Apresentamos neste trabalho uma técnica simplificada de RT-PCR para identificação de vírus de dengue. Cinco estirpes brasileiras de vírus de dengue dos tipos 1 e 2, isoladas de pacientes e o vírus da vacina de febre amarela como controle negativo, foram utilizadas nos testes. Células C6/36 foram infectadas e os fluidos de cultura coletados após 7 dias. A RT-PCR, era efetuada em um único tubo contendo 1µl de fluidos infectados e diluídos 1/10 em água destilada ou em mistura detergente contendo Nonidet P40. A mistura de reação, num volume de 50 µl, continha 50 pmol de primers especificos, que amplificavam seqüência com 482 pares de bases para vírus do dengue tipo 1 e 210 pares de bases para dengue tipo 2, ou, ainda, primers para grupo dengue que amplificavam seqüência com 511 pares de bases. A mistura de reação, também, continha 0.1 mM dos 4 desoxinucleotídeos, 7.5 U de transcriptase reversa e 1 U de Taq DNA polimerase termoestável. A mistura era incubada por 5 minutos a 37º C para a transcrição reversa e processada em 30 ciclos de um PCR com 2 passos (92º C por 60 segundos, 53º C por 60 segundos) e incremento lento da temperatura. Produtos do PCR foram visualizados à luz ultra-violeta após eletroforese em gel de agarose e coloração em brometo de etídio. Baixos títulos virais como 103,6TCID50/ml foram detectados com o RT-PCR para dengue tipo 1. Amplificação genômica tipo-específica e grupo-específica para dengue foi obtida com todos os vírus do dengue estudados. Este RT-PCR, comparado a testes similares, é menos trabalhoso, mais rápido e possui reduzido risco de contaminação.
