Scielo RSS <![CDATA[Brazilian Journal of Microbiology]]> http://www.scielo.br/rss.php?pid=1517-838220010004&lang=en vol. 32 num. 4 lang. en <![CDATA[SciELO Logo]]> http://www.scielo.br/img/en/fbpelogp.gif http://www.scielo.br <![CDATA[<B>Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons by soil fungi</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400001&lng=en&nrm=iso&tlng=en Thirteen deuteromycete ligninolytic fungal strains were grown in media containing polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), for 6 and 10 days. The PAHs were added directly with the inocula or on the third day of cultivation. A selection of the best strains was carried out based on the levels of degradation of the PAHs and also on the ligninolytic activities produced by the fungi. The selected strains were cultivated for 3, 6, 9, 12 and 15 days in the PAHs-containing media. Degradation of PAHs, as measured by reversed-phase HPLC on a C18 column, varied with each strain as did the ligninolytic enzymes present in the culture supernatants. Highest degradation of naphthalene (69%) was produced by the strain 984, having Mn-peroxidase activity, followed by strain 870 (17%) showing lignin peroxidase and laccase activities. The greatest degradation of phenanthrene (12%) was observed with strain 870 containing Mn-peroxidase and laccase activities. When anthracene was used, the strain 710 produced a good level of degradation (65%).<hr/>Treze fungos deuteromicetos ligninolíticos foram cultivados em meio contendo hidrocarbonetos aromáticos policíclicos (HAPs) por 6 e 10 dias. Os HAPs foram adicionados diretamente com o inóculo ou no terceiro dia de cultivo. A seleção das melhores linhagens foi baseada nos níveis de degradação dos HAPs e também nas atividades ligninolíticas produzidas pelas linhagens fúngicas. Essas melhores linhagens foram então cultivadas por 3, 6, 9, 12 e 15 dias. A degradação dos HAPs foi monitorada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) em uma coluna C18, variando para cada linhagem assim como as enzimas ligninolíticas presentes nos sobrenadantes das culturas. Alta degradação de naftaleno (69%) foi obtida pela linhagem 984, tendo atividade de Mn-peroxidase, seguida pela linhagem 870 (17%) a qual apresentou atividades de lignina peroxidase e lacase. A melhor porcentagem de degradação de fenantreno (12%) foi observada pela linhagem 870 contendo atividades de Mn-peroxidase e lacase. Quando antraceno foi utilizado como fonte de carbono, a linhagem 710 apresentou nível de degradação de 65%. <![CDATA[<B>Successive cultivation of maize and agricultural practices on root colonization, number of spores and species of arbuscular mycorrhizal fungi</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400002&lng=en&nrm=iso&tlng=en A large number of propagules and a broad spectrum of species are two important components of ecosystem (including agroecosystem) sustainability. Previous studies carried out in temperate areas showed that repeated monoculture leads to a decrease in the species abundance of arbuscular mycorrhizal fungi (AMF). This study evaluated the influence of maize monoculture and its agricultural practices on AMF during three consecutive cropping years in a Brazilian field. At the end of each cycle, soil and root samples were evaluated for species composition, spore populations and root colonization by AMF. The AMF community present during this period was scored according to the Spearman rank correlation and Principal Components Analysis. The mean percent root colonization values for the three cultivation periods were: 66.9, 60.7 and 70.5, respectively. Seven species were detected in the first year, Scutellospora persica being the most abundant (24.1% of spores) and Glomus macrocarpum the most observed (100% of samples). In the second year, Glomus etunicatum was the species with the greatest number of spores (24.7%) and, like G. macrocarpum, the most frequently observed (90%) in a community of thirteen. In the third year, twenty-three AMF species were identified, Scutellospora sp. 1 being the most abundant (17.4%), and Gigaspora decipiens and Glomus claroideum the most frequent (both with a relative frequency of 70%). The main soil factors influencing root colonization and sporulation by AMF were pH (and related properties), phosphorus and organic matter contents.<hr/>Elevado número de propágulos e de espécies são componentes importantes para manter a sustentabilidade dos ecossistemas, incluindo agrossistemas. Estudos desenvolvidos em áreas temperadas indicaram que monocultivo prolongado conduziu ao decréscimo na abundância de esporos e de espécies de fungos micorrízicos arbusculares (FMA). O presente estudo avaliou a influência da monocultura de milho e de suas práticas culturais sobre o desenvolvimento de FMA durante três anos sucessivos de cultivo em campo. Ao final de cada ciclo, amostras de solo e raízes foram avaliadas quanto à composição de espécies, populações de esporos e colonização radical por FMA. As mudanças da composição das comunidades de FMA estabelecidas durante estes anos foram avaliadas a partir da correlação de Spearman e da Análise dos Componentes Principais. As percentagens médias de colonização radical foram: 66,9, 60,7 e 70,5, respectivamente. No primeiro ano, sete espécies foram detectadas, sendo Scutellospora persica a mais abundante (24,1% dos esporos) e Glomus macrocarpum a espécie mais frequente (100% das amostras). No segundo ano, Glomus etunicatum foi a espécie com maior número de esporos (24,7%) e, juntamente com G. macrocarpum, foi a mais frequentemente observada (90%) numa comunidade de treze espécies. No terceiro ano, vinte e três espécies de FMA foram identificadas, sendo Scutellospora sp. 1 a mais abundante (17,4%), e