Scielo RSS <![CDATA[Brazilian Journal of Microbiology]]> http://www.scielo.br/rss.php?pid=1517-838220070004&lang=en vol. 38 num. 4 lang. en <![CDATA[SciELO Logo]]> http://www.scielo.br/img/en/fbpelogp.gif http://www.scielo.br <![CDATA[<B>Paratuberculosis</B>: <B>an update</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400001&lng=en&nrm=iso&tlng=en Paratuberculosis is a chronic enteritis that affects ruminants and is caused by Mycobacterium avium paratuberculosis (Map). The disease is worldwide spread and causes important economic losses. In Brazil, the bacillus was isolated in the south and northeast regions of the country and in Rio de Janeiro, but there are no enough epidemiological studies about its occurrence. Isolation of Map from tissues or fecal samples is 100% specific, but Map shows the most fastidious growth of all mycobacteria. Incubation lasts 8 -12 weeks, with a dependency on exogenous mycobactin J. Diagnostic tests based on specific DNA sequences allow fast and secure identification, and PCR has been used to confirm positive culture results and to identify Map in feces, milk and tissues. The most frequently used target sequences are the gene encoding the 16S rRNA, and the insertion element IS900. Serological assays are widely used for the herd diagnosis of the disease. A commercial ELISA with M. phlei pre-adsorption step achieves a specificity of 95.4% to 99% and a sensitivity of about 45%. Until now, there is no effective treatment for ill animals and control programs are based on managing procedures of herds and culling of symptomatic animals. In Brazil, paratuberculosis was recently identified and has been demonstrated even in autochthonous closed herds. Therefore, it is essential to perform an epidemiological national research and to investigate the economic impact of the disease in our herds. These results could promote a control program of paratuberculosis adapted to the Brazilian requirements.<hr/>A Paratuberculose é uma enterite crônica que afeta ruminantes, causada por Mycobacterium avium paratuberculosis (Map). A doença é cosmopolita e determina importantes perdas econômicas. No Brasil, o agente foi isolado nas regiões Sul e Nordeste além do Rio de Janeiro, mas não há estudos epidemiológicos suficientes sobre sua ocorrência. O isolamento de Map dos tecidos ou amostras fecais é 100% especifico, mas Map apresenta o crescimento mais fastidioso dentre todas as micobactérias, com período de incubação de até 8 -12 semanas, dependente de fonte exógena de micobactina J. Os testes diagnósticos baseados em seqüências especificas de DNA permitem uma identificação rápida e segura, e PCR tem sido usado para confirmar resultados de cultura positiva e para identificar Map em fezes, leite ou tecidos. O alvo mais frequentemente utilizado é o gene que codifica para o 16S rRNA, e o elemento de inserção IS900. Testes sorológicos são amplamente utilizados para o diagnóstico de rebanho. Um ELISA comercial com uma etapa de pré-adsorção com M. phlei alcança uma especificidade de 95,4% a 99% e uma sensibilidade de cerca de 45%. Até agora, não existe tratamento efetivo para animais doentes e os programas de controle são baseados em medidas de manejo e descarte dos animais sintomáticos. No Brasil, a paratuberculose foi recentemente demonstrada mesmo em rebanhos fechados e autóctones. Assim, é essencial realizar-se um inquérito epidemiológico nacional e investigar o impacto econômico da enfermidade em nossos rebanhos. Estes resultados poderiam ser utilizados para um programa de controle da paratuberculose adaptado ás necessidades de nosso país. <![CDATA[<B>Presence of extraintestinal pathogenic <I>Escherichia coli</I> in butcheries in Taquaritinga, SP, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400002&lng=en&nrm=iso&tlng=en The study was conducted in twenty-three butcheries in the city of Taquaritinga, State of São Paulo, Brazil, surveyed during a 10 months period. Among two hundred and eighty-seven Escherichia coli strains isolated from samples of ground beef, meat-grinding-machines and the hands of manipulators, five were recognized as extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC), showing virulence factors (P and S fimbriae, hemolysin and aerobactin) and presenting multidrug resistance. Retail-sold food may constitute an important vehicle for the dissemination of ExPEC in communities, giving rise to reasons for concern.<hr/>O trabalho foi desenvolvido em 23 açougues em Taquaritinga, Estado de São Paulo, Brasil, durante um período de 10 meses. De duzentas e oitenta e sete cepas de E.coli isoladas de carne moída, moedor de carne e mãos de manipuladores de carne, cinco foram caracterizadas como E. coli patogênica extraintestinal (ExPEC) apresentando fatores de virulência (fimbria P e S, hemolisina e aerobactina), assim como multiresistencia a drogas antimicrobianas. Retalhos de carne podem ser um veiculo importante para a disseminação de ExPEC, o que representa um motivo de preocupação. <![CDATA[<B>Microbiological quality of minimally processed vegetables sold in Porto Alegre, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400003&lng=en&nrm=iso&tlng=en Minimally processed vegetables go through various steps during their preparation, with many modifications to their natural structure. However, they must maintain the same quality as the fresh produce. The aim of the present study was to quantify mesophilic and psychrotrophic microorganisms and total and faecal coliforms, and to assess the presence of Escherichia coli, parasites, and dirt material in ready-to-eat minimally processed vegetables. Fifty-six samples of minimally processed vegetables were analysed for the presence of mesophilic and psychrotrophic microorganisms by the plate-count method. Monthly means ranged from 4.7x10(5) to 1.6x10(8) CFU/g and from 7.9x10(6) to 2.7x10(8) CFU/g, respectively for mesophilic and psychrotrophic microorganisms. Coliforms were analysed by the multiple-tube method; total coliforms ranged from &lt;3 to ³ 2.4x10(4) MPN/g and faecal coliforms from &lt;3 to 1.1x10(4) MPN/g. Escherichia coli was detected in eight samples. Out of 52 samples, eight (15.3%) contained oocysts of Eimeria spp.. Dirt matter, such as insect body parts and young mites, was also found. Contamination of faecal origin was observed in these samples, suggesting that either the sanitisation of the product was unsuccessful, or soil or irrigation water could be the source of these microorganisms.<hr/>Hortaliças minimamente processadas passam por várias etapas durante seu processamento, no qual ocorrem várias modificações de sua estrutura natural, todavia elas devem manter a mesma qualidade do produto não processado. O objetivo deste estudo foi quantificar microrganismos mesófilos e psicrótróficos, coliformes totais e fecais e verificar a presença de E. coli, parasitas e sujidades em hortaliças minimamente processadas prontas para consumo. Foram analisadas 56 amostras para mesófilos e psicrotróficos pelo método de contagem em placas, com média mensal 4,7x10(5) a 1,6x10(8) UFC/g e de 7,9x10(6) a 2,7x10(8) UFC/g, respectivamente. Os coliformes foram analisados pela técnica dos tubos múltiplos, onde coliformes totais variaram de &lt;3 a ³ 2,4x10(4) NMP/g e coliformes fecais, de &lt;3 a 1,1x10(4) NMP/g, e E. coli foi observada em oito amostras. De 52 amostras, 8 (15,3%) apresentaram oocistos de Eimeria spp. Sujidades, como fragmentos de insetos e ácaros jovens foram encontrados. Contaminação de origem fecal foi verificada no presente estudo, sugerindo falhas nas etapas do processamento das hortaliças, ou que o solo ou a água de irrigação também poderiam ser fontes de disseminação destes microrganismos. <![CDATA[<B>Isolation of Shiga toxigenic <I>Escherichia coli</I> from butcheries in Taquaritinga city, State of São Paulo, Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400004&lng=en&nrm=iso&tlng=en Shiga toxigenic Escherichia coli (STEC) has been implicated as the cause of several human diseases. Samples (ground beef, grinding-machines and human hands) from 23 butcheries were assayed for E. coli using standard microbiological methods, and 287 isolates were submitted to polymerase chain reaction for the detection of stx 1, stx 2 and eae genes. Four STEC isolates were recovered, two from ground beef and two from grinding-machines; all harbored the stx 2 gene and were negative for the eae gene. All E. coli isolates including the four STEC were screened for antibiotic resistance. High levels of resistance against several antimicrobial agents were detected; those most commonly observed were to tetracycline (76.6%), amoxicillin (64.1%) and cephalothin (58.8%). Such high levels of antimicrobial resistance highlight the need for a more rational use of these agents in cattle.<hr/>Escherichia coli Shiga toxigênica (STEC) tem sido responsabilizada como o agente etiológico de diversas doenças nos seres humanos. Neste estudo foram analisadas amostras provenientes de 23 açougues (carne moída, moedor de carne e mãos de manipuladores) visando o isolamento de cepas de E. coli utilizando os métodos microbiológicos tradicionais. Um total de 287 cepas de E. coli, isoladas destas amostras, foram submetidas a reação em cadeia da polimerase para a detecção dos genes stx 1, stx 2 e eae. Foram identificadas 4 cepas STEC, 2 provenientes de carne moída e 2 provenientes do moedor de carne, todas as cepas apresentando o gene stx 2 e negativas para a presença do gene eae. Todas as cepas de E. coli, incluindo as 4 cepas STEC, foram examinadas para verificar a resistência antimicrobiana. Foram detectados altos níveis de resistência a diferentes agentes antimicrobianos, sendo as resistências mais elevadas para a tetraciclina (76,6%), amoxicilina (64,1%) e cefalotina (58,8%). Estes altos índices de resistência ressaltam a necessidade de uma utilização mais racional destes agentes no gado bovino. <![CDATA[<B><I>Listeria </I>spp. associated to different levels of autochthonous microbiota in meat, meat products and processing plants</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400005&lng=en&nrm=iso&tlng=en High levels of microbial contamination, commonly found in animal origin foods and food processing environments, are able to hinder the growth of pathogens in these products and interfere in the results of laboratory analyses for detection of these pathogens. With the aim of verifying the possible interference of the autochthonous microbiota encountered in meat and meat products and processing plants over the presence of Listeria spp., 443 samples, collected from 11 meat retail establishments, were submitted to microbiological analysis to determine the levels of mesophilic aerobes, total coliforms and Escherichia coli and the presence of Listeria spp., according to the methodology proposed by the USDA. The results did not show evident interference of the autochthonous microbiota over Listeria spp., once the genus was detected even in the meat, meat products and environmental samples with high levels of contamination by mesophilic aerobes and coliforms.