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Tropical Plant Pathology, Volume: 36, Número: 5, Publicado: 2011
  • Detecção do Cassava common mosaic virus por immunocaptura-RT-PCR em mandioca obtida por cultura de meristemas no estado do Paraná Articles

    Silva, Jaqueline M.; Carnelossi, Patrícia R.; Bijora, Taise; Facco, Cassiele U.; Picoli, Marcelo H.S.; Souto, Eliezer R.; Oliveira, Arildo J.B.; Almeida, Álvaro M.R.

    Resumo em Português:

    Em um levantamento conduzido na região noroeste do Paraná, principal região produtora de mandioca do estado, constatou-se que o CsCMV está amplamente disseminado, infectando mais de 90% das plantas de todas as cultivares. Um isolado do CsCMV foi purificado para a produção de um anti-soro policlonal de alto título (1/1000), o qual foi utilizado na indexação por meio de PTA-ELISA de plantas produzidas via cultura de meristemas. De uma produção inicial de 110 plantas da cultivar Olho Junto, 31 permaneceram infectadas como indicou o PTA-ELISA. Visando aumentar a sensibilidade de detecção do vírus, foi estabelecido um protocolo de IC-RT-PCR. A IgG purificada, específica para o vírus, combinada com um par de oligonucleotídeos universais para Potexvirus, prontamente detectou o CsCMV nos extratos obtidos de mandioca. Produtos de IC-RT-PCR de 750 pb foram amplificados a partir de seis de um total de 35 plantas previamente testadas como negativas para o CsCMV via PTA-ELISA. Os sequenciamentos confirmaram que os produtos de IC-RT-PCR são parte do gene codificador da replicase do CsCMV, indicando assim a presença do vírus mesmo após a termoterapia combinada com a cultura de meristemas. O PTA-ELISA permitiu a triagem preliminar de plantas vírus-positivas, possibilitando a redução do número de plantas a serem analisadas por IC-RT-PCR. Embora o CsCMV seja considerado de importância menor, o fato desse vírus estar disseminado na região noroeste do Paraná recomenda a adoção de medidas efetivas para o seu controle.

    Resumo em Inglês:

    A virus survey conducted in the northwest region of Paraná, the main cassava-producing region of that state, showed Cassava common mosaic virus (CsCMV) to be widespread, infecting more than 90% of plants from all cassava cultivars. A CsCMV isolate was purified and used to raise a high-titer (1/1.000) polyclonal antiserum for indexing plants produced from meristem-tip culture, using PTA-ELISA. From an initial production of 110 plants of cultivar Olho Junto, 31 remained infected as indicated by PTA-ELISA. To improve the sensitivity of virus detection, an immunocapture-RT-PCR (IC-RT-PCR) protocol was established. Virus-specific IgG, purified and combined with a primer set for the genus Potexvirus, could readily detect CsCMV in cassava crude leaf extracts. IC-RT-PCR products of 750 bp were amplified from six out of 35 plants previously tested as virus-negative by PTA-ELISA. Sequence analysis of cloned IC-RT-PCR products confirmed they were part of the CsCMV replicase gene, indicating that the virus was still present after thermotherapy and meristem-tip culture. PTA-ELISA enabled initial screening of virus-positive cassava, reducing the number of plants to be further analyzed by IC-RT-PCR. Though CsCMV has been considered of minor importance, its widespread nature, as noticed in Paraná, indicates the need for adoption of effective control measures.
  • Distribuição de uma sequência de transposase confirma a ocorrência de dois genótipos de Moniliophthora perniciosa na Bahia, Brasil Articles

    Ignacchiti, Mariana D.C.; Santana, Mateus F.; Araújo, Elza F.; Queiroz, Marisa V.