Gigaspora decipiens e Glomus claroideum as espécies mais frequentes (ambas em 70% das amostras). As principais causas de variação que puderam ser identificadas foram pH e concentrações de fósforo e matéria orgânica no solo. <![CDATA[<B>Isolation, properties and kinetics of growth of a thermophilic <I>Bacillus</B></I>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400003&lng=en&nrm=iso&tlng=en A strictly aerobic, thermophilic, spore-forming bacteria was isolated from a soil sample collected in Campos dos Goytacazes City, Rio de Janeiro, Brazil. The cells of this organism were Gram-positive, catalase positive, actively motile, 1.2 µm wide and 5.3 µm long. Growth occurred at pH values ranging from 6.5 to 9.0, and optimum growth occurred at about pH 7.0. The optimum temperature for growth was around 55ºC, and the upper temperature limit for growth was around 70ºC. Yeast extract stimulated growth on glucose and was obligately required at supraoptimal temperatures (65ºC). The results of 16S rRNA sequence comparisons indicated that the isolate was closely related to Bacillus caldoxylolyticus and Bacillus sp strain AK1, and these three organisms exhibited levels of ribossomal DNA sequence homology of 94%.<hr/>Uma bactéria formadora de esporos, termofílica e aeróbica estrita foi isolada de amostras de solo coletadas na cidade de Campos dos Goytacazes, Rio de Janeiro, Brasil. As células deste organismo foram Gram-positivas, móveis e mediram 1,2 µm de largura e 5,3 µm de comprimento. O crescimento ocorreu a valores de pH variando de 6,5 a 9,0 e o crescimento ótimo ocorreu em torno de pH 7,0. A temperatura ótima de crescimento foi em torno de 55ºC e a máxima de 70ºC. O extrato de levedura estimulou o crescimento do organismo em glicose e foi obrigatoriamente requerido a supra-ótimas temperaturas (65ºC). Os resultados da comparação de seqüências de 16SrRNA indicaram que o isolado foi proximamente relacionado com o Bacillus caldoxylolyticus and Bacillus sp AK1 e estes três organismos exibiram níveis de homologia de 94% nas seqüências de DNA ribossomal <![CDATA[<B>The interactive effect of phosphorus and nitrogen on "in vitro" spore germination of <I>Glomus etunicatum </I>Becker & Gerdemann, root growth and mycorrhizal colonization</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400004&lng=en&nrm=iso&tlng=en The effects of P and N amendment and its interactions on spore germination, root growth and colonized root length by Glomus etunicatum Becker & Gerdemann (INVAM S329) was studied "in vitro" in RiT - DNA transformed roots of Anthylis vulneraria sub sp. Sampaiana (Kidney vetch). Three N media concentrations (5, 10 and 50 mg/l) at P constant level (2 mg/l) and three P media concentrations (2, 10 and 20 mg/l) at N constant level (5 mg/l) were utilized as a treatment. Bécard & Fortin medium was used as a basal medium for root growth and colonized root length, and water/agar (0.8%) media was the control for spore germination. Spore germination of G. etunicatum at low P level was reduced by N addition in relation to the control media, and at low N level addition of P stimulated spore germination. Total root length was stimulated by N addtion at low P level, but no significant difference (p£0.05) was observed between 10 and 50 mg/l of N. P addition at low N level media also stimulated total root growth, and a significant difference (p£0.05) was observed among P concentrations. Colonized root length by G. etunicatum increased significantly (p£0.05) with P additions at low N levels. Under low P level no significant differences was found between 10 and 50 mg/l of N. These results demonstrate that the interaction between P and N affect differently spore germination, root growth and colonized root lenght.<hr/>Os efeitos da adição de P e N e suas interações sobre a germinação de esporos, crescimento e extensão de raízes de Anthylis vulneraria sub sp. Sampaiana (Kidney vetch) RiT-DNA transformadas e colonizadas por Glomus etunicatum Becker & Gerdemann (INVAM S329) foram estudadas em condições "in vitro". Em meios com baixo nível de P (2 mg/l) foram utilizadas três concentrações de N (5, 10 e 50 mg/l) e em baixo nível de N (5 mg/l) foram utilizadas três concentrações de P (2, 10 e 20 mg/l). O meio de Bécard e Fortin foi utilizado como meio básico para o crescimento das raízes e colonização por G. etunicatum. O meio agar-água (0,8%) foi considerado como controle para a germinação dos esporos. A germinação dos esporos de Glomus etunicatum em meios com baixo nível de P foi diminuída pela adição de N em relação ao meio de controle, e em meios com baixo nível de N a adição de P estimulou a germinação dos esporos. O comprimento total das raízes foi estimulado pela adição de N em meios com baixo nível de P, mas não foi observada diferença significativa entre as concentrações de 10 e 50 mg/l de N. A adição de P em meios com baixo nível de N também estimulou o comprimento total das raízes, observando-se diferença significativa (p£0,05) no comprimento total das raízes entre as concentrações de P utilizadas. A extensão das raízes colonizadas por G. etunicatum aumentou significativamente (p£0,05) com a adição de P nos meios com baixo nível de N. Sob baixo nível de P não foi observada diferença significativa entre a adição de 10 e 50 mg/l de N. Os resultados mostram que a interação entre P e N afeta diferentemente a germinação de esporos, o crescimento das raízes e a extensão da colonização. <![CDATA[<B>Germination and germ tube growth of the arbuscular mycorrhizal fungi <I>Gigaspora albida</I> in different substrates</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400005&lng=en&nrm=iso&tlng=en The role of the substrate on germination of Gigaspora albida Schenck & Smith was investigated. Spores