<hr/>Altos níveis de contaminação microbiana, usualmente encontrados em alimentos de origem animal e nos ambientes de processamento, podem inibir a multiplicação de microrganismos patogênicos nesses produtos e interferir nos resultados das análises laboratoriais para o isolamento desses patógenos. Com o objetivo de verificar as possíveis interferências da microbiota autóctone encontrada na carne, produtos cárneos e plantas de processamento sobre a presença de Listeria spp., 443 amostras, coletadas em 11 estabelecimentos processadores, foram submetidas a análises microbiológicas para determinação dos níveis de contaminação por aeróbios mesófilos, coliformes totais e Escherichia coli e para verificação da presença de Listeria spp., de acordo com a metodologia proposta pelo USDA. Os resultados obtidos não mostraram uma interferência evidente da microbiota autóctone sobre Listeria spp., uma vez que esse gênero foi detectado mesmo nas amostras de carne e produtos cárneos e amostras ambientais e de superfície de equipamentos que apresentaram altos níveis de contaminação por aeróbios mesófilos e coliformes. <![CDATA[<B>Evaluation of <I>Origanum vulgare </I>essential oil as antimicrobial agent in sausage</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400006&lng=en&nrm=iso&tlng=en This work reports antimicrobial activity of oregano (Origanum vulgare) essential oil against several bacteria in sausage. The in vitro minimum inhibitory concentration (MIC) was determined for 9 selected aerobic heterotrofic bacteria. The antimicrobial activity of distinct concentrations of the essential oil on the basis of the highest MIC found was tested in a food system comprised of fresh sausage. Batch food samples were also inoculated with Escherichia coli with a fixed concentration and the time course of the product was evaluated with respect to the action of the different concentrations of essential oil. Sensory analysis were conducted, and results showed that the addition of oregano essential oil to sausage may be a promising route as bacteriostatic effect was verified for oil concentrations lower than the MIC.<hr/>O presente trabalho reporta resultados referentes à testes de atividade antimicrobiana do óleo essencial de orégano (Origanum vulgare) contra várias bactérias em lingüiça. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada para 9 bactérias aeróbicas heterotróficas. Com base no maior valor encontrado da CIM, testou-se a atividade antimicrobiana para distintas concentrações do óleo essencial in lingüiça fresca. Amostras do sistema alimentar escolhido foram inoculadas com Escherichia coli numa determinada concentração e a evolução temporal do produto concernente ao crescimento microbiano foi monitorada avaliando-se o efeito das diferentes concentrações de óleos essencial aplicadas ao produto inoculado. Os resultados das análises microbiológica e sensorial mostraram que a adição do óleo essencial de orégano a linguiça fresca coloca-se como promissora tendo em vista os efeitos bacteriostáticos observados em baixas concentrações do óleo essencial, inferiores a CIM. <![CDATA[<B>Correlation between API 20 STREP and multiplex PCR for identification of <I>Enterococcus</I> spp. isolated from Brazilian foods</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400007&lng=en&nrm=iso&tlng=en We evaluated the suitability of API 20 STREP and multiplex PCR to speciate 52 Enterococcus spp. obtained from Brazilian foods. A high percentage of isolates (78.9%) presented discrepant results between evaluated tests. Similar results were obtained for six E. faecalis and five E. faecium. The PCR multiplex was more effective than API 20 STREP for complete identification of the isolates.<hr/>A identificação das espécies de 52 Enterococcus spp. isolados de amostras de alimentos foi realizada empregando-se duas metodologias: sistema API 20 STREP e PCR multiplex. Os resultados obtidos revelaram que 78,9% dos isolados apresentaram resultados diferentes nos dois testes utilizados. Apenas seis E. faecalis e cinco E. faecium apresentaram resultados concordantes pelos dois métodos. PCR multiplex permitiu a identificação completa de um número significantemente maior de enterococos do que o sistema API 20 STREP. <![CDATA[<B><I>Salmonella </I>Hadar phage types isolated from different sources of foodchain in Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400008&lng=en&nrm=iso&tlng=en The gastroenteritis incidence caused by Salmonella Hadar has increased over the last decades worldwide. The uncontrolled use of antimicrobials for treating human patients and veterinary field contributes to increase the multidrug resistance of this serovar. In the present investigation, a total of 179 S. Hadar isolates from different sources of foodchain in Brazil were phage typed and analyzed for their antimicrobial resistance profile. The main S. Hadar phage types isolated were PT 38, PT 39, PT 40, PT 11, PT 34, PT 1 and PT 22. Others phage types as PT 13, PT 19, PT 21, PT 23, PT 31, PT 33 and PT 37 were obtained in low percentages. A total of 35,7% S. Hadar strains were resistant to two or more antimicrobials drugs. Furthermore, no resistance to third generation cephalosporin or ciprofloxacin was identified in these strains. Those results appoint to S. Hadar phage types circulating among animals, food and humans, as well as the increasing of multidrug resistance. The surveillance and monitoring of S. Hadar strains based on phage typing and antimicrobial resistance profile are useful for detecting outbreaks, identifying sources of infection and implementing prevention and control measures of salmonellosis.<hr/>A incidência de gastrenterite causada por Salmonella Hadar tem aumentado ao longo dos anos em todo o mundo. O uso indiscriminado de antimicrobianos na clínica humana e veterinária tem contribuído para o aumento da multiresistência deste sorovar. No presente estudo, 179 cepas de S. Hadar isoladas de diferentes fontes da cadeia alimentar no Brasil foram fagotipadas e analisadas quanto ao perfil de resistência antimicrobiana. Os principais fagotipos de S. Hadar isolados foram PT 38, PT 39, PT 40, PT 11, PT 34, PT 1 e PT 22. Outros fagotipos como PT 13, PT 19, PT 21, PT 23, PT 31, PT 33 e PT 37 foram obtidos em menores percentagens. Um total de 35,7% das cepas avaliadas foi resistente a dois ou mais antimicrobianos. Por outro lado, não foi observada resistência a cefalosporinas de terceira geração ou ciprofloxacina. Esses resultados apontam para a circulação de fagotipos de S. Hadar entre animais, alimentos e seres humanos, bem como o aumento da multiresistência antimicrobiana. O monitoramento de cepas de S. Hadar baseado na fagotipagem e no padrão de resistência aos antimicrobianos são ferramentas úteis na detecção de surtos, identificação das fontes de infecção, além de auxiliar na implantação de programas de controle e prevenção de salmoneloses. <![CDATA[<B>Analysis of the in vitro adherence of <I>Streptococcus mutans</I> and <I>Candida albicans</B></I>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400009&lng=en&nrm=iso&tlng=en The objective of the present study was to investigate the in vitro adherence capacity of Streptococcus mutans and Candida albicans. Adherence assays were conducted on dental surfaces and analyzed by scanning electron microscopy (SEM). Extracted human teeth were inoculated with Streptococcus mutans or Candida albicans and with both species simultaneously, and incubated at 37ºC for 21 days. Bacterial inocula had been obtained from saliva samples of children that had been colonized by both organisms. ATCC reference strains were used as controls. SEM analyses showed that the biofilm that covered the entire analyzed dental surface was more homogeneous inoculated with the two microorganisms simultaneously than with each species separately. In a second experiment, carried out with isolates that had shown the highest adherence the isolates were tested for adherence to high-density polyethylene substrates. The potentialization of the adherence capacity of Streptococcus mutans and Candida albicans when in association was confirmed.<hr/>O objetivo deste trabalho foi investigar a capacidade de aderência in vitro de Streptococcus mutans e Candida albicans. Ensaios de aderência foram realizados in vitro na superfície dentária, com posterior análise por Microscopia Eletrônica de Varredura (M.E.V.). Dentes humanos extraídos foram inoculados com Streptococcus mutans e Candida albicans, além de ambas espécies em conjunto, e foram incubados a 37ºC por 21 dias. Os inóculos eram provenientes de amostras salivares de crianças colonizadas por ambos microrganismos. Como controles foram utilizadas linhagens de referência ATCC dos dois microrganismos. A análise por M.E.V. mostrou a formação de um biofilme que cobriu toda a superfície dentária analisada de forma mais homogênea quando incubados juntos do que separadamente. Um segundo experimento foi desenvolvido utilizando isolados mostrando maior aderência dos experimentos anteriores e cortes de polietileno de alta densidade como substrato. A potencialização da capacidade de aderência de Streptococcus mutans e Candida albicans em associação foi confirmada. <![CDATA[<B>Antifungal properties of plants used in Brazilian traditional medicine against clinically relevant fungal pathogens</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400010&lng=en&nrm=iso&tlng=en Antifungal properties of extracts from eight Brazilian plants traditionally used in popular Brazilian medicine were tested against five clinically relevant Candida species, Cryptococcus neoformans, and Sporothrix schenckii. Results demonstrate that almost all extracts exhibited antifungal activity, at least against one of the microorganisms tested. The ethanolic extract from the leaves of Schinus terebinthifolius exhibited potential antifungal activity against C. glabrata and S. schenckii. Preliminary phytochemical analysis of extract from S. terebinthifolius showed the presence of biologically active compounds, namely saponins, flavonoids, triterpenes, steroids and tannins.