Scielo RSS <![CDATA[Brazilian Journal of Microbiology]]> http://www.scielo.br/rss.php?pid=1517-838220070002&lang=en vol. 38 num. 2 lang. en <![CDATA[SciELO Logo]]> http://www.scielo.br/img/en/fbpelogp.gif http://www.scielo.br <![CDATA[<B>Employing pharmacokinetic and pharmacodynamic principles to optimize antimicrobial treatment in the face of emerging resistance</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200001&lng=en&nrm=iso&tlng=en Antimicrobial efficacy in vivo is not exclusively defined by the activity of an antibiotic as determined in the in vitro susceptibility test. Knowledge of the pharmacokinetics and pharmacodynamics of antimicrobials and all phenomena occurring between antimicrobial agents and microorganisms is imperative. The pharmacodynamic (PD) parameters most often used in studies of antibiotic effect include the following relationships: the maximum free concentration (fCmax) to minimum inhibitory concentration (MIC) ratio, the free area under the curve (fAUC/MIC) ratio and the duration of time the free concentration exceeds the MIC (fT>MIC). Utilization of known pharmacokinetic/ pharmacodynamic surrogate relationships should help to optimize treatment outcome, especially in the face of emerging resistance among Gram-positive and Gram-negative bacteria. Clinical studies in the field of antibacterial PD are still relatively scarce, and much information is needed to enable relevant dosing strategies for all types of antibiotics against all common infections and microorganisms. In this review, the distinctive patterns of antimicrobial activitybased on PD parameters are discussed. Various antibioticsand bacterial pathogens can be used as models to demonstrate the utilityof PD parameters in predicting the in vivo efficacy of antimicrobialtherapy. And finally, the use of computer modeling with Monte Carlo populationsimulations can further enhance the predictability of antimicrobial efficacywhen using PD parameters.<hr/>A eficácia antimicrobiana in vivo não pode ser definida exclusivamente pela atividade de um antibiótico determinada por um teste de sensibilidade in vitro. O conhecimento da farmacocinética e farmacodinâmica dos antimicrobianos, assim como de todos os fenômenos que ocorrem entre agentes antimicrobianos e microrganismos é fundamental na interpretação de alguns resultados. Os parâmetros farmacodinâmicos (PD) mais frequentemente usados nos estudos do efeito dos antibióticos incluem os seguintes relacionamentos: a concentração livre máxima (fCmax) com relação à concentração inibitória mínima (CIM), a área livre sob a curva (fAUC/CIM) e a duração do tempo em que a concentração livre excede a CIM (fT> CIM). A utilização dos dados conhecidos de farmacocinética/farmacodinâmica devem ajudar a otimizar o resultado dos tratamentos adotados, especialmente com relação à resistência emergente entre as bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Os estudos clínicos no campo da farmacodinâmica dos antimicrobianos ainda são relativamente escassos, e muita informação é necessária para permitir estratégias de dosagem relevantes para todos os tipos de antibióticos contra a todas as infecções e microorganismos comuns. Nesta revisão, os padrões distintos da atividade antimicrobianabaseado em parâmetros de farmacodinâmica são discutidos. Vários antibióticose patógenos bacterianos podem ser usados como modelos para demonstrar a utilidadede parâmetros de farmacodinâmica em predizer a eficácia in vivo da terapia antimicrobiana. E finalmente, o uso da modelagem computadorizada utilizando a simulação de Monte Carlo em determinadas populações podem realçar ainda mais o valor preditivo e a eficácia antimicrobiana quando se utilizam parâmetros de farmacodinâmica nas interpretações. <![CDATA[<B>Effect of substrate feeding on production of fructosyltransferase by <I>Penicillium purpurogenum</B></I>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200002&lng=en&nrm=iso&tlng=en Penicillium purpurogenum was found to produce both extracellular and intracellular fructosyltransferase. The organism could also produce sucrose hydrolytic enzyme. Sucrose was found to be the best carbon source for fructosyltransferase production. Maximum intracellular and extracellular fructosyltransferase production was observed after 3rd and 4th day of cultivation, respectively. The enzyme activity was optimum at temperature of 55ºC and pH 5.5. The addition of amino acids, like leucine induced slightly the extracellular fructosyltransferase production, where as histidine and leucine had little inductive effect on intracellular fructosyltransferase production. Enhanced production of fructosyltransferase by Penicillium purpurogenum was observed when sucrose content was restored by additional sucrose feeding to the cultivation medium during production period.<hr/>Penicillium purpurogenum foi identificado como produtor extracellular e intracelular de frutosiltransferase. O microrganismo também é capaz de produzir uma enzima hidrolítica de sacarose. Sacarose foi identificada como a melhor fonte de carbono para a produção de frutosiltransferase. A produção máxima de frutosiltransferase extracelular e intracelular foi observada após o 3º e 4º dia de cultivo, respectivamente. Atividade ótima da enzima foi observada na temperatura de 55º C e pH 5,5. A adição de amino ácidos, como leucina, induziu ligeiro aumento na produção extracelular de frutosiltransferase, enquanto que histidina e leucina induziram um pequeno aumento na produção da frutosiltransferase intracelular. Observou-se aumento na produção de frutosiltransferase por Penicillium purpurogenum quando a quantidade de sacarose era restaurada por adição do carboidrato ao meio de cultura durante o período de produção. <![CDATA[<B>Thermal and mechanical shocks affecting the first flush of production of <I>Lentinula edodes</I> on <I>Eucalyptus saligna</I> logs</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200003&lng=en&nrm=iso&tlng=en The aim of this work was to evaluate the effect of thermal and mechanical shocks on the productivity of Lentinula edodes colonized on 140 Eucalyptus saligna logs at different immersion times in water and in the first flush of production. The logs were immersed in water at low temperature (16ºC) or environmental temperature (22ºC), for 6, 10, 14, 18, 22, 26 and 38 hours. The mechanical shock treatment was accomplished by dropping the logs onto the floor three consecutive times, in a vertical position. Water temperature and immersion time affected L. edodes yield, which increased two to four times when the logs were immersed in cool water for the shortest times (6 and 10 hours). The mechanical shock treatment did not increase the sporophore yield.<hr/>O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do choque térmico e mecânico na produtividade de Lentinula edodes em 140 toras de Eucalyptus saligna, completamente colonizadas pelo fungo, em diferentes tempos de imersão em água e no primeiro fluxo de produção. As toras foram imersas em água resfriada (16ºC) ou à temperatura ambiente (22ºC); os períodos de imersão corresponderam a 6, 10, 14, 18, 22, 26 e 38 horas; o choque mecânico foi acompanhado por três quedas consecutivas da tora, em posição vertical, no chão. A temperatura da água e o tempo de imersão afetaram a produção de L. edodes, resultando em aumentos significativos (2 a 4 vezes) nos tratamentos em que as toras foram submetidas à água resfriada e nos tempos de imersão mais curtos (6 e 10 horas). O choque mecânico não resultou em aumento na produção de basidiomas. <![CDATA[<B><I>In vitro</I> antibacterial activity of the crude methanol extract of <I>Woodfordia fruticosa</I> Kurz. flower (Lythraceae)</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200004&lng=en&nrm=iso&tlng=en The antibacterial activity of the crude methanol extract of Woodfordia fruticosa Kurz. flower was evaluated at two different concentrations by the agar well diffusion method. The methanol extract of the flower exhibited antibacterial activity at varied levels except against Bacillus subtilis and Micrococcus flavus. The methanol extract was most active against Pseudomonas pseudoalcaligenes. The extract was more active against Gram-negative bacteria as compared to Gram-positive. The inhibitory effect of the extract was compared with standard antibiotics, amoxicillin and ciprofloxacin.<hr/>A atividade antibacteriana do extrato metanólico bruto da flor Woodfordia fruticosa Kurz. (Lythraceae) foi avaliada em duas concentrações diferentes através do método de difusão em poços. A atividade antibacteriana ocorreu em diferentes níveis, exceto contra Bacillus subtilis e Micrococcus flavus. O extrato metanólico foi mais ativo contra Pseudomonas pseudoalcaligens. O extrato foi mais ativo contra bactérias Gram negativas do que bactérias Gram positivas. O efeito inibitório do extrato foi comparado ao dos antibióticos padrão amoxicilina e ciprofloxacina. <![CDATA[<B>Rhizobia amylase production using various starchy substances as carbon substrates</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200005&lng=en&nrm=iso&tlng=en Six isolates of indigenous rhizobia of Central Amazonia were screened for the production of amylases in liquid media using various starchy substances as carbon sources. All rhizobia strains could produce more extracellular protein, biomass and amylases with the different kinds of carbon substrates. Among the carbon sources tested maltose was the best substrate for protein and amylase production. In general, peach palm flour and corn starch (maizena®) were also considered to be good carbon sources for rhizobia amylases. On the other hand, the biomass production by the rhizobia isolates was higher in the presence of oat flour. INPA strain R-926 was a good amylase producer in maltose (1.94 U) and corn starch (0.53 U) media. INPA strain R-991 was also a good amylase producer in maltose (1.66 U) and corn starch (1.59 U) yielding significant extracellular amylase. Correlation analysis showed significant and positive relationships between rhizobia amylases and final pH (r = 0.49, P < 0.05), extracellular protein (r = 0.47, P < 0.47) and biomass production (r = 0.69, P < 0.01) in the maltose medium. The results obtained in this study revealed several Central Amazonian rhizobia strains as promising sources of amylase for biotechnological applications, especially in starch industry.