were desinfested with 0.5% sodium hypochlorite (20 min.) and placed on Petri dishes over a Millipore filter, with one of the following media: a- 1% water-agar; b- water-agar + aqueous extract of roots of Panicum miliaceum L.; c- salt medium of Murashige & Skoog (MS) or sterilized sand; and incubated in the dark at room temperature (28ºC ± 2). The experimental design was at random with four treatments and four replicates. Germination was evaluated every 7 days until the 28th day. The water-agar medium was the most feasible for spore germination at the 7th day, followed by the MS medium at the 14th day. Conversely, the sand and the root extract medium did not allow high germination. Spores maintained in water-agar also presented longer germ tubes than spores in the other treatments. Auxiliary cells were observed at the beginning of formation of hyphal branching in all treatments, however they were more numerous in the water-agar medium.<hr/>Foi investigado o papel do substrato sobre a germinação e o crescimento do tubo germinativo de Gigaspora albida Schenck & Smith. Os esporos foram desinfestados com hipoclorito de sódio a 0,5% por 20 min. sob agitação constante, lavados com água destilada esterilizada e colocados em membrana de milipore, em placas de Petri com: 1. ágar água 1%, 2. ágar água 1% + extrato aquoso de raizes de Panicum miliaceum, 3. meio com sais de Murashige & Skoog (MS) e 4. areia esterilizada. O material foi incubado no escuro, sob temperatura ambiente (28 ºC ± 2). O delineamento foi inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e quatro repetições e a avaliação feita a cada sete dias até completar 28 dias. O meio ágar água 1% foi o mais propício para germinação (100%) após sete dias, seguido pelo meio MS, aos 14 dias. Ao contrário, o solo e o meio com extrato de raiz proporcionaram baixo índice de germinação. Os esporos mantidos em ágar água também apresentaram maior crescimento do tubo germinativo, em relação aos demais tratamentos. Células auxiliares características do gênero foram observadas no início das ramificações hifálicas, em todos os tratamentos, sendo mais numerosas no tratamento em ágar água 1%. <![CDATA[<B>Comparison of electrophoretic protein profiles of <I>Campylobacter jejuni</I> subsp. <I>jejuni</I> isolated from different animal species</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400006&lng=en&nrm=iso&tlng=en Electrophoretic protein profiles of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains isolated from feces of seven animal species, including man, were compared. Fourteen strains (two from each species) plus two human strains and the reference one, were ruptured by ultrasound and their total soluble proteins were analyzed by SDS-PAGE technique in a 12% polyacrylamide gel with computerized densitometric reading by the molecular analyst software. All the strains had bands in common that correspond to 45 and 66 Kda molecular weight. The disagreement corresponded to a 97 to 200 Kda molecular weight region. From the 17 strains, 13 (76.5%), were classified as biotype I, three (17.6%) as biotype II and one (5.8%) as biotype III. Since protein extracts were obtained from cells grown under identical conditions, and thus, able to express the same phenotype, this disagreement region could be related to different genotypes or serotypes.<hr/>Perfis eletroforéticos de proteínas de cepas Campylobacter jejuni subsp. jejuni isoladas de fezes de diferentes espécies animais, inclusive o homem, foram comparados. Quatorze cepas (duas de cada espécie) mais duas cepas de origem humana e a cepa de referência foram rompidas por ultra-som e suas proteínas solúveis totais analisadas através das técnicas de SDS-PAGE em gel de poliacrilamida a 12% e análise densitométrica. Todas as cepas tinham em comum bandas que migraram em regiões que correspondiam ao peso molecular de 45 e 66 Kda. As regiões discordantes correspondiam principalmente às regiões entre 97 e 200 Kda. Das 17 cepas, 13 (76.5%), foram classificadas como biotipo I, três (17.6%) como biotipo II e uma (5.8%) como biotipo III. Uma vez que os extratos de proteínas foram obtidos de células que se desenvolveram sob condições idênticas, possibilitando a expressão do mesmo fenótipo, estas regiões protéicas discordantes poderiam estar relacionadas a diferentes sorotipos ou genótipos. <![CDATA[<B><I>Salmonella </I>in Brazilian and imported pet reptiles</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400007&lng=en&nrm=iso&tlng=en The presence of salmonellae in fecal samples or cloacal swabs of 97 pet reptiles (15 snakes, 24 lizards and 58 chelonians) was investigated. Thirty seven animals had national origin and 60 were imported. Salmonella spp was detected in 39.1% of the reptiles, being 62.5% in lizards, 53.3% in snakes and 25.8% in chelonians. Strains belonged to subspecies I (44.7%), II (10.5%), IIIa (5.2%), IIIb (21.0%) and IV (18.5%) of the enterica species, with predominance (55.3%) of subspecies usually found in cold-blooded animals (II to IV). In the subspecies I, the serovars Albany, Enteritidis and Typhimurium predominated. The Trachemys scripta elegans imported turtles corresponded to 93.3% (14/15) of the salmonellae-positive chelonians. The national iguanas presented a high rate of colonization (77.7% - 7/9). These animals pose a potencial risk to the human health, demanding sanitary control and more information to the public.