<hr/>A propriedade antifúngica de extratos de oito plantas utilizadas na medicina tradicional brasileira foi testada contra cinco espécies de Candida, com relevância clínica, Cryptococcus neoformans e Sporothrix schenckii. Os resultados mostraram que todos os extratos exibiram atividade antifúngica contra pelo menos um dos microrganismos testados. O extrato etanólico das folhas de Schinus terebinthifolius apresentou potencial atividade antifúngica contra C. glabrata e S. schenckii. Na análise fitoquímica preliminar dos extratos de S. terebinthifolius observou-se a presença de compostos biologicamente ativos como, flavonóides, triterpenos, esteróides e taninos. <![CDATA[<B><I>Aeromonas </I>associated diarrhoeal disease in south Brazil</B>: <B>prevalence, virulence factors and antimicrobial resistance</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400011&lng=en&nrm=iso&tlng=en Aeromonas were isolated from 27 (6.6%) of 408 patients admitted with acute gastroenteritis in two hospitals at Rio Grande do Sul, Brazil. Isolates were classified as A. hydrophila (51.8%), A. caviae (40.8%), and A. veronii biotype sobria (7.4%). The highest prevalence of Aeromonas associated infections occurred in lactants and children. Virulence genes (aerA -aerolysin/hemolysin, ahpA -serine-protease, satA - glycerophospholipid-cholesterol acyltransferase, lipA -lipase, and ahyB -elastase) and virulence factors (hemolytic, proteolitic, lipolitic activities, and biofilm formation) were identified in most A. hydrophila and A. veronii biotype sobria isolates, with lower frequencies on A. caviae. All Aeromonas isolates were resistant to ampicillin, ticarcillin/clavulanic acid, cephalotin, and cephazolin, and most of them (>70%) exhibited resistance to imipenem, carbenicillin, amoxillin/sulbactan, and piperacillin. Multiple-resistance, more than four antibiotics, was evidenced in 29.6% of the isolates. The most efficient antibiotics were the quinolones (ciprofloxacin and norfloxacin), and the aminoglycosides (amikacin and netilmicin).<hr/>Aeromonas foram isoladas de 27 (6.6%) dos 408 pacientes admitidos com gastroenterite aguda em dois hospitais do Rio Grande do Sul, Brasil. Os isolados foram classificados com A. hydrophila (51.8%), A. caviae (40.8%), e A. veronii biotype sobria (7.4%). A maior prevalência de Aeromonas ocorreu em lactantes e crianças. Genes (aerA -aerolisina/hemolisina, ahpA -serina-protease, satA - glicerofosfolipidio-colesterol aciltransferase, lipA -lipase, e ahyB -elastase) e factores (atividade hemolítica, proteolítica, lipolítica, e formação de biofilme) de virulência foram identificados na maioria dos isolados de A. hydrophila e A. veronii biotype sobria, com freqüências menores em A. caviae. Todos os isolados de Aeromonas apresentaram resistência a ampicilina, ticarcilina/ácido clavulânico, cefalotina e cefazolina, e a maior parte (>70%) exibiram resistência a imipenem, carbenicilina, amoxacilina/sulbactam e piperacilina. Resistência múltipla foi evidenciada em 29,6% dos isolados. Os antibióticos mais eficientes foram as quinolonas (ciprofloxacina e norfloxacina) e os aminoglicosídicos (amicacina e netilmicina). <![CDATA[<B>Disinfectant-resistant bacteria in Buenos Aires city hospital wastewater</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400012&lng=en&nrm=iso&tlng=en Large quantities of disinfectants are used in hospitals, externally on human skin or to eliminate microorganisms from inanimate objects. After use, residual quantities of these products reach the wastewater, exposing the bacteria that survive in hospital wastewaters to a wide range of biocides that could act as a selective pressure for the development of resistance. Increasing attention has been directed recently to the resistance of bacteria to disinfectants. The aim of this paper was to determine the disinfectant bacterial resistance pattern of the microflora released to the urban sewer system by hospital effluents. The characterization of the waste water microflora was performed by determination of the CFU of heterotrophic bacteria, fecal indicator bacteria, Pseudomonas sp. and Staphylococcus sp., in a Buenos Aires hospital effluent. The bacterial resistance to the disinfectants more frequently used in the hospital practice, glutaraldehyde, chlorhexidine and povidone-iodine, was then evaluated. Disinfectant resistant bacterial strains were isolated and typified. Between 10³ and 10(6) chlorexidine resistant bacteria/100 mL were isolated from the samples. Bacteria resistant to other disinfectants ranged between 10³ and 10(4) /100 mL. The bacterial population resistant to desinfectants to was mainly composed by Enterobacteriaceae, Staphylococcus spp, and Bacillus spp, which are highly associated to nosocomial infections. The results obtained show that the hospital effluents are of importance in the bacterial resistance selection process, particularly in the case of disinfectants.<hr/>Os hospitais utilizam uma grande quantidade de desinfetantes para eliminar microorganismos tanto da pele humana como de superfícies inanimadas. Após sua utilização, esses produtos podem chegar ao esgoto em quantidades residuais. A pressão seletiva exercida pelos antimicrobianos nos efluentes hospitalares propicia a disseminação de linhagens resistentes. Além dos antibióticos, os desinfetantes podem atuar como agentes seletivos de linhagens resistentes aos antimicrobianos. Este trabalho teve como objetivo o estudo do perfil da resistência aos desinfetantes das bactérias lançadas na rede de esgoto pelo efluente hospitalar. Na caracterização microbiológica do efluente do Hospital de Clínicas Buenos Aires, determinou-se a concentração de bactérias heterotróficas, bactérias indicadoras fecais, Pseudomonas sp. e Staphylococcus sp. presentes. A resistência aos desinfetantes empregados no hospital, glutaraldeído, iodo povidona, e clorexidina foi então avaliada. Verificou-se a existência de bactérias resistentes à clorexidina em número variando de 10³ a 10(6) bactérias/100 mL e de bactérias resistentes a outros desinfetantes em uma faixa de variação de 10³ a 10(4) bactérias/100 mL. Bactérias dos gêneros Staphylococcus e Bacillus, e da família Enterobacteriaceae, envolvidas em infecções hospitalares, apresentaram resistência aos desinfetantes testados. Estes resultados indicam que as águas residuárias de hospitais desempenham um papel de grande relevância na disseminação de linhagens bacterianas resistentes aos desinfetantes no meio aquático. <![CDATA[<B>Disinfection of gutta-percha cones with chlorhexidine</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400013&lng=en&nrm=iso&tlng=en This study investigated the effectiveness of detergent and aqueous solutions of 2% chlorhexidine digluconate in decontaminating gutta-percha cones (gpc) contaminated with bacteria, yeast, or bacterial spores. Gutta-percha cones were contaminated with 10(7)-10(8) colony-forming units per milliliter (cfu/ml) of the following test organisms: Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, or Candida albicans. Spores of Bacillus subtilis were also tested. Contaminated gpc were treated with the chlorhexidine solutions for 1, 5, 10, or 15 min. Each cone was then transferred to a tube containing saline and the micoorganisms were recovered after homogenization for cfu determination. Both detergent and aqueous chlorhexidine solutions were effective in eliminating S. aureus, E. faecalis, and C. albicans cells adhered on the surface of gpc within 1 min of exposure. E. coli was eliminated in 5 min with detergent solution. The Bacillus subtilis spores were eliminated by chlorhexidine solutions within 5 min. The results of this study demonstrated that both aqueous and detergent solutions of 2% chlorhexidine digluconate were effective in decontaminating gpc within 5 minutes of exposure.<hr/>No presente estudo foi investigada a eficácia das soluções aquosa e detergente de digluconato de clorexidina a 2% na descontaminação de cones de guta-percha (cgp) contaminados experimentalmente com bactérias, leveduras ou esporos bacterianos. Os cones foram contaminados com 10(7) a 10(8) unidades formadores de colônias por mililitro (ufc/ml) dos seguintes microrganismos teste: Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Escherichia coli, ou Candida albicans. Esporos de Bacillus subtilis foram também testados. Os cones contaminados foram tratados com as soluções de clorexidina por, respectivamente, 1, 5, 10 ou 15 min. Cada cone foi então transferido para solução salina e homogeneizado para a determinação das ufc dos microorganismos. As soluções de clorexidina destruíram em 1 min as células de S. aureus, E. faecalis ou de C. albicans aderidas à superfície dos cgp. E. coli foi eliminada em 5 min com a solução detergente. Os esporos de Bacillus subtilis foram eliminados pelas soluções de clorexidina em 5 min. Os resultados deste estudo demonstraram que as soluções aquosa e detergente de clorexidina a 2% foram efetivas na descontaminação dos cones de guta percha em 5 minutos. <![CDATA[<B>Viral Hepatitis C in a leading Brazilian hospital</B>: <B>epidemiological factors and genotyping</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400014&lng=en&nrm=iso&tlng=en The hepatitis C virus (HCV) is classified into six different genotypes and their distribution is different throughout the world. Epidemiologic studies are important to determine several characteristics of the virus, as well as the disease. This study analysed the prevalence of HCV and its genotypes among patients from a leading hospital in Ceará, which is located in Northeast Brazil. A total of 119 anti-HCV-seropositive patients, each having previously completed a questionnaire about risk behaviours related to HCV infection were tested for HCV infection using a qualitative HCV polymerase chain reaction (PCR) assay and genotyping by restriction fragment length polymorphism (RFLP). The detection was based on amplifying of the non-coding 5' region. Of the 119 patients, 95 showed positive results in the qualitative HCV test. History of surgery was the most reported risk factor, followed by the use of drugs, having tattoos, undergoing haemodialysis and occupational exposure. Genotype 1 was the most prevalent (46.9%), followed by genotype 3 (34.4%) and 2 (8.3%). The genotype distribution was similar for all of the various risk behaviours.