<hr/>Seis isolados de rizobia nativos da Amazonia Central foram selecionados para a produção de amilases em meio de cultura líquido, usando várias substâncias amiláceas como fontes de carbono. Os resultados mostraram que todos os isolados de rizobia podem produzir quantidades diferenciadas de proteína extracelular, biomassa e amilases com diferentes tipos de fontes de carbono. Entre as fontes testadas, maltose foi a melhor para as produções de proteína e amilase. Por outro lado, a produção de biomassa pelos isolados de rizobia foi maior na presença de farinha de aveia. O isolado INPA R-926 mostrou-se um bom produtor de amilase nos meios com maltose (1,94 U) e amido de milho (0,53 U). O isolado INPA R-991 também foi um bom produtor de amilase com rendimentos significativos na presença de maltose (1,66 U) e amido de milho (1,59 U). As análises de correlação revelaram relações positivas e significativas entre as atividades de amilase e pH final (r = 0,49, P < 0,05), proteína extracelular (r = 0,47, P < 0,47) e a produção de biomassa (r = 0,69, P < 0,01) no meio com maltose. Os resultados obtidos nesse estudo revelaram alguns isolados de rizóbio da Amazônia Central como fontes promissoras de amilases para aplicações biotecnológicas, especialmente na indústria do amido. <![CDATA[<B>Monitoring <I>Saccharomyces cerevisiae</I> populations by mtDNA restriction analysis and other molecular typing methods during spontaneous fermentation for production of the artisanal <I>cachaça</B></I>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200006&lng=en&nrm=iso&tlng=en An ecological study on Saccharomyces cerevisiae populations in spontaneous fermentation has been conducted in three vats of a cachaça distillery in Minas Gerais, Brazil. Ninety-seven yeast isolates were collected at the beginning, the middle and at the end of the production period, and were identified by standard methods. Differentiation between the indigenous S. cerevisiae strains isolated was performed by mitochondrial DNA (mtDNA) restriction analysis, RAPD-PCR, and PCR fingerprint using an intron splice primer. Analysis of the mtDNA restriction profiles revealed 12 different patterns, 11 corresponding to indigenous yeasts (I to XI) and one (XII) to a commercial strain of the bakery yeast. Pattern II (53.6% of the population) and pattern IV strains were present in all the vats. Pattern IV strain raised from the middle to the end of the period reaching proportions near those of pattern II strain. PCR methods allowed the differentiation of 41 molecular profiles. Both methods showed population fluctuation of S. cerevisiae strains along the period of cachaça production and among different vats of the distillery.<hr/>Um estudo ecológico das populações de Saccharomyces cerevisiae em fermentações espontâneas foi conduzido em três dornas de uma destilaria de cachaça em Minas Gerais, Brasil. Noventa e sete isolados foram coletados no início, meio e final do período de produção, e identificados por métodos padrões. A diferenciação entre as linhagens isoladas de S. cerevisiae indígenas foi feita pela analise de restrição do DNA mitocondrial (mtDNA), RAPD-PCR, e PCR por impressão digital do DNA utilizando um iniciador complementar a sítios de processamento de íntron. As análises dos perfis de restrição do mtDNA mostraram a ocorrência de 12 perfis diferentes, sendo 11 correspondentes as leveduras indígenas (I ao XI) e um (XII) a uma linhagem comercial de levedura de panificação. Linhagens com o perfil II (53,6% da população) e o perfil IV estiveram presentes em todas as dornas. A linhagem com perfil IV aumentou do meio para o final do período de fermentação, alcançando proporções próximas a aquelas encontradas para a linhagem com o perfil II. Os métodos baseados em PCR permitiram a diferenciação de 41 perfis moleculares. Ambos os métodos mostraram flutuações populacionais nas linhagens de S. cerevisiae durante o período de produção da cachaça e entre as diferentes dornas da destilaria. <![CDATA[<B>Production of 11<FONT FACE=Symbol>a</FONT>-hydroxyprogesterone using <I>Aspergillus terreus</I> immobilized on polytetrafluoroethylene</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200007&lng=en&nrm=iso&tlng=en In attempt to immobilize the mycelial fungi on a new hydrophobic matrix, Aspergillus terreus mycelia were immobilized into polytetrafluoroethylen (PTFE) and used for selected conversion of progesterone to 11alpha-hydroxyprogesterone. The immobilized cells exhibited higher yields than the free cells. Different parameters that can affect the cell activity were measured. The optimum pH was 6 and the optimum temperature was 30ºC. Higher transformation activities were achieved with matrix contained 40% PTFE. No considerable loss in yield was observed with storage of the cells at 4ºC for 30 days. Utilization of the immobilized cells in repeated batch processes indicated that the cells retained about 84% of their activity after reuse for eight successive cycles.<hr/>Com o objetivo de imobilizar o micélio fúngico em uma nova matriz hidrofóbica, o micélio de Aspergillus terreus foi imobilizado em politetrafluoretileno (PTFE) e usado para a conversão de progesterona em 11alfa-hidroxiprogesterona. As células imobilizadas apresentaram rendimento melhor que as células livres. Diferentes parâmetros que afetavam a atividade celular foram avaliados. O pH ótimo foi 6 e a temperatura ótima foi 30ºC. Verificou-se que a atividade de transformação era mais elevada quando a matriz continha 40% de PTFT. Não houve perda significativa de atividade após o armazenamento das células a 4ºC por 30 dias. Utilizando-se as células imobilizadas em partidas repetidas, verificou-se que mantinham cerca de 84% da atividade após oito ciclos sucessivos. <![CDATA[<B>Cellulase activities during decomposition of a submerged aquatic macrophyte (<I>Utricularia breviscapa</I>)</B>: <B>a microcosm assay</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200008&lng=en&nrm=iso&tlng=en Decomposition of lignocellulosic detritus at enzymatic level is the rate-limiting step during aquatic macrophyte decomposition. Assays were carried out to evaluate cellulase activity during decomposition of Utricularia breviscapa; the assays included the following C-sources: leachate, lignocellulosic matrix and integral detritus. The incubations comprised U. breviscapa C-sources added to Óleo lagoon (21º 36'S and 47º 49'W) water maintained in the dark under anaerobic condition at 15ºC, 20ºC, 25ºC and 30ºC. Cellulase activity were monitored during 180 days, with the activity showing a time evolution that depended on the temperature and type of detritus: (i) cellulase activity tended to occur earlier with increasing temperatures, but it was less intense than at lower temperatures, (ii) no activity was observed in incubations with leachate, (iii) cellulase activity was observed in the incubation with integral detritus and lignocellulosic matrix and (iv) higher cellulase activity was observed in the incubations with integral detritus at 15ºC (P < 0.05).<hr/>A decomposição dos detritos lignocelulósicos em nível enzimático é uma etapa limitante da decomposição de macrófitas aquáticas. Experimentos foram realizados para avaliar a atividade da celulase durante a decomposição de diferentes fontes de carbono provenientes de Utricularia breviscapa: lixiviado, matriz lignocelulósica e detritos íntegros. As incubações compreenderam as fontes de carbono de U. breviscapa adicionadas à água da lagoa do Óleo (21º 36'S e 47º 49'W) mantida no escuro à 15ºC, 20ºC, 25ºC e 30ºC. As atividades da celulase foram monitoradas durante 180 dias, apresentando uma evolução temporal dependente da temperatura e do tipo de detrito: (i) a atividade da celulase tendeu a ocorrer mais cedo nas temperaturas mais elevadas, porém foram menos intensas, que nas temperaturas mais baixas, (ii) nenhuma atividade foi observada nas incubações com lixiviado, (iii) as atividades da celulase foram observadas nas incubações com detritos integrais e com matriz lignocelulósica e (iv) as atividades da celulase foram mais elevadas nas incubações com detritos integrais à 15ºC (P < 0,05). <![CDATA[<B>Production and characterization of an enzyme complex from a new strain of <I>Clostridium thermocellum</I> with emphasis on its xylanase activity</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200009&lng=en&nrm=iso&tlng=en A new bacterial strain (ISO II) was isolated from manure cow and identified as phylogenetically close to the thermophilic cellulolytic bacterium Clostridium thermocellum. The new strain produced extracellular xylanase, pectinase, mannanase and cellulase activities when grown in liquid culture medium containing banana stem as carbon source. The enzyme production profile after growth on banana stem showed that xylanase and cellulase activities were detected in different incubation periods. An enzyme complex containing xylanase, cellulase and mannanase activities was isolated from culture supernatant samples of strainISO II. The complex was partially purified by ultrafiltration and gel filtration chromatography on Sephacryl S-300. Zymogram analysis after SDS-PAGE presented at least 05 subunits with xylanase activity. The enzyme showed single protein and xylanase activity bands after electrophoresis under non-denaturing conditions. The hydrolysis of xylan was optimal at temperature range of 55-75ºC and pH 6.0. Xylanase activity was quite stable at 65ºC, retaining 80% of its original activity after 12 h incubation. The apparent Km values, using insoluble and soluble arabinoxylans as substrates, were 1.54 and 11.53 mg/mL, respectively. Xylanase was activated by dithiothreitol, L-tryptophan and L-cysteine and strongly inhibited by N-bromosuccinimide and CoCl2. The characterization of mannanase showed Km and temperature optimum of 0.846 mg/mL and 65ºC, respectively and pH 8.0. By contrast to xylanase, it was less stable at 65ºC with half-life of 2.5 h and inhibited by dithiothreitol and Ca2+.<hr/>Uma nova linhagem de bactéria (ISO II) foi isolada de esterco bovino e identificada como filogeneticamente próxima à bactéria termofílica Clostridium thermocellum. A nova linhagem produziu atividades de xilanase, mananase, pectinase e celulase quando cultivada em meio de cultura líquido contendo engaço de bananeira como fonte de carbono. O perfil de produção enzimática após crescimento em engaço de bananeira mostrou que as atividades de xilanase e celulase foram detectadas em diferentes períodos de incubação. Um complexo enzimático, contendo atividades de xilanase, celulase e mananase, foi isolado de amostras de sobrenadante do meio de cultura da linhagem ISO II crescida em engaço de bananeira. O complexo foi parcialmente purificado por ultrafiltração e cromatografia de filtração em gel em coluna de Sephacryl S-300. Análise de zimograma mostrou 05 sub-unidades com atividade de xilanase. A amostra enzimática apresentou bandas únicas de proteína e atividade de xilanase após eletroforese sob condições não-desnaturantes. A hidrólise de xilana foi ótima no intervalo de temperatura de 55-75ºC e pH 6,0. A xilanase foi estável a 65ºC, mantendo 80% de sua atividade original após 12 h de incubação. Os valores de Km aparente, usando arabinoxilanas insolúveis e solúveis como substratos, foram 1,54 and 11,53 mg/mL, respectivamente. A xilanase foi ativada por ditiotreitol, L-triptofano and L-cisteina e fortemente inibida por N-bromosuccinamida e CoCl2. A caracterização da mananase do complexo mostrou Km e temperatura ótima de 0,846 mg/mL e 65ºC, respectivamente e pH 8,0. Ao contrário da xilanase, a mananase foi menos estável a 65ºC com meia vida de 2,5 h e inibida por ditiotreitol e Ca2+. <![CDATA[<B>Productivity, biological efficiency, and number of <I>Agaricus blazei</I> mushrooms grown in compost in the presence of <I>Trichoderma</I> sp. and <I>Chaetomium olivacearum</I> contaminants</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200010&lng=en&nrm=iso&tlng=en This experiment was carried out to evaluate the effect of the fungi Trichoderma sp. and Chaetomium olivacearum on the productivity, biological efficiency and number of Agaricus blazei mushrooms grown in compost (mixture of crushed sugarcane, coast-cross grass trash, soybean meal, gypsum, and calcitic limestone). The experiment consisted of 3 treatments (Trichoderma sp., C. olivacearum, and a control) with 8 replications each (box containing 12kg of compost colonized by A. blazei). Later, 150g of inoculum of each contaminant fungus (Trichoderma sp. and C. olivacearum) were distributed on the surface of the compost previously colonized by A. blazei. The experiment was conducted in a greenhouse with a plastic roof, under relative humidity of about 60-90% and temperature between 20-34ºC. Productivity was determined from the relation between fresh weight of the mushroom and fresh weight of the compost. Biological efficiency was determined from the relation between fresh weight of the mushroom and dry weight of the compost at the end of the harvesting period. Based on results obtained, the contaminant fungi did not affect the productivity, biological efficiency, and number of A. blazei mushrooms grown in compost when introduced into previously colonized composts.