<hr/>A presença de salmonelas em amostras de fezes ou swabs cloacais de 97 répteis de estimação (15 cobras, 24 lagartos e 58 quelônios), dos quais 37 eram de origem nacional e 60 importados, foi investigada. Salmonella spp foi detectada em 39,1% dos répteis estudados, sendo 62,5% em lagartos, 53,3% em cobras e 25,8% em quelônios. Foram caracterizadas as subespécies I (44,7%), II (10,5%), IIIa (5,2%), IIIb (21,0%) e IV (18,5%) da espécie enterica, com predominância (55,3%) das subespécies habitualmente encontradas em animais de sangue frio (II a IV). Na subespécie I, houve maior freqüência dos sorovares Albany, Enteritidis e Typhimurium. As tartarugas importadas Trachemys scripta elegans corresponderam a 93,3% dos quelônios portadores de salmonelas. Os iguanas nacionais apresentaram elevado índice de colonização (77,7% - 7/9). Conclui-se que esses animais apresentam risco potencial à saúde humana, havendo necessidade de controle sanitário e maior esclarecimento ao público. <![CDATA[<B>Isolation of <I>Leptospira santarosai</I>, serovar guaricura from buffaloes (<I>Bubalus bubalis</I>) in Vale do Ribeira, São Paulo, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400008&lng=en&nrm=iso&tlng=en In April 1998 urine samples from adult female buffaloes were collected in a farm located in Registro, Vale do Ribeira, São Paulo State, Brazil. The urine samples obtained after furosemide injection were immediately transported to the laboratory in liquid modified EMJH medium and seeded, by the serial dilution technique, into Fletcher's or modified EMJH-0.2% agar, both of them with 5-fluorouracil 100mg/mL. The intraperitoneoum inoculation of 0.5 mL was also performed with each urine sample in young, adult hamsters (Mesocricetus auratus). All samples seeded directly in culture medium were contaminated. The hamsters did not show any sign of disease and were killed at the 21st post inoculation day. At this time kidney cultures of these animals were performed and from one of them, one leptospira strain (M04-98) was isolated, identified as belonging to serogroup Sejroe by Microscopic Agglutination Test (MAT) with a panel of 36 rabbit sera against serovars representative for the pathogenic serogroups. Subsequently, MAT was carried out with antisera against the 19 reference strains of serogroup Sejroe, revealing a close relationship with serovar guaricura. Afterwards the MAT was done with a panel of 18 monoclonal antibodies representative for serovars of serogroup Sejroe. The histogram closely resembled that of serovar guaricura. So Cross Agglutination Absorption Test (CAAT) was carried out with the buffalo isolate and serovar guaricura, supporting the relationship between the buffalo isolate and serovar guaricura.<hr/>Em Abril de 1998 foram colhidas amostras de urina de búfalas fêmeas adultas em uma Fazenda localizada em Registro, Vale do Ribeira, São Paulo, Brasil. Estas amostras foram obtidas após a injeção de furosemida (0,8 mg/kg, iv), transportadas para o Laboratório em meio de EMJH modificado e semeadas pela técnica das diluições seriadas em meios de Fletcher ou EMJH modificado com 0,2% de agar, ambos acrescidos de 5-fluorouracil 100 mg/mL. Também foi efetuada a inoculação, em hamsters (M.auratus), 0,5 mL da amostra, via intraperitonial. Todos os cultivos de urina apresentaram contaminação e foram descartados. Os hamsters não apresentaram sinais de doença e foram sacrificados no 21º dia pós-inoculação; nesta ocasião foram efetuados cultivos do tecido renal destes animais, dos quais foi isolada uma estirpe de leptospira (M04-98). A identificação deste isolado foi iniciada com um painel de 36 antisoros contra amostras patogênicas e o mesmo foi identificado como pertencente ao sorogrupo Sejroe. Subseqüentemente com painel de anticorpos monoclonais e teste de absorção cruzada de aglutininas a identidade do isolado foi confirmada como L. santarosai, sorogrupo Sejroe, sorovar guaricura. Este foi o primeiro isolamento de leptospira de búfalos efetuado no Brasil. <![CDATA[<B>Immunoblot profiles of sera from laboratory rats naturally infected with <I>Mycoplasma pulmonis</I> and technicians exposed to infected animal facilities</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400009&lng=en&nrm=iso&tlng=en Mycoplasma pulmonis have been isolated in about 10(5) CFU/mL from tracheal aspirates of rats from conventional animal facilities in São Paulo. The mycoplasma transmission by aerosol may happen from an infected rat to a healthy one at distances up to 120 cm. This condition also favors the technicians contamination. As this infection is unknown in humans, in this study the immunoblot profiles to M. pulmonis of sera from rats were compared to those presented by animal facility technicians. About 32 proteins from 11 to 230 kDa (kilodaltons) were recognized by the sera from rats naturally infected with M. pulmonis. Sera from technicians responsible for the cleaning and sanitation of cages of infected animals for more than seven years recognized about 10 proteins of this bacteria. Sera from individuals with shorter working time or that had never been exposed to such environment recognized few proteins. Proteins about 117 and 95 kDa were recognized by human and rat sera and by the negative controls. Although a positive human serum against M. pulmonis is unknown, this study established a temporary profile of protein recognition of human serum against such mycoplasma.