Scielo RSS <![CDATA[Brazilian Journal of Microbiology]]> http://www.scielo.br/rss.php?pid=1517-838220080002&lang=en vol. 39 num. 2 lang. en <![CDATA[SciELO Logo]]> http://www.scielo.br/img/en/fbpelogp.gif http://www.scielo.br <![CDATA[<b>Glycoconjugates and polysaccharides of fungal cell wall and activation of immune system</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200001&lng=en&nrm=iso&tlng=en The fate of organochlorine 14C-dicofol in activated sludge process was investigated. Results showed that the major part of radioactivity remained adsorbed on biological sludge. Consequently, its final disposal deserves special attention. The small amounts of dicofol, biotransformed or not, which remained in the treated effluent could contaminate receiving bodies.<hr/>Glicoproteínas, glicoesfingolipídios e polissacarídios, expostos nas camadas mais externas da parede celular dos fungos, estão envolvidos em diferentes tipos de interações com o ambiente extracelular. Essas moléculas são componentes essenciais desses organismos, contribuindo para a estrutura, integridade, crescimento celular, diferenciação e sinalização. Alguns são compostos imunologicamente ativos com potencial para regular a patogênese e a resposta imune do hospedeiro, Algumas dessas estruturas podem ser especificamente reconhecidas por anticorpos presentes no soro de pacientes, sugerindo uma possível utilização como ferramenta no diagnóstico das infecções fúngicas. <![CDATA[<b>Improved diagnosis of central nervous system tuberculosis by MPB64-Target PCR</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200002&lng=en&nrm=iso&tlng=en Central nervous system (CNS) tuberculosis is a serious clinical problem, the treatment of which is sometimes hampered by delayed diagnosis. Clearly, prompt laboratory diagnosis is of vital importance as the spectrum of disease is wideand abnormalities of the cerebrospinal fluid (CSF) are incredibly variable. Since delayed hypersensitivity is the underlying immune response, bacterial load is very low. The conventional bacteriological methods rarely detect Mycobacterium tuberculosis in CSF and are of limited use in diagnosis of tuberculous meningitis (TBM). This double blind study was, therefore, directed to the molecular analysis of CNS tuberculosis by an in-house-developed PCR targeted for amplification of a 240bp nucleotidesequence coding for MPB64 protein specific for Mycobacterium tuberculosis. Based on the clinical criteria, 47 patients with CNS tuberculosis and a control group of 10 patients having non-tubercular lesions of the CNS were included in the study. Analyses were done in three groups; one group consisting of 27 patients of TBM, a second group of 20 patients with intracranial tuberculomas and a third group of 10 patients having non-tubercular lesions of the CNS acted as control. There were no false positive results by PCR and the specificity worked out to be 100%. In the three study groups, routine CSF analysis (cells and chemistry), CSF for AFB smear and culture were negative in all cases. PCR was positive for 21/27 patients (77.7% sensitivity) of the first group of TBM patients, 6/20 patients (30% sensitivity) of the second group with intracranial tuberculomas were positive by PCR and none was PCR-positive (100% specificity) in the third group. Thus, PCR was found to be more sensitive than any other conventional method in the diagnosis of clinically suspected tubercular meningitis.<hr/>A tuberculose do sistema nervoso central (CNS) é um problema clínico sério, cujo tratamento é dificultado pelo diagnóstico tardio. O diagnóstico laboratorial rápido é de importância vital considerando que o espectro da doença é amplo e as anormalidades do liquor são muito variáveis. Considerando que a hipersensibilidade tardia é a resposta imune fundamental, a carga bacteriana é muito baixa. Os métodos bacteriológicos convencionais raramente detectam Mycobacterium tuberculosis no liquor e são de uso limitado para diagnóstico da meningite tuberculosa (TBM). O presente estudo duplo-cego objetivou a análise molecular da tuberculose do CNS através de um PCR desenvolvido in-house direcionado para a amplificação de uma seqüência de nucleotídios de 240pb que codificam a proteína MPB64 especifica de Mycobacterium tuberculosis. Baseando-se em critérios clínicos, selecionou-se 47 pacientes com tuberculose do CNS e um grupo controle de 10 pacientes com lesões não-tuberculosas no CNS. As análises foram divididas em três grupos: um grupo de 27 pacientes com TBM, um segundo grupo com 20 pacientes com tuberculomas intracraniais e um terceiro grupo de 10 pacientes com lesões não-tuberculosas no CNS (controles). O PCR não forneceu nenhum resultado falso-positivo, com 100% de especificidade. Em todos os três grupos de estudo, os resultados das análises de rotina do liquor por histologia, química e baciloscopia e também cultura foram negativos em todos os casos. No primeiro grupo de pacientes com TBM, PCR foi positivo em 21/27 pacientes (sensibilidade de 77,7%). No segundo grupo de pacientes com tuberculomas intracraniais, 6/20 foram positivos (sensibilidade de 30%). Nenhum dos pacientes do grupo controle foi positivo (100% de especificidade). Dessa forma, o PCR mostrou-se mais sensível que os métodos convencionais no diagnóstico de casos suspeitos de meningite tuberculosa. <![CDATA[<b>Lectin-binding properties of <i>Aeromonas caviae</i> strains</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200003&lng=en&nrm=iso&tlng=en The cell surface carbohydrates of four strains of Aeromonas caviae were analyzed by agglutination and lectin-binding assays employing twenty highly purified lectins encompassing all sugar specificities. With the exception of L-fucose and sialic acid, the sugar residues were detected in A. caviae strains. A marked difference, however, in the pattern of cell surface carbohydrates in different A. caviae isolates was observed. Specific receptors for Tritricum vulgaris (WGA), Lycopersicon esculentum (LEL) and Solanum tuberosum (STA) (D-GlcNAc-binding lectins) were found only in ATCC 15468 strain, whereas Euonymus europaeus (EEL, D-Gal-binding lectin) sites were present exclusively in AeQ32 strain, those for Helix pomatia (HPA, D-GalNAc-binding lectin) in AeC398 and AeV11 strains, and for Canavalia ensiformes (Con A, D-Man-binding lectin) in ATCC 15468, AeC398, AeQ32 and AeV11 strains, after bacterial growing at 37ºC. On the other hand, specific receptors for WGA and EEL were completely abrogated growing the bacteria at 22ºC. Binding studies with 125I- labeled lectins from WGA, EEL and Con A were performed. These assays essentially confirmed the selectivity, demonstrated in the agglutination assays of these lectins for the A. caviae strains.<hr/>Os carboidratos de superfície celular de quatro amostras de Aeromonas caviae foram analisados por aglutinação e ensaios de ligação de lectinas empregando vinte lectinas altamente purificadas com especificidade para açúcares. Com exceção da L-fucose e do ácido siálico, os resíduos de açúcar foram detectados em amostras de A. caviae. Entretanto, foi observada uma diferença marcante no padrão de carboidratos de superfície celular em diferentes amostras de A. caviae. Receptores específicos para Tritricum vulgaris (WGA), Lycopersicon esculentum (LEL) e Solanum tuberosum (STA), lectinas de ligação a D-GlcNAc, foram encontrados apenas na amostra ATCC 15468, enquanto sítios de Euonymus europaes (EEL), lectina de ligação a D-Gal, estavam presentes exclusivamente na amostra AeQ32, sítios de Helix pomatia (HPA), lectina de ligação a D-GalNac, nas amostras AeC398 e AeV11 e de Canavalia ensiformis (Com A), lectina de ligação a D-Man, nas amostras ATCC 15468, AeC398, AeQ32 e AeV11, após crescimento bacteriano a 37ºC. Por outro lado, receptores específicos para WGA e EEL foram completamente abolidos após o crescimento das bactérias a 22ºC. Estudos de ligação com lectinas WGA, EEL e Con A marcadas com 125I também foram realizados. Esses ensaios confirmaram a seletividade, demonstrada em ensaios de aglutinação dessas lectinas para as amostras de A. caviae. <![CDATA[<b>Membrane fluidity and lipid composition of fluconazole resistant and susceptible strains of <i>Candida albicans</i> isolated from diabetic patients</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200004&lng=en&nrm=iso&tlng=en Ten clinical isolates of Candida albicans, five strains belonging to each of fluconazole resistant and susceptible groups isolated from diabetic patients, were studied for the membrane fluidity and lipid composition. Compared to fluconazole susceptible strains, fluconazole resistant ones exhibited enhanced membrane fluidity as measured by fluorescence polarization technique. The increased membrane fluidity was reflected in the decreased p-values exhibited by the resistant strains. On the other hand, susceptible isolates contained higher amount of ergosterol, almost twice as compared to resistant isolates which might have contributed to their lower membrane fluidity. However, no significant alteration was observed in the phospholipid and fatty acid composition of these isolates. Labeling experiments with fluorescamine dye revealed that the percentage of the exposed aminophospholipid, phosphatidylethanolamine was highest in the resistant strains as compared to the susceptible strains, indicating a possible overexpression of CDR1 and CDR2 genes in resistant strains. The results presented here suggest that the changes in the ergosterol content and overexpression of ABC transporter genes CDR1 and CDR2 could contributeto fluconazole resistance in C. albicans isolated from diabetic patients.<hr/>Dez isolados clínicos, sendo cinco resistentes e cinco sensíveis ao fluconazol, obtidos de pacientes diabéticos, foram estudados quanto à fluidez e composição química da membrana. Quando comparados aos isolados sensíveis ao fluconazol, os isolados resistentes apresentaram fluidez de membrana aumentada, conforme mensurado pela técnica de polarização fluorescente. A fluidez de membrana aumentada refletiu-se pelos valores mais baixos de p. Por outro lado, os isolados sensíveis continham quantidades mais elevadas de ergosterol, quase o dobro dos isolados resistentes, o que pode ter contribuído para a fluidez de membrana mais baixa. Entretanto, não se observou alteração significativa na composição fosfolipídica e de ácidos graxos nesses isolados. Experimentos de marcação com corante fluorescamina indicaram que a porcentagem de aminofosfolípides e fosfatidiletanolamina expostos foi mais elevada nos isolados resistentes do que nos sensíveis, indicando uma possível superexpressão dos genes CDR1 e CDR2 nos isolados resistentes. Os resultados aqui apresentados sugerem que alterações no teor de ergosterol e superexpressão dos genes ABC transportadores CDR1 e CDR2 podem contribuir na resistência ao fluconazol em isolados de C. albicans de pacientes diabéticos. <![CDATA[<b>Periodontal profile and presence of periodontal pathogens in young African-Americans from Salvador, BA, Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200005&lng=en&nrm=iso&tlng=en This cross-sectional study evaluated the periodontal status and the presence of periodontopathogens in 132 young, black ethnic subjects who live in Salvador/Bahia-Brazil and have never smoked. Periodontal Probing Depth (PPD), Clinical Attachment Level (CAL), Plaque Index (PI) and Gingival Index (GI) were measured and analyzed by ANOVA and Wilcoxon tests (p<0.05) according to gender and age. The presence of A.actinomycetemcomitans, P.gingivalis, E.corrodens and F.nucleatum was determined by PCR and was analyzed by ANOVA, Wilcoxon, Student-t tests (p<0.05). Mean values of PPD and CAL were 2.18 and 1.0mm, respectively. Clinical parameters did not show differences between subjects of varying gender and age. The microbial prevalence was observed to be 95.45% for E.corrodens followed by F.nucleatum with 68.18%, A.actinomycetemcomitans with45.45% and P.gingivalis with 40.9%. An association between the presence of pathogens and gender and age was not observed (p<0.05). PPD, CAL and PI were not associated with P.gingivalis; however, GI appeared in higher frequencies among subjects without P.gingivalis. In this young, black ethnic, Brazilian population, a high percentage (96.96%) of subjects harbored at least one selected periodontal pathogen, but most subjects showed a healthy periodontal status. Further investigations are required to evaluate the actual influence of the presence of these bacterial species.