<hr/>Foi avaliado o efeito dos fungos contaminantes Trichoderma sp. e C. olivacearum na produtividade, eficiência biológica e número de cogumelos da produção do A. blazei em composto (mistura de cana-de-açúcar, palha de capim coast-cross, farelo de soja, gesso e calcário calcítico). O delineanamento foi inteiramente casualizado com três tratamentos (Trichoderma sp., C. olivacearum e testemunha) e oito repetições (caixa com 12 kg de composto colonizado com A. blazei). Após a colonização do composto pelo A. blazei, adicionou-se 150g de inóculo à base de triticale de cada um dos fungos contaminantes na superfície do composto seguido da camada de cobertura. O experimento foi conduzido em estufa com cobertura plástica, umidade relativa entre 60-90% e temperatura de 20-34ºC. A produtividade foi determinada pela relação entre a massa fresca de basidiomas e a massa úmida do composto. A eficiência biológica foi determinada pela relação entre a massa fresca de basidiomas e a massa seca do composto ao final do período de colheita. De acordo com os resultados obtidos, os fungos contaminantes C. olivacearum e Trichoderma sp. não afetaram a produtividade, eficiência biológica e número de cogumelos da produção do A. blazei em compostos previamente colonizados. <![CDATA[<B>Characterization of fungal inoculum used in soil bioremediation</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200011&lng=en&nrm=iso&tlng=en Studies have indicated the capacity of basidiomycetes to degrade recalcitrant organopollutants. However, the age of the fungal inoculum to obtain a more effective degradation has not been defined. The criterion used is total colonization of the substrate. Psilocybe castanella CCB444 and Lentinus crinitus CCB274 have been evaluated in soils containing hexachlorobenzene. In the present study, the physiological conditions of the fungal inocula were characterized on solid substrate (sugarcane bagasse, starch and soy flour). Colonization of the substrate, loss of organic matter, pH variation, organic carbon, total nitrogen, fungal biomass and enzymatic activity were evaluated over 30 days of incubation. Colonization of the substrate was almost complete after 20 days for both species, with about 90% of organic matter remaining on the substrates. The pH continued to be acid during incubation. The highest enzymatic production was observed at 10 days for L. crinitus and at 5 days for P. castanella. The fungi presented growth up to 30 days. The C/N ratio of the inocula showed little variation. The use among 10 and 15-day-old inoculum is adequate since sufficient nutrients are left to guarantee survival of the fungus, vigorous colonization of the substrate, a growing biomass and an active enzymatic system, thus permitting fungal growth in soil.<hr/>Estudos indicam capacidade de basidiomicetos em degradar organopoluentes recalcitrantes. Porém, ainda não foi padronizada a idade do inóculo fúngico a ser aplicado para que ocorra uma degradação mais efetiva. O critério utilizado é colonização total do substrato. Psilocybe castanella CCB444 e Lentinus crinitus CCB274 têm sido avaliados em solos com hexaclorobenzeno. No presente trabalho, foram caracterizadas as condições fisiológicas dos inóculos fúngicos em substrato sólido (bagaço de cana-de-açúcar , amido e farinha de soja). Determinou-se a colonização do substrato, perda de matéria orgânica, variação de pH, carbono orgânico, nitrogênio total, biomassa fúngica e atividade enzimática durante 30 dias de incubação. A colonização do substrato foi quase completa após 20 dias, para ambos os fungos, restando cerca de 90% de matéria orgânica nos substratos. O pH permaneceu ácido durante incubação. A maior produção enzimática foi aos 10 dias para L. crinitus e aos 5 dias para P. castanella. Os fungos apresentaram crescimento até os 30 dias. A relação C/N dos inóculos variou pouco. Conclui-se que, inóculos entre 10 e 15 dias de idade podem ser utilizados, pois ainda restam nutrientes suficientes para manter a sobrevivência do fungo, colonização vigorosa do substrato, biomassa crescente e sistema enzimático ativo, permitindo seu crescimento no solo. <![CDATA[<B>Effect of the culture conditions on the production of an extracellular protease by thermophilic <I>Bacillus</I> sp and some properties of the enzymatic activity</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200012&lng=en&nrm=iso&tlng=en Protease production by thermophilic Bacillus sp strain SMIA-2 cultivated in liquid cultures containing 1% maltose as a carbon source and supplemented with whey protein (0.1%) and corn steep liquor (0.3%) reached a maximum at 14 h, with levels of 42 U/mg protein. The microorganism was capable of utilizing a wide range of carbon sources, but protease activity varied according the carbon source. Starch and maltose were the best carbon sources in the present study for protease secretion, while lactose and sucrose were less effective. Increasing maltose concentration in the medium until 1%, improved the growth of the organism and the enzyme activity. Regarding the amounts of corn steep liquor and whey protein in the medium, the concentrations of 0.2% and 0.1% respectively, were considered the most effective for protease secretion by the organism. Studies on the protease characterization revealed that the optimum temperature of this enzyme was 70ºC. Thermostability profile indicated that the enzyme retained 80% of the original activity after 2 h heat treatment at 60ºC. At 70ºC, 70% of the original activity was retained after 15 min heat treatment. The optimum pH of the enzyme was found to be 8.5. After incubation of crude enzyme solution at room temperature for 2 h at pH 6.0-10.0, a decreased of about 15% of its original activity at pH 8.5 was observed. At pH 10.0, the decrease was 24%. In the presence of 1.0 M and 5.0 M NaCl, 76% and 37% of protease activity was retained after 2 h incubating at 45ºC respectively.<hr/>A produção de proteases pelo termofílico Bacillus sp cepa SMIA-2 cultivado em culturas líquidas contendo maltose (1%) e suplementada com proteínas de soro (0,1%) e água de maceração de milho (0,3%) alcançou o máximo em 14 h, com níveis de 42 U/mg proteína. O microrganismo foi capaz de utilizar várias fontes de carbono, mas a atividade da protease variou com cada fonte. Amido e maltose foram as melhores fontes para a secreção da protease, enquanto lactose e sacarose não foram muito efetivas. O aumento da concentração de maltose no meio de cultura até 1% melhorou o crescimento do organismo e a atividade da enzima. Em relação à concentração de proteínas do soro e da água de maceração de milho no meio de cultura, 0,1% e 0,2% respectivamente, foram as mais efetivas para a secreção da enzima pelo organismo. Estudos sobre a caracterização da protease revelaram que a temperatura ótima desta enzima foi 70ºC. Em relação a termoestabilidade da enzima, a protease manteve 80% de sua atividade original após 2 h de tratamento a 60ºC. A 70ºC, 70% de sua atividade original foi mantida após 15 min. O pH ótimo para atividade da enzima foi 8,5. Após a incubação da solução enzimática bruta a pH 6,0-10.0 por 2 h a temperatura ambiente, foi observado um decréscimo de em torno de 15% da sua atividade original a pH 8,5. A pH 10,0 o decréscimo na atividade foi de 24%. Na presença de 1.0 M e 5.0 M NaCl, 76% e 37% da atividade da protease foi mantida após 2 h de incubação a 45ºC respectivamente. <![CDATA[<B>Genetic diversity among <I>Botryosphaeria</I> isolates and their correlation with cell wall-lytic enzyme production</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200013&lng=en&nrm=iso&tlng=en Nine isolates of Botryosphaeria spp. were evaluated for their growth and the production of cell wall-lytic enzymes (laccase, pectinase and beta-1,3-glucanase) when grown on basal medium in the absence and presence of the laccase inducer, veratryl alcohol (VA). The genetic relationship among the nine isolates collected from different host plants was determined by RAPD analyses. ITS sequence analysis showed eight closely related isolates classified as Botryosphaeria rhodina, and one isolate classified as Botryosphaeria ribis. RAPD analysis resolved the isolates into three main clusters based upon levels of laccase and beta-1,3-glucanase activity. There appears to be no correlation between pectinase production and genetic diversity among the nine isolates. However, the strain characterized as B. ribis, positioned out of the main cluster, was found to be the highest producer of pectinases in the presence of VA.<hr/>Nove isolados de Botryosphaeria spp foram avaliados quanto ao crescimento e produção de enzimas líticas da parede celular (lacase, pectinase e beta-1,3-glucanase) quando cultivados em meio basal na ausência e presença do indutor de lacase álcool veratrílico (VA). As relações genéticas entre os nove isolados coletados de diferentes plantas hospedeiras foram determinadas por RAPD. A análise das seqüências de nucleotídeos da região ITS mostrou oito isolados estreitamente relacionados, os quais foram classificados como Botryosphaeria rhodina e um isolado como Botryosphaeria ribis. A análise por RAPD agrupou os isolados em três grupos principais condizentes com os níveis de atividades de lacase e beta-1,3-glucanase. Nenhuma correlação foi detectada entre a produção de pectinase e a diversidade genética nos nove isolados. Entretanto, a linhagem caracterizada como B. ribis, posicionada fora dos grupos principais, se mostrou maior produtora de pectinase na presença de álcool veratrílico. <![CDATA[<B>Partial characterization of antagonistic substance produced by a <I>Clostridium butyricum</I> strain</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200014&lng=en&nrm=iso&tlng=en The production of antagonistic substance by bacterium present in the infected root canal system (RCS) probably is an important ecological factor for its successful colonization of the local. The objective of this study was to partially characterize an antagonistic substance produced by a Clostridium butyricum isolated from infected RCS.Production of inhibitory compound was evaluated by the agar double layer diffusion technique using Fusobacterium nucleatum and Bifidobacterium adolescentis as indicator bacteria. The physicochemical and biochemical factors tested for the partial characterization were influence of pH and temperature and susceptibility to the action of some proteolytic enzymes. An inhibition zone was observed against the two indicator strains and acidity and bacteriophage were rejected as responsible for this phenomenon. The inhibitory activity showed to be decreasing in a pH range from 3.5 to 6.5 and being stable at temperatures of 60º, 70º and 100ºC, but completely inactivated when exposed at 121ºC. The antagonistic activity was resistant to the proteolytic action of trypsin, a-chymotrypsin and papain. An antagonistic substance was produced by C. butyricum, which was thermo-resistant and probably of non-protein nature.