<hr/>Mycoplasma pulmonis foi isolado em aproximadamente 10(5) UFC/mL do lavado traqueal de ratos mantidos em biotérios convencionais da cidade de São Paulo. A transmissão do micoplasma por aerossol pode ocorrer entre os animais em até 120 cm. Esta condição favorece a sua transmissão para os bioteristas que também são expostos a este microrganismo. Como esta colonização é desconhecida em humanos, as imunoeletroforeses dos soros destes indivíduos foram comparados à com os dos ratos. Aproximadamente 32 proteínas de 11 a 230 kDa foram reconhecidas pelo soros dos ratos naturalmente infectados com M. pulmonis. Os soros dos bioteristas que estão envolvidos por mais de 7 anos na higenização das caixas com animais infectados reconheceram cerca de 10 proteínas deste microrganismo. O soro de indivíduos com menos tempo de serviço neste ambiente ou aqueles que nunca estiveram em biotérios reconhecerem poucas proteínas. As proteínas de aproxi-madamente 117 and 95 kDa foram reconhecidas pelo soro de ratos, humanos e soros controle negativos. Embora desconhece-se um soro humano positivo contra M. pulmonis, este estudo apresenta o perfil imunoeletroforético dos indivíduos expostos a este microrganismo. <![CDATA[<B>Nitrogen consumption during batch cultivation of <I>Neisseria meningitidis</I> (serogroup C) in Frantz medium</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400010&lng=en&nrm=iso&tlng=en Capsular polysaccharide, extracted from microorganism cultivations, is the principal antigen for elaboration of vaccine against the disease caused by Neisseria meningitidis serogroup C. The final protein content allowed in this vaccine is 1%. In order to find a relationship between nitrogen consumption and cell growth, including polysaccharide production, and cell nitrogen content, cultivations were carried out in an 80 liters bioreactor (total capacity), under the following conditions: Frantz medium; temperature of 35ºC; air flow of 5 L/min (0.125 vvm); agitation frequency of 120 rpm and vessel pressure of 6 psi (kLa = 0.07 min-1). Concentrations of biomass, total polysaccharide, cellular nitrogen, residual organic and inorganic nitrogen in the medium were measured during cultivation. From five cultivations carried out under the same conditions, a mean cell nitrogen percentage of 12.6% (w/w) in respect to the dry biomass was found. The inorganic nitrogen in the medium did not change significantly along the cultivation time, whereas the organic nitrogen consumption was linearly related to cell growth, with constant yield factors (average of 8.44). Polysaccharide production kinetics followed the cell growth kinetics until the beginning of the stationary growth phase. A supplemental polysaccharide production was observed until the end of cultivation, but without cell nitrogen absorption. Thus, the results indicate that polysaccharide is produced in two phases, being the first one biomass formation followed by non-associated to growth.<hr/>Polissacarídeo capsular, extraído de cultivos microbianos, é o principal antígeno para o preparo da vacina contra a doença causada por Neisseria meningitidis sorogrupo C. O conteúdo final de proteína permitido nessa vacina é de 1%. De modo a encontrar uma relação entre o consumo de nitrogênio, o crescimento microbiano (incluindo a produção de polissacarídeo) e o conteúdo de nitrogênio celular, cultivos foram realizados em um fermentador de 80 L (capacidade total), sob as seguintes condições: meio de Frantz; temperatura de 35ºC; vazão de ar de 5 L/min (0,125 vvm); freqüência de agitação de 120 rpm e pressão da dorna de 6 psi (kLa = 0.07 min-1). Durante os cultivos, foram determinadas as concentrações de biomassa, polissacarídeo, nitrogênio celular, nitrogênio residual orgânico e inorgânico no meio. De cinco fermentações realizadas sob as mesmas condições, encontrou-se uma porcentagem média de nitrogênio celular de 12,6% (p/p) em relação à biomassa seca. O nitrogênio inorgânico do meio não apresentou variação significativa ao longo do tempo de cultivo, enquanto que o consumo de nitrogênio orgânico foi linearmente relacionado com o crescimento da população celular, com fatores de conversão constantes (média de 8,44). A cinética de produção de polissacarídeo acompanhou a de crescimento da cultura celular até o começo da fase estacionária de crescimento e, a partir desse momento até o fim do cultivo, foi observada uma produção suplementar de polissacarídeo, mas sem absorção de nitrogênio pelas células. Assim, os resultados indicaram uma estratégia de produção de polissacarídeo em duas etapas, sendo a primeira crescimento celular seguida da produção de polissacarídeo não-associado ao crescimento microbiano. <![CDATA[<B>Desiccation resistance in <I>Arcobacter</I> <I>butzleri</B></I>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400011&lng=en&nrm=iso&tlng=en The desiccation resistance of A. butzleri was studied. Two, 3 and 4 of the strains did not resist desiccation for more than 2, 12 and 36 h, respectively. Two strains resisted desiccation for > 48 h. A. butzleri seems to be more resistant to desiccation than the classical enteropathogenic Campylobacter species.<hr/>A resistência de Arcobacter butzleri à dessecação foi determinada. Duas, 3 e 4 amostras não resistiram a dessecação por mais de 2, 12 e 36 h, respectivamente. Duas amostras resistiram a dessecação por > 48 h. A. butzleri seria mais resistente que as espécies enteropatogênicas clássicas de Campylobacter. <![CDATA[<B>Diffuse and enteroaggregative patterns of adherence of <I>Escherichia coli</I> isolated from stools of children in northeastern Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400012&lng=en&nrm=iso&tlng=en Childhood diarrheal diseases remain highly endemic in northeastern Brazil. The attributable fraction of all diarrheal diseases among children less than 2 years of age due to Escherichia coli was examined in a 2-year prospective study in two large urban centers of Brazil. Between May 1997 and June 1999, fecal E. coli isolates from 237 children with diarrhea (217 acute and 20 persistent cases) and 231 children without diarrhea (controls) attending two hospitals in Northeast Brazil were tested for their pattern of adherence to HEp-2 cells and for colony hybridization with DNA probes specific for the six pathotypes of diarrheagenic E. coli. Enteroinvasive E. coli, enterotoxigenic E. coli and enterohemorrhagic E. coli were not isolated from any children. Diffusely adherent E. coli (DAEC) and enteroaggregative E. coli (EAEC) were the most frequent isolates with similar frequencies from children with or without diarrhea. Atypical EPEC (EAF-negative) strains were isolated with similiar frequency from both cases (5.5%) and controls (5.6%). Enteropathogenic E. coli (typical EPEC) strains, characterized by localized adherence pattern of adherence, hybridization with the EAF probe, and belonging to the classical O serogroups, were significantly associated with diarrhea (P = 0.03). These E. coli strains associated with diarrhea accounted for 9% of all children with diarrhea. Collectively, in Northeast Brazil, E. coli strains comprise a small proportion of severe diarrhea prevalence in children.