    Resumo em Português:

    A análise de sequência de transposase é uma técnica importante para descobrir a presença de elementos transponíveis no genoma. Uma sequência potencial de transposase foi analisada no genoma do fitopatógeno Moniliophthora perniciosa, o agente causal da doença vassoura-de-bruxa no cacau. As comparações de sequência do peptídeo predito para a transposase indicam uma relação com transposases de elementos da superfamília Tc1-Mariner. A análise da distribuição desta sequência de transposase foi realizada através das técnicas de PCR e Southern blot nos diferentes isolados, pertencentes aos biótipos C, L, e S, coletados de várias áreas geográficas. O perfil de distribuição da transposase sugere a presença de cópias polimórficas entre os diferentes isolados do biótipo C. O perfil de hibridização do DNA total de cada isolado foi utilizado para o cálculo de distância genética e agrupamento pelo método de UPGMA. Os isolados do biótipo C coletados no estado da Bahia apresentaram dois perfis de hibridização para a sequência de transposase. Os dois diferentes padrões apresentados na análise de Southern podem ser relacionados com a presença de dois genótipos diferentes na Bahia.

    Resumo em Inglês:

    Transposase sequence analysis is an important technique used to detect the presence of transposable elements in a genome. Putative transposase sequence was analyzed in the genome of the phytopathogenic fungus Moniliophthora perniciosa, the causal agent of witches' broom disease of cocoa. Sequence comparisons of the predicted transposase peptide indicate a close relationship with the transposases from the elements of the Tc1-Mariner superfamily. The analysis of the distribution of transposase sequence was done by means of PCR and Southern blot techniques in different isolates of the fungus belonging to C-, L-, and S-biotypes and collected from various geographical areas. The distribution profile of the putative transposase sequence suggests the presence of polymorphic copies among the isolates from C-biotypes. The total DNA hybridization profile of each isolate was used to calculate genetic distance and group by the UPGMA method. C-biotype isolates colleted from of the Bahia showed two hybridization profiles for the transposase sequence. Thus the two different fingerprinting profiles for transposase sequence reported here by Southern analysis could also be correlated to the presence of two different genotypes in Bahia, Brazil.
  • Isoenzymatic characterization of Colletotrichum kahawae isolates with different levels of aggressiveness Articles

    Loureiro, Andreia; Guerra-Guimarães, Leonor; Lidon, Fernando C.; Bertrand, Benoit; Silva, Maria C.; Várzea, Vítor

    Resumo em Inglês:

    The hemibiotrophic fungus Colletotrichum kahawae is the causal agent of Coffee Berry Disease - CBD, an economically devastating disease restricted to Arabica coffee production in Africa. Understanding pathogen variability is crucial for the implementation of disease control measures. In this study, six isoenzymatic systems (esterase, acid and alkaline phosphatase, malate dehydrogenase, peroxidase and superoxide dismutase) were used to assess the genetic variation among 12 C. kahawae isolates (from different geographic origins and with different levels of aggressiveness towards coffee) and one Colletotrichum gloeosporioides isolate (not pathogenic to green berries). Cluster analysis of the banding profiles obtained for the six enzymes enabled the differentiation of the two species and revealed the existence of intraspecific variability among C. kahawae isolates. Alkaline phosphatase was the most discriminative enzyme, allowing also the discrimination between the most and least aggressive isolates of C. kahawae.
  • Controle químico e respostas de cultivares suscetíveis e resistentes de soja ao progresso da ferrugem asiática Articles

    Koga, Lucimara J.; Canteri, Marcelo G.; Calvo, Éberson S.; Xavier, Sheila A.; Harada, Arlindo; Unfried, Jair R.; Kiihl, Romeu A.S.

    Resumo em Português:

    Este trabalho comparou o progresso da ferrugem asiática da soja na cultivar suscetível BRS 133 e na linhagem resistente CB06-953/963, com o gene de resistência Rpp4, sob tratamentos fungicidas em diferentes estádios de desenvolvimento. Foram medidas as variáveis porcentagem de desfolha, coeficiente de dano (CD) e limiar de dano econômico (ETL), as duas últimas calculadas a partir da severidade da doença e produtividade de grãos. Os ensaios foram realizados em condições de campo nos anos 2006-2007 em uma época de semeadura (Experimento I) e em 2007-2008 em duas épocas de semeadura (Experimentos II e III). O delineamento experimental utilizado foi blocos ao acaso, com dez tratamentos e quatro repetições. Houve redução do progresso da doença em CB06-953/963 nos três experimentos realizados. Os valores de CD e ETL foram superiores na linhagem resistente em comparação à suscetível. No experimento II, o ETL para CB06-953/963 foi atingido 13,3 dias após o registrado para BRS 133. As aplicações fungicidas apresentaram maiores benefícios na produtividade e redução da desfolha na cultivar suscetível. Sob condições de alta pressão de inóculo (Experimento III), três e quatro aplicações de fungicidas resultaram em ganho na produtividade (P<0.05) nos dois genótipos de soja quando comparados aos controles sem aplicação de fungicidas. As aplicações de fungicidas, mesmo quando realizadas mais tardiamente nas cultivares resistentes, auxiliaram no controle da SR e na manutenção da alta produtividade.