<hr/>A produção de substâncias antagonistas por espécies bacterianas presentes em sistema de canais radiculares (SCR) infectados, tem um papel importante na colonização deste sítio. O objetivo deste estudo foi caracterizar parcialmente a substância antagonista produzida por amostra de Clostridium butyricum isolado de SCR infectados.A produção de substância antagonista foi avaliada pela técnica de difusão em ágar utilizando como bactérias indicadoras Fusobacterium nucleatum e Bifidobacterium adolescentis. Os parâmetros físico-químicos utilizados durante a caracterização parcial foram: pH, estabilidade térmica, susceptibilidade à ação das enzimas tripsina, a-quimiotripsina e papaína. Foi observada zona de inibição contra as duas amostras indicadoras e ainda foi demonstrado que ácidos e bacteriófagos não eram responsáveis por este fenômeno. A atividade inibitória mostrou-se diminuída em uma faixa de pH de 3.5 a 6.5 e estável em temperaturas de 60º, 70º e 100ºC, sendo completamente inativada quando exposta a 121ºC. A atividade antagonista foi resistente à ação das enzimas proteolíticas: tripsina, a-quimiotripsina e papaína. A substância antagonista produzida por C. butyricum é termoresistente e provavelmente de natureza não protéica. <![CDATA[<B>Effect of different methods of sterilization on the inactivation of bacterial endotoxin (LPS) in endodontic files</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200015&lng=en&nrm=iso&tlng=en This study evaluated the presence of lipopolysaccharide (LPS) in endodontic files after in vitro contamination with E. coli LPS and sterilization in dry heat or wet heat, with or without previous immersion in a Ca(OH)2 suspension. LPS was quantified using the Kinetic QCL TM test and data were analyzed statistically by the t-test. LPS was quantified only in the contaminated group, not submitted to any immersion or sterilization procedure (0.262±0.1296 endotoxin units/mL) (p=0.0003). In conclusion, both wet heat and dry heat sterilization were effective in inactivating LPS without the need of previous immersion of the files in a Ca(OH)2 suspension.<hr/>Este estudo avaliou a presença de endotoxina (LPS) em limas endodônticas após contaminação in vitro com LPS de E. coli e esterilização em autoclave ou forno de Pasteur, com ou sem imersão prévia em suspensão de hidróxido de cálcio. A quantificação do LPS foi efetuada pelo teste Kinetic QCL TM, e os resultados submetidos à análise estatística (teste t). LPS foi quantificado apenas no grupo contaminado e não submetido a nenhum procedimento de imersão ou esterilização (0,262±0,1296 unidades de endotoxina/mL) (p=0,0003). Concluiu-se que a esterilização das limas em autoclave ou forno de Pasteur foi eficaz na inativação do LPS, não sendo necessária a sua imersão prévia em suspensão de hidróxido de cálcio. <![CDATA[<B>Atypical phenotypic characteristics of klebsiella pneumoniae isolates from an outbreak in a neonatal intensive care unit in Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200016&lng=en&nrm=iso&tlng=en Extended-spectrum beta-Lactamase-producing (ESBL) Klebsiella sp.isolates from an outbreak in a Neonatal Intensive Care Unit (NICU) at a teaching hospital in Londrina, Paraná State, Brazil, presented atypical phenotypic characteristics that hampered their identification and the distinction between Klebsiella and Enterobacter species. Ten isolates were identified as K. pneumoniae due to negative reactions for motility and inducible beta-lactamase test (ESBL and AmpC) despite being positive for ornithyne descarboxilase. These isolates were genotyped by ribotyping and polymerase chain reaction (PCR) with repetitive extragenic palindromic sequences (REP). Ribotyping by means of an automated instrument and EcoRI and Pvu II as restriction enzymes resulted indetection of K. pneumoniae subspecie pneumoniae RIBO1 222-36-S-5 ribotype. Typing by REP-PCR showed that the 17 isolates from the outbreak were highly similar, belonging to one cluster with 100% of similarity, and that they presented more than 70% of similarity with K. pneumoniae ATCC 13883 and ATCC 10031, and 25% of similarity with E. aerogenes CDC 1680. In conclusion, the isolates of the outbreak were identified as Klebsiella pneumoniae, despite presenting ornithyne descarboxilase enzyme, which is an atypical characteristic of this Klebsiella species.<hr/>Isolados de Klebsiella sp. produtora de beta-lactamase de espectro estendido (ESBL), responsável por um surto na Unidade Neonatal de Terapia Intensiva (UNTI) do Hospital Universitário de Londrina, Paraná, Brasil apresentaram características fenotípicas atípicas que dificultaram sua identificação e a diferenciação entre as espécies Klebsiella pneumoniae e Enterobacter aerogenes. Dez isolados foram identificados como K. pneumoniae devido às reações negativas para motilidade e produção de enzimas beta-lactamases (ESBL e AmpC). Embora apresentassem teste positivo para ornitina descarboxilase. Estes isolados foram genotipados por ribotipagem e por reação em cadeia da polimerase (PCR) com oligonucleotídeos para "repetitive extragenic palindromic sequences" (REP). A ribotipagem com as enzimas de restrição EcoRI e Pvu II detectou o ribotipo de K. pneumoniae subespécie pneumoniae RIBO1 222-36-S-5. A técnica de REP-PCR mostrou que os isolados do surto foram similares, pertencentes a um grupo com 100% de similaridade, e apresentaram mais de 70% de similaridade com amostras padrão de K. pneumoniae (ATCC 13883 e 10031), e 25% de similaridade com E. aerogenes CDC 1680. Concluindo, os isolados do surto da NICU mostraram se geneticamente relacionados e foram identificados como Klebsiella pneumoniae, embora apresentassem ornitina descarboxilase, característica atípica para esta espécie de Klebsiella. <![CDATA[<B>Genetic relatedness among clinical strains of <I>Stenotrophomonas maltophilia</I> in tertiary care hospital settings in São Paulo State, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200017&lng=en&nrm=iso&tlng=en Stenotrophomonas maltophilia is a Gram-negative bacillus, which is becoming widely recognized as an important nosocomial pathogen. The main objective of this study was to evaluate the genetic relatedness, by random amplified polymorphic DNA (RAPD) and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) of 86 clinical isolates of S. maltophilia (colonization 22, infection 64) obtained from 79 hospitalized patients, from different geographic regions of São Paulo State. The genotypic analysis performed by RAPD and PFGE was used in 24 isolates for genetic identity confirmation. The results were congruent between the two methods but it was not possible to link genetic profiles with the studied variables, clinical state and geographic area, probably due to the great variability among the strains. The analyses by PFGE confirmed identity in 5 pairs of microorganisms and RAPD, in this study, showed to be a useful tool for investigation of diversity leading the identification of 85 genetic profiles. The genetic diversity shown may be due to re-infection by different strains or co-infection by multiple strains which suggests multiple entry sources of the bacterium in the hospital setting or of acquisition by patient. In this setting, colonization, infection and re-infection occur with unknown frequency, raising the need for the establishment of specific control measures.<hr/>Stenotrophomonas maltophilia é um bacilo Gram-negativo, conhecido como importante patógeno nosocomial. O principal objetivo desse estudo foi avaliar a relação genética, através da análise randômica do polimorfismo de DNA (RAPD) e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE), de 86 isolados clínicos de S. maltophilia (22 de colonização, 64 de infecção) obtidos de 79 pacientes hospitalizados em diferentes regiões geográficas do estado de São Paulo. A análise genotípica foi realizada através da técnica RAPD e o PFGE foi usado em 24 isolados para confirmar a identidade genética dos mesmos. Os resultados foram coerentes entre os dois métodos, mas não foi possível correlacionar um perfil genético com as variáveis estudadas, estado clínico e área geográfica, provavelmente pela ampla variabilidade entre as linhagens. A análise por PFGE confirmou a identidade genética em 5 pares de microrganismos e o RAPD, neste estudo, mostrou ser uma ferramenta útil para investigação da diversidade, possibilitando identificar 85 perfis genéticos. A diversidade genética observada através do RAPD pode ser devido à re-infecção por diferentes linhagens ou co-infecção por linhagens distintas, sugerindo múltiplas fontes de entrada da bactéria no hospital ou de aquisição pelo paciente. Nesse ambiente, a colonização, infecção e re-infecção ocorrem com freqüência, o que leva à necessidade do estabelecimento de medidas de controle específicas. <![CDATA[<B><I>Fusarium lateritium</I> (NEES) as an agent of fungemia in a patient infected with the human immunodeficiency virus (HIV)</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200018&lng=en&nrm=iso&tlng=en Emerging fungal pathogens are associated with significant morbidity and mortality in the immunocompromised host. The association of fungi from the Fusarium genus with human infection in uncommon. The objective of this paper is to report the first case of fungaemia caused by Fusarium lateritium in a 42-year-old HIV-infected patient.<hr/>Patógenos fúngicos emergentes estão associados com morbidade e mortalidade no hospedeiro imunocomprometido. O gênero Fusarium raramente está associado com infecção humana. O objetivo deste estudo é relatar o primeiro caso de fungemia causada por Fusarium lateritium em um paciente infectado pelo HIV com 42 anos de idade. <![CDATA[<B>Pheno- and genotypic characterization of <I>Listeria monocytogenes</I> clinical isolates from the southwestern region of the State of São Paulo, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200019&lng=en&nrm=iso&tlng=en Considering the lack of information available in Brazil concerning listeriosis, the present study aimed to analyze phenotypic and genotypically Listeria monocytogenes clinical isolates from the Southwestern region of the State of São Paulo, Brazil. From January 1995 to May 2005, thirteen isolates of L. monocytogenes from twelve patients with listeriosis were sent to the Adolfo Lutz Institute (Campinas Regional Laboratory, São Paulo, Brazil). The antimicrobial susceptibility of the isolates was evaluated by the microdilution broth method for ampicillin, gentamicin, trimethoprim, sulfamethoxazole and vancomycin. They were also serotyped (Denka Seiken, Japan), and sub-typed by PFGE employing ApaI and AscI and the American CDC protocol. None of the isolates showed resistance to the antibiotics tested; however, seven of them presented increased values for sulfamethoxazole MICs. Ten isolates belonged to serotype 4b, two to serotype 1/2a and only one to serotype 1/2b. After digestion with ApaI and AscI, the strains were distributed in 3 different groups according to their profile. It was observed that the spatial or temporally unrelated strains exhibited similar PFGE profiles, indicating a possible clonal relationship among them.