<hr/>Na região nordeste do Brasil a doença diarréica na infância continua sendo altamente endêmica. Com o objetivo de determinar a prevalência das diferentes categorias de E. coli diarreiogênica foi realizado um estudo prospectivo de dois anos em dois grandes centros urbanos dessa região. Entre maio de 1997 a junho de 1999, foram examinadas amostras de Escherichia coli isoladas de 237 fezes de crianças com diarréia (217 aguda e 20 persistente casos) e 231 de crianças sem diarréia (controles) atendidas em dois hospitais na região nordeste do Brasil quanto a adesão a células HEp-2 e hibridização com sondas genéticas especîficas para as seis categorias de E. coli diarreiogênica. E. coli que adere difusamente (DAEC) e E. coli enteroagregativa (EAEC) foram as categorias mais frequentemente isoladas tanto em casos como em controles. E. coli enteropatogênica atípica (EPEC) foi isolada tanto em casos (5.5%) como em controles (5.6%). Amostras de E. coli enteropatogênica (EPEC típica), caracterizadas pelo padrão de adesão localizada, hibridização positiva com a sonda EAF e pertencentes aos sorogrupos clássicos foram mais frequentes em casos do que em controles, significantemente relacionadas com diarréia (P = 0.03). Essas amostras constituíram o terceiro patógeno, depois de rotavirus e Shigella spp, com predomínio significantemente maior entre os casos. Concluindo, na região nordeste do Brasil as EPEC respondem por 9% dos casos de diarréia grave em crianças menores de dois anos. <![CDATA[<B>Screening and genetic improvement of pectinolytic fungi for degumming of textile fibers</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400013&lng=en&nrm=iso&tlng=en Aiming at contributing to technological improvements in plant fiber processing methods, this paper reports research work on the obtainment of more efficient pectinase-producing fungi strains. More specifically, this work reports the analysis of 18 strains of filamentous fungi, with the purpose of obtaining enzymes for textile fibers degumming. The strains were evaluated for production of pectinolytic enzymes under several growth conditions (culture medium and growth temperature). Production of pectinases was measured by an enzymatic index (EI) in solid pectin medium. Among the tested strains, Penicillium chrysogenum IFO 4626 (Q 176) showed the best performance. Genetic improvement of this strain was carried out to increase its pectinase production, while keeping cellulase activity down to a negligible level, since cellulases are known to decrease the resistance of the fiber. Variability was induced through several cycles of mutation and selection by exposing conidea to ultra-violet light (UV). We selected 39 out of 390 isolated colonies. Resulting mutants produced nine times more pectin lyase (PL) than the original strain in terms of PL specific activity, and five times more in terms of PL activity (i.e. mmoles liberated per minute of reaction per mL of medium). Periodically, mutant performance was evaluated in solid pectin medium. Genetic stability was maintained for four years after isolation.<hr/>Com a intenção de melhorar tecnologicamente os métodos de processamento de fibras vegetais, o presente trabalho comunica pesquisas feitas para obter linhagens mais eficientes de fungos produtores de pectinases. Mais especificamente com o objetivo de obter enzimas para degomagem de fibras têxteis caracterizou-se 18 linhagens de fungos filamentosos quanto a algumas condições de cultivo (meio de cultura e temperatura de crescimento) e quanto ao índice enzimático (IE) em meio de pectina sólido. Constatou-se superioridade da linhagem IFO 4626 (Q 176) de Penicillium chrysogenum e conduziu-se melhoramento genético da mesma com o objetivo de elevar sua produção de pectinases, mantendo em níveis insignificantes a atividade de celulases. Induziu-se mutações por meio de luz ultra-violeta e selecionou-se as 39 melhores linhagens entre 390 isolados. Obteve-se mutantes com produção de pectina liase aproximadamente nove vezes superior à da linhagem original no que se refere à atividade específica de PL e cinco vezes superior em termos de atividade de PL (liberação de µMoles por minuto de reação e mL de meio). Periodicamente, o desempenho dos mutantes foi avaliado em meio de pectina sólido. A estabilidade genética manteve-se por 4 anos após o isolamento dos mesmos. <![CDATA[<B>Partial purification and characterization of exopolygalacturonase II and III of <I>Penicillium frequentans</B></I>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400014&lng=en&nrm=iso&tlng=en Previous studies from our laboratory have demonstrated that the fungus Penicillium frequentans produces high levels of polygalacturonase and pectinesterase. Endopolygalacturonase I (Endo-PG I) and Exopolygalacturonase I (Exo-PG I) were previously purified and characterized. In the present study two extracellular polygalacturonases were separated, partially purified and biochemically characterized. Both were characterized as exopolygalacturonases so they were named exopolygalacturonase II (Exo-PG II) and exopolygalacturonase III (Exo-PG III) which had a molecular mass of 63 kDa (Exo-PG II) and 79 kDa (Exo-PG III). The Km values were 1.6 and 0.059 g/L and the Vmax values were 2571 and 185 U/mg, respectively. The optimum temperature was 50ºC for both enzymes, while the optimum pH was 5.0 for Exo-PG II and 5.8 for Exo-PG III.