<hr/>O vírus da hepatite C (VHC) é classificado em seis genótipos diferentes e sua distribuição é diferente em todo o mundo. Os estudos epidemiológicos são importantes para determinar várias características sobre o vírus, bem como da doença. Este estudo analisou a prevalência do VHC e seus genótipos em pacientes atendidos em hospital de referência no Ceará, o qual é localizado no nordeste do Brasil. Um total de 119 pacientes, os quais eram soropositivos anti-VHC, preencheram questionários sobre fatores de risco relacionados à infecção pelo VHC e foram testados quanto à infecção ao VHC usando o teste da reação da polimerase em cadeia (PCR) qualitativo para VHC e genotipagem por "restriction fragment length polymorphism" (RFLP). A detecção foi baseada na amplificação da região não codificante 5'. Dos 119 pacientes, 95 mostraram resultados positivos no teste qualitativo para VHC. A história prévia de cirurgia foi o fator de risco mais relatado, seguido pelo uso de drogas, ter tatuagem, ter sido submetido à hemodiálise e risco ocupacional. O genótipo 1 foi o mais prevalente (46,9%), seguido pelo genótipo 3 (34,4%) e 2 (8,3%). A distribuição dos genótipos foi similar entre os vários fatores de risco analisados. <![CDATA[<B>Differences in the cell wall architecture of melanin lacking and melanin producing <I>Cryptococcus neoformans</I> clinical isolates from India</B>: <B>an electron microscopic study</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400015&lng=en&nrm=iso&tlng=en Cryptococcus neoformans is an important opportunistic fungal pathogen that causes life-threatening infection of the central nervous system. A major virulence factor for C. neoformans is the production of melanin in the cell wall. Using transmission electron microscopy, we studied the cell walls of three pairs of isolates obtained from patients with dual cryptococcal infections, where a melanotic and an albino strain were isolated from the CSF of each patient. Transmission Electron Microscopy revealed that the albino strains lacked a melanin layer whereas a melanin layer was associated with the cell wall of the melanotic strains, comprising approximately 75% of the cell wall area. The cell wall size of the melanin producing cells was approximately double the size the albino isolates' cell walls (p value <= 0.003). In this study TEM revealed that the differences in the ultrastructure of the melanin lacking and melanin producing isolates were associated to the cell wall and the melanin layer.<hr/>Cryptococcus neoformans é um importante fungo oportunista patogênico que causa infecção no sistema nervoso central, e que pode levar o paciente à morte. Um dos principais fatores de virulência do C. neoformans é a produção de melanina na parede celular. Utilizando microscopia eletrônica de transmissão, nós estudamos as paredes celulares de três pares de isolados obtidos de pacientes com dupla infecção pelo fungo, onde um isolado melanizado e um albino foram isolados do líquor de cada paciente. A microscopia eletrônica de transmissão revelou que as cepas albinas não apresentavam a camada de melanina enquanto que uma camada de melanina estava associada com a parede celular de cepas melanóticas, constituindo aproximadamente 75% da área da parede celular. O tamanho da parede celular das células produtoras de melanina foi aproximadamente o dobro do tamanho da parede celular dos isolados albinos (p < 0,003). Neste estudo, a microscopia eletrônica de transmissão revelou que as diferenças na estrutura dos isolados albinos sem melanina e dos isolados produtores de melanina estava associada à parede celular e a camada de melanina. <![CDATA[<B>Construction and characterization of a bovine herpesvirus 5 mutant with a deletion of the gI, gE and US9 genes</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400016&lng=en&nrm=iso&tlng=en Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is a important cause of viral encephalitis in cattle in South America. Within the framework of developing a differential vaccine against BoHV-5, a deletion mutant was constructed based on a Brazilian BoHV-5 isolate. The target of the deletions were genes that code proteins implicated in the neurovirulence of BoHV-5, the glycoprotein I (gI), glycoprotein E (gE) and membrane protein US9. To construct the deletion mutant of BoHV-5, the flanking regions of all three genes were cloned in a prokaryotic plasmid. This deletion fragment was co-transfected with the viral DNA into bovine cells. Identification of deletion mutants was performed by immunostaining with an anti-gE monoclonal antibody. One of the gE negative viral populations found was purified, amplified and further examined by restriction endonuclesase analysis of its genomic DNA. The plaque sizes and penetration kinetics of the deletion mutant and wild type viruses were compared. The plaque sizes of the deletion mutant were significantly smaller than those of the parental strain (p <= 0.05), but no statistical differences were observed in penetration kinetics. The results indicate that the gI/gE/US9 deletion mutant of BoHV-5 may have a reduced virulence in the host and is still viable enough to be a good candidate for the development of a BoHV-5 vaccine.<hr/>O herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é uma causa importante de encefalite viral em bovinos na América do Sul. Buscando o desenvolvimento de uma vacina diferencial contra o BoHV-5, um mutante deletado foi construído com base em um isolado brasileiro deste vírus. O alvo das deleções foram genes que codificam proteínas implicadas na neurovirulência do BoHV-5, a glicoproteína I (gI), a glicoproteína E (gE) e a proteína de membrana US9. Para construir o mutante deletado de BoHV-5, as regiões flanqueadoras dos três genes foram clonadas em um plasmídeo procarioto. Este fragmento de deleção foi co-transfectado com o DNA viral em células de bovinos. A identificação dos mutantes deletados foi feita por meio da técnica de imunoperoxidase com um anticorpo monoclonal anti-gE. Uma das populacões virais gE negativas encontradas foi purificada, amplificada e seu genoma foi examinado por análise de restrição enzimática. Os tamanhos de placas virais e taxas de penetração do vírus mutante foram determinados e comparados com os do vírus selvagem. As placas virais do vírus mutante deletado foram significativamente menores do que as do vírus selvagem (p <= 0,05), mas não foram encontradas diferenças significativas quando comparadas as taxas de penetração dos dois vírus. Estes resultados indicam que o vírus mutante deletado gI/gE/US9 de BoHV-5 pode apresentar virulência reduzida e é viável o suficiente para ser um bom candidato para o desenvolvimento de uma vacina contra o BoHV-5. <![CDATA[<B>Leptospirosis serosurvey in bovines from Brazilian Pantanal using IGG ELISA with recombinant protein LipL32 and microscopic agglutination test</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400017&lng=en&nrm=iso&tlng=en This investigation was carried out in Brazilian Pantanal: region with important biodiversity. This region's climatic conditions, hydrology and geomorphology as well as the existence of great variety of wild species favor the maintenance of the Leptospira in the environment. The aim of this study was to evaluate IgG ELISA with recombinant protein LipL32 in comparison with microscopic agglutination test (MAT) and additionally contribute to the knowledge of the distribution of the one of most important worldwide zoonotic infection, assessing the seropositivity of bovine leptospirosis in beef cattle herds of Brazilian Pantanal, an important ecological preserved area, where cattle constitute not only the most important economic resource but also the major activity compatible of the conservation of natural resource of the region. Out of 282 samples of cattle serum analyzed, 143 (50.71%) were positive in MAT. The serovar Hardjo (genotypic Hardjoprajitno and Hardjobovis), Wolffi and Ballum showed the largest frequency of reactive samples. In the IgG ELISA rLipL32, 161 samples (57.09%) were positive. This result was higher than obtained by MAT (p<0.001). The sensitivity of the ELISA test was 99.30% and the specificity was 86.33%, based on the MAT. This test was shown to be a more sensitive, specific and accurate test for the diagnosis of bovine leptospirosis compared to the MAT.<hr/>Este estudo foi realizado no Pantanal brasileiro: região que apresenta importante biodiversidade. As condições de clima, hidrologia e geomorfologia dessa região, bem como a existência de grande variedade de espécies animais silvestres, favorecem a manutenção da Leptospira no meio ambiente. O objetivo desse estudo foi avaliar o ELISA IgG com proteína recombinante LipL32 em comparação com a soroaglutinação microscópica (SAM) para o diagnóstico sorológico de Leptospira. Adicionalmente, contribuir para o conhecimento da distribuição da leptospirose bovina, uma das mais importantes zoonoses mundialmente distribuída. Foi avaliada a soropositividade para essa bactéria em rebanhos bovinos de corte da região do Pantanal, uma área onde o bovino constitui não apenas o recurso econômico mais importante, como também a principal atividade econômica compatível com a conservação dos recursos naturais da região. Das 282 amostras de soro bovino analisadas, 143 (50,71%) foram positivas na SAM. O sorovar Hardjo (genótipos Hardjoprajitno e Hardjobovis), Wolffi e Ballum apresentaram freqüências altas de amostras reativas. No IgG ELISA rLipL32, 161 amostras (57,09%) foram positivas, apresentando esse teste uma maior soropositividade em relação à SAM (p<0,001). A Sensibilidade do ELISA em comparação com a SAM foi de 99,30% e a especificidade de 86,33%. O IgG ELISA rLipL32 mostrou ser um teste sensível, específico e de alta acurácia para o diagnóstico de leptospirose bovina. <![CDATA[<B>Extended-spectrum beta-lactamase production among ampicillin-resistant <I>Escherichia coli</I> strains from chicken in Enugu State, Nigeria</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400018&lng=en&nrm=iso&tlng=en One hundred and seventy-two ampicillin-resistant E. coli strains isolated from commercial chickens in Enugu State, Nigeria, were screened for beta-lactamase production using the broth method with nitrocefin® as the chromogenic cephalosporin to detect enzyme production. Beta-lactamase producing strains were further examined for extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production using the Oxoid combination discs method. One hundred and seventy (98.8%) of the 172 ampicillin-resistant E. coli strains produced beta-lactamase enzyme. Sixteen (9.4%) beta-lactamase producers were phenotypically confirmed to produce ESBLs. Six of the ESBL producing strains were only detected with ceftazidime versus ceftazidime/clavulanate combination while ten of the ESBL producers were detected with cefotaxime versus cefotaxime/clavulanate combination. Chicken may serve as a reservoir of ESBL-producing E. coli strains which could be transferred to man and other animals.