<hr/>O objetivo do presente estudo foi avaliar a condição periodontal e presença de periodonto-patógenos em uma amostra de 132 jovens não fumantes, afro-descendentes, residentes em Salvador/Bahia-Brasil. Profundidade de Sondagem (PS), Nível Clínico de Inserção (NCI), Índice de Placa (IP) e Índice Gengival (IG) foram mensurados e analisados pelos testes ANOVA e Wilcoxon (p<0,05) em função do gênero e idade dos indivíduos. A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis, E. corrodens e F. nucleatum foram identificados por PCR e analisados por ANOVA, Wilcoxon e t de Student (p<0,05). Foram observados valores médios de PS e NCI de 2,18 e 1,0mm respectivamente. Os parâmetros clínicos avaliados não sofreram influência dos fatores gênero e idade (p<0,05). E. corrodens foi a bactéria mais prevalente (95.45%), seguido de F. nucleatum (68.18%), A. actinomycetemcomitans (45.45%) e P. gingivalis (40.9%). Não foi observada associação entre os patógenos periodontais pesquisados com o gênero e idade dos indivíduos (p<0,05). PS, NCI e IP não estiveram associados a presença de P. gingivalis, todavia para o parâmetro IG este mostrou alta freqüência entre os indivíduos que não alocaram P. gingivalis. Nessa população jovem de brasileiros afro-descendentes um percentual (96,96%) elevado de indivíduos apresentou pelo menos um patógeno periodontal, mas mostraram-se clinicamente saudáveis. Outras investigações são necessaries para avaliar a real influencia da presença dessas espécies bacterianas. <![CDATA[<b><i>In vitro</i></b><b> synergistic activity of antibiotic combinations against <i>Brucella melitensis</i> using E-test methodology</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200006&lng=en&nrm=iso&tlng=en The treatment of brucellosis is still problematic, because of high rates of treatment failure or relapses. As the microorganism is an intracellular pathogen, treatment requires combined regimens. However, limited existing data on in vitro combinations are avaliable for Brucellae. The aim of this study was to investigate the in vitro efficacy of various traditional and new antibiotic combinations against 16 Brucella melitensis strains. The combination effect of antimicrobial agents was evaluated by E-test synergy method to obtain a fractional inhibitory concentration (FIC) index. Co-Trimoxazole (SXT) and moxifloxocin (MXF) exhibited the lowest MIC, while Rifampin (RIF) had the highest MIC in the study. Combinations with RIF showed the best synergistic activity (100% of RIF-tetracycline (TET), and 87.5% of RIF-SXT). Synergistic activity was also detected at seven (43.7%) of ciprofloxocin (CIP)-SXT, four (25%) of TET-MXF, and two (12.5%) of TET-SXT combinations. The combinations that demonstrated additivity were TET-SXT, CIP-SXT and TET-MXF. Antagonism was observed only with the TET-Streptomycin (STR) combination in three strains (18.8%). Further work including randomized controlled clinical trials is required to fully evaluate the usefulness of these data.<hr/>O tratamento da brucelose é problemático devido à alta freqüência de tratamentos mal sucedidos e recidivas. Por tratar-se de um patógeno intracelular, o tratamento requer procedimentos combinados. Entretanto, existem poucos dados sobre combinações in vitro para Brucellae. O objetivo deste trabalho foi investigar a eficiência de vários tratamentos tradicionais e novas combinações de antibióticos contra 16 isolados de Brucella melitensis. O efeito combinado foi avaliado através do método do E-test para obtenção do FIC (índice de concentração inibitória fracional). Co-trimoxazol (SXT) e moxifloxocina (MXF) apresentaram o MIC mais baixo, enquanto rifampicina (RIF) apresentou o MIC mais alto. Combinações com RIF mostraram a melhor atividade sinergística (100% para RIF-tetraciclina e 87,5% para RIF-SXT). Atividade sinergística foi também detectada para sete (43,7%) combinações de ciprofloxacina (CIP-STX), quatro (25%) de TET-MXF e duas (12,5%) de TET-SXT. As combinações que apresentaram efeito aditivo foram TET-SXT, CIP-SXT e TET-MXF. Antagonismo foi observado somente para a combinação TET-estreptomicina (STR) em três isolados (18,8%). Mais pesquisas utilizando ensaios clínicos randomizados controlados são necessárias para avaliar a utilidade desses dados. <![CDATA[<b>Lectin staining patterns in human gastric mucosae with and without exposure to <i>Helicobacter pylori</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200007&lng=en&nrm=iso&tlng=en The aim of the present study was to evaluate qualitative changes in the glycoconjugate expression in human gastric tissue of positive and negative patients for Helicobacter pylori, through lectins: Wheat Germ Agglutinin (WGA) and Concanavalin A (Con A). The lectins recognized differently the glycoconjugates in the superficial mucous layer at the gastric tissues. The results suggest a significant change in the carbohydrate moieties present on the surface of the gastric cells during infection.<hr/>O objetivo do presente estudo foi avaliar as mudanças qualitativas na expressão de glicoconjugados em tecidos gástrico humano de pacientes infectados ou não pelo Helicobacter pylori, através das lectinas: Wheat germ agglutinin (WGA) e Concanavalina A (Con A). As lectinas reconheceram diferentemente os glicoconjugados nas camadas mucosas superficiais do tecido gástrico. Os resultados sugerem mudanças significantes nas porções de carboidratos presentes nas células gástricas durante a infecção. <![CDATA[<b>Comparison of three decontamination methods for <i>Mycobacterium bovis</i> isolation</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200008&lng=en&nrm=iso&tlng=en Sixty samples of tissue fragments with lesions suggestive of tuberculosis from bovine abattoirs, kept in saturated solution of sodium borate, were subjected to four treatments: 4% NaOH (Petroff Method), 12 % H2SO4 and 1.5% HPC (1-Hexadecylpyridinium Chloride) decontamination, and physiological saline solution (control). The HPC method showed the lowest contamination rate (3%) when compared to control (88%, p<0.001), NaOH (33%, p<0.001) and H2SO4 (21.7%, p<0.002). Regarding the isolation success, the HPC method was better (40%) than the control (3%, p<0.001), NaOH (13%, p=0.001) and H2SO4 (1.7%, p<0.001) methods. These results indicate that HPC is an alternative to the Petroff method.<hr/>Sessenta amostras de fragmentos de tecidos com lesões sugestivas de tuberculose provenientes de abatedouros bovinos, conservadas em solução saturada de borato de sódio, foram submetidas a quatro tratamentos: descontaminação através dos métodos NaOH 4% (Método Petroff), H2SO4 12% e HPC (Cloreto de hexadecilpiridínio) 1,5%, e solução salina (controle). O método HPC apresentou a menor proporção de contaminação (3%), em relação ao controle (88%, p<0,001), NaOH (33%, p<0,001) e H2SO4 (21,7%, p=0,002). Em relação ao sucesso no isolamento, o método HPC apresentou o melhor resultado (40%), em relação ao controle (3%, p<0,001), NaOH (13%, p=0,001) e H2SO4 (1,7%, p<0,001). Os resultados indicam que o HPC é uma alternativa à utilização do método Petroff. <![CDATA[<b>Antibiotic susceptibility patterns and prevalence of group B <i>Streptococcus </i>isolated from pregnant women in Misiones, Argentina</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200009&lng=en&nrm=iso&tlng=en This study was performed to determine the susceptibility patterns and the colonization rate of Group B Streptococcus (GBS) in a population of pregnant women. From January 2004 to December 2006, vaginal-rectal swabs were obtained from 1105 women attending Dr. Ramón Madariaga Hospital, in Posadas, Misiones, Argentina. The carriage rate of GBS among pregnant women was 7.6%. A total of 62 GBS strains were randomly selected for in vitro susceptibility testing to penicillin G, ampicillin, tetracycline, levofloxacin, gatifloxacin, ciprofloxacin, quinupristin-dalfopristin, linezolid, vancomycin, rifampicin, trimethoprim-sulfametoxazol, nitrofurantoin, gentamicin, clindamycin and erythromycin, and determination of resistance phenotypes. No resistance to penicillin, ampicillin, quinupristin-dalfopristin, linezolid, and vancomycin was found. Of the isolates examined 96.8%, 98.3%, 46.8%, and 29.0% were susceptible to rifampicin, nitrofurantoin, trimethoprim-sulfametoxazol and tetracycline, respectively. Rank order of susceptibility for the quinolones was: gatifloxacin (98.4%) > levofloxacin (93.5%) > ciprofloxacin (64.5%). The rate of resistance to erythromycin (9.7%) was higher than that of other reports from Argentina. High-level resistance to gentamicin was not detected in any of the isolates. Based on our finding of 50% of GBS isolates with MIC to gentamicin equal o lower than 8 µg/ml, a concentration used in one of the selective media recommended for GBS isolation, we suggested, at least in our population, the use of nalidixic acid and colistin in selective media with the aim to improve the sensitivity of screening cultures for GBS carriage in women.