<hr/>Estudos prévios realizados em nosso laboratório demonstraram que o fungo Penicillium frequentans produz altos níveis de poligalacturonase e pectinesterase. Endopoligalacturonase I (Endo-PG I) e Exopoligalacturonase I (Exo-PG I) já foram previamente purificadas e caracterizadas. No presente trabalho foram separadas, purificadas parcialmente e caracterizadas bioquimicamente duas poligalacturonases extracelulares. Ambas foram caracterizadas como exopoligalacturonases e então foram designadas exopoligalacturonase II (Exo-PG II) e exopoligalacturonase III (Exo-PG III) as quais apresentaram massa molecular de 63 kDa (Exo-PG II) e 79 kDa (Exo-PG III). Os valores de Km foram 1,6 e 0,059 g/L e os de Vmáx = 2571 e 185 U/mg, respectivamente. A temperatura ótima de ambas foi 50ºC e enquanto o pH ótimo da Exo-PG II foi 5,0 o da Exo-PG III foi 5,8. <![CDATA[<B>Hygienic-sanitary conditions of vegetables and irrigation water from kitchen gardens in the municipality of Campinas, SP</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400015&lng=en&nrm=iso&tlng=en We examined samples of irrigation water and vegetables from kitchen gardens in Campinas, Brazil. The bacterial analysis condemned 22.3% of the vegetable samples, and the parasitological examination condemned 14.5%. The criteria established by the Brazilian legislation condemned 11.8% of the irrigation water samples. Parasites were significantly more frequent in vegetables in the rainy season, while excessive fecal coliforms were more frequent in the dry season. A proper monitoring of the irrigation water supply is important to avoid the contamination of vegetables.<hr/>Foram analisadas amostras de água de irrigação e vegetais de hortas de Campinas, SP. A análise bacteriana condenou 22,3% das hortaliças e o exame parasitológico condenou 14,5%. O critério estabelecido pela legislação brasileira condenou 11,8% das amostras de água de irrigação. A contaminação de hortaliças por parasitas foi significantemente mais freqüente na estação chuvosa, enquanto o excesso de coliformes fecais foi mais freqüente na estação seca. O monitoramento adequado da água de irrigação é importante para evitar a contaminação de vegetais. <![CDATA[<B>Antimicrobial susceptibility, hemolysis, and hemagglutination among <I>Aeromonas </I>spp. isolated from water of a bovine abattoir</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400016&lng=en&nrm=iso&tlng=en The presence of Aeromonas spp. in food has been demonstrated. They are often introduced from water, which is the natural habitat of many species and is thought to be the main source of contamination. The occurrence of Aeromonas spp. was investigated in 70 water samples of a bovine abattoir. Aeromonas spp. were present in 21.4% of water samples. A. hydrophila was isolated from 11.4% of supplying water samples and from 25.7% of the water drained from carcasses, whereas A. sobria was sole isolated from 5.7% of supplying water samples. Although greater number of positive samples were from water drained from carcasses, only A. hydrophila isolates were present. This suggests that the supplying water is the source of contamination. The antibiotic susceptibility testing revealed all strains were resistant to b-lactam antibiotics. However, the susceptibility to other antimicrobials was variable, being A. hydrophila more resistant than A. sobria strains. The investigation for virulence factors revealed positive reactions of hemolysis and hemagglutination. The results indicate that Aeromonas spp. are present in the supplying water system. These microorganisms may be a potential contaminant of carcasses and widespread in derived food.<hr/>A presença de bactérias do gênero Aeromonas nos alimentos tem sido demonstrada. Normalmente destacam-se os alimentos que durante sua industrialização entraram em contato com a água, a qual é tida como habitat natural das diversas espécies e principal fonte de contaminação. Objetivando determinar a ocorrência de espécies de Aeromonas, bem como aspectos relacionados a sua virulência como capacidade de hemólise e hemoaglutinação, foram analisadas 70 amostras de água divididas entre água de abastecimento e de escoamento de lavagem das carcaças. De acordo com os resultados obtidos verificou-se a ocorrência de Aeromonas spp. em 21,4% das amostras. A. hydrophila obteve o maior índice de isolamento, 11,4% em água de abastecimento e 25,7% em águas de escoamento, já A. sobria foi isolada somente em água de abastecimento num percentual de 5,7%. O maior número de amostras positivas foram de águas de escoamento, porém com uma única espécie, isto sugere que a fonte de contaminação ainda é a água de abastecimento. Em relação ao teste de sensibilidade, a espécie A. hydrophila, apresentou uma maior resistência aos antibióticos testados do que a A. sobria. Foram observadas reações positivas de hemólise e hemoaglutinação para ambas espécies. Estes resultados indicam que Aeromonas spp. estão presentes no sistema de abastecimento de água, sendo potenciais contaminantes das carcassas e dos produtos derivados. <![CDATA[<B>Chemical and microbiological evaluation of the internal surfaces of aluminum tubes both unlined and lined with epoxi resin by means of the stereoscope and scanning electron microscope</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400017&lng=en&nrm=iso&tlng=en The internal surfaces of aluminum tubes, both unlined and lined