<hr/>Cento e setenta e duas cepas de Escherichia coli resistentes a ampicilina isoladas de frangos em Enugu State, Nigéria, foram avaliadas quanto à produção de beta-lactamase através do uso de método em caldo com nitrocefin® como indicador cromogênico da produção da enzima. Em seguida, as cepas produtoras de beta-lactamase foram examinadas quanto à produção de beta-lactamase de espectro expandido (ESBL) através do método de discos combinados Oxoid. Entre as cepas de Escherichia coli resistentes a ampicilina, cento e setenta (98,8%) produziram beta-lactamase. Testes fenotípicos indicaram que dezesseis (9,4%) das cepas produtoras de beta-lactamase produziram ESBL. Seis cepas produtoras de ESBL foram detectadas apenas com a combinação ceftazidima versus cefotaxime/clavulanato, enquanto dez cepas produtoras de ESBL foram detectadas com a combinação cefotaxime versus cefotaxime/clavulanato. Frangos podem ser reservatório de cepas de E.coli produtoras de ESBL, que podem ser transferidos para o homem e outros animais. <![CDATA[<B>Comparison of methods for mycobacteria isolation from swine feces</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400019&lng=en&nrm=iso&tlng=en Swine mycobacteriosis is an important cause of carcass condemnation at abattoirs. One of the best ways to recognize the etiologic agent involved, in live animals, is the fecal isolation, as 94% of the lesions are located in the digestive tract. Therefore, the goal of the present study was to compare the performance of four decontamination methods followed by inoculation in three different culture media, totalizing twelve procedures of mycobacteria search from swine fecal samples experimentally contaminated. The swine feces were artificially contaminated with 0.02 g of Mycobacterium avium, PIG-B strain, and subjected to mycobacteria isolation trial. The protocols used were: 1) modified Petroff or basic method; 2) modified Lowenstein-Jensen or acidic method; 3) modified Petroff or basic method with re-suspension in Amphotericin B; 4) modified Lowenstein-Jensen or acid method with re-suspension in Amphotericin B, followed by inoculation in Petragnani, Lowenstein-Jensen and Lowenstein-Jensen medium with antibiotics (Penicillin G and Nalidixic acid). There was a difference (p<0.05) between the mycobacterial recovery percentages from swine feces. The acid method with re-suspension in Amphotericin B solution and inoculation in Lowenstein-Jensen medium with antibiotics showed the best results (87% of mycobacteria recovery).<hr/>As micobacterioses suínas são responsáveis por condenações de carcaças em abatedouro e uma das melhores formas de se conhecer os agentes envolvidos nos animais vivos é o isolamento a partir das fezes, pois em 94% das vezes, as lesões localizam-se no trato digestivo. Assim sendo, o presente estudo teve por objetivo comparar o desempenho de quatro métodos de descontaminação com semeadura em três diferentes meios de cultura, totalizando doze procedimentos na pesquisa de micobactérias a partir de amostras de fezes de suínos contaminadas experimentalmente. Amostras de fezes de suínos foram contaminadas artificialmente com 0,02g de Mycobacterium avium, estirpe de PIG-B, e submetidas à tentativa de isolamento de micobactérias, utilizando-se os seguintes protocolos de descontaminação: 1) Petroff modificado ou método básico; 2) Lowenstein-Jensen modificado ou método ácido; 3) Petroff modificado ou método básico e ressuspensão com anfotericina B; 4) Lowenstein-Jensen modificado ou método ácido e ressuspensão com anfotericina B; com subseqüente semeadura em meios de Petragnani, Lowenstein-Jensen e Lowenstein-Jensen com antibióticos (Penicilina G e Ácido nalidíxico). Houve diferença entre os percentuais de recuperação de micobactérias a partir das fezes de suínos (p<0,05) e o método ácido com ressuspensão em solução de anfotericina B e semeadura em meio de Lowenstein-Jensen com antibióticos apresentou os melhores resultados (87% de recuperação de micobactérias). <![CDATA[<B>Molecular characterization of swine hepatitis E virus from Southeastern Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400020&lng=en&nrm=iso&tlng=en Despite serological evidences of presence of hepatitis E virus (HEV) in humans or other animals, until this study the virus had not been detected and molecular characterization of the isolate that circulates in Brazil had not been described. Thus, we collected stool samples of young pigs and tested for presence of HEV RNA by RT-PCR, using primers for partial amplification of ORF2 sequence. Phylogenetic analysis with sequence obtained from the amplified products revealed that the HEV isolate identified here was most closely related to HEV isolates of genotype 3, which is commonly detected in HEV infected pigs. Nucleotide sequence analyses carried out with the entire amplified fragment, ORF2/ORF3 overlapping and ORF2 non-overlapping sequences showed highest identities with the US isolate of genotype 3. Similarly, amino acid sequence analyses done with the entire amplified fragment, ORF2 non-overlapping, ORF2 and ORF3 overlapping sequences also showed highest identities with the genotype 3 isolate. Presence, in Brazil, of HEV of genotype 4, which also infects pigs, as well as HEV strains that infect humans still remain to be detected and characterized.<hr/>Apesar de evidências sorológicas da presença do vírus da hepatite E (VHE) em humanos ou outros animais, até o presente estudo o vírus não havia sido detectado e a caracterização molecular da cepa que circula no Brasil não havia sido descrita. Assim, amostras de fezes de porcos jovens foram colhidas e analizadas quanto a presença do ARN do VHE por RT-PCR, utilizando-se oligonucleotídeos para amplificação da seqüência parcial do ORF2 viral. Análise filogenética realizada com a seqüência obtida dos produtos amplificados revelou que a cepa encontrada apresentou relação próxima com cepas do genótipo 3 que são detectadas com freqüência em porcos. Análises das seqüências nucleotídicas realizadas com todo o segmento amplificado, com somente o segmento sobreposto do ORF2/ORF3 e aquele sem sobreposição do ORF2, em comparação com isolados de genótipos conhecidos, mostraram maior identidade com o isolado encontrado nos Estados Unidos (US) do genótipo 3. De maneira semelhante, análises da seqüência de aminoácidos realizadas com os mesmos segmentos também mostraram maior identidade com o isolado de genótipo 3. Presença ou não do vírus de genótipo 4, que também infecta porcos, ainda necessita ser verificada. Da mesma forma, cepas do VHE que infectam humanos ainda necessitam ser detectadas e caracterizadas. <![CDATA[<B>Identification of a mutation in the spike protein cleavage site in Brazilian strains of wild-type bovine coronavirus</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400021&lng=en&nrm=iso&tlng=en The spike (S) protein of coronaviruses, a type I membrane glycoprotein, is primarily responsible for entry into susceptible cells by binding with specific receptors on cells and mediating subsequent virus-cell fusion. The bovine coronavirus (BCoV) S protein is cleaved into two subunits, the N-terminal S1 and the C-terminal S2. The proteolytic cleavage site of S protein is highly conserved among BCoV strains and is located between amino acids 763 and 768 (KRRSRR). This study describes a single mutation in the S protein cleavage site of three Brazilian strains of BCoV detected in diarrheic fecal samples from calves naturally infected. The sequenced PCR products revealed that amino acid sequence of the cleavage site of our strains was KRRSSR, indicating a mutation at amino acid position 767 (R <FONT FACE=Symbol>®</FONT> S). This amino acid substitution occurred due to a single nucleotide substitution in the sequence of DNA corresponding to the proteolytic cleavage site, CGT to AGT. This is the first description of this nucleotide mutation (C to A), which resulted in the substitution of arginine to serine in the S cleavage site. In this study we speculated the probable effects of this mutation in the proteolytic cleavage site using the murine hepatitis coronavirus (MHV) as a comparative model.