<hr/>Esse estudo objetivou determinar os padrões de sensibilidade a antibióticos e as taxas de colonização de Streptococcus do grupo B (GBS) em uma população de mulheres grávidas. Entre janeiro de 2004 e dezembro de 2006, foram obtidos swabs vaginais-retais de 1105 mulheres no Hospital Dr. Ramon Madariaga, em Posadas, Missiones, Argentina. A positividade para GBS nas mulheres grávidas foi 7,6%. Um total de 62 cepas de GBS foi selecionado ao acaso para testes in vitro de sensibilidade a penicilina G, ampicilina, tetraciclina, levofloxacina, gatifloxacina, ciprofloxacina, quinupristina-dalfopristina, linezolida, vancomicina, rifampicina, trimetoprim-sulfametoxazol, nitrofurantoína, gentamicina, clindamicina e eritromicina, e determinação dos fenótipos de resistência. Não foi encontrada resistência à penicilina, ampicilina, quinupristina-dalfopristina, linezolida e vancomicina. Entre as cepas, 96,8%, 98,3%, 46,8% e 29,0% foram sensíveis à rifampicina, nitrofurantoína, trimetoprim-sulfametoxazol e tetraciclina, respectivamente. Para as quinolonas, a ordem de sensibilidade foi: gatifloxacina (98,4%) > levofloxacina (93,8%) > ciprofloxacina (64,5%). A taxa de resistência à eritromicina (9,7%) foi superior a de outros relatos na Argentina. Nenhuma das cepas apresentou alto nível de resistência à gentamicina. Devido a 50% das cepas de GBS terem apresentado MIC para gentamicina igual ou inferior a 8 mg/ml, correspondente à concentração usada em um dos meios seletivos recomendados para GBS, sugeriu-se ao menos em nossa população, o emprego de ácido nalidíxico e colistina em meios seletivos para melhorar a sensibilidade da triagem de culturas para GBS em mulheres grávidas. <![CDATA[<b>Serological markers and risk factors related to hepatitis B virus in dentists in the Central West region of Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200010&lng=en&nrm=iso&tlng=en The hepatitis B virus (HBV) has been considered the major occupational risk agent for dentists. The Central West region of Brazil is considered an intermediate endemic pattern area, but currently there is no information about the HBV prevalence in dentists of Goiânia, Goiás. This study aimed at the detection of the HBV infection rate and risk factors for dentists of Goiânia and the comparison of the obtained data with the general population and other groups. A randomized sample of 680 professionals participated in this study. All dentists gave written consent for the procedure and filled out a questionnaire about risk factors. The HBV serological markers were analyzed using ELISA test and the presence of anti-HBc was observed in 41 (6.0%) of the dentists. None of them was HBsAg positive. Significant relationships with HBV positivity were observed with gender, the time working as a dentist and the use of incomplete personal protective equipment (PPE). The HBV prevalence found in this group of dentists was lower than the endemic pattern of the general population, other health care workers of the region and the dentists from other regions in Brazil. These results may indicate a positive impact of vaccination considering the high adherence of the dentists to the immunization program (98.4%). Finally, the use of complete PPE by the majority as well as other standard precautions recommended for health care workers could be responsible for the low HBV seroprevalence.<hr/>O vírus da hepatite B (VHB) tem sido considerado o agente de maior risco ocupacional para o cirurgião-dentista (CD). A região Centro Oeste do Brasil é considerada de padrão endêmico intermediário para a infecção pelo vírus e não há informações sobre a prevalência do VHB em CD da cidade de Goiânia, Goiás. Este estudo objetivou determinar a soroprevalência da infecção pelo VHB e fatores de risco relacionados em CD de Goiânia comparando com dados da população geral e outros grupos populacionais. Uma amostra randomizada de 680 profissionais participou deste estudo. Após consentimento escrito, todos os CD responderam um questionário com informações sobre fatores de risco. Os marcadores sorológicos da infecção para o VHB foram analisados por meio do teste ELISA tendo sido observado o marcador de infecção viral, anti-HBc, em 41 (6.0%) dentistas, nenhum deles positivo para o HBsAg. Associações significantes com a positividade ao VHB foram observadas em relação a gênero, ao tempo de trabalho e ao uso incompleto de equipamentos de proteção individual (EPI). A soroprevalência ao VHB observada em CD foi inferior ao da população geral, para outros grupos de profissionais de saúde na mesma região e para CD de outras regiões do Brasil. Os resultados deste estudo sugerem impacto positivo da vacinação, considerando a alta adesão pelos CD ao programa de imunização (98,4%). Finalmente, a adoção de todos os EPI pela maioria dos CD assim como às outras medidas de precauções padrão recomendadas para profissionais de saúde pode justificar a menor soroprevalência observada. <![CDATA[<b>Occurrence of yeasts, enterococci and other enteric bacteria in subgingival biofilm of HIV-positive patients with chronic gingivitis and necrotizing periodontitis</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200011&lng=en&nrm=iso&tlng=en The purpose of this study was to determine the prevalence of enteric bacteria and yeasts in biofilm of 80 HIV-positive patients with plaque-associated gingivitis or necrotizing periodontitis. Patients were subjected to extra, intra oral and radiographic examinations. The oral hygiene, bleeding on probing, gingival conditions, and attachment loss were evaluated. Clinical specimens were collected from gingival crevices or periodontal pockets, transferred to VMGA III, diluted and transferred to Sabouraud Dextrose agar with 100 µg/ml of chloramphenicol, peptone water, EVA broth, EMB agar, SS agar, Bile esculin agar and Brilliant green agar. Isolation of yeasts was carried out at room temperature, for 3-7 days; and for the isolation of enteric microorganisms plates were incubated at 37ºC, for 24-48 h. The yeasts identification was performed according to the carbon and nitrogen assimilation, fermentation of carbohydrates and germ tube formation. Bacteria were identified according to their colonial and cellular morphologies and biochemical tests. Yeasts were identified as Candida albicans and its occurrence was more common in patients with CD4+ below 200/mm³ and was affected by the extension of periodontal involvement (P = 0.0345). Enteric bacteria recovered from clinical specimens were identified as Enterobacter sakazakii, Enterobacter cloacae, Serratia liquefaciens, Klebsiella oxytoca and Enterococcus sp. Enterobacteriaceae and enterococci were detected in 32.5% of clinical samples from patients with necrotizing periodontitis. In conclusion, non-oral pathogenic bacteria and C. albicans were more prevalent in periodontal sites of HIV-positive patients with necrotizing periodontitis and chronic gingivitis.<hr/>O objetivo desse estudo foi avaliar a ocorrência de bactérias entéricas e leveduras no biofilme subgengival de pacientes HIV-positivos com gengivite crônica ou periodontite necrosante. Os pacientes foram submetidos a exame clínico e radiográfico e de higiene bucal, sangramento à sondagem, condições gengivais e a perda de inserção. Os espécimes clínicos de sulcos gengivais ou bolsas periodontais foram inoculados em ágar Sabouraud dextrose com 100 mg/ml de cloranfenicol, água peptonada, caldo EVA, ágar EMB, ágar SS, ágar Bile esculina e ágar verde brilhante. O cultivo de leveduras foi realizado à temperatura ambiente, de 3-7 dias; das enterobactérias a 37ºC de 24-48 h. A identificação das leveduras foi realizada pela assimilação de carbono e nitrogênio, fermentação de açucares e formação de tubo germinativo. As bactérias de acordo com a morfologia celular e colonial e testes bioquímicos. Foram identificadas Candida albicans e sua prevalência foi maior em pacientes com contagens de CD4+ < 200/mm³, e sua ocorrência foi afetada pela extensão da destruição periodontal (P = 0,0345). Enterobacteriaceae e enterococos foram detectados em 32,5% dos pacientes com periodontite necrosante. As enterobactérias foram Enterobacter sakazakii, E. cloacae, Serratia liquefaciens, Klebsiella oxytoca e Enterococcus sp. Concluiu-se que bactérias patogênicas exógenas à cavidade bucal e C. albicans podem ser detectadas no biofilme subgengival de pacientes HIV-positivos com periodontite necrosante e gengivite. <![CDATA[<b>Comparison between qualitative and semiquantitative catheter-tip cultures</b>: <b>laboratory diagnosis of catheter-related infection in newborns</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200012&lng=en&nrm=iso&tlng=en This prospective study evaluated semiquantitative and qualitative catheter-culture methods for diagnosis of catheter-related infection (CRI) in newborns. Catheter tips from newborns admitted to the Neonatal Unit of the University Hospital of the Botucatu Medical School, UNESP were included in the study. Catheter cultures were performed with both semiquantitative and qualitative techniques. For CRI diagnosis, microorganisms isolated from catheter cultures and from peripheral blood cultures were identified and submitted to agent susceptibility test. The gold standard was the certain CRI diagnosis when same microorganism (specie and profile of susceptibility to agents) was isolated from both catheter tips and peripheral blood culture. A total of 85 catheters from 63 newborns were included in the study. The semiquantitative culture method, despite presenting lower sensitivity (90%), showed higher specificity (71%) when compared to 100% of sensitivity and 60% of specificity in the qualitative method. The identification of the microorganisms obtained from the catheter cultures showed a prevalence of coagulase-negative staphylococci(CNS) species. The specie Staphylococcus epidermidis (77.5%) was the prevalent in the catheters with positive semiquantitative cultures. Among 11 episodes with CRI diagnosis, 8 (72.7%) were associated with CNS species, of which 6 were S. epidermidis. Two episodes of CRI by S. aureus and one by Candida parapsilosis were also detected. The semiquantitative catheter-culture method showed advantages for CRI diagnosis in newborns when compared to the conservative qualitative method.<hr/>Este estudo prospectivo avaliou os métodos semiquantitativo e qualitativo de cultura de cateter para o diagnóstico de infecção relacionada a cateter (IRC) em recém-nascidos (RN). Foram incluídas pontas de cateteres provenientes de recém-nascidos internados na Unidade Neonatal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP. Foram utilizadas as técnicas semiquantitativa e qualitativa de cultura de cateter. Para o diagnóstico de IRC, os microrganismos isolados das culturas de cateteres e de hemoculturas periféricas foram identificados e submetidos ao teste de sensibilidade a antimicrobianos. O padrão ouro correspondeu ao diagnóstico de certeza de IRC, com o isolamento do mesmo microrganismo (espécie e perfil de sensibilidade a antimicrobianos) isolado em hemocultura periférica. Foram estudados 85 cateteres provenientes de 63 RN. A cultura semiquantitativa, embora tenha apresentado menor sensibilidade (90%), apresentou uma maior especificidade (71%) em comparação à sensibilidade de 100% e especificidade de 60% encontradas na cultura qualitativa. Através da identificação dos microrganismos obtidos nas culturas de cateteres, observou-se uma predominância de espécies de Estafilococos coagulase-negativa (ECN). A espécie Staphylococcus epidermidis foi a prevalente (77,5%) nos cateteres com culturas semiquantitativas positivas. Dos 11 episódios de IRC diagnosticados, 8 (72,7%) foram associados a espécies de ECN, dos quais 6 eram da espécie S. epidermidis. Também foram detectados dois casos de IRC por S. aureus e um caso por Candida parapsilosis. O método de cultura semiquantitativo cateter apresentou vantagens para o diagnóstico de IRC em RN quando comparado com o método qualitativo tradicional. <![CDATA[<b>Identification of non-tuberculous mycobacteria from the Central Public Health Laboratory from Mato Grosso do Sul and analysis of clinical relevance</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200013&lng=en&nrm=iso&tlng=en Non-tuberculous mycobacteria isolated at the Central Public Health Laboratory from Mato Grosso do Sul in 2003 and 2004 were identified by conventional phenotypic methods (TI) and by PCR-Restriction Enzyme Analysis (PRA) using the hsp65 gene as target (PRA-hsp65). With 15 of the 32 analysed isolates, results of both methods were concordant, being 8 Mycobacterium avium, 3 M. fortutium, 1 M. kansasii, 1 M. flavescens, 1 M. peregrinum and 1 Nocardia brasiliensis. TI of 12 isolates was inconclusive. Novel PRA-hsp65 patterns were observed with 11 isolates. Medical data were evaluated for inference of clinical relevance of these isolates.