with epoxy resin, which are used for packaged medicines such as creams, ointments, gels, etc., were evaluated chemically, and microbiologically with regard to microorganism adherence. Proof of porosity of the unlined aluminum surface and lined with epoxy resin, and the resistance to removal of the resin were observed using a scanning electron microscope and a stereoscope, with a digitalized image system. To evaluate the microorganisms adherence to the aluminum surface, unlined and lined with epoxy resin, sterilized disks (10mm in diameter) were immersed in Mueller Hinton Broth and placed in tubes of polypropylene with screw caps. The liquid culture medium was then inoculated with suspensions (10(9)CFU/ml) of the following microorganisms: Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Acinetobacter lwoffii and Candida albicans and incubated at 37°C under constant agitation (100rpm) for 12 days. The culture broth was changed every 3 days, after which the disks were removed, and observed under the scanning electron microscope. Microscopic observations revealed adherence of the microorganisms and biofilm on the aluminum surfaces both unlined and lined with epoxy resin.<hr/>A superfície interna das bisnagas fabricadas com alumínio não revestido e revestido com resina epóxi, utilizadas para acondicionar cremes, pomadas, géis, etc., foram avaliadas quimicamente e por métodos microbiológicos correlacionados com a aderência de microrganismos. A prova da porosidade e da resistência à remoção da resina foi observada por meio do microscópio eletrônico de varredura (Topcon FM300) e estereoscópio Leica (MZ12) acoplado a Sistema de Digitalização de Imagens. Para avaliar a ação dos microrganismos foram utilizados corpos-de-prova esterilizados (discos de 10mm de diâmetro), imersos em caldo Mueller Hinton (Difco) e colocados em tubos de polipropileno com tampa de rosca (Corning). Foram inoculados tubos com meio de cultura para cada uma das suspensões bacterianas (10(9)UFC/mL) de Streptococcus agalactiae, Staphylococcus aureus, Acinetobacter lwoffii e Candida albicans, incubados a 37°C, sob agitação constante durante 12 dias. O meio de cultura era trocado a cada 3 dias. Após esse período, os corpos-de prova foram removidos, processados e observados em microscópio eletrônico de varredura JEOL-JSM (T330A). A observação por meio do microscopio eletrônico de varredura mostrou a aderência e a formação de biofilme sobre a superfície de alumínio não revestido e revestido com resina epóxi. <![CDATA[<B>Occurrence of <I>Fusarium moniliforme</I> and fumonisins in kernels of maize hybrids in Venezuela</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822001000400018&lng=en&nrm=iso&tlng=en Fusarium moniliforme (FM) incidence and fumonisins (FUM) content were determined in white kernel samples of maize hybrids, harvested in farms of Guárico and Portuguesa states, Venezuela. FM incidence was estimated in subsamples placed on a malt-salt-agar medium. Values in the range of 0-15 % were considered low, from 15-30% intermediate, and more than 30% high. FUM content was quantified through specific immunoassay (Fumonitest, VICAM Sci. Tech., USA) and values above 1 ppm were considered high. The hybrids were compared using a completely randomized design and results were subjected to analysis of variance and mean comparisons. The correlation between FUM content and FM incidence was also estimated. FM and FUM were detected in all of the 89 samples. Mean incidence of FM among hybrids ranged from 26.0 to 72.0% in Portuguesa state (PS) and from 28.7 to 55.7 in Guárico state (GS). Significant differences among hybrids were determined in farms of El Playón and Turén, PS, and El Sombrero and El Socorro, GS. The incidence of FM was high in all hybrids. FUM contents ranged from 0.80 to 10.00 ppm in PS, and from 1.50 to 13.00 ppm in GS. Significant differences among hybrids were found in El Playón, PS, and in both locations of GS. Only in Ospino, PS, the content of FUM was correlated with FM incidence. This indicates the natural occurence of FM strains with different toxigenic capabilities. The results show that Guárico and Portuguesa states are hazardous regions regarding FM and FUM in maize kernels.<hr/>A incidência de Fusarium moniliforme (FM) e o conteúdo de fumonisinas (FUM) foram determinados em amostras de grãos brancos de híbridos de milho, coletados em fazendas dos estados Guárico e Portuguesa, Venezuela. Incidência de FM foi calculada em submostras colocadas em ágar malte-sal. Valores na faixa de 0-15% foram considerados baixos, de 15-30% intermediários, e acima de 30% altos. O conteúdo de FUM foi quantificado através de imunoensaio específico (Fumonitest, VICAM Sci. Tech., USA.) e valores acima de 1 ppm foram considerados altos. Os híbridos foram comparados utilizando um esquema completamente aleatório. A correlação entre conteúdo de FUM e incidência de FM também foi calculada. A presença de FM e de FUM foi detectada em todas as 89 amostras. A incidência média de FM nos híbridos variou de 26,0 a 72,0% no estado Portuguesa (PS) e de 28,7 a 55,7% no estado Guárico (GS). Diferenças significativas entre híbridos foram determinadas em fazendas de El Playón e Turén (PS) e El Sombrero e El Socorro (GS). A incidência de FM foi alta em todos os híbridos. Os teores de FUM variaram de 0,80 a 10,00 ppm em PS e de 1,50 a 13,00 ppm em GS. Diferenças significativas entre híbridos foram achadas em El Playón (PS) e em ambas localidades de GS. Somente em Ospino (PS), o teor de FUM correlacionou-se com a incidência de FM. Isto indica a ocorrência natural de cepas de FM com capacidades toxigenicas diferentes. Os resultados mostraram que os estados Guárico e Portuguesa são regiões de risco em relação à FM e FUM em grãos de milho.