<hr/>A proteína da espícula (S), uma glicoproteína de membrana do tipo I, é primariamente responsável pela entrada do vírus em células susceptíveis por meio da interação inicial com receptores celulares específicos e subseqüente mediação da fusão vírus-célula. A proteína S do coronavírus bovino (BCoV) é clivada em duas subunidades: a S1, na região N-terminal e a S2, na região C-terminal. O sítio de clivagem proteolítica da proteína S é altamente conservado entre as estirpes de BCoV e está situado entre os aminoácidos 763-768 (KRRSRR). Este estudo descreve uma mutação no sítio de clivagem da proteína S de três estirpes do BCoV detectadas em amostras fecais diarréicas de bezerros naturalmente infectados no Brasil. O seqüenciamento dos produtos de PCR identificou a seqüência de aminoácidos KRRSSR no sítio de clivagem de nossas amostras, indicando uma mutação na posição 767 (R->S). Esta mutação ocorreu devido a uma única substituição de nucleotídeo no sítio de clivagem proteolítica, alterando o códon CGT para AGT. Esta é a primeira descrição desta mutação de nucleotídeo (C para A), que resultou na substituição do aminoácido arginina por serina no sítio de clivagem da proteína S. Neste estudo também são sugeridos os prováveis efeitos desta mutação no sitio de clivagem proteolítica utilizando o coronavírus da hepatite dos camundongos (MHV) como um modelo comparativo. <![CDATA[<B>Antimicrobial activity of surfactants produced by <I>Bacillus subtilis</I> R14 against multidrug-resistant bacteria</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400022&lng=en&nrm=iso&tlng=en Lipopeptides represent a class of microbial surfactants with increasing scientific, therapeutic and biotechnological interests. The genus Bacillus is a producer of these active compounds, and among them B. subtilis produces surfactin, the most potent biosurfactant known. These compounds can act as antibiotics, antivirals, antitumorals, immunomodulators and enzyme inhibitors. In this work, the antimicrobial activity of biosurfactants obtained by cultivation of B. subtilis R14 was investigated against multidrug-resistant bacteria. During cultivation in defined medium, the surface tension of the medium was reduced from 54 mN/m in the beginning of the microbial growth to 30 mN/m after 20 hours. A crude surfactant concentration of 2.0 g/L was obtained after 40 hours of cultivation. A preliminary characterization suggested that two surfactants were produced. The evaluation of the antimicrobial activity of these compounds was carried out against 29 bacteria. Enterococcus faecalis (11 strains), Staphylococcus aureus (6 strains) and Pseudomonas aeruginosa (7 strains) and Escherichia coli CI 18 (1 strain) displayed a profile of well defined drug resistance. All strains were sensitive to the surfactants, in particular Enterococcus faecalis. The results demonstrated that lipopeptides have a broad spectrum of action, including antimicrobial activity against microorganisms with multidrug-resistant profiles.<hr/>Os lipopeptídeos representam uma classe de surfactantes microbiológicos com crescente interesse científico, terapêutico e biotecnológico. O gênero Bacillus é um dos maiores produtores destes compostos ativos. Dentre as espécies produtoras de biossurfactante, B. subtilis produz surfactina um dos mais conhecidos. Estes compostos atuam como antibióticos, antivirais, agente antitumorais, imunomoduladores e inibidores enzimáticos. O objetivo deste trabalho foi determinar a atividade antimicrobiana de biossurfactantes, obtidos pelo cultivo de B. subtilis R14, frente a bactérias multidroga-resistentes. Durante o cultivo em meio quimicamente definido, a tensão superficial do meio foi reduzida de 54 mN/m no início do crescimento microbiano para 30 mN/m depois de 20 h. Uma concentração de surfactante bruto de 2 g/L foi obtida depois de 40h de cultivo. Uma caracterização preliminar sugeriu que dois surfactantes foram produzidos. A avaliação antimicrobiana destes compostos foi realizada frente a vinte e nove bactérias. O perfil de multidroga-resistência foi previamente definido para Enterococcus faecalis (11 cepas) Staphylococcus aureus (6 cepas), Pseudomonas aeruginosa (7 cepas) e Escherichia coli IC18. Todas as cepas foram sensíveis aos surfactantes, em particular Enterococcus faecalis. Os resultados demonstraram que os lipopeptídios têm um amplo espectro de ação, incluindo microrganismos multidroga-resistentes. <![CDATA[<B>Microbiological monitoring of clean rooms in development of vaccines</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400023&lng=en&nrm=iso&tlng=en The aim of the present work was to evaluate an environmental monitoring program for clean rooms, or classified environments, involved in the filling and quality control of biological products produced by Butantan Institute, São Paulo, Brazil. This monitoring established the quantification, characterization and seasonality of the microorganisms in air and operators and, moreover, determined the alert and action limits. The total detectable microbial number showed some contrasts in installed air purification systems and in the operational impact on adopted procedures. The typical microbial population consisted of Staphylococcus sp, Micrococcus sp, Bacillus sp and Penicillium sp. The highest microorganism concentration occurred during summer and springtime. The established internal alert and action limits supported the operational procedures. Therefore, the environmental monitoring program is recommended for other laboratories involved in the production of vaccines, hyperimmune sera and biopharmaceuticals.<hr/>O presente trabalho teve por objetivo avaliar um programa de monitoramento microbiológico ambiental para áreas limpas, ou ambientes classificados, envolvidas na produção, envasamento e controle dos imunobiológicos produzidos pelo Instituto Butantan. Este monitoramento permitiu a quantificação, a caracterização e a sazonalidade da população microbiana presente no ar e nos operadores, e a determinação dos limites de alerta e ação. O número total de bactérias detectáveis revelou diferenças nos sistemas de purificação de ar instalados e o impacto operacional ocasionado pelos procedimentos realizados. A população microbiana característica foi composta por bactérias dos gêneros Staphylococcus sp, Micrococcus sp, Bacillus sp e por fungos filamentosos do gênero Penicillium sp. A maior concentração de microrganismos ocorreu nos períodos de verão e primavera. Os limites internos de alerta e ação estabelecidos asseguram os procedimentos operacionais, recomendando o monitoramento microbiológico ambiental a outros laboratórios envolvidos na produção de vacinas, soros hiperimunes e imunobiológicos. <![CDATA[<B>Antibacterial activity of medicinal plant extracts</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400024&lng=en&nrm=iso&tlng=en The present study aimed at evaluating the in vitro antimicrobial activity of methanolic extracts of some medicinal plants against Escherichia coli, Salmonella Typhimurium, Staphylococcus aureus and Enterococcus sp. The methanolic extract of Caryophyllus aromaticus presented the highest anti-S. aureus activity and was effective against all bacterial strains tested.<hr/>Avaliou-se a atividade antimicrobiana in vitro de extratos metanólicos de algumas plantas medicinais frente a Escherichia coli, Salmonella Typhimurium, Staphylococcus aureus e Enterococcus sp. O extrato metanólico de Caryophyllus aromaticus foi o mais eficaz para todas as bactérias testadas e apresentou a melhor atividade anti-S. aureus. <![CDATA[<B>Phenotypic and genotypic characterization of <I>Salmonella</I> Enteritidis isolates</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400025&lng=en&nrm=iso&tlng=en In order to study the epidemiology of Salmonella Enteritidis outbreaks and determine the source of contamination so that a recurrence can be avoided, detailed characterization is necessary. Thus, the purpose of this study was to verify whether rep-PCR was able to discriminate among Salmonella Enteritidis isolates. Phage typing, detection of virulence genes and antimicrobial resistance testing were also associated to rep-PCR results. One hundred and two S. Enteritidis isolates from broiler carcasses, food, human, pigs, poultry-related samples, and nine isolates from other countries were genotypically typed by REP-PCR, ERIC-PCR and BOX-PCR, collectively called rep-PCR. Phage typing, detection of virulence genes and antimicrobial resistance testing were also performed. Only three fingerprinting profiles were obtained with each rep-PCR method, with the majority of isolates belonging to the same profile. No relationship was observed between genotypic profile and year, place of isolation or source of infection. However, the less frequent rep-PCR profiles showed single antimicrobial resistance patterns. Although few strains isolated from swine were analyzed, different antimicrobial resistance patterns were observed. Furthermore, phage type 4 was not found in swine isolates. rep-PCR showed a lower discriminatory power as compared with antimicrobial resistance and phage typing, but the combination of genotypic and phenotypic methods was more discriminatory than any method alone, resulting in 48 different types.<hr/>Uma caracterização detalhada de Salmonella Enteritidis é necessária para que possa ser desenvolvido o estudo da epidemiologia dos surtos causados por este organismo, bem como a determinação da fonte de contaminação, evitando que ocorram novos surtos. Assim, o objetivo deste estudo foi verificar se a rep-PCR era capaz de diferenciar isolados de S. Enteritidis. A fagotipagem, a detecção de genes de virulência e a determinação de resistência antimicrobiana foram associadas aos resultados da rep-PCR. Cento e duas S. Enteritidis isoladas de carcaças de frango, alimentos prontos para consumo, humanos suínos, amostras relacionadas a aves, e nove isolados de outros países foram genotipicamente tipados por REP-PCR, ERIC-PCR e BOX-PCR, juntamente chamados de rep-PCR. A fagotipagem, a detecção de genes de virulência e a determinação de resistência antimicrobiana também foram realizadas. Somente três padrões de fingerprinting foram obtidos com cada método de rep-PCR, sendo que a maioria dos isolados pertenceu ao mesmo perfil. Nenhuma relação foi observada entre o perfil genotípico e o ano, o local de isolamento e a fonte de infecção. Entretanto, os perfis menos freqüentes de rep-PCR apresentaram padrões de resistência antimicrobiana únicos. Embora poucas amostras de suínos tenham sido analisadas, diferentes padrões de resistência antimicrobiana foram observados. Além disso, o fagotipo 4 não foi encontrado em isolados de suínos. A rep-PCR apresentou um menor poder discriminatório quando comparada com a resistência antimicrobiana e com a fagotipagem, mas a combinação dos métodos genotípicos e fenotípicos foi mais discriminatória do que qualquer método isolado, resultando em 48 tipos diferentes. <![CDATA[<B>Genetic variability of <I>Streptococcus mutans</I> isolated from low-income families, as shown by RAPD markers</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400026&lng=en&nrm=iso&tlng=en The detection of Streptococcus mutans isolates with high genetic variability in different individuals indicates the occurrence of transmissibility. In this context, nine low-income families (40 individuals in total) with similar social conditions were assessed to identify the bioserotypes of S. mutans using both biochemical and RAPD markers and to establish the degree of similarity among the intra-familial isolates. The polymorphism analysis used the coefficient of Jaccard in both a Principal Coordinates Analysis (PCO) and in a UPGMA clustering method. A total of 157 isolates were obtained from salivary samples, using the morphology of colonies recovered using MSB agar as indicators. From those, 64 were characterized biochemically as S. mutans and 10 as S. sombrinus. Genetic variability among isolates based on RAPD markers was not consistent with their intra-familial distribution. In particular, some individuals might have experienced multiple infections given the high genetic variability among their isolates. The occurrence of 4 isolates with 100% genetic similarity is indicative of intra-familial transmission.