    Resumo em Inglês:

    This work compared development of soybean rust (SR) on the susceptible cultivar BRS 133 and on the resistant line CB06-953/963 (Rpp4 gene) following different fungicide treatments applied in different developmental stages. The assessed variables were percent plant defoliation, coefficient of damage (CD) and economic threshold level (ETL), the latter two calculated from disease severity ratings and yield. Experiments were conducted in the field during the 2006-2007 growing season with one sowing date (Experiment I) and in 2007-2008 with two sowing dates (Experiments II and III). The experimental design was a randomized complete block with ten treatments and four replications. Overall, the Rpp4 gene in the resistant line was effective in reducing development of SR in all three experiments. The values of CD and ETL were higher for the resistant line than for the susceptible cultivar. The resistant line needed 13.3 days longer than the susceptible cultivar to reach the ETL in Experiment II. Fungicide applications were more effective in protecting yield and minimizing defoliation in the susceptible cultivar than in the resistant line. Under high inoculum pressure (Experiment III), three and four fungicide sprays applied during the season resulted in significantly higher yields (P<0.05) in both soybean genotypes compared with the untreated controls. Late season fungicide applications reduced rust severity and increased the yield of the resistant cultivar.
  • Desempenho de genótipos de algodoeiro na presença ou não de rotação de cultura com Crotalaria spectabilis, em área infestada com Meloidogyne incognita Artigos

    Galbieri, Rafael; Fuzatto, Milton G.; Cia, Edivaldo; Welter, Adinara M.; Fanan, Sheila

    Resumo em Português:

    Em área naturalmente infestada com Meloidogyneincognita raça 3, localizada em Primavera do Leste-MT, foi estudado o desempenho de 21 genótipos de algodoeiro com níveis diversos de tolerância ao nematoide, com a adoção ou não de rotação de cultura com Crotalaria spectabilis. De modo geral a rotação diminuiu a severidade dos sintomas exibidos pelas plantas, devidos ao ataque do parasita, e promoveu aumento na produtividade de algodão. Entretanto, seu efeito não foi suficiente para tornar eficaz o desempenho de genótipos de baixa tolerância ao nematoide, os quais, mesmo na presença da leguminosa, tiveram notas para sintomas 142% maiores e produtividades de algodão 57% menores do que as cultivares mais tolerantes. Alta correlação entre as médias de produção dos genótipos na seqüência ou não da leguminosa e ausência de interação genótipo x rotação, indicaram que, embora em patamar mais elevado de produção, a tendência de desempenho dos genótipos foi a mesma na presença e na ausência da crotalária. De tal modo que, na média, a produção dos três genótipos mais tolerantes, na ausência de rotação, foi, ainda assim, 48% superior à dos genótipos mais intolerantes, na presença da crotalária. As perdas mínimas possíveis na produção, atribuíveis ao uso de genótipos intolerantes, foram estimadas em 37% na ausência da rotação e em 29% com rotação.

    Resumo em Inglês:

    In an area naturally infested with Meloidogyne incognita race 3, located in Primavera do Leste, Mato Grosso State, Brazil, the performance of 21 cotton genotypes having different levels of tolerance to this parasitic nematode was studied, in the presence or absence of crop rotation with Crotalaria spectabilis. A general trend was observed for crop rotation to reduce the severity of symptoms exibited by plant sowing to nematode incidence, and lead to increased cotton yield. However, its effect was not sufficient to increase the performance of genotypes with low tolerance to the parasite, which, even under the crop rotation schem, had disease sympton rates that were 142% higher and cotton yields that were 57% lower than those obtained for more tolerant genotypes. High correlation between average yield in the presence or absence of crop rotation, and absence of interaction between genotype and crop rotation, indicated that, although at higher yield level being achieved, the tendency of genotype performance remained the same in both systems. The yield of the three more tolerant genotypes in the absence of crop rotation was 48% superior to that of the three least tolerant genotypes under crop rotation. The minimum possible losses, attributable to the use of susceptible genotypes, were estimated at 37% and 29%, respectively, without crop rotation being used or under conditions of crop rotation.
  • Avaliação da resistência de 12 híbridos de milho a Pratylenchus brachyurus Artigos

    Inomoto, Mário M.

