Scielo RSS <![CDATA[Brazilian Journal of Microbiology]]> http://www.scielo.br/rss.php?pid=1517-838220080003&lang=pt vol. 39 num. 3 lang. pt <![CDATA[SciELO Logo]]> http://www.scielo.br/img/en/fbpelogp.gif http://www.scielo.br <![CDATA[<b>Avaliação da produtividade de um solo de pastagem na zona do semi-árido através de análises microbianas</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300001&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt The productivity of a pasture soil (caatinga) located in the region of São João do Cariri, PB, Brazil was evaluated based an the following microbiological parameters: biomass (measured by fumigation-incubation method), activity (estimated from basal respiration and cellulose decomposition rate), qCO2, and Cmic : Corg ratio. This analysis demonstrated that livestock management in the 'caatinga' is probably causing environment damage by affecting the soil properties, reducing the microbial biomass and soil respiration and increasing the qCO2, affecting the recovery of this ecosystem.<hr/>A produtividade de um solo de pastagem (caatinga) na região de São João do Cariri, PB, Brasil foi avaliado através dos seguintes parâmetros microbiológicos: biomassa (medidas pelo método de fumigação incubação), atividade (estimada com base na respiração basal e taxa de decomposição de celulose), qCO2 e a razão Cmic : Corg. Estas análises demonstraram que o manejo de rebanhos na caatinga pode causar danos a este ambiente devido a modificações das propriedades do solo como diminuição da biomassa microbiana e da atividade e aumento do qCO2, afetando a recuperação deste ecossistema. <![CDATA[<b>Caracterização molecular de bactérias fixadoras de nitrogênio isoladas de plantas brasileiras no estado de São Paulo</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300002&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Fourteen strains of nitrogen-fixing bacteria were isolated from different agricultural plant species, including cassava, maize and sugarcane, using nitrogen-deprived selective isolation conditions. Ability to fix nitrogen was verified by the acetylene reduction assay. All potentially nitrogen-fixing strains tested showed positive hybridization signals with a nifH probe derived from Azospirillum brasilense. The strains were characterized by RAPD, ARDRA and 16S rDNA sequence analysis. RAPD analyses revealed 8 unique genotypes, the remaining 6 strains clustered into 3 RAPD groups, suggesting a clonal origin. ARDRA and 16S rDNA sequence analyses allowed the assignment of 13 strains to known groups of nitrogen-fixing bacteria, including organisms from the genera Azospirillum, Herbaspirillum, Pseudomonas and Enterobacteriaceae. Two strains were classified as Stenotrophomonas ssp. Molecular identification results from 16S rDNA analyses were also corroborated by morphological and biochemical data.<hr/>Quatorze linhagens de bactérias fixadoras de nitrogênio foram isoladas de diferentes espécies de plantas, incluindo cassava, milho e cana-de-açúcar, usando condições seletivas desprovidas de nitrogênio. A capacidade de fixar nitrogênio foi verificada por ensaio de redução de acetileno. Todas as linhagens fixadoras de nitrogênio testadas apresentaram hibridização positiva com sonda de gene nifH derivada de Azospirillum brasilense. As linhagens foram caracterizadas por RAPD, ARDRA e sequenciamento do gene 16S rDNA. As análises de RAPD revelaram 8 genótipos, as 6 linhagens restantes foram agrupadas em 3 grupos de RAPD, sugerindo uma origem clonal. ARDRA e seqüências de 16S rDNA foram alocadas em 13 grupos conhecidos de bactérias fixadoras de nitrogênio, incluindo organismos dos gêneros Azospirillum, Herbaspirillum, Pseudomonas e Enterobacteriaceae. Duas linhagens foram classificadas como Stenotrophomonas ssp. Os resultados da identificação molecular baseados em sequencias de 16S rDNA corroboram com dados obtidos em testes morfológicos e bioquímicos. <![CDATA[<b>Comparação da promoção de crescimento de plantas por <i>Pseudomonas aeruginosa</i> e <i>Bacillus subtilis</i> em três vegetais</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300003&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Our objective was to compare some plant growth promoting rhizobacteria (PGPR) properties of Bacillus subtilis and Pseudomonas aeruginosa as representatives of their two genera. Solanum lycopersicum L. (tomato), Abelmoschus esculentus (okra), and Amaranthus sp. (African spinach) were inoculated with the bacterial cultures. At 60 days after planting, dry biomass for plants treated with B. subtilis and P. aeruginosa increased 31% for tomato, 36% and 29% for okra, and 83% and 40% for African spinach respectively over the non-bacterized control. Considering all the parameters tested, there were similarities but no significant difference at P < 0.05 between the overall performances of the two organisms.<hr/>Nosso objetivo foi comparar as propriedades PGPR (rizobactérias promotoras de crescimento de plantas) de Bacillus subtilis e Pseudomonas aeruginosa. Solanum licopersicum (tomate), Asbelmoschus esculentus (ocra) e Amaranthus sp (espinafre africano) foram inoculados com as culturas bacterianas. Após 60 dias de plantio, a biomassa seca das plantas tratadas com B.subtilis e P. aeruginosa aumentou 31% para o tomate, 36% e 29% para ocra, e 83% e 40% para espinafre africano, respectivamente, em comparação com o controle não inoculado. Considerando os parâmetros testados, o desempenho dos dois microrganismos foi similar, sem diferença estatisticamente