<hr/>Micobactérias não-tuberculosas isoladas no Laboratório Central de Saúde Pública de Mato Grosso do Sul em 2003 e 2004 foram identificadas usando métodos fenotípicos convencionais (TI) e PCR-Restriction Enzyme Analysis (PRA) tendo o gene hsp65 como alvo (PRA-hsp65). Em 15 dos 32 isolados analisados os resultados obtidos com ambos métodos foram concordantes, sendo 8 Mycobacterium avium, 3 M. fortutium, 1 M. kansasii, 1 M. flavescens, 1 M. peregrinum e 1 Nocardia brasiliensis. TI de 12 isolados não foi conclusiva. Perfis não descritos de PRA-hsp65 foram observados com 11 isolados. Dados dos prontuários médicos foram avaliados para inferir a relevância clínica dos isolados. <![CDATA[<b>Virulence factors in vancomycin-resistant and vancomycin - susceptible <i>Enterococcus faecalis</i> from Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200014&lng=en&nrm=iso&tlng=en Enterococci are members of commensal flora of animals and insects, but are also important opportunistic pathogens. Our objective was to observe if there was any difference of virulence in several groups of E. faecalis, mainly between vancomycin-resistant E. faecalis (VREFS) of colonization and infection. VREFS and vancomycin-sensitive E. faecalis from Brazil were screened for the presence of virulence factor genes. Phenotypic assays were used to assess in vitro expression, to understand the pathogenic potential of these isolates and to determine whether a correlation exists between virulence and antibiotic resistance. Different virulence profiles were found suggesting that the disseminating clone may have generated several variations. However, our study showed that one constellation of traits appeared most commonly: gelatinase, aggregation substance and esp (GEA). These factors are important because they have been implicated in cell aggregation and biofilm formation. Biofilm formation may promote the conjugation of plasmids harboring resistance and virulence genes, enhancing the probability of entry of new resistance genes into species. Curiously, the profile GEA was not exclusive to VREFS, it was the second most observed in VSEFS isolates from colonization and infection in hospitalized patients and also from rectal swabs of healthy volunteers. Such strains appear to represent the entry gateway to new resistance genes into E. faecalis and may contribute to the spreading of E. faecalis mainly in hospitals.<hr/>Enterococci são membros da microbiota comensal de animais e insetos, mas também são importantes patógenos oportunistas. Nosso objetivo foi observar se há qualquer diferença na virulência nos diversos grupos de Enterococcus faecalis, principalmente nos E. faecalis resistente à vancomicina (VREFS) isolados de colonização e infecção. VREFS e E. faecalis sensíveis à vancomicina (VSEFS) do Brasil foram pesquisadas quanto a presença de fatores de virulência. Ensaios fenotípicos foram usados para obter a expressão in vivo, entender o potencial patogênico destas amostras e determinar se existe correlação entre virulência e resistência a antibióticos. Diferentes perfis de virulência foram encontrados sugerindo que o clone que está se disseminado pode ter gerado diversas variações. No entanto, nosso estudo mostrou que um conjunto de fatores parece ser mais comum entre as amostras: gelatinase, substância de agregação e esp (GEA). Estes fatores tem sido correlacionados com a agregação de células e formação de biofilmes. A formação de biofilme pode promover a conjugação de plasmídeos contendo genes de resistência entre as espécies. Curiosamente, o perfil GAE não foi exclusivo para VREFS, foi o segundo mais observado em amostras VSEFS provenientes de colonização e infecção em pacientes hospitalizados e também de swabs retais de voluntários saudáveis. Tais linhagens pacerem representar a "porta de entrada" para novos genes de resistência em E. faecalis e podem contribuir para a disseminação de E. faecalis principalmente nos hospitais. <![CDATA[<b><i>Candida Glabrata </i></b><b>Esophagitis</b>: <b>new case reports and management</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200015&lng=en&nrm=iso&tlng=en Candida esophagitis (CE) is a common opportunistic infection in the immunocompromised host. C. glabrata is rarely cited as agent of CE and has been underestimated due to lack of proper identification. In this study, two cases of C. glabrata esophagitis in AIDS and chagasic patients are reported. Diagnosis of Candida species should be considered an important key for the ideal choice of antifungal therapy against this mycosis.<hr/>Esofagitepor Candida (CE) é uma infecção oportunista comum em hospedeiros imunocomprometidos. C. glabrata é raramente citada como agente de CE e tem sido subestimada devido à falta de uma identificação apropriada. Este estudo relata dois casos de esofagitepor C. glabrata em pacientes com AIDS e doença de Chagas. O diagnóstico das espécies de Candida deveria ser considerado uma importante chave para a escolha da terapia antifúngica ideal contra esta micose. <![CDATA[<b>Occurrence of filamentous fungi in <i>Simulium goeldii</i> Cerqueira & Nunes de Mello (diptera: simuliidae) larvae in central Amazonia, Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200016&lng=en&nrm=iso&tlng=en The family Simuliidae is the host of simbiontes fungi that inhabit the digestive tracts of arthropods. This paper reports the presence of fungi in Simulium goeldii Cerqueira & Nunes de Mello larvae in Amazonia. We observed that the larvae are a good component of aquatic systems to isolate filamentous fungi.<hr/>A família Simuliidae é hospedeira de fungos simbiontes que habitam o trato digestivo de artrópodos. Este estudo reporta a presença de fungos em larvas de Simulium goeldii Cerqueira & Nunes de Mello da Amazônia. Foi observado que as larvas são bons componentes do sistema aquático para isolar fungos filamentosos. <![CDATA[<b>Mechanisms and significance of fungicide resistance</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200017&lng=en&nrm=iso&tlng=en In this review article, we show that occurrence of fungicide resistance is one of the most important issues in modern agriculture. Fungicide resistance may be due to mutations of genes encoding fungicide targets (qualitative fungicide resistance) or to different mechanisms that are induced by sub-lethal fungicide stress. These mechanisms result in different and varying levels of resistance (quantitative fungicide resistance). We discuss whether or not extensive use of fungicides in agricultural environments is related to the occurrence of fungicide resistance in clinical environments. Furthermore, we provide recommendations of how development of fungicide resistant pathogen populations may be prevented or delayed.<hr/>A ocorrência de resistência a fungicidas é uma das mais importantes conseqüências da agricultura moderna. Este fato pode ser resultado de mutações em genes codificadores de resistência a fungicidas (resistência quantitativa) ou a diferentes mecanismos que são induzidos por stresse devido a doses subletais dos produtos utilizados. Estes mecanismos produzem diferentes e variados níveis de resistência (resistência quantitativa). Também é discutido se o uso extensivo de fungicidas em ambientes agricultáveis é relacionado ou não com a ocorrência de resistência em ambientes clínicos. Além disso, também são fornecidas recomendações de como prevenir ou mesmo retardar o desenvolvimento de resistência a fungicidas em patógenos. <![CDATA[<b>Greenhouse evaluation of <i>Bacillus subtilis</i> AP-01 and <i>Trichoderma harzianum</i> AP-001 in controlling tobacco diseases</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200018&lng=en&nrm=iso&tlng=en Two biological control agents, Bacillus subtilis AP-01 (LarminarTM) and Trichoderma harzianum AP-001 (TrisanTM) alone or/in combination were investigated in controlling three tobacco diseases, including bacterial wilt (Ralstonia solanacearum), damping-off (Pythium aphanidermatum), and frogeye leaf spot (Cercospora nicotiana). Tests were performed in greenhouse by soil sterilization prior to inoculation of the pathogens. Bacterial-wilt and damping off pathogens were drenched first and followed with the biological control agents and for comparison purposes, two chemical fungicides. But for frogeye leaf spot, which is an airborne fungus, a spraying procedure for every treatment including a chemical fungicide was applied instead of drenching. Results showed that neither B. subtilis AP-01 nor T. harzianum AP-001 alone could control the bacterial wilt, but when combined, their controlling capabilities were as effective as a chemical treatment. These results were also similar for damping-off disease when used in combination. In addition, the combined B. subtilis AP-01 and T. harzianum AP-001 resulted in a good frogeye leaf spot control, which was not significantly different from the chemical treatment.<hr/>Dois agentes de controle biológico, Bacillus subtilis AP-01 (Larminar®) e Trichoderma harzianum AP-001 (Trisan®) foram avaliados separadamente ou em combinação quanto à capacidade de controlar três doenças do tabaco: murcha bacteriana (bacterial wilt, Ralstonia solanacearum), tombamento de mudas (damping-off, Pythium aphanidermatum), e mancha olho-de-rã (frogeye leaf spot, Cercospora nicotiana). Os testes foram realizados em estufa, esterilizando-se o solo antes da inoculação dos patógenos. Os patógenos causadores da murcha bacteriana e tombamento de mudas foram inicialmente encharcados e acompanhados com os agentes de controle biológico e, para comparação, com um fungicida químico. Para a mancha olho-de-rã, causada por um fungo anemófilo, utilizou-se um processo de spray ao invés do encharcamento. Os resultados indicaram que nenhum dos dois agentes de controle biológico, aplicado isoladamente, foi capaz de controlar a murcha bacteriana, mas quando em combinação a capacidade de controle foi similar ao do tratamento químico. Resultados semelhantes foram obtidos para o tombamento de mudas. Além disso, a combinação de Bacillus subtilis AP-01 e Trichoderma harzianum AP-001 resultou em um controle muito eficiente da mancha olho-de-rã, que não diferiu significativamente daquele obtido com o tratamento químico. <![CDATA[<b>Cuticle-degrading proteases produced by the entomopathogenic fungus <i>Beauveria bassiana </i>in the presence ofcoffee berry borer cuticle</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200019&lng=en&nrm=iso&tlng=en A Brazilian isolate of Beauveria bassiana (CG425) that shows high virulence against the coffee berry borer (CBB) was examined for the production of subtilisin-like (Pr1) and trypsin-like (Pr2) cuticle-degrading proteases. Fungal growth was either in nitrate-medium or in CBB cuticle-containing medium under both buffered and unbuffered conditions. In unbuffered medium supplemented with cuticle, the pH of cultures dropped and Pr1 and Pr2 activities were detected in high amounts only at a pH of 5.5 or higher. In buffered cultures, Pr1 and Pr2 activities were higher in medium supplemented with cuticle compared to activities with nitrate-medium. The Pr1 and Pr2 activities detected were mostly in the culture supernatant. These data suggest that Pr1 and Pr2 proteases produced by strain CG425 are induced by components of CBB cuticle, and that the culture pH influences the expression of these proteases, indicating the occurrence of an efficient mechanism of protein secretion in this fungus. The results obtained in this study extend the knowledge about protease production in B. bassiana CG425, opening new avenues for studying the role of secreted proteases in virulence against the coffee berry borer during the infection process.