    Resumo em Português:

    O nematoide-das-lesões, Pratylenchus brachyurus, é atualmente responsável por elevadas perdas na cultura da soja no Brasil. O uso de milho em rotação, ou sucessão, com soja tem sido recomendado no manejo do nematoide, porém há poucos híbridos resistentes a P. brachyurus. Em função do quadro exposto, dois experimentos foram conduzidos em casa de vegetação, com o propósito de avaliar a resistência de 12 híbridos de milho a P. brachyurus. Nenhum dos híbridos se mostrou resistente a P. brachyurus, porém P30K75, DKB-330, AG-7088, DKB-350 e AG-7000 foram moderadamente resistentes. Portanto, o híbrido P30K75, usualmente considerado resistente a P. brachyurus, deveria ser reclassificado como moderadamente resistente. Dois experimentos adicionais foram efetuados; um deles para avaliar o efeito de dois períodos experimentais (70 e 107 dias após a inoculação) na reprodução do nematoide. O período mais longo possibilitou maior reprodução de P. brachyurus e deveria ser adotado para a avaliação da resistência de milho a P. brachyurus. Em outro experimento, P. brachyurus reproduziu-se menos em milheto 'ADR-300' que nos híbridos de milho; portanto, esse híbrido de milheto é melhor opção que o milho para o manejo de P. brachyurus.

    Resumo em Inglês:

    Attack by the root-lesion-nematode Pratylenchus brachyurus is, presently, the cause of extensive crop losses in soybean yields in Brazil. Rotation with maize has been recommended for P. brachyurus management, however only a few resistant maize hybrids are currently available for use in such schemes. Two experiments were carried out in greenhouse conditions in order to evaluate the resistance of 12 maize hybrids to P. brachyurus. None of them was entirely resistant to P. brachyurus, but P30K75, DKB-330, AG-7088, DKB-350 and AG-7000 were moderately resistant. Thus, the hybrid P30K75, usually considered resistant to P. brachyurus, should be reclassified as moderately resistant. Two additional experiments were also performed: one was assessed the effect of two experimental periods (70 and 107 days after inoculation) on nematode reproduction and has indicated that the longer period allowed higher reproduction of P. brachyurus and should be preferred in evaluations of maize resistance to P. brachyurus; and the other showed that P. brachyurus' reproduction was lower in pearl millet 'ADR-300' than in maize hybrids and that, therefore, this pearl millet culvivar is more adequate for rotation schemes with soybean in P. brachyurus management than maize.
  • Variabilidade in vitro, in vivo e molecular de isolados de Cercospora coffeicola Artigos

    Dell' Acqua, Raphaela; Mantovani, Elaine Spindola; Braghini, Masako T.; Oliveira, Claudio Marcelo G.; Harakava, Ricardo; Robaina, Abikeyla S.; Petek, Marcos Rafael; Patricio, Flávia R. A.

    Resumo em Português:

    Neste estudo, sete isolados de Cercospora coffeicola, agente causal da cercosporiose em cafeeiros, foram estudados com relação ao crescimento micelial em diferentes temperaturas, comparação das sequências das regiões ITS1 e ITS2 do DNA ribossômico e de parte do gene da calmodulina, e com relação à patogenicidade a oito cultivares de cafeeiro (Catuaí Vermelho IAC 81, Catuaí S H3, Tupi IAC 1669 - 33, Tupi RN IAC 1669 - 13, Icatu Vermelho IAC 4045, Ouro Verde IAC H 5010-5, Geisha IAC 1137 e Mundo Novo IAC 376-4). As temperaturas de maior crescimento micelial foram de 23,8, 23,7 e 23,9ºC para os isolados IBLF277 (Franca, SP), IBLF280 (São Sebastião do Paraíso, MG) e IBLF379 (São João do Manhuaçu, MG), respectivamente; de 24,6ºC e de 25,1ºC para os isolados IBL199 (Patos de Minas, MG) e IBLF270 (Boa Esperança, MG); e de 27,6 e 27,8ºC, para os isolados IBLF004 (Campinas, SP) e IBLF206 (Patrocínio, MG). Na análise filogenética os isolados IBLF270 e IBLF379 formaram um subgrupo único, mas as sequências do gene da calmodulina de todos os isolados apresentaram 100% de identidade. Os isolados IBLF277, IBLF270, IBLF379 e IBLF199 foram os mais patogênicos às mudas de cafeeiro das diferentes cultivares. A cultivar Ouro Verde IAC H 5010-5 foi a mais resistente à cercosporiose e as cultivares Geisha IAC 1137, Mundo Novo IAC 376-4 e Tupi IAC 1669-33 as mais suscetíveis, entretanto, no segundo experimento, houve interação entre cultivares e isolados.

    Resumo em Inglês:

    Seven isolates of Cercospora coffeicola, the etiological agent of brown eye spot in coffee, were studied in relation to micelial growth at different temperatures, sequences of the ITS1 and ITS2 ribossomic DNA regions and of part of the calmodulin gene, and pathogenicity to seedlings of eight coffee cultivars (Catuaí Vermelho IAC 81, Catuaí S H3, Tupi IAC 1669 - 33, Tupi RN IAC 1669 - 13, Icatu Vermelho IAC 4045, Ouro Verde IAC H 5010-5, Geisha IAC 1137 and Mundo Novo IAC 376-4). The temperatures that promoted the highest micelial growth varied among isolates: 23,8, 23,7 and 23,9ºC for isolates IBLF277, IBLF280 and IBLF379; 24,6ºC to 25,1ºC for isolates IBL199 and IBLF270; and 27,6 and 27,8ºC for isolates IBLF004 and IBLF206. In the phylogenetic analysis, isolates IBLF270 and IBLF379 were separated in a subgroup, but the sequences of part of the calmodulin gene of all isolates showed 100% identity. The most pathogenic isolates for all coffee cultivars were IBLF277, IBLF270, IBLF379 and IBLF199. The cultivar Ouro Verde IAC H 5010-5 was the most resistant to brown eye spot and the cultivars Geisha IAC 1137, Mundo Novo IAC 376-4 and Tupi IAC 1669-33 were the most susceptible, but in the second experiment there was interaction between cultivars and isolates.
  • Phytophthora nicotianae causando podridão de raiz e caule em Dieffenbachia picta em Buenos Aires, Argentina Short Communications

    Palmucci, Hemilse E.; Grijalba, Pablo E.; Wolcan, Silvia M.; Guillin, Eduardo; López, María V.; Herrera, Cecilia; Fantino, Elisa

    Resumo em Português:

    Dieffenbachia picta ("comigo-ninguém-pode") é uma espécie difundida em todo o mundo devido ao seu valor ornamental. Na Argentina, é cultivada nas províncias de clima mais quente e nos arredores da cidade de Buenos Aires. Na primavera de 2007 um grande número de plantas apresentou sintomas de murcha e presença de lesões encharcadas (anasarca) nas folhas inferiores, principalmente em plantas de 4 a 6 meses de idade. Em seguida, constatou-se murcha da planta devido ao apodrecimento do caule e raiz. Um organismo peronosporomycete foi isolado de tecidos afetados. O patógeno foi identificado como Phytophthora nicotianae com base em características culturais, morfologia das estruturas vegetativas e reprodutivas, e testes moleculares baseados na sequência da região ITS do DNA ribossômico. Os testes de patogenicidade foram conduzidos e os postulados de Koch atendidos. Em estudos complementares, as variedades de D. picta Alex, Compact, Marianne e Camilla foram suscetíveis, enquanto a variedade Tropic snow (D. amoena) foi resistente. Este é o primeiro relato de P. nicotianae causando podridão radicular de Dieffenbachia picta na Argentina e nas Américas.