<hr/>No Brasil, dados sobre a ocorrência de surtos ou casos esporádicos de listeriose são raros, assim como estudos que tratem da caracterização de cepas de L. monocytogenes isoladas destes episódios. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo avaliar feno e genotipicamente 13 cepas de Listeria monocytogenes isoladas de 12 casos clínicos de listeriose ocorridos em 6 municípios da região sudoeste do Estado de São Paulo, Brasil, no período de janeiro de 1995 a maio de 2005. As cepas foram submetidas ao teste de sensibilidade a cinco antimicrobianos (ampicilina, gentamicina, trimetoprim, sulfametoxazol e vancomicina) pelo método de microdiluição em caldo; à sorotipagem (Denka Seiken, Japão) e à determinação do perfil de macro-restrição por eletroforese em campo pulsado (PFGE, Pulsenet, CDC, USA, 2001). Nenhuma das cepas foi resistente aos antimicrobianos testados; entretanto, sete tiveram valores da CIM aumentados para o sulfametoxazol. Dez cepas pertenciam ao sorotipo 4b, duas ao sorotipo 1/2a e apenas uma ao sorotipo 1/2b. Com o emprego da técnica de PFGE e as enzimas Apa I e Asc I as cepas foram separadas em três grupos diferentes, de acordo com seus perfis moleculares. É interessante destacar que cepas não relacionadas (temporal ou espacialmente) apresentaram perfis moleculares semelhantes indicando uma possível relação clonal entre elas. <![CDATA[<B>Emergence of fluoroquinolone-resistant <I>Neisseria gonorrhoeae</I> in São Paulo, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200020&lng=en&nrm=iso&tlng=en Continued monitoring of antimicrobial resistance patterns is essential in order for Sexually Transmitted Diseases (STD) treatment to be effective. Gonococci isolates from 65 patients in São Paulo were submitted to susceptibility testing, and a decreased susceptibility or resistance to ciprofloxacin was observed in 8.7% of these patients, indicating that Neisseria gonorrhoeae fluoroquinolone resistance is emerging in Brazil.<hr/>O monitoramento contínuo de resistência antimicrobiana é essencial para a efetividade do tratamento das Doenças Sexualmente Transmissíveis (DST). Gonococosisolados de 65 pacientes de São Paulo foram submetidos a teste de susceptibilidade verificando-se que 8,7% apresentavam susceptibilidade diminuída ou resistência ao ciprofloxacino, o que indica que a resistência da Neisseria gonorrhoeae às fluoroquinolonas é emergente no Brasil. <![CDATA[<B><I>Salmonella</I> spp. in raw broiler parts</B>: <B>occurrence, antimicrobial resistance profile and phage typing of the <I>Salmonella </I>Enteritidis isolates</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200021&lng=en&nrm=iso&tlng=en The present study was carried out to evaluate the occurrence of Salmonellae in raw broiler parts and to determine the antimicrobial resistance profile of the isolated strains. Twenty-four (39.3%) broiler parts samples were positive for Salmonella and twenty-five Salmonella strains were isolated, since two different serovars were detected in one single positive sample. Salmonella Enteritidis was the most prevalent serovar. Among Salmonella Enteritidis isolates, 95.2% belonged to Phage Type 4 (PT4) (20/21) and 4.8% to PT7 (1/21). Twenty-two (88%) strains of Salmonella were resistant to at least one antimicrobial agent, generating eight different resistance patterns. The S. Typhimurium (n: 1) and S. Hadar (n: 3) isolates presented multiple resistance. Three S. Enteritidis isolates were susceptible to all antimicrobials tested, two were resistant only to tetracycline. The high prevalence of Salmonella in the broiler parts strenghtens the importance of the use of good manufacturing practices (GMP), and HACCP. The results also emphasize the need for the responsible use of antimicrobials in animal production.<hr/>Este trabalho foi conduzido para avaliar a ocorrência de Salmonella em cortes de frango e para determinar o perfil de resistência antimicrobiana das cepas isoladas. Vinte e quatro (39,3%) cortes de frango foram positivas para Salmonella, tendo sido isoladas vinte e cinco cepas de Salmonella, uma vez que em uma amostra isolaram-se dois sorovares. Salmonella Enteritidis foi o sorovar prevalente. Entre as Salmonella Enteritidis isoladas, 95,2% pertencem ao Fagotipo 4 (PT4) (20/21) e 4,8% ao PT7 (1/21). Vinte e duas (88%) cepas de Salmonella foram resistentes a pelo menos um agente antimicrobiano e oito diferentes padrões de resistência foram observados. S. Typhimurium (n:1) e S. Hadar (n: 3), apresentaram múltipla resistência. Três cepas de S. Enteritidis foram sensíveis a todos os antimicrobianos e duas resistentes somente a tetraciclina. A elevada ocorrência de Salmonella nos cortes de frango utilizados no presente estudo reforça a importância das normas de boas práticas de fabricação, bem como dos controles de perigos e pontos críticos de controle. No tocante aos níveis de resistência a antimicrobianos, os resultados enfatizam a necessidade do uso responsável dos mesmos na produção animal. <![CDATA[<B>Ochratoxin A in brazilian instant coffee</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200022&lng=en&nrm=iso&tlng=en The aim of this study was to determine the ochratoxin A (OTA) contamination of instant coffee samples collected in the market of the city of São Paulo, Brazil from August to December, 2004. The EN 14133/2003 method, originally developed to quantify OTA in wine, grape juice and beer samples, was evaluated and approved for analyzing OTA in instant coffee samples. OTA was isolated in an immunoaffinity column and quantified by HPLC with fluorescence detection. The established detection and quantification limits were 0.16 and 0.52 ng/g, respectively. The recoveries from spiked samples were 92.6 ± 1.7, 83.7 ± 0.8, and 91.0 ± 1.2 % at levels of 3.0, 5.0, and 8.0 ng/g, respectively. Of a total of 82 samples analised, 81 (98.8%) contained OTA at levels ranging from 0.17 to 6.29 ng/g. The high frequency of OTA occurrence in the instant coffee samples demonstrates the importance of an effective control of this product by governmental authorities and industries. The rapid methodology for OTA analysis in instant coffee used in this study was defined and validated, permitting it´s use for quality control of this product.<hr/>O objetivo do presente estudo foi determinar a contaminação por OTA em amostras de café solúvel comercializadas na cidade de São Paulo, Brasil no período de agosto a dezembro de 2004. O método EN 14133/2003, originalmente desenvolvido para quantificar OTA em amostras de vinho, suco de uva e cerveja, foi avaliado e aprovado para análise de OTA em amostras de café solúvel. OTA foi isolada em coluna de imunoafinidade e quantificada por CLAE com detecção em fluorescência. Os limites de detecção e quantificação do método foram 0,16 e 0,52 ng/g, respectivamente. Os percentuais médios de recuperação foram de 92,6% (3 ng/g), 83,7% (5 ng/g) e 91,0% (8 ng/g), com coeficientes de variação de 1,7 (3 ng/g), 0,8 (5 ng/g) e 1,2 (8 ng/g). A análise das 82 amostras de café solúvel revelou a presença de ocratoxina A em 81 amostras (98,8%), com concentrações variando de 0,17 a 6,29 ng/g. A elevada ocorrência de OTA nas amostras analisadas indica a importância de um controle efetivo desse produto por parte das autoridades governamentais e das indústrias alimentícias. A metodologia rápida utilizada nesse estudo para análise de OTA em amostras de café solúvel foi definida e validada, podendo ser utilizada no controle de qualidade deste produto. <![CDATA[<B>Intralaboratory optimization and validation of a method for patulin determination in grapes by Thin-Layer Chromatography</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200023&lng=en&nrm=iso&tlng=en The aim of this work was to optimize and validate, by intralaboratorial procedures, a method for the determination of patulin in grapes by thin-layer chromatography. The steps of extraction, cleanup, detection and quantification were optimized. For the validation of the method, recovery assays with standard solutions and artificially contaminated samples were carried out. The mean recovery and the variation coefficient were 65.4% and 7.58%, respectively. The optimized conditions were: 50 mL of grape juice, three extraction stages (with 100 mL of ethyl acetate in the first stage and 50 mL in second and third stages), and 100 µL of ethanol to solubilize the extract. The solvent-system used was toluene - ethyl acetate - formic acid (6:3:1), and 0.5% MBTH in 5% formic acid was sprayed on the plates to intensify the fluorescence. The visual detection and quantification limits were 7.44 ng and 15.87 µg.kg-1, respectively. The optimized and validated method demonstrated sufficient efficiency for adoption in the monitoring of patulin in grape.<hr/>O objetivo deste trabalho foi otimizar e validar, por procedimentos intralaboratoriais, um método de determinação de patulina em uva por cromatografia em camada delgada. Foram realizados testes de otimização das etapas de extração, limpeza, detecção e quantificação. Para validação do método foram realizados ensaios de recuperação com soluções padrões e amostras artificialmente contaminadas. A recuperação e o coeficiente de variação foram 65,4% e 7,58%, respectivamente. As condições otimizadas foram: 50 mL do suco da uva; três etapas de extração, 100 mL de acetato de etila na primeira etapa e 50 mL na segunda e terceira etapas; 100 µL de etanol para solubilizar o extrato; a fase móvel tolueno-acetato de etila-ácido fórmico (6:3:1) e o revelador o MBTH 0,5% em ácido fórmico 5%. O limite de detecção visual foi de 7,44 ng e o de quantificação de 15,87 µg/kg. O método otimizado e validado apresentou eficiência para ser adotado em atividades de monitoramento de patulina em uva. <![CDATA[<B>Survival of <I>Listeria monocytogenes</I> in low acid italian sausage produced under brazilian conditions</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200024&lng=en&nrm=iso&tlng=en Dry sausages have been considered ready-to-eat products with low risk of causing listeriosis due to the hurdles created during the manufacturing process such as low pH and a w, high salt concentration and presence of lactic acid bacteria (LAB). However, several studies have detected survival of Listeria monocytogenes in these products and also shown that process parameters, LAB and L. monocytogenes strains directly influence the results. In this work, survival of the pathogen in sausages prepared with three different formulations (one standard formulation, one formulation added of Lactobacillus plantarum and one added of 2% sodium lactate), using the manufacturing process usually employed in Brazil, was evaluated. Naturally contaminated sausages presented a small increase in the counts of L. monocytogenes in the first days of the process, followed by a gradual decrease until the end of the process. In experimentally contaminated samples containing L. plantarum, the reduction of counts of L. monocytogenes during processing was considerable, but there wasn´t significant differences between the treatments.