<hr/>O isolado brasileiro de Beauveria bassiana (CG425) que apresenta alta virulência contra a broca do café (CBB) foi analisado quanto à produção de proteases degradadoras de cutícula, tipo-subtilisina (Pr1) e tipo-tripsina (Pr2). O crescimento fúngico foi realizado em meio contendo nitrato e em meio contendo cutícula da broca em condições de pH tamponado e não tamponado. Em meio não tamponado, suplementado com cutícula, o pH da cultura caiu e as atividades de Pr1 e Pr2 foram detectadas somente em valores de pH igual ou superior a 5,5. Em culturas tamponadas, as atividades Pr1 e Pr2 foram superiores em meio suplementado com cutícula, comparativamente as atividades em meio contendo nitrato. As atividades Pr1 e Pr2 ocorreram predominantemente no sobrenadante de cultivo. Os dados obtidos sugerem que Pr1 e Pr2 produzidas pelo isolado CG425 são induzidas por componentes da cutícula da broca do café (CBB), e que o pH da cultura influencia a expressão destas proteases, indicando a ocorrência de um mecanismo eficiente de secreção por este fungo. Os resultados obtidos neste estudo aumentam o conhecimento a respeito da produção de proteases por B. bassiana CG425, abrindo novos caminhos para o estudo do papel de proteases na virulência contra a broca do café durante o processo de infecção. <![CDATA[<b>A conservative region of the mercuric reductase gene (<i>merA</i>) as a molecular marker of bacterial mercury resistance</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200020&lng=en&nrm=iso&tlng=en The most common bacterial mercury resistance mechanism is based on the reduction of Hg(II) to Hg0, which is dependent of the mercuric reductase enzyme (MerA) activity. The use of a 431 bp fragment of a conservative region of the mercuric reductase (merA) gene was applied as a molecular marker of this mechanism, allowing the identification of mercury resistant bacterial strains.<hr/>O mecanismo de resistência bacteriana ao mercúrio mais comum é baseada na redução do Hg(II) a Hg0, através da atividade da enzima mercúrio redutase (MerA). O uso do fragmento de 431 pb amplificado de uma região conservada do gene merA, que codifica a enzima MerA,foi utilizado como marcador molecular deste mecanismo, permitindo a identificação de bactérias resistentes ao mercúrio. <![CDATA[<b>Fate of organochlorine <sup>14</sup>C-dicofol in a lab-scale wastewater treatment</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200021&lng=en&nrm=iso&tlng=en The fate of organochlorine 14C-dicofol in activated sludge process was investigated. Results showed that the major part of radioactivity remained adsorbed on biological sludge. Consequently, its final disposal deserves special attention. The small amounts of dicofol, biotransformed or not, which remained in the treated effluent could contaminate receiving bodies.<hr/>A dinâmica do organoclorado 14C-dicofol no processo de lodos ativados foi investigada. Os resultados mostraram que a maior parte da radioatividade ficou adsorvida no lodo biológico. Consequentemente, o seu descarte final merece atenção especial. Pequenas quantidades de dicofol, biotransformadas ou não, permanecem no efluente tratado podendo contaminar os corpos receptores. <![CDATA[<b>Isolation and characterization of a chitinase gene from entomopathogenic fungus <i>Verticillium lecanii</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200022&lng=en&nrm=iso&tlng=en Entomopathogenic fungus Verticillium lecanii is a promising whitefly and aphid control agent. Chitinases secreted by this insect pathogen have considerable importance in the biological control of some insect pests. An endochitinase gene Vlchit1 from the fungus was cloned and overexpressed in Escherichia coli. The Vlchit1 gene not only contains an open reading frame (ORF) which encodes a protein of 423 amino acids (aa), but also is interrupted by three short introns. A homology modelling of Vlchit1 protein showed that the chitinase Vlchit1 has a (α/β)8 TIM barrel structure. Overexpression test and Enzymatic activity assay indicated that the Vlchit1 is a functional enzyme that can hydrolyze the chitin substrate, so the Vlchit1 gene can service as a useful gene source for genetic manipulation leading to strain improvement of entomopathogenic fungi or constructing new transgenic plants with resistance to various fungal and insects pests.<hr/>O fungo entomopatogênico Verticillium lecanii é um agente promissor no controle da mosca-branca e do pulgão. As quitinases secretadas por esse patógeno de insetos têm uma grande importância no controle biológico de doenças causadas por insetos. Um gene de endoquitinase Vlchit1 desse fungo foi clonado e expresso em Escherichia coli. O gene Vlchit contém não apenas um ORF que codifica uma proteína de 423 aminoácidos, mas também é interrompido por três pequenos introns. A modelagem de homologia da proteína Vlchit1indicou que a quitinase Vlchit1 tem uma estrutura (α/β) 8 TIM barrel. Testes de expressão e de atividade enzimática indicaram que Vlchit1 é uma enzima funcional que hidroliza quitina, portanto o gene Vlchit pode ser um gene útil para manipulação genética para melhoramento de cepas de fungos entomopatogênicos ou para a construção de novas plantas transgênicas com resistência a várias doenças causadas por fungos e insetos. <![CDATA[<b>First record of<i> Botryosphaeria ribis</i> associated with leaf spots on <i>Magnolia</i> aff. candollei in Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200023&lng=en&nrm=iso&tlng=en A leaf spot disease was observed attacking some Magnolia aff. candollei plants grown in a private garden in the city of Rio de Janeiro, RJ, Brazil. Such leaf spots coalesced and led to extensive blight of foliage. A fungus was clearly associated to the disease symptoms and was identified as Botryosphaeria ribis. Its anamorph, Fusicoccum ribis, was also present, although less abundant than the teleomorph. This is first report of this fungus on this host in Brazil and the first record of any fungal disease on a member of the genus Magnolia in Brazil.<hr/>Neste trabalho são apresentadas observações feitas sobre a etiologia de uma doença foliar encontrada atacando alguns indivíduos da espécie Magnolia aff. candollei cultivados em um jardim particular na cidade do Rio de Janeiro. Esta doença se apresentava como manchas foliares que tendiam a coalescer levando à queima de áreas extensas das folhas atacadas. Um fungo estava claramente associado a estes sintomas e foi identificado como Botryosphaeria ribis. Seu anamorfo, Fusicoccum ribis, também estava presente, embora sendo menos comum que o teliomorfo. Este é o primeiro relato deste fungo neste hospedeiro no Brasil e o primeiro relato de uma doença fúngica em planta do gênero Magnolia no Brasil. <![CDATA[<b>Effects of pH and temperature on growth and glycerol production kinetics of two indigenous wine strains of <i>Saccharomyces cerevisiae</i> from Turkey</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200024&lng=en&nrm=iso&tlng=en The study was performed in a batch system in order to determine the effects of pH and temperature on growth and glycerol production kinetics of two indigenous wine yeast strains Saccharomyces cerevisiae Kalecik 1 and Narince 3. The highest values of dry mass and specific growth rate were obtained at pH 4.00 for both of the strains. Maximum specific glycerol production rates were obtained at pH 5.92 and 6.27 for the strains Kalecik 1 and Narince 3, respectively. Kalecik 1 strain produced maximum 8.8 gL-1 of glycerol at pH 6.46. Maximum glycerol concentration obtained by the strain Narince 3 was 9.1 gL-1 at pH 6.48. Both yeasts reached maximum specific growth rate at 30ºC. Optimum temperature range for glycerol production was determined as 25-30ºC for the strain Kalecik 1. The strain Narince 3 reached maximum specific glycerol production rate at 30ºC. Maximum glycerol concentrations at 30ºC were obtained as 8.5 and 7.6 gL-1 for Kalecik 1 and Narince 3, respectively.<hr/>Este estudo foi conduzido em sistema descontínuo a fim de determinar o efeito do pH e da temperatura na cinética de crescimento celular ede produção de glicerol de duas linhagens selvagens de vinificação, Saccharomyces cerevisiae Kalecik 1 e Saccharomyces cerevisiae Narince 3. Os maiores valores de massa celular seca e de velocidade específica de crescimento foram obtidos em pH 4,0 para as duas linhagens. A máxima velocidade específica de produção de glicerol foi obtida em pH 5,92 e 6,27 para a linhagem Kalecik 1 e Narince 3, respectivamente. A linhagem Kalecik 1 proporcionou a máxima produção de glicerol, 8,8 gL-1 em pH 6,46. A máxima concentração de glicerol obtida pela linhagem Narince 3 foi de 9,1 gL-1 no pH 6,48. As duas linhagens atingiram a máxima velocidade específica de crescimento à temperatura de 30ºC. A faixa de temperatura ótima para a produção de glicerol para a linhagem Kalecik 1 variou de 25 a 30ºC. A linhagem Narince 3 atingiu a máxima velocidade específica de produção de glicerol a 30ºC. A máxima concentração de glicerol, obtida a 30ºC, foi de 8,5 e 7,6 gL-1 para as linhagens Kalecik 1 e Narince 3, respectivamente. <![CDATA[<b>Xylitol production from wheat straw hemicellulosic hydrolysate</b>: <b>hydrolysate detoxification and carbon source used for inoculum preparation</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200025&lng=en&nrm=iso&tlng=en Wheat straw hemicellulosic hydrolysate was used for xylitol bioproduction. The use of a xylose-containing medium to grow the inoculum did not favor the production of xylitol in the hydrolysate, which was submitted to a previous detoxification treatment with 2.5% activated charcoal for optimized removal of inhibitory compounds.