    Resumo em Inglês:

    Dieffenbachia picta is a worldwide appreciated crop due to its ornamental value. In Argentina it is cultivated in warm provinces and in the outskirts of Buenos Aires city, where in spring 2007 a great amount of plants were lost in commercial greenhouses. Symptoms such as wilting and soaked lesions in the basal leaves began in four- to six-month-old plants causing plants to wilt due to basal stem and root rot processes. A Peronosporomycete was consistently isolated from diseased tissues. The pathogen was identified as Phytophthora nicotianae based on cultural characteristics, morphology of vegetative and reproductive structures, and on the analysis of the sequence of the nuclear ribosomal internal transcribed spacer (ITS) region. Pathogenicity tests were carried out and Koch's postulates were fulfilled. In complementary studies, the dieffenbachia varieties Alex, Compact, Camilla and Marianne were susceptible to the infection caused by P. nicotianae, whereas Tropic snow (D. amonea) was resistant. This is the first report of P. nicotianae causing stem and root rot of D. picta in Argentina and in the Americas.
  • Manejo do míldio e ferrugem em videira com indutores de resistência: produtividade e qualidade pós-colheita Comunicações

    Gomes, Erbs C.S.; Leite, Rodrigo P.; Silva, Fábio J.A.; Cavalcanti, Leonardo S.; Nascimento, Luciana C.; Silva, Silvanda M.

    Resumo em Português:

    O míldio e a ferrugem da videira estão entre as principais doenças dessa cultura no Brasil provocando grandes perdas em pré e pós-colheita. Trabalhos envolvendo diferentes aspectos da resistência induzida têm sido desenvolvidos com o intuito de promover a redução do uso de pesticidas no campo. Assim, objetivou-se com este trabalho avaliar a eficácia da utilização de indutores de resistência no controle dessas doenças em videira 'Isabel', identificando alterações nos aspectos de produtividade e qualidade dos frutos. Foram testados sete tratamentos: produto comercial à base de bioflavonóides cítricos (1,5 L ha-1), bioflavonóides cítricos + fosfito de potássio (1,5 L ha-1 + 130 g 100 L-1), fosfito de potássio (130 g 100 L-1), testemunha pulverizada com água (T), fungicida (metyran + pyraclostrobin) (2 kg ha-1), silicato de alumínio (1%) e Saccharomyces cerevisiae (1,5 L ha-1), quatro repetições de cinco plantas. Foram realizadas 13 pulverizações em intervalos semanais, iniciadas 17 dias após a poda. Os índices de doença foram determinados através das curvas de progresso das doenças segundo normas da produção integrada de frutas, sendo agrupados em quatro períodos (0 a 42 dias após a poda - DAP; 43 a 77 DAP; 78 a 129 DAP e 0 a 129 DAP). As características de produtividade e aspectos de qualidade foram avaliadas aos 126 DAP. Os tratamentos S. cerevisiae e fungicida promoveram os maiores índices de controle do míldio. Entretanto, o uso de S. cerevisiae resultou em queda de produtividade. Não houve efeito significativo dos indutores utilizados sobre a incidência de ferrugem.

    Resumo em Inglês:

    Mildew and rust diseases are among the main diseases of the vine crop in Brazil causing great losses in pre- and post-harvest conditions. Studies involving different aspects of induced resistance have been developed with the aim of promoting the reduction of pesticides use in the field. In this research, the effect of elicitors on the control of mildew and rust in vine cultivar Isabel was evaluated. Seven treatments were tested: Citric bioflavonoids (1.5 L ha-1), citric bioflavonoids + potassium phosphite (1.5 L ha-1 + 130 g 100 L-1), potassium phosphite (130 g 100 L-1), control treatment was sprayed with water (T), fungicide (metyran + pyraclostrobin) (2 kg ha-1), aluminum silicate (1%) and Saccharomyces cerevisiae (1.5 L ha-1), four replications and five plants per replication. The disease indexes were determined using progress curve of disease in grapevine according PIF (Integrated Fruits Production) for four periods (0 to 42 days post pruning - DAP, 43 to 77 DAP, 78 to 129 DAP and 0 to 129 DAP). The yield components and quality aspects were evaluated at 126 DAP. The use of S. cerevisiae and fungicide promoted the highest mildew control. However, the use of S. cerevisiae decreased the yield. No significant effects of the elicitors were observed on rust incidence.
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