<hr/>Salames têm sido considerados produtos prontos para o consumo com baixo risco de provocar listeriose devido aos obstáculos criados no processo de fabricação e suas características de pH e atividade água baixos, alta concentração de sal e presença de bactérias lácticas. Entretanto, a sobrevivência de Listeria monocytogenes nesta classe de produtos é verificada e estudos de processo visando à redução da contaminação por este patógeno, têm demonstrado que particularidades como variação dos parâmetros de processo, cepas de bactérias lácticas e de L. monocytogenes influenciam diretamente os resultados. Neste estudo três formulações foram avaliadas (uma padrão, uma com inoculação da cultura Lactobacillus plantarum e outra com adição 2% de lactato de sódio) empregando parâmetros de processo comumente praticados no Brasil. Os salames naturalmente contaminados apresentaram discreto aumento da população de L. monocytogenes no início do processo, seguidos por redução até o final da maturação. Os salames artificialmente contaminados tiveram redução considerável da contagem de L. monocytogenes não havendo diferenças significativas entre os tratamentos. <![CDATA[<B>Activity of passion fruit (<I>Passiflora edulis</I>) and guava (<I>Psidium guajava</I>) pulps on <I>Lactobacillus acidophilus</I> in refrigerated mousses</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200025&lng=en&nrm=iso&tlng=en Five pilot-scale mousse-making trials were produced and supplemented with Lactobacillus acidophilus La-5 probiotic culture: M1 with passion fruit concentrated juice (PJ); M2 with PJ and prebiotic fibre inulin; M3 with frozen passion fruit pulp (PP); M4 with frozen guava pulp (GP); M5 with GP and lactic acid. The products were stored refrigerated (4ºC) and M2 and M5 were also stored frozen (-18ºC). Viability of L. acidophilus decreased up to 4.7 log cfu.g-1 in the 21st day for refrigerated mousses containing passion fruit (M1, M2 and M3), whereas the probiotic population remained above 6 log cfu.g-1 in the mousses containing guava (M4 and M5). Inhibition due to acidity was discharged. The addition of fruits to probiotic products should be carefully planned because inhibition of probiotic strains might occur.<hr/>Cinco musses foram produzidas em escala piloto e suplementadas com a cultura probiótica de Lactobacillus acidophilus La-5: M1 - com suco concentrado de maracujá (SM); M2 - com SM e fibra prebiótica inulina; M3 - com polpa congelada de maracujá (PM); M4 - com polpa congelada de goiaba (PG); M5 - com PG e ácido lático. Os produtos foram armazenados refrigerados (4ºC) e M2 e M5 também congelados (-18ºC). A viabilidade de Lactobacillus acidophilus diminuiu em até 4,7 log ufc.g-1 ao 21º dia nas musses contendo maracujá (M1, M3 e M2), enquanto a população do probiótico permaneceu acima de 6 log ufc.g-1 naquelas contendo goiaba (M4 e M5). A inibição devido à acidez foi descartada. A adição de frutas aos produtos probióticos deve ser cuidadosamente planejada, uma vez que pode haver inibição das cepas probióticas. <![CDATA[<B>Adhesion of <I>Salmonella</I> Enteritidis to stainless steel surfaces</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200026&lng=en&nrm=iso&tlng=en Adhesion of microorganisms to food processing surfaces and the problems it causes are a matter of strong concern to the food industry. Contaminated food processing surfaces may act as potential sources of transmission of pathogens in food industry, catering and in the domestic environments. Several studies have shown that adhesion of bacteria to surfaces partly depends upon the nature of the inert surfaces and partly upon the bacterial surface properties. The aim of this study was to compare the adhesion of four different strains of Salmonella Enteritidis to stainless steel 304 (SS 304). The effect of surface hydrophobicity and surface elemental composition on the adhesion process was also analysed. Hydrophobicity was evaluated through contact angle measurements using the sessile drop method. All the strains studied showed positive values of the degree of hydrophobicity (deltaGlwl) and so can be considered hydrophilic while stainless steel revealed a hydrophobic character. Bacterial cell surface composition was measured using X-ray photoelectron spectroscopy (XPS). The XPS results corroborated the similarity of the values of the degree of hydrophobicity obtained by contact angles. The different Salmonella strains showed similar elemental composition and cell surface physico-chemical properties. Nevertheless, S. Enteritidis MUSC presented higher adhesion ability to SS 304 (p<0.05). It can be concluded that the physico-chemical properties of the strain does not explain the ability of adhesion to stainless steel. Other factors like the production of polysaccharides must be considered.<hr/>A adesão de microrganismos a superfícies de processamento de alimentos e os problemas que daí resultam são matéria de grande preocupação para a indústria alimentar. Superfícies de processamento de alimentos contaminadas podem actuar como uma potencial fonte de transmissão de patogénicos na indústria alimentar, restauração e em ambientes domésticos. Diversos estudos têm demonstrado que a adesão de bactérias a superfícies depende, por um lado, da natureza das superfícies inertes e, por outro, das propriedades superficiais das bactérias. O objectivo deste trabalho consistiu na comparação da capacidade de adesão de 4 cepas diferentes de Salmonella Enteritidis ao aço inoxidável 304 (SS 304). Analisou-se também o efeito da hidrofobicidade e da composição elementar no processo de adesão. A hidrofobicidade foi determinada através da medição de ângulos de contacto usando o método da gota séssil. Todas as cepas apresentaram valores positivos do grau de hidrofobicidade (deltaGlwl) podendo, assim, ser consideradas hidrofílicas enquanto o aço inoxidável revelou um carácter hidrofóbico. A composição elementar da superfície das células bacterianas foi medida através de espectroscopia de fotoelectrões X (XPS). Os resultados do XPS corroboraram a similaridade de valores do grau de hidrofobicidade obtidos por ângulos de contacto. As diferentes cepas de Salmonella apresentaram uma composição elementar e propriedades físico-químicas semelhantes. No entanto, a Salmonella MUSC apresentou uma capacidade de adesão ao aço inoxidável mais elevada (p<0.05). Pode então concluir-se que as propriedades físico-químicas das cepas não explicam a capacidade de adesão ao aço inoxidável, devendo ser considerados outros factores tais como a produção de exopolissacáridos. <![CDATA[<B>Isolation of filamentous fungi from public telephones of the Metropolitan region of the city of Recife, PE, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200027&lng=en&nrm=iso&tlng=en Fungi can inhabit our organism without causing any harm, but they show themselves when the immunological system is compromised. In this study, a survey of the occurrence of filamentous fungi was carried out in public telephones of the Metropolitan Region of the City of Recife, PE, Brazil. This showed the public phones as a possible mean of transmission of fungal diseases among humans. Samples from the environment, audios, speakers and keyboards were taken at the airport, mall, subway and bus station in the months of October/2003 (dry season) and June/2004 (rainy season), totaling 120 samples. The procedure of identification of species was carried out through conventional taxonomy. Thirty-four genera were isolated, totaling 73 species, the majority belonging to the anamorphic fungi (91.78%), followed by the Ascomycota (6.85%) and the Zygomycota (1.37%). There was no significant difference in the proportion of species between the dry and rainy seasons, with 46 and 53 species identified, respectively. Due to the lack of maintenance, or inadequate cleaning of public telephones, the fungi present in these appliances may cause mycosis in the users as these telephones are used by people from different social classes and variable habits, both healthy and immunocompromised.<hr/>Os fungos podem circular pelo nosso organismo sem causar qualquer mal, mas manifestam-se quando o sistema imunológico está comprometido. Neste estudo foi realizada uma análise da ocorrência de fungos filamentosos em telefones públicos da Região Metropolitana da Cidade do Recife, PE, Brasil. Apresentando-os como possível meio de transmissão de doenças de natureza fúngica entre os indivíduos. Amostras dos ambientes, áudios, bocais e teclas foram obtidas no aeroporto, shopping, metrô e rodoviária nos meses de outubro/2003 (período seco) e junho/2004 (período chuvoso), totalizando 120 amostras. O procedimento de identificação das espécies ocorreu através da taxonomia convencional. Trinta e quatro gêneros foram isolados, totalizando 73 espécies, a maioria pertencente aos fungos anamórficos (91,78%), seguido de Ascomycota (6,85%) e Zygomycota (1,37%). Não houve diferença significativa quanto a proporção de espécies entre os períodos seco e chuvoso, com 46 e 53 espécies identificadas, respectivamente. Por falta de manutenção ou limpeza inadequada dos telefones públicos, os fungos presentes podem vir a provocar micoses nos usuários, pois esses aparelhos são utilizados por pessoas de diferentes classes sociais e hábitos variados, tanto sadias quanto imunocomprometidas. <![CDATA[<B>Distribution of HNA and LNA bacterial groups in the Southwest Atlantic Ocean</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200028&lng=en&nrm=iso&tlng=en Bacterioplankton was studied in a large area of Southwest Atlantic Ocean between 13 and 25ºS and 28 and 42ºW. Samples were collected in 108 stations at 20 m depth. Bacteria were enumerated by flow cytometry after nucleic acid staining with syto13 and two subgroups were differentiated: low nucleic acid content (LNA) and high nucleic acid content (HNA) bacteria. Total bacterial numbers varied from 0.37 to 5.53 10(5) cells mL-1. HNA cells represented 15 to 70% of the total number while LNA cells represented 30 to 85%. Heterotrophic bacterial production was determined by incorporation of tritiated leucine and ranged from 2.7 to 171.07 ng C L-1 h-1. No significant correlation was found between abundance and production. Nevertheless with support of multivariate analysis between bacterial abundance, bacterial production, chlorophyll a and other oceanographic data the distribution of the groups in two different oceanic provinces could be explained by nutrient availability. HNA bacteria accounted for the high percentage of cells found in the area north of 19ºS, linked to higher temperature waters and riverine nutrients inputs. LNA bacteria were the dominant cells south of this latitude and were correlated to the higher values of nitrate found for the same area.<hr/>Um estudo do bacterioplâncton foi realizado numa área extensa do Oceano Atlântico Sudoeste entre 13 e 25ºS e 28 e 42ºW. As amostras foram coletadas em 108 estações oceanográficas a 20 m de profundidade. A abundância bacteriana foi determinada por citometria de fluxo após coloração dos ácidos nucléicos com Syto13. Dois grupos de bactérias foram enumerados e distinguidos: bactérias com alto conteúdo de ácidos nucleicos (HNA) e bactérias com baixo conteúdo de ácidos nucleicos (LNA). O número de bactérias variou de 0,37 a 5,53 10(5) células mL-1. As células HNA representaram de 15 a 70% da abundância total enquanto as células LNA representaram de 30 a 85%. A produção bacteriana foi determinada por incorporação de leucina tritiada e variou de 2,7 a 171,07 ng C L-1 h-1. A correlação entre abundância e produção bacterianas não foi significativa. Entretanto uma análise multivariada realizada entre abundância, produção, clorofila a e outros dados oceanográficos revelou que a distribuição dos dois grupos em diferentes províncias oceânicas pode ser atribuída a disponibilidade de nutrientes. As bactérias HNA foram responsáveis pelo maior percentual de células na área ao norte de 19ºS e estiveram relacionadas às águas quentes e aos nutrientes de origem pluvial. As bactérias LNA foram dominantes ao sul dessa latitude e estiveram relacionadas à disponibilidade de nitrato cujos valores foram mais altos nessa região. <![CDATA[<B>Association between the concentration of protozoa and surrogates in effluents of the slow sand filtration for water treatment</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200029&lng=en&nrm=iso&tlng=en Currently, a major challenge on producing high-quality drinking water is to monitor pathogens, such as Giardia, Cryptosporidium and enteric viruses. Due to limitations of the analytical methods available to detect pathogens in water, the research of surrogate indicators is an up-to-date subject. In view of these aspects, a pilot scale study was performed to evaluate the association between microbiological and physical indicators and the presence of Giardia spp and Cryptosporidium sp in the effluent of upflow and downflow slow sand filters. The results showed that efficient bacterial removal could indicate suitable protozoa removal. Although coliforms and Escherichia coli do not present the appropriate physiological profile for an "ideal" indicator, they are still good references for drinking water microbiological quality, specifically for slow sand filtration. The results also point out to the need of deeper researches about the use of anaerobic spores as routine indicator. Regarding the control of Cryptosporidium outbreaks, the expectation that a single indicator will satisfy all purposes is unreal. It may be more useful to know the advantages and disadvantages of several indicators, and integrate them appropriately.<hr/>Atualmente, um grande desafio para a produção de água de elevado padrão de qualidade é o monitoramento de patogênicos, como Giardia, Cryptosporidium e vírus entéricos. Devido a limitações nos métodos analíticos para a detecção de patogênicos na água, a pesquisa de indicadores substitutos é um tema atual. Em vista desses aspectos, foi realizado um estudo em escala piloto para a avaliação da associação entre indicadores microbiológicos e físicos e a presença de Giardia spp e Cryptosporidium sp no efluente de filtros lentos de areia de escoamentos ascendente e descendente. Os resultados mostraram que uma remoção bacteriana eficiente pode indicar adequada remoção de protozoários. Embora coliformes e Escherichia coli não apresentem o perfil fisiológico apropriado de um indicador "ideal", eles são ainda boas referências para a qualidade microbiológica da água, especificamente para a filtração lenta. Os resultados também chamam a atenção para o necessário aprofundamento de pesquisas sobre o uso de esporos anaeróbios como um indicador rotineiro. Quanto ao controle de surtos de Cryptosporidium, a expectativa de que um único indicador satisfará todos os objetivos não é realista. Seria mais útil conhecer as vantagens e desvantagens de diversos indicadores e utilizá-los apropriadamente de forma integrada. <![CDATA[<B>Laboratory study on the bioremediation of diesel oil contaminated soil from a petrol station</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200030&lng=en&nrm=iso&tlng=en The purpose of the present study was to investigate possible methods to enhance the rate of aerobic biodegradation of hydrocarbons (ex-situ treatments). In this work, the bioremediation processes were applied to a sandy soil with a high level of contamination originated from the leakage of a diesel oil underground storage tank at a petrol station. Laboratory scale experiments (Bartha biometer flasks) were used to evaluate the biodegradation of the diesel oil. Enhancement of biodegradation was carried out through biostimulation (addition of nitrogen and phosphorus solutions or Tween 80 surfactant) and bioaugmentation (bacterial consortium isolated from a landfarming system). To investigate interactions between optimizing factors, and to find the right combination of these agents, the study was based on full factorial experimental design. Efficiency of biodegradation was simultaneously measured by two methods: respirometric (microbial CO2 production) and gas chromatography. Acute toxicity tests with Daphnia similis were applied for examination of the efficiency of the processes in terms of the generation of less toxic products. Results showed that all bioremediation strategies enhanced the natural bioremediation of the contaminated soil and the best results were obtained when treatments had nutritional amendment. Respirometric data indicated a maximum hydrocarbon mineralization of 19.8%, obtained through the combination of the three agents, with a total petroleum hydrocarbons (TPH) removal of 45.5% in 55 days of treatment. At the end of the experiments, two predominant bacteria species were isolated and identified (Staphylococcus hominis and Kocuria palustris).<hr/>O objetivo do presente estudo foi investigar possíveis métodos para aumentar a taxa de biodegradação aeróbia de hidrocarbonetos (tratamentos ex-situ). Neste trabalho, processos de biorremediação foram aplicados a um solo arenoso com alto nível de contaminação ocasionada por um vazamento de um tanque de armazenamento de óleo diesel subterrâneo em um posto de combustíveis. Experimentos em escala laboratorial (respirômetros de Bartha) foram utilizados para avaliar a biodegradação do óleo diesel. Estímulo da biodegradação foi realizado utilizando-se as técnicas de bioestímulo (adição de soluções de nitrogênio e fósforo ou surfactante Tween 80) e de bioaumento (consórcio bacteriano isolado de um sistema de landfarming). Para investigar as interações entre os fatores otimizadores, e encontrar a melhor combinação entre esses agentes, o estudo foi baseado em um delineamento experimental fatorial completo. A eficiência de biodegradação foi simultaneamente medida com dois métodos: respirométrico (produção de CO2 microbiano) e cromatografia gasosa. Testes de toxicidade aguda com Daphnia similis foram aplicados para examinar a eficiência dos processos em termos de geração de produtos menos tóxicos. Resultados mostraram que todas as estratégias de biorremediação aceleraram a biorremediação natural do solo contaminado e os melhores resultados foram obtidos quando os tratamentos tinham adição de nutrientes. Dados respirométricos indicaram uma máxima mineralização de hidrocarbonetos de 19,8%, obtida com a combinação dos três agentes, com uma remoção de hidrocarbonetos totais de petróleo (TPH) de 45,5% em 55 dias de tratamento. No final dos experimentos, duas espécies predominantes de bactéria foram isoladas e identificadas como Staphylococcus hominis e Kocuria palustris. <![CDATA[<B>Virus isolation and molecular characterization of canine distemper virus by RT-PCR from a mature dog with multifocal encephalomyelit</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200031&lng=en&nrm=iso&tlng=en A case of multifocal distemper encephalomyelitis in a mature dog is described. In the presented case the ante mortem clinical diagnosis of canine distemper virus (CDV) infection could not be ideally performed due to the absence of typical signs of distemper, such as myoclonus and systemic signs accompanying the nervous signs. The definitive diagnosis of distemper encephalomyelitis was only carried out at post mortem through virus isolation in cell culture from fresh central nervous system (CNS) fragments and CDV nucleoprotein gene detection in the CNS by RT-PCR.<hr/>Descreve-se um caso de encefalomielite multifocal pela cinomose em um cão adulto. No caso apresentado o diagnóstico clínico da infecção pelo vírus da cinomose canina (CDV) não pode ser adequadamente realizado devido à ausência de sinais típicos da enfermidade, tais como mioclonia e sinais sistêmicos. O diagnóstico definitivo somente foi possível post mortem pelo isolamento do CDV em cultivo celular a partir dos fragmentos frescos do sistema nervoso central (SNC) e pela detecção do gene da nucleoproteína do CDV em fragmentos do SNC por meio da RT-PCR. <![CDATA[<B>Antimicrobial susceptibility of <I>Campylobacter</I> sp strains isolated from calves with and without diarrhea in Minas Gerais state, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200032&lng=en&nrm=iso&tlng=en The antimicrobial susceptibility of 25 Campylobacter sp strains isolated from calves with and without diarrhea - 7 C. coli, 16 C. fetus and 2 C. jejuni was studied by the disk diffusion method. Eleven antimicrobial agents were tested amikacin, ampicillin, kanamycin, chloramphenicol, erythromycin, gentamicin, neomycin, nitrofurantoin, penicillin G, tetracycline and sulfamethoxazole-trimethoprim. All Campylobacter sp strains were susceptible to amikacin, ampicillin, chloramphenicol, erythromycin, gentamicin, neomycin and nitrofurantoin. Three strains were moderately susceptible to kanamycin (2 C. coli and 1 C. fetus). All the strains were resistant to penicillin G. Two C. fetus strains were moderately susceptible to sulfamethoxazole-trimethoprim and 1 C. coli, 9 C. fetus and 2 C. jejuni strains were resistant. Two C. fetus strains were moderately susceptible to tetracycline and 3 C. coli, 2 C. fetus and 1 C. jejuni strains were resistant. Eleven strains showed multidrug resistance (2 C. coli, 8 C. fetus and 1 C. jejuni). There was no correlation between resistance of Campylobacter sp strains to antimicrobials and the occurrence of diarrhea in calves. The frequency of resistance and, most importantly, multi drug resistance found among Campylobacter sp strains isolated from calves in Minas Gerais, Brazil, were high and the patterns of resistance observed are related to the antimicrobials agents most largely used in cattle in Brazil.