<hr/>A detecção de isolados de S. mutans com alta similaridade genética em indivíduos diferentes, sugere a existência de transmissibilidade. Neste contexto, nove famílias (40 indivíduos) de baixo poder aquisitivo com condições sociais homogêneas foram avaliadas, visando identificar os biosorotipos de S. mutans por meio de bioquimismo e marcadores RAPD e estabelecer o grau de similaridade entre os isolados intra-familiar. Para a análise de polimorfismo utilizou-se coeficiente de Jaccard, análise de coordenadas principais (PCO) e método "UPGMA". Foram obtidos 157 isolados, a partir de amostras salivares, usando como indicador a morfologia das colônias recuperadas em ágar MSB. Destes, 64 foram caracterizados bioquimicamente como S. mutans e 10 como S. sobrinus. A partir dos marcadores RAPD verificou-se variabilidade genética entre isolados, sendo diferente a distribuição intra-familiar destes. Em determinados indivíduos podem ter ocorrido infecções múltiplas, devido a grande variabilidade dos isolados. A existência de quatro isolados apresentando 100% de similaridade, sugeriu transmissão intra-familiar. <![CDATA[<B>Quantitative analysis of Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism (T-RFLP) microbial community profiles</B>: <B>peak height data showed to be more reproducible than peak area</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400027&lng=en&nrm=iso&tlng=en Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism (T-RFLP) is a culture-independent fingerprinting method for microbial community analysis. Profiles generated by an automated electrophoresis system can be analysed quantitatively using either peak height or peak area data. Statistical testing demontrated that peak height data showed to be more reproducible than peak area data.<hr/>Terminal Restriction Fragment Length Polymorphism (T-RFLP) é um método molecular, independente de cultivo, para análise de comunidades microbianas. Perfis gerados por um sistema automatizado de eletroforese podem ser analisados quantitativamente usando dados de altura ou área dos picos. Os dados de altura mostraram-se mais reprodutíveis do que os de área. <![CDATA[<B>Antibacterial and antifungal activities of fatty acid methyl esters of the blind-your-eye mangrove from India</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400028&lng=en&nrm=iso&tlng=en Fatty acids are widely occurring in natural fats and dietary oils and they are known to have antibacterial and antifungal properties. However, little is known on the antibacterial and antifungal properties of the blind-your-eye mangrove (Excoecaria agallocha) and this study for the first time determines the fatty acid composition and the antibacterial and antifungal activities of Fatty Acid Methyl Esters (FAME) of the blind-your-eye mangrove plant found along the coastal areas of south India.<hr/>Gorduras naturais e óleos são abundantes em ácidos graxos que apresentam atividade antibacteriana e antifúngica. Entretanto, pouco se sabe sobre a atividade antibacteriana e antifúngica de ésteres metílicos de ácidos graxos de mangue "blind-your-eye" (Excoecaria agallocha). Esse estudo relata, pela primeira vez, a composição em ácidos graxos e a atividade antibacteriana e antifúngica de ésteres metílicos de ácidos graxos (FAME) de mangue "blind-your-eye" encontrado ao longo de áreas costeiras do sul da India. <![CDATA[<B>Detection of <I>Legionella pneumophila </I>in water and biofilm samples by culture and molecular methods from man-made systems in São Paulo - Brazil</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400029&lng=en&nrm=iso&tlng=en Legionella pneumophila is a pathogenic bacteria associated to aquatic habitat of natural and artificial environments. Clinical cases of legionellosis have been reported in Brazil but there is a lack of information about the incidence and concentration of this bacterium in environmental sources. Thus, the present study was designed to evaluate the occurrence of legionellae in São Paulo city, Brazil, using different methods of detection and identification. Sixty-seven water and biofilm samples from natural reservoirs and man-made systems were collected and analyzed for the presence of Legionella spp by culturing onto a selective medium, coculture in axenic free-living amoebae and direct fluorescent antibody (DFA) assay. Results showed that freshwater of reservoirs did not contain legionellae, Legionella pneumophila was isolated from man-made systems, with predominance of Legionella pneumophila serogroup 1 strains. Although there was no statistical difference among the proposed detection methods, the plate culture method yielded a higher number of L. pneumophila positive samples, followed by amoebic coculture procedure and direct fluorescent antibody assay. Results of PCR and sequencing reactions revealed that application of macrophage infectivity potentiator gene as a molecular marker was an important tool for the identification of environmental isolates of L. pneumophila. The agreement among the three detection methods-when all methods yielded similar results- and the prevalence of a single Legionella species in the sampled man-made systems could suggest that the occurrence of this bacterium had been influenced by the higher concentration of metallic ions dissociated in water of those systems than in natural reservoirs. Thus, the results of this study revealed that the water of man-made systems in Sao Paulo may serve as a reservoir for L. pneumophila and other microorganism, including free-living protozoans.<hr/>Legionella pneumophila é uma bactéria patogênica associada à habitats aquáticos de ambientes naturais e artificiais. Casos clínicos de legionelose têm sido descritos no Brasil, mas a incidência e concentração desta bactéria em fontes ambientais ainda são pouco conhecidas. Assim, o presente estudo foi desenvolvido para avaliar a ocorrência de bactérias do gênero Legionella na cidade de São Paulo, Brasil, utilizando diferentes métodos de isolamento e identificação. Sessenta e sete amostras de água e biofilme de reservatórios naturais e sistemas artificiais de climatização de ambientes interiores foram coletadas e analisadas quanto à presença de Legionella spp por métodos de cultivo em meio-de-cultura seletivo, cocultivo com amebas de vida livre axênicas e ensaios de imunofluorescência direta (IFD). Os resultados demonstraram que bactérias do gênero Legionella não foram detectadas em reservatórios naturais de água, Legionella pneumophila foi isolada de sistemas artificiais de climatização, com predominância de cepas de Legionella pneumophila sorogrupo 1. Apesar de não ter havido diferença estatística significante entre os métodos de detecção propostos, o método de cultivo em placa produziu o melhor resultado quanto ao número de amostras positivas para L. pneumophila, seguido do procedimento de cocultivo com amebas e ensaio de imunofluorescência direta. Os resultados das reações de PCR e sequenciamento revelaram que a aplicação do gene potencializador de infecção em macrófagos como marcador molecular foi um importante implemento na identificação de isolados ambientais de L. pneumophila. A concordância existente entre os três métodos de detecção - quando todos os métodos produziram resultados similares - e a prevalência de uma espécie de Legionella nos sistemas artificiais amostrados poderia sugerir que a ocorrência desta bactéria tenha sido influenciada pela maior concentração de íons metálicos dissociados na água daqueles sistemas do que nos reservatórios naturais. Assim, os resultados deste estudo revelaram que a água proveniente dos sistemas artificiais de climatização de ambientes interiores pode servir como reservatório de L. pneumophila e outros microrganismos, incluindo protozoários de vida livre. <![CDATA[<B>Production and infectivity of inoculum of arbuscular mycorrhizal fungi multiplied in a substrate supplemented with Tris-HCl buffer</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400030&lng=en&nrm=iso&tlng=en The effect of adding Tris-HCl buffer on production and infectivity of AMF inoculum was investigated. Sporulation of Glomus etunicatum, Acaulospora longula and Gigaspora albida was improved in solution with buffer. The infectivity of G. etunicatum increased after storage, what suggests that the inoculum of this isolate is benefited by storage.<hr/>O efeito da adição do tampão Tris-HCl na produção e infectividade de inóculo foi investigado. A esporulação de Glomus etunicatum, Acaulospora longula e Gigaspora albida foi incrementada utilizando solução com tampão. A infectividade de G. etunicatum aumentou após estocagem, sugerindo que o inóculo deste isolado é beneficiado pelo armazenamento. <![CDATA[<B><I>Hemibeltrania urbanodendrii </I>sp. nov. and <I>Pseudobeltrania angamosensis</B></I>: <B>new fungal records from the brazilian tropical seasonal semi-deciduous montane forest</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400031&lng=en&nrm=iso&tlng=en The new species Hemibeltrania urbanodendrii, associated to leaf-spots on Urbanodendron verrucosum (Lauracea) and Pseudobeltrania angamosensis, associated with leaf-spots on Virola gardneri (Myristicaceae), are recorded for the first time in Brazil. They represent additions to the mycobiota of the Tropical Seasonal Semi-Deciduous Montane Forest in Viçosa (Minas Gerais, Brazil), a highly threatened ecosystem.