<hr/>Hidrolisado hemicelulósico de palha de trigo foi utilizado para a bioprodução de xilitol. O uso de meio contendo xilose para crescer o inóculo não favoreceu a produção de xilitol no hidrolisado, que foi submetido a um tratamento prévio de destoxificação com 2.5% de carvão ativo para remoção otimizada de compostos inibitórios. <![CDATA[<b>Chlorine dioxide against bacteria and yeasts from the alcoholic fermentation</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200026&lng=en&nrm=iso&tlng=en The ethanol production in Brazil is carried out by fed-batch or continuous process with cell recycle, in such way that bacterial contaminants are also recycled and may be troublesome due to the substrate competition. Addition of sulphuric acid when inoculum cells are washed can control the bacterial growth or alternatively biocides are used. This work aimed to verify the effect of chlorine dioxide, a well-known biocide for bacterial decontamination of water and equipments, against contaminant bacteria (Bacillus subtilis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum and Leuconostoc mesenteroides) from alcoholic fermentation, through the method of minimum inhibitory concentration (MIC), as well as its effect on the industrial yeast inoculum. Lower MIC was found for B. subtilis (10 ppm) and Leuconostoc mesenteroides (50 ppm) than for Lactobacillus fermentum (75 ppm) and Lactobacillus plantarum (125 ppm). Additionally, these concentrations of chlorine dioxide had similar effects on bacteria as 3 ppm of Kamoran® (recommended dosage for fermentation tanks), exception for B. subtilis, which could not be controlled at this Kamoran® dosage. The growth of industrial yeasts was affected when the concentration of chlorine dioxide was higher than 50 ppm, but the effect was slightly dependent on the type of yeast strain. Smooth yeast colonies (dispersed cells) seemed to be more sensitive than wrinkled yeast colonies (clustered cells/pseudohyphal growth), both isolated from an alcohol-producing unit during the 2006/2007 sugar cane harvest. The main advantage in the usage of chlorine dioxide that it can replace antibiotics, avoiding the selection of resistant populations of microorganisms.<hr/>A produção de etanol no Brasil é atualmente realizada pelo processo de fermentação em batelada alimentada ou contínuo, com reciclo de células de leveduras, de forma que contaminantes bacterianos são também reciclados e podem causar problemas devido à competição pelo mesmo substrato. O controle bacteriano é feito pela adição de ácido sulfúrico na lavagem das células do fermento ou utilizando-se biocidas. O objetivo do trabalho foi verificar o efeito do dióxido de cloro, um biocida muito utilizado para a descontaminação da água e equipamentos, contra bactérias contaminantes da fermentação alcoólica (Bacillus subtilis, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum e Leuconostoc mesenteroides), através do método da concentração inibitória mínima (CIM), assim como seu efeito sobre o fermento industrial. Valores menores de CIM foram encontrados para Bacillus subtilis (10 ppm) e Leuconostoc mesenteroides (50 ppm) do que para Lactobacillus fermentum (75 ppm) e Lactobacillus plantarum (125 ppm). Estas concentrações tiveram o mesmo efeito inibidor que 3 ppm de Kamoran®, com exceção de B. subtilis, no qual não se observou inibição de crescimento à esta concentração. As leveduras industriais apresentaram inibição no crescimento em concentrações superiores a 50 ppm, porém esta pareceu ser dependente do tipo de linhagem de levedura. Colônias cremosas (células dispersas) foram ligeiramente mais sensíveis que as colônias rugosas (células agrupadas/pseudohifas), ambas isoladas de uma unidade produtora de álcool durante a safra de cana-de-açúcar 2006/2007. A principal vantagem na utilização deste produto está na eliminação do uso de antibióticos, evitando a geração de populações resistentes de microrganismos. <![CDATA[<b>Mycelial glucoamylases produced by the thermophilic fungus <i>Scytalidium thermophilum</i> strains 15.1 and 15.8</b>: <b>purification and biochemical characterization</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200027&lng=en&nrm=iso&tlng=en Two strains (15.1 and 15.8) of the thermophilic fungus Scytalidium thermophilum produced high levels of intracellular glucoamylases, with potential for industrial applications. The isoform I of the glucoamylase produced by 15.1 strain was sequentially submitted to DEAE-Cellulose and CM-Cellulose chromatography, and purified 141-fold, with 5.45% recovery. The glucoamylase of strain 15.8 was purified 71-fold by CM-Cellulose and Concanavalin A-Sepharose chromatography, with 7.38% recovery. Temperature and pH optima were in the range of 50-60ºC and 5.0-6.0, respectively, using starch and maltose as substrates. The glucoamylase of S. thermophilum 15.8 was more stable (t50 > 60 min) than that of S. thermophilum 15.1 (t50= 11-15 min), at 60ºC. The glucoamylase activities were enhanced by several ions (e.g. Mn2+ and Ca2+) and inhibited by β-mercaptoethanol. The glucoamylase from 15.1 strain showed a Km of 0.094 mg/ml and 0.029 mg/ml and Vmax of 202 U/mg prot and 109 U/mg prot, for starch and maltose, respectively. The hydrolysis products of starch and maltose, analyzed by TLC, demonstrated glucose as end product and confirming the character of the enzyme as glucoamylase. Differences were observed in relation to the products formed with maltose as substrate between the two strains studied. S. thermophilum 15.8 formed maltotriose in contrast with S. thermophilum 15.1.<hr/>Duas linhagens (15.1 e 15.8) do fungo termofílico Scytalidium thermophilum se mostraram produtoras de grandes quantidades de glucoamilases, com potencial aplicação industrial. A isoforma I de glucoamilase produzida pela linhagem 15.1 foi submetida seqüencialmente a cromatografia em colunas de DEAE-celulose e CM-celulose, sendo purificada 141 vezes com porcentagem de recuperação de 5,45%. A glucoamilase da linhagem 15.8 foi purificada 71 vezes através do uso de colunas de cromatografia de CM-celulose e Concanavalina A-sepharose com porcentagem de recuperação de 7,38%. Temperatura e pH ótimo foram de 50-60ºC e 5,0-6,0 respectivamente, utilizando-se amido e maltose como substratos. A glucoamilase de S. thermophilum 15.8 se mostrou mais estável (t50 > 60 min) que a de S. thermophilum 15.1 (t50 =11-15min) a 60ºC. As glucoamilases tiveram suas atividades enzimáticas aumentadas na presença de vários íons (ex: Mn2+, e Ca2+) e inibidas por β-mercaptoetanol. A glucoamilase da linhagem 15.1 apresentou um Km de 0,094 mg/ml e 0,029 mg/ml and Vmax de 202U/mg prot e 109U/mg prot, para amido e maltose respectivamente. A análise do produto da hidrólise de amido e maltose por TLC, demonstrou que o produto final era glucose, confirmando as características da enzima como glucoamilase. Diferenças entre as duas linhagens foram observadas com relação aos produtos formados tendo maltose como susbstrato, a linhagem 15.8 de S. thermophilum produziu maltotriose como produto final em contrate com a linhagem 15.1. <![CDATA[<b>Mass spectrometry analysis of surface tension reducing substances produced by a pah-degrading <i>Pseudomonas citronellolis</i> strain</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200028&lng=en&nrm=iso&tlng=en In this work we investigated the structure of the iron-stimulated surface tension reducing substances produced by P. citronellolis 222A isolated from a 17-years old landfarming used for sludge treatment in petrochemical industries and oil refinery. Its mass spectrum differs from P. aeruginosa spectrum, indicating that the surface tension reducing substances produced by P. citronellolis can be a new kind of biosurfactant.<hr/>Neste trabalho é apresentado um estudo a respeito da análise da estrutura de substâncias redutoras de tensão superficial produzidas por Pseudomonas citronellolis 222A estimulado pela presença de ferro. Esta bactéria foi isolada de um solo que há 17 anos vem sendo utilizado para o tratamento de borra oleosa proveniente da indústria petroquímica e de refinaria de petróleo. O espectro de massa difere do espectro de P. aeruginosa, indicando que as substâncias redutoras de tensão superficial produzidas por P. citronellolis podem ser um novo tipo de biosurfactante. <![CDATA[<b>Evaluation of culture media for counts of <i>Bifidobacterium animalis </i>subsp.<i> lactis </i>Bb 12in yoghurt after refrigerated storage</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200029&lng=en&nrm=iso&tlng=en The agar RCPB pH5 has been considered a good alternative for counts of Bifidobacterium in yoghurt. However, during the refrigerated storage of yoghurt it is extremely difficult to count this microorganism due to the size of the colonies, which are so small they require the aid of a stereoscope to count them. Another agar, MRS-LP, has been also recommended for counts of Bifidobacterium in the presence of yoghurt bacteria. This study evaluated the supplementation of RCPB pH5 agar with dehydrated liver extract and the salts KH2PO4, K2HPO4, FeSO(4)7H2O, MnSO4H2O and MgSO(4)7H2O, aiming at improving the differentiation of Bifidobacterium in yoghurt after refrigerated storage, and also evaluated the selective count of Bifidobacterium in yoghurt using the agar MRS-LP. The agar MRS-LP presented the same cell recovery as non-fortified RCPB pH5 agar, used as a standard medium, thus being considered a good option for counts of Bifidobacterium in yoghurt. The fortified RCPB pH5 also presented the same recovery as the standard RCPB pH5 medium, however, the addition of dehydrated liver extract to the RCPB pH5 agar considerably increased the size of the Bifidobacterium colonies after refrigerated storage, making differentiation of the colonies much easier and reliable when compared to the standard non-fortified RPCP pH5. The addition of the salts (KH2PO4, K2HPO4, FeSO(4)7H2O, MnSO4H2O and MgSO(4)7H2O) had no influence on the performance of the RCPB pH5 agar.<hr/>O meio RCPB pH5 tem sido considerado uma boa opção para a contagem de Bifidobacterium em iogurte. Entretanto, durante a estocagem refrigerada do iogurte é extremante difícil a contagem deste microrganismo devido ao pequeno diâmetro desenvolvido pelas colônias de Bifidobacterium neste meio, sendo que a sua contagem somente se torna possível com o auxílio de um estereoscópio. Outro meio, MRS-LP, também tem sido recomendado para a contagem de Bifidobaterium em iogurte. Este estudo avaliou a suplementação do meio RCPB pH5 com extrato de fígado desidratado e com os sais KH2PO4, K2HPO4, FeSO(4)7H2O, MnSO4H2O e MgSO(4)7H2O, visando melhorar a diferenciação de Bifidobacterium em iogurte durante a estocagem refrigerada e também avaliou a contagem seletiva de Bifidobacterium em iogurte usando o meio MRS-LP. O meio MRS-LP apresentou a mesma recuperação de células que o meio RCPB pH5, usado como padrão, após 30 dias de estocagem refrigerada do iogurte, sendo considerado uma boa opção para a contagem de Bifidobacterium em iogurtes durante a estocagem refrigerada. O meio RCPB pH5 fortificado também apresentou a mesma recuperação de células de Bifidobacterium que o meio padrão RCPB pH5; entretanto, a adição de extrato de fígado desidratado aumentou consideravelmente o diâmetro das colônias de Bifidobacterium, tornando a diferenciação destas bastante fácil e confiável quando comparadas à sua diferenciação no meio RCPB pH5 sem a fortificação. A adição dos sais (KH2PO4, K2HPO4, FeSO(4)7H2O, MnSO4H2O e MgSO(4)7H2O) não exerceu influência no desempenho do meio RCPB pH5. <![CDATA[<b>The potential of <i>Origanum vulgare </i>L. (Lamiaceae) essential oil in inhibiting the growth of some food-related <i>Aspergillus</i> species</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200030&lng=en&nrm=iso&tlng=en Origanum vulgare L. (Lamiaceae) has been currently known for their interesting antimicrobial activity being regarded as alternative antimicrobial for use is food conservation systems. This study aimed to evaluate the effectiveness of O. vulgare essential oil in inhibiting the growth of some food-related Aspergillus species (A. flavus, A. parasiticus, A. terreus, A. ochraceus, A. fumigatus and A. niger). The essential oil revealed a strong anti-Aspergillus property providing an inhibition of all assayed mould strains. MIC values were between 80 and 20 µL/mL being found a MIC50 of 40 µL/mL. The essential oil at concentration of 80 and 40 µL/mL provided a fungicidal effect on A. flavus, A. fumigatus and A. niger noted by a total inhibition of the radial mycelial growth along 14 days of interaction. In addition, the essential oil was able to inhibit the mould spores germination when assayed at concentrations of 80 and 40 µL/mL. Our results showed the interesting anti-Aspergillus activity of O. vulgare essential oil supporting their possible use as anti-mould compound in food conservation.<hr/>Origanum vulgare L. (Lamiaceae) tem sido atualmente reconhecido por sua intensa atividade antimicrobiana sendo considerado como fonte de compostos antimicrobianos alternativos para uso em sistemas de conservação de alimentos. Este estudo objetivou avaliar a efetividade do óleo essencial de O. vulgare em inibir o crescimento de algumas espécies de Aspergillus (A. flavus, A. parasiticus, A. terreus and A. fumigatus) de interesse em alimentos. O óleo essencial revelou uma forte atividade atni-Aspergillus provocando a inibição de todas as cepas fúngicas ensaiadas. Os valores de MIC estiveram entre 80 e 20 µL/mL sendo encontrado uma MIC50 de 40 µL/mL. O óleo essencial nas concentrações de 80 e 40 µL/mL causou um efeito fungicida sobre A. flavus, A. fumigatus e A. niger notado por uma total inibição do crescimento micelial radial ao longo de 14 dias de interação, bem como foi capaz de inibir a germinação de esporos destas cepas fúngicas. Nossos resultados mostram a intensa atividade anti-Aspergillus do óleo essencial de O. vulgare suportando o seu possível uso como antifúngico em sistemas de conservação de alimentos. <![CDATA[<b>Screening of lactic acid bacteria from vacuum packaged beef for antimicrobial activity</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200031&lng=en&nrm=iso&tlng=en The objective of this study was to isolate lactic acid bacteria (LAB) from vacuum packaged beef and to investigate their antagonist activity. LAB mean counts of 5.19 log cfu/cm² were obtained from five samples of vacuum packaged beef. Two hundred isolates were selected and screened for the inhibitory effect on five ATCC reference Lactobacillus strains. Thirty six isolates showed activity in the agar spot test against at least two of the indicator strains. However, only six cell free supernatants (CFS) from these isolates exhibited activity against the indicator strains using the well-diffusion test and conditions that eliminated the effects of organic acids and hydrogen peroxide. L. acidophilus was the most sensitive indicator tested, whereas L. plantarum and L. fermentum were the most resistant ones. Identification by MIDI system indicated that these LAB isolates were Lactococcus lactis subsp. cremoris, Pediococcus acidilactici, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus and Lactobacillus casei GC subgroup A. The antagonistic factors produced by most of these LAB against L. acidophilus were resistant to heat treatment (100ºC for 10 min) and stable over a wide pH range (4.0 to 9.0). These data suggest that these isolates could be used as promising hurdles aiming increased safety and extended shelf life of meat products.<hr/>Este trabalho teve como objetivo isolar bactérias ácido láticas (BAL) de carne bovina embalada a vácuo e investigar sua atividade antimicrobiana. Uma média de 5,19 log ufc/cm² BAL foi obtida de cinco amostras. Duzentos isolados foram selecionados e o efeito inibitório sobre cinco cepas ATCC referência de Lactobacillus foi pesquisado. Trinta e seis isolados apresentaram atividade inibitória pelo teste 'agar spot' de pelo menos duas das cepas indicadoras. Sobrenadantes isentos de células (SIC) destes isolados foram obtidos. Apenas seis SIC apresentaram atividade contra as cepas indicadoras usando o método de difusão em poços e condições que eliminaram a influência do peróxido de hidrogênio e de ácidos orgânicos. L. acidophilus foi a cepa indicadora mais sensível, enquanto L. plantarum e L. fermentum foram as mais resistentes. Identificação pelo sistema MIDI indicaram que as BAL isoladas eram Lactococcus lactis subsp. cremoris, Pediococcus acidilactici, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus e Lactobacillus casei GC subgrupo A. O efeito antagonista ao L. acidophilus dos SIC destas BAL foi resistente ao tratamento térmico (100ºC/10 min) e estável em ampla faixa de pH (4,0 a 9,0). Estes dados sugerem que os isolados obtidos poderiam ser utilizados como barreiras promissoras no aumento da segurança e na extensão da vida útil de produtos cárneos. <![CDATA[<b>Epidemiological Survey of <i>Listeria monocytogenes</i> in a gravlax salmon processing line</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200032&lng=en&nrm=iso&tlng=en Listeria monocytogenes is a cause of concern to food industries, mainly for those producing ready-to-eat (RTE) products. This microorganism can survive processing steps such as curing and cold smoking and is capable of growing under refrigeration temperatures. Its presence in RTE fish products with extended shelf life may be a risk to the susceptible population. One example of such a product is gravlax salmon; a refrigerated fish product not exposed to listericidal processes and was the subject of this study. In order to evaluate the incidence and dissemination of L. monocytogenes 415 samples were collected at different steps of a gravlax salmon processing line in São Paulo state, Brazil. L. monocytogenes was confirmed in salmon samples (41%), food contact surfaces (32%), non-food contact surfaces (43%) and of food handlers' samples (34%), but could not be detected in any ingredient. 179 L. monocytogenes isolates randomly selected were serogrouped and typed by PFGE. Most of L. monocytogenes strains belonged to serogroup 1 (73%). 61 combined pulsotypes were found and a dendrogram identified six clusters: most of the strains (120) belonged to cluster A. It was suggested that strains arriving into the plant via raw material could establish themselves in the processing environment contaminating the final product. The wide dissemination of L. monocytogenes in this plant indicates that a great effort has to be taken to eliminate the microorganism from these premises, even though it was not observed multiplication of the microorganism in the final product stored at 4ºC up to 90 days.<hr/>Listeria monocytogenes é um patógenode grande preocupação para as indústrias alimentícias, principalmente aquelas produtoras de alimentos prontos para consumo (RTE). Este microrganismo pode sobreviver às etapas de cura e defumação a frio, além de tolerar temperaturas de refrigeração. A presença de L. monocytogenes em pescados RTE com vida de prateleira longa representa um risco para a população susceptível, sendo o salmão gravlax deste tipo de produto. No presente estudo avaliou-se a incidência e disseminação de L. monocytogenes em 415 amostras de salmão gravlax obtidas de diferentes etapas de processamento de uma indústria localizada no Estado de São Paulo. A presença de L. monocytogenes foi confirmada em amostras de salmão (41%), superfícies de contato (32%) e não contato (43%) e manipuladores (34%), porém não se isolou o microrganismo em nenhum ingrediente. Do total de cepas isoladas, 179 destas foram escolhidas aleatoriamente e submetidas a sorologia e tipagem por PFGE. A maioria dos isolados pertenceu ao sorogrupo 1 (73%), sendo identificados 61 pulsotipos quando se combinou os resultados de sorologia e PFGE e 6 clusters foram distribuídos em um dendrograma. O cluster A agrupou a maioria das cepas (120). Pode-se sugerir que as cepas foram introduzidas na linha de processamento por meio da matéria prima e contaminando o produto final. Estes resultados indicam que a eliminação de L. monocytogenes deste estabelecimento requer um grande esforço, ainda que o microrganismo não se multiplicou no produto final estocado a 4ºC por 90 dias. <![CDATA[<b><i>Mycoplasma synoviae</i></b><b> infection on Newcastle disease vaccination of chickens</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200033&lng=en&nrm=iso&tlng=en Newcastle disease is characterized by respiratory manifestations in association with nervous and/or digestive symptoms. Its prevention is done by vaccination with live attenuated (lentogenic strains) and/or killed vaccines. The lentogenic strains can lead to strong post-vaccination reaction, principally due to the presence of other pathogenic agents. Among them, Mycoplasma synoviae is worldwide important, mainly in Brazil. The dissemination of this agent in poultry flocks has been achieved due to difficulties in diagnosis and disease reproduction, virulence variations among different M.synoviae strains, and attribution of typical M.synoviae disease manifestation to other disease agents. This experimental study in SPF chicks (Gallus gallus), previously infected by M.synoviae and thereafter vaccinated against Newcastle disease, was done with the objective of evaluating M.synoviae pathogenicity through assessment of post-vaccinal respiratory reactions and serologic responses to Newcastle disease virus vaccine in the absence of environmental factors. A total of 86 three days old chicks were used, being 57 infected by eye and nostril drop, with chicken activated M. synoviae strain WVU 1853. Seven days later, 21 mycoplasma infected birds plus 29 not mycoplasma infected ones were vaccinated against Newcastle disease. As results, the not infected and vaccinated birds yielded, significantly, higher and longer lasting serologic responses to Newcastle disease vaccine virus than those infected and vaccinated. Similarly, the infected and vaccinated birds yielded lower serologic reactions to M.synoviae than those only mycoplasma infected. No post-vaccinal respiratory reaction was observed in the vaccinated birds.<hr/>A doença de Newcastle é caracterizada por manifestações respiratórias associadas a sintomas nervosos e/ou digestivos. Sua prevenção é feita pela vacinação com vacinas vivas atenuadas (cepas lentogênicas) e/ou inativadas. As cepas lentogênicas podem determinar acentuada reação pós-vacinal, principalmente na presença de outros patógenos. Entre eles, o Mycoplasma synoviae tem importância mundial, principalmente no Brasil. A disseminação deste agente nos planteís avícolas tem sido facilitada, devido a dificuldades de reprodução e diagnóstico da doença em aves, variação de virulência entre as diferentes cepas de M.synoviae e atribuição a outros patógenos de manifestação típica da micoplasmose por M.synoviae. Este estudo experimental em aves (Gallus gallus) SPF, previamente infectadas por M.synoviae e depois vacinadas contra Newcastle, foi realizado com objetivo de avaliar a patogenicidade do M.synoviae pela obtenção dareação respiratória pós-vacinal e a resposta sorológica para o vírus vacinal da doença de Newcastle, na ausência de fatores ambientais. Um total de 86 aves, com três dias de idade foram utilizadas, sendo 57 infectadas via ocular e intranasal, com cepa MS WVU 1853, ativada em galinhas. Sete dias depois, 21 aves infectadas por micoplasma e 29 não infectadas foram vacinadas contra a doença de Newcastle. Como resultados, aves não infectadas e vacinadas produziram resposta sorológica para o vírus vacinal da doença de Newcastle, significativamente mais elevada e mais duradora que aquelas infectadas e vacinadas. Igualmente, aves infectadas e vacinadas produziram reações sorológicas para M.synoviae mais baixa, que aquelas apenas infectadas. Não foram observadas reações respiratórias pós-vacinal nas aves vacinadas. <![CDATA[<b>Control of <i>Salmonella</i> enterica serovar Enteritidis in laying hens by inactivated <i>Salmonella</i> Enteritidis vaccines</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200034&lng=en&nrm=iso&tlng=en Salmonella Enteritidis is one of the agents that is responsible for outbreaks of human foodborne salmonellosis caused by Salmonella Enteritidis and is generally associated with the consumption of poultry products. Inactivated Salmonella Enteritidis cell vaccine is one of the available methods to control Salmonella Enteritidis in breeders and laying hens, however results in terms of efficacy vary. This vaccine has never been tested in Brazil, therefore, the present work was carried out to assess three commercial inactivated Salmonella Enteritidis vaccines allowed in Brazil. Four hundred white light variety commercial laying hens were obtained at one-day-of age. At eight weeks old, the birds were divided into four groups with one hundred animals each. Birds from three groups (V1, V2 and V3) received different intramuscular vaccines, followed by a booster dose at 16 weeks of age. Birds from another group (CG) were not vaccinated. When the laying hens were 20, 25 and 31 weeks old, 13 from each group were transferred to another room and were challenged by inoculating 2 mL neat culture of Salmonella Enteritidis. On the second day after each challenge, the caecal contents, spleen, liver and ovary of three birds from each group were analyzed for the presence of Salmonella Enteritidis. Twice a week a cloacal swab of each bird was taken and all eggs laid were examined for the presence of Salmonella Enteritidis. After four consecutive negative cloacal swabs in all the groups, the birds were sacrificed so as to examine the liver, caecal contents and ovaries. Overall, the inactivated vaccine used in group V3 reduced Salmonella Enteritidis in the feces and eggs. A very small amount of Salmonella was found in the spleen, liver, ovary and caeca of the birds in the four groups during the whole experiment. In general, inactivated Salmonella Enteritidis vaccines was able to decrease the presence of Salmonella Enteritidis in the birds and in the eggs as well. Nevertheless, they must be associated with general hygiene and disinfection practices in poultry husbandry.<hr/>Salmonella Enteritidis é um dos agentes responsáveis por toxinfecção alimentar em humanos e tem sido associada a alimentos de origem avícola. Entre os métodos disponíveis para o seu controle está a vacinação de poedeiras e matrizes com vacinas inativadas (bacterinas). Os resultados a respeito da proteção das bacterinas contra Salmonella Enteritidis em aves são variados. Face à inexistência de dados referentes ao uso dessas vacinas no Brasil, realizou-se o presente trabalho. Foram utilizadas 400 pintinhas de uma linhagem de postura leve. Na 8º semana de idade, as aves foram divididas em quatro grupos (V1, V2, V3 e CG). Três diferentes bacterinas comerciais foram administradas às aves do V1, V2 e V3 em duas doses, na 8º e 16º semanas de vida; as do CG não receberam vacina. Treze aves por grupo foram infectadas com Salmonella Enteritidis nas 20º, 25º e 31º semanas. No 2º dia após cada desafio foram sacrificadas três aves por grupo, para contagem de Salmonella Enteritidis em fígado, baço, conteúdo cecal e pesquisa do microrganismo no ovário. Suabes de cloaca foram realizados dois dias pós-infecção (dpi) e duas vezes por semana. Todos os ovos foram examinados. Após a ausência de Salmonella Enteritidis em quatro suabes de cloaca consecutivos, esse microrganismo foi pesquisado em fígado, conteúdo cecal e ovário. Não houve diferença da contagem de Salmonella Enteritidis nos órgãos. O conteúdo cecal das aves do V1 teve menos Salmonella que as do CG. As aves do V3 excretaram menos Salmonella em fezes e ovos. Conforme os resultados observados no V3, é possível reduzir excreção de Salmonella Enteritidis com o uso de bacterinas; contudo, deve ser utilizado de forma complementar a boas práticas de manejo, limpeza e desinfecção. <![CDATA[<b>Antibacterial activities of multi drug resistant <i>Myroides odoratimimus </i>bacteria isolated from adult flesh flies (Diptera: Sarcophagidae) are independent of metallo beta-lactamase gene</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200035&lng=en&nrm=iso&tlng=en Flesh flies (Diptera: Sarcophagidae) are well known cause of myiasis and their gut bacteria have never been studied for antimicrobial activity against bacteria. Antimicrobial studies of Myroides spp. are restricted to nosocomial strains. A Gram-negative bacterium, Myroides sp., was isolated from the gut of adult flesh flies (Sarcophaga sp.) and submitted to evaluation of nutritional parameters using Biolog GN, 16S rRNA gene sequencing, susceptibility to various antimicrobials by disc diffusion method and detection of metallo β-lactamase genes (TUS/MUS). The antagonistic effects were tested on Gram-negative and Gram-positive bacteria isolated from human clinical specimens, environmental samples and insect mid gut. Bacterial species included were Aeromonas hydrophila, A. culicicola, Morganella morganii subsp. sibonii, Ochrobactrum anthropi, Weissella confusa, Escherichia coli, Ochrobactrum sp., Serratia sp., Kestersia sp., Ignatzschineria sp., Bacillus sp. The Myroides sp. strain was resistant to penicillin-G, erythromycin, streptomycin, amikacin, kanamycin, gentamycin, ampicillin, trimethoprim and tobramycin. These strain showed antibacterial action against all bacterial strains except W. confusa, Ignatzschineria sp., A. hydrophila and M. morganii subsp. sibonii. The multidrug resistance of the strain was similar to the resistance of clinical isolates, inhibiting growth of bacteria from clinical, environmental and insect gut samples. The metallo β-lactamase (TUS/MUS) genes were absent, and resistance due to these genes was ruled out, indicating involvement of other secretion machinery.<hr/>Moscas varejeiras (Diptera: Sarcophagidae) são causa conhecida de miíase e as bactérias de seus intestinos nunca foram estudadas quanto à atividade antibacteriana. Estudos antimicrobianos de Myroides spp restringem-se à cepas hospitalares. Uma bactéria Gram negativa, Myroides sp, foi isolada do intestino de moscas varejeiras adultas (Sarcophaga sp) e submetida à avaliação de parâmetros nutricionais pelo sistema BIOLOG GN, ao sequenciamento genético 16S rRNA, à sensibilidade a vários antimicrobianos pelo método de difusão de discos e à detecção dos genes de metalo beta lactamases (TUS/MUS). Os efeitos antagonistas foram testados contra bactérias Gram negativas e Gram positivas isoladas de material clínico humano, amostras ambientais e intestino do inseto. As espécies bacterianas incluíram Aeromonas hydrophila, A. culicicola, Morganella morganii subsp sibonii, Ochrobactrum anthropi, Weissella confusa, Escherichia coli, Ochrobactrum sp, Serratia sp, Kestersia sp, Ignatzschineria sp e Bacillus sp. A cepa Myroides sp foi resistente à penicilina G, eritromicina, estreptomicina, amicacina, canamicina, gentamicina, ampicilina, trimetoprim e tobramicina. Esta cepa apresentou atividade antimicrobiana contra todas as cepas exceto W.confusa, Ignatzschineria sp, A. hydrophila e M. morgani subsp sibonii. A resistência múltipla da cepa foi semelhante à de isolados clínicos, inibindo bactérias das amostras clínicas, ambientais e do intestino do inseto. Os genes de metalo beta lactamases (TUS/MUS) estavam ausentes, excluindo-se a resistência mediada por esses genes, o que indica o envolvimento de um mecanismo alternativo de secreção. <![CDATA[<b>Selection of filamentous fungi of the <i>Beauveria</i> genus able to metabolize quercetin like mammalian cells</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000200036&lng=en&nrm=iso&tlng=en Microbial biotransformations constitute an important alternative as models for drug metabolism study in mammalians and have been used for the industrial synthesis of chemicals with pharmaceutical purposes. Several microorganisms with unique biotransformation ability have been found by intensive screening and put in commercial applications. Ten isolates of Beauveria sp genus filamentous fungi, isolated from soil in the central Brazil, and Beauveria bassiana ATCC 7159 were evaluated for their capability of quercetin biotransformation. Biotransformation processes were carried out for 24 up to 96 hours and monitored by mass spectrometry analyses of the culture broth. All strains were able to metabolize quercetin, forming mammalian metabolites. The results were different from those presented by other microorganisms previously utilized, attrackting attention because of the great diversity of reactions. Methylated, sulphated, monoglucuronidated, and glucuronidated conjugated metabolites were simultaneously detected.<hr/>Biotransformações microbianas constituem uma alternativa importante como modelo para o estudo do metabolismo de medicamentos em mamíferos e são empregadas em processos sintéticos industriais com propósitos farmacêuticos. Diversos microrganismos com potencial para biotransformação têm sido encontrados através de screening intensivo e aplicados comercialmente. Dez cepas de fungos filamentosos do gênero Beauveria, isolados na região central do Brasil, e a cepa Beauveria bassiana ATCC 7159 foram avaliadas quanto à capacidade de biotransformação da quercetina. As reações de biotransformações foram realizadas por um período de 24 a 96 horas, e monitoradas através de espectrometria de massas do meio reacional. Todas as cepas foram capazes de metabolizar a quercetina, formando metabólitos encontrados nos mamíferos. Os resultados foram diferentes dos resultados apresentados por outros microrganismos utilizados anteriormente e chamam a atenção devido à diversidade das reações evidenciadas. Diferentes metabólitos conjugados foram detectados simultaneamente: metilados, sulfatados, monoglicuronados, e glicuronados.