<hr/>Foi estudado o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos de 25 amostras de Campylobacter sp isoladas de bezerros com e sem diarréia (7 C. coli, 16 C. fetus e 2 C. jejuni). Foram testados pelo método de difusão 11 agentes antimicrobianos: amicacina, ampicilina, canamicina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina, neomicina, nitrofurantoína, penicilina G, tetraciclina e sulfametoxazole-trimetoprim. Todas as amostras de Campylobacter sp foram susceptíveis a amicacina, ampicilina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina, neomicina e nitrofurantoína. Três amostras foram moderadamente sensíveis à canamicina (2 C. coli e 1 C. fetus). Todas as amostras foram resistentes à penicilina G. Duas amostras de C. fetus foram moderadamente sensíveis a sulfametoxazole-trimetoprim e 1 C. coli, 9 C. fetus e 2 C. jejuni foram resistentes. Duas amostras de C. fetus foram moderadamente sensíveis à tetraciclina e 3 de C. coli, 2 de C. fetus e 1 de C. jejuni foram resistentes. Onze amostras apresentaram multirresistência (2 C. coli, 8 C. fetus e 1 C. jejuni). Não houve correlação entre resistência de amostras de Campylobacter sp aos antimicrobianos e a ocorrência de diarréia nos bezerros. A frequência de resistência e, principalmente, a multirresistência encontradas nas amostras Campylobacter sp isoladas de bezerros em Minas Gerais, Brasil, foram altas. O perfil de resistência de amostras de Campylobacter sp observado está relacionado aos agentes antimicrobianos mais utilizados em bovinos no Brasil. <![CDATA[<B>Interference of vaccinal antibodies on serological diagnosis of leptospirosis in vaccinated buffalo using two types of commercial vaccines</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200033&lng=en&nrm=iso&tlng=en The vaccinal antibodies interference represents one of the Microscopic Agglutination test - MAT limitation in the animal leptospirosis serum diagnosis. Prospective studies showing the dimensions of this effect are rare in buffaloes. This study aimed to determine the anti-Leptospira serum agglutinin profile in vaccinated female buffaloes using two types of commercial vaccines against leptospirosis: bacterin (whole bacterial cell) and purified outer membrane and to evaluate the vaccinal interference on serum diagnosis. Three groups of 11 adult buffalo females were established: G1-control, non-vaccinated, G2- vaccinated with bacterin vaccine with six serovars, G3- outer membrane purified vaccine with five serovars. A booster dose was administrated 30 days after the first vaccination (dpv) and two re-vaccinations six months a part (210 and 390 dpv). Serum samples were collected on days 0, 15, 40, 45, 60 and every 30 days until 540 dpv. G1, G2 and G3 serum samples were submitted to MAT with the serovars present in the vaccines. G1 remained always negative. Both vaccines induced serologic responses in MAT at 150 dpv against all serovars and they revealed maximum titers around 45 and 60dpv as follows: Pomona: G2 (1600) and G3 (3200); Hardjo: G2 and G3 (1600); Wolffi: G2 (800) and G3 (1600); Icterohaemorrhagiae: G2 and G3 (800); Grippotyphosa: G2 and G3 (200) and Canicola: G2 (NR) and G3 (400). Even though, the Wolffi serovar is not present in the purified outer membrane vaccine, G3 showed a response to that serovar, probably due to cross reaction to the serovar Hardjo. The G3 titers were higher and appeared earlier than in G2, but with similar serologic profiles. At the re-vaccination there was an increase on agglutinin levels, but of less intensity than those previously observed. After six months from the second revaccination (540 dfv), G2 and G3 were almost negative, which demonstrated the short diagnostic interference.<hr/>A persistência de anticorpos vacinais representa um dos entraves para o sorodiagnóstico da leptospirose. Raros estudos dimensionam prospectivamente esse efeito na espécie bubalina. O presente trabalho objetivou traçar o perfil de aglutininas séricas anti-Leptospira spp.em búfalas vacinadas contra leptospirose com dois tipos de vacina comercial : bacterina e de membrana externa purificada e avaliar a interferência temporal dos títulos vacinais no sorodiagnóstico. Três grupos de 11 fêmeas bubalinas adultas: G1- controle não vacinado, G2 -vacinado com bacterina contendo seis sorovares e G3- recebeu vacina com membrana externa purificada de cinco sorovares, receberam reforço 30 dias pós primo vacinação (dpv) e duas revacinações semestrais nos dias 210 e 390. Foram colhidas amostras sorológicas nos dias 0, 15, 30, 45, 60 e a cada 30 dias até 540 dpv e analisadas pela reação de Soroaglutinação Microscópica-SAM frente aos sorovares presentes nas vacinas. G1 manteve-se sempre negativo. Ambas vacinas induziram resposta sorológica na SAM aos 15º dpv para todos os sorovares e revelaram títulos máximos ao redor do 45º e 60º dpv.: Pomona: G2 (1600) e G3 (3200); Hardjo: G2 e G3 (1600); Wolffi: G2 (800) e G3 (1600), Icterohaemorrhagiae: G2 e G3 (800), Grippotyphosa: G2 e G3 (200) e Canicola: G2 (NR) e G3 (400). Apesar da vacina de membrana externa não possuir o sorovar Wolffi, G3 revelou resposta para este sorovar, provavelmente pelo sorovar Hardjo vacinal. Os perfis sorológicos representados graficamente pela média geométrica dos títulos de aglutininas foram semelhantes, porém em G3 mais precoces e mais elevados que G2. Na revacinação houve aumento do nível de aglutininas, porém de menor intensidade que o anterior; e ao final de seis meses da segunda revacinação (540 dpv) eram quase nulos, demonstrando curta duração da interferência ao diagnóstico. <![CDATA[<B>Screening methods to determine antibacterial activity of natural products</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200034&lng=en&nrm=iso&tlng=en The emergence of new infectious diseases, the resurgence of several infections that appeared to have been controlled and the increase in bacterial resistance have created the necessity for studies directed towards the development of new antimicrobials. Considering the failure to acquire new molecules with antimicrobial properties from microorganisms, the optimization for screening methods used for the identification of antimicrobials from other natural sources is of great importance. The objective of this study was to evaluate technical variants used in screening methods to determine antibacterial activity of natural products. Thus, a varied range of natural products of plant, fungi and lichen origin were tested against two bacterial species, Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC 25922, by two variants of the agar diffusion method (well and disc), two variants of the bioautographic method (direct and indirect) and by microdilution assay. We concluded that the well-variant of the diffusion method was more sensitive than the disc-variant, whilst the direct-variant of the bioautographic method exhibited a greater sensitivity if compared to indirect-variant. Bioautographic and diffusion techniques were found to have similar sensitivity; however the latter technique provided more suitable conditions for the microbial growth. In this study, we also discussed the best conditions for the determination of minimal inhibitory concentration.<hr/>Com o surgimento de novas doenças infecciosas, o reaparecimento de várias infecções que pareciam ter sido controladas, e o aumento da resistência bacteriana houve a necessidade de pesquisas dirigidas ao desenvolvimento de novos antimicrobianos. Levando em consideração a dificuldade de aquisição de novas moléculas com atividades antimicrobianas, a otimização de métodos de triagem usados na identificação de antimicrobianos de fontes naturais é de grande importância. O objetivo deste estudo foi avaliar variantes técnicas, usadas em métodos de triagem para determinar atividade antibacteriana de produtos naturais. Assim, vários produtos naturais, oriundos de plantas, fungos e líquens foram testados contra duas espécies bacterianas, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Escherichia coli ATCC 25922, por duas variantes do método de difusão em ágar (poço e disco), duas variantes do método bioautográfico (direto e indireto) e por testes de microdiluição. Concluímos que a variante do método de difusão variante poço foi mais sensível do que a variante disco, enquanto que a variante direta do método bioautográfico exibiu uma sensibilidade maior, comparada com a variante indireta. As técnicas de bioautografia e difusão mostraram sensibilidades similares, embora a última tenha fornecido condições mais apropriadas para o crescimento bacteriano. Neste estudo, também discutimos as melhores condições para a determinação da concentração inibitória mínima. <![CDATA[<B>Antimicrobial activity of <I>Syzygium cumini</I> (Myrtaceae) leaves extract</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200035&lng=en&nrm=iso&tlng=en The antimicrobial activity of Syzygium cumini leaves extract, known as "jambolão", was evaluated. The crude hydroalcoholic extract was active against Candida krusei (inhibition zone of 14.7 ± 0.3 mm and MIC = 70 µg/mL), and against multi-resistant strains of Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae and Staphylococcus aureus.<hr/>A atividade antimicrobiana do extrato das folhas de Syzygium cumini (Myrtaceae), conhecido como "jambolão", foi avaliada. O extrato hidroalcoólico mostrou atividade contra Candida krusei (halo de inibição de 14.7 ± 0.3 mm e CIM = 70 µg/mL) e cepas multiresistentes de Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Staphylococcus aureus. <![CDATA[<B>Phage typing and Multidrug resistance profile in <I>S</I>. Typhimurium isolated from different sources in Brazil from 1999 to 2004</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000200036&lng=en&nrm=iso&tlng=en Salmonella Typhimurium has become a widespread cause of salmonellosis among humans and animals worldwide. In Brazil, Salmonella Typhimurium (STM) is one of the most prevalent serovars isolated from food for human consumption. The uncontrolled sale and use of antimicrobials in agriculture and for treating human patients contributes to increase multidrug resistance of this serovar. In the present study, a total of 278 STM isolates from different sources and regions of Brazil over the period 1999 to 2004 were phage typed and analyzed for their antimicrobial resistance profile at Laboratory of Enterobacteria, Oswaldo Cruz Institute, FIOCRUZ. The main STM phage types isolated were DT 193 (64.3%), DT 19 (17.4%) and DT 18 (4%). Others phage types as DT 10 (2%), DT 27 (3.24%), DT 13 (0.36%), DT 22 (0.36%), DT 28 (0.36%), DT 29 (0.36%) and DT 149 (0.36%) were obtained in low percentages. A total of 54% STM strains were resistant to three or more antimicrobial classes, while no resistance to third generation cephalosporin or ciprofloxacin was identified in these strains. Those results show the STM phage types circulating among animals, food for human consumption and humans in Brazil as well as the increasing of multidrug resistance. The surveillance of STM strains based on phage typing and antimicrobial resistance profile are useful for detecting outbreaks, identifying sources of infection and implementing prevention and control measures.<hr/>Salmonella Typhimurium é considerada uma das principais bactérias causadoras de salmonelose nos animais e no homem em todo o mundo. No Brasil, Salmonella Typhimurium é um dos mais prevalentes sorovares isolados de alimentos para consumo humano. O uso indiscriminado de antibióticos em produtos agrícolas e no tratamento de pacientes humanos tem contribuído para aumentar a multirresistência desse sorovar a diversos antimicrobianos. No presente estudo, 278 cepas de STM foram selecionadas de diferentes fontes e regiões do Brasil, no período de 1999 a 2004 e realizadas a fagotipagem e análise do perfil de resistência antimicrobiana no Laboratório de Enterobactérias, Instituto Oswaldo Cruz, FIOCRUZ. Os principais fagotipos isolados foram DT 193 (64,3%), DT 19 (17,4%) e DT 18 (4%). Os fagotipos DT 10 (2%), DT 27 (3,24%), DT 13 (0,36%), DT 22 (0,36%), DT 28 (0,36%), DT 29 (0,36%) e DT 149 (0,36%) foram isolados em menores percentuais. Um total de 54% das cepas de STM foi resistente a três ou mais classes de antimicrobianos e não foi observada resistência a cefalosporinas de terceira geração ou ciprofloxacina. Esses resultados indicam os principais lisotipos de Salmonella Typhimurium circulantes entre os animais, alimentos de consumo humano e seres humanos no Brasil, bem como o aumento da multirresistência antimicrobiana. O monitoramento de cepas de Salmonella Typhimurium baseado na fagotipagem e no padrão de resistência antimicrobiana são ferramentas úteis para detectar surtos, identificar a fonte de infecção e implementar programas de prevenção e controle de salmonelose.