<hr/>Novas ocorrências de fungos relacionados a manchas foliares são apresentadas: Hemibeltrania urbanodendrii sp. nov., associado a Urbanodendron verrucosum (Lauracea) e Pseudobeltrania angamosensis, associado a Virola gardneri (Myristicaceae). Eles representam adições à micobiota da Floresta Tropical Estacional Semidecidual Montana de Viçosa (Minas Gerais), um ecossistema fortemente ameaçado. <![CDATA[<B>Rhizobacteria able to produce phytotoxic metabolites</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400032&lng=en&nrm=iso&tlng=en To contribute for the development of environmental friendly methods for weed control, a selection of rhizobacteria able to produce phytotoxic substances was carried out. Initially, 35 strains previously isolated from plants in the south of Minas Gerais State (Brazil) were grown in tryptic soy broth. After removal of bacterial cells, the resulting liquids were freeze-dried and extracted with methanol/ethyl acetate (1:1). The extracts were concentrated under vacuum and dissolved in water to be submitted to a lettuce (Lactuca sativa L.) seed assay. Metabolites produced by five strains reduced the number of normal seedlings to values statistically bellow the one observed for the negative control, being the most expressive results obtained with Bacillus cereus Frankland and Frankland, isolated from Ricinus communis L., which was able to cause rotted rootlets to 82.4% of seedlings. The bacterium metabolites also avoided germination of 52% Brachiaria decumbens Stapf seeds and the remaining 48% resulted in abnormal seedlings. Metabolites from B. cereus were submitted to a purification process guided by the lettuce seed assay. As a consequence, one substance causing rotted rootlets to all lettuce seedlings during the seed assay at 0.057 g/L was isolated and will be identified in future studies.<hr/>Com vistas a contribuir para o desenvolvimento de métodos não agressivos ao meio ambiente, para o controle de plantas invasoras, buscou-se selecionar rizobactérias produtoras de substâncias fitotóxicas. Inicialmente, 35 culturas previamente isoladas de plantas da região sul do Estado de Minas Gerais (Brasil) foram cultivadas em caldo soja tripticaseína. Após remoção das células bacterianas, os líquidos resultantes foram liofilizados e extraídos com metanol/acetato de etila (1:1). Os extratos foram concentrados sob vácuo e submetidos a testes com sementes de alface (Lactuca sativa L.). Os metabólitos produzidos por cinco isolados bacterianos reduziram o número de plântulas normais para valores estatisticamente inferiores aos observados para o controle negativo, sendo os mais expressivos resultados obtidos com Bacillus cereus Frankland and Frankland, isolado de Ricinus communis L., que causou necroses nas radículas de 82,4% das plântulas. Os metabólitos dessa bactéria também impediram a germinação de 52% das sementes de Brachiaria decumbens Stapf e fizeram com que as 48% restantes dessem origem a plântulas anormais. Os metabólitos de B. cereus foram submetidos a processos de purificação direcionados por testes com sementes de alface. Em decorrência, isolou-se uma substância, que será identificada em estudos futuros. Na concentração de 0,057 g/L, causou necrose nas radículas de todas as plântulas de alface provenientes do teste com sementes. <![CDATA[<B>Secretion of an alkaline protease from a salt- tolerant and alkaliphilic, <I>Streptomyces clavuligerus</I> strain Mit-1</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400033&lng=en&nrm=iso&tlng=en An alkaliphilic and salt- tolerant actinomycete, Streptomyces clavuligerus strain Mit-1, was isolated from Mithapur, the western coast of India. The organism was Gram-positive, having filamentous, long thread like structure. The sporulation started after two days of growth and the optimum level of alkaline protease (130 U/ml) was produced during the early stationary phase. The strain could grow and produce protease with 0-10% NaCl (w/v), the optimum being 5% NaCl (w/v). Growth and protease production was optimum at pH 9 with substantial decline at neutral pH. Sucrose and gelatin were the best carbon and nitrogen sources respectively, whereas gelatin broth was the preferred medium for protease production. Mit-1 produced substantial protease with various amino acids, when employed as the sole nitrogen sources. Crude substrates, such as molasses, whey and wheat flour had significant effect on enzyme production. The results are quite valuable, as only few actinomycetes, particularly salt-tolerant alkaliphilic ones, have so far been explored for their enzymatic potential and process optimization.<hr/>Uma cepa halotolerante e alcalifílica de Streptomyces clavuligerus, Mit-1, foi isolada em Mithapur, na costa oeste da Índia. Esse microrganismo é Gram positivo e apresenta estrutura filamentosa na forma de longas cordas. A esporulação iniciou após dois dias de cultivo e o nível ótimo de produção de protease alcalina (130 U/ml) foi atingido no início da fase estacionária de crescimento. A cepa foi capaz de multiplicar com 0-10% NaCl (w/v), com um ótimo de 5% NaCl (w/v). O ótimo de crescimento e produção de protease foi atingido em pH 9, apresentando declínio substancial em pH neutro. Sacarose e gelatina foram as melhores fones de carbono e nitrogênio, respectivamente, enquanto o caldo gelatina foi o melhor meio para produção de protease. A cepa Mit-1 produziu bastante protease quando vários aminoácidos foram empregados como única fonte de nitrogênio. Substratos crus, como melaço, soro de leite e farinha de trigo, tiveram um efeito significativo na produção da enzima. Os resultados são bastante interessantes, considerando que somente poucos actinomicetos, especialmente os halotolerantes, já foram explorados por seu potencial de produção de enzimas e otimização de processos. <![CDATA[<B>Production of moderately halotolerant, SDS stable alkaline protease from <I>Bacillus cereus</I> MTCC 6840 isolated from lake Nainital, Uttaranchal state, India</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400034&lng=en&nrm=iso&tlng=en A moderately cold active, extracellular alkaline protease producing bacterium was isolated from a fresh water lake. The isolate was found to be a gram-positive, rod shaped organism later identified as Bacillus cereus MTCC 6840. The bacterium produced the maximum amount of enzyme when allowed to grow for 24 h at temperature 25º and pH 9.0. Among a variety of substrates used, fructose as a carbon source and a combination of yeast extract and peptone as nitrogen source, supported the maximum protease production by the organism (120 U/ml). Fe++ and Co++ stimulated the enzyme activity whereas Ca++, Cu++, K+, Mg++ and Mn++ inhibited it to different extents. The protease was found to be highly stable in the presence of NaCl, SDS and acetone. Treatment with EDTA and PMSF resulted in the considerable loss of enzyme activity. The enzyme was found to be optimally active at pH 9.0 and temperature 20ºC.<hr/>Uma bactéria produtora de protease alcalina extracelular, moderadamente ativa no frio, foi isolada da água de um lago. Trata-se de um bacilo Gram positivo, identificado como Bacillus cereus MTCC6840. A maior produção da enzima foi em 24h a 25ºC e pH 9,0. A produção máxima de protease (120 U/ml) ocorreu quando foi utilizada frutose como fonte de carbono e uma combinação de extrato de levedura com peptona como fonte de nitrogênio. Fe++ e Co++ estimularam a atividade da enzima, enquanto Ca++, Cu++, K+,Mg++ e Mn++ tiveram efeito inibitório, com intensidades diferentes. A protease permaneceu estável na presença de NaCl, SDS e acetona. O tratamento com EDTA e PMSF causou uma significativa perda na atividade. A enzima apresentou atividade ótima em pH 9,0 e temperatura de 20ºC. <![CDATA[<B>Screening of <I>Metarhizium </I>spp. strains for anticancer indolizidine alkaloid production and its rapid detection by MS analysis</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400035&lng=en&nrm=iso&tlng=en Six fungi strains (M. anisopliae 3935, 4516, 4819, PL57, PL43 and M. flavoviride CG291) were studied regarding their ability to produce an anticancer indolizidine alkaloid. The culture process was carried out in Shaken flask at 26ºC and 200 rpm using three different culture medium containing oat meal extract supplemented with glucose and DL-lysine or Czapek culture medium. The mycelial extracts produced by Metarhizium spp. cultures were directly submitted to electrospray ionization mass spectrometry (ESI-MS) analysis and the highest alkaloid concentration (approximately, 6 mg.L-1) was reached when M. anisopliae 3935 was tested.<hr/>O presente trabalho teve como objetivo avaliar diferentes cepas dos fungos M. anisopliae e M. flavoviride ao respeito da sua capacidade de produzir um alcalóide anticancerígeno, por fermentação em frascos erlenmeyers usando três meios de cultura distintos. De seis cepas testadas, quatro foram capazes de produzir o composto de interesse, M. anisopliae 3935, PL57 e PL43 e M. flavoviride CG291, sendo que a maior concentração de alcalóide (aproximadamente, 6 mg.L-1) foi produzida pelo M. anisopliae 3935, contendo um meio constituído de extrato de farinha de aveia, glicose e DL-lisina a 26ºC e 200 rpm. <![CDATA[<B>Antimicrobial properties of sclerotiorin, isocHromophilone VI and pencolide, metabolites from a Brazilian cerrado isolate of <I>Penicillium sclerotiorum </I>van Beyma</B>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822007000400036&lng=en&nrm=iso&tlng=en As a part of a research program that aims to identify antibacterial and antifungal substances from fungus specimen of Brazilian's cerrado soil samples, Penicillium sclerotiorum was identified as a source of secondary metabolites possessing antibiotic activities. This microorganism was cultured in a liquid medium rich in glucose for fifteen days. The resulting ethyl acetate extract was chemically fractionated leading to the isolation of three metabolites pencolide, sclerotiorin and isochromophilone VI. The antimicrobial disc assay activity of these substances towards Candida albicans, Streptomyces pyogenes, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium and Escherichia coli was performed. Minimum inhibitory concentration (MIC) of the compounds was determined. All compounds showed distinguished antimicrobial activities.<hr/>Como parte de um programa de pesquisa visando a identificação de substâncias antibacterianas e antifúngicas a partir de espécies fúngicas isoladas de solo do cerrado, foi estudado o fungo Penicillium sclerotiorum van Beyma. Este microrganismo foi cultivado em meio líquido rico em glicose e, após extração com acetato de etila, este foi quimicamente fracionado levando ao isolamento de três metabólitos pencolídeo, esclerotiorina e isocromofilona VI. A atividade destas três substâncias, por meio de teste de difusão em discos, contra Candida albicans, Streptomyces pyogenes, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimurium e Escherichia coli foi avaliada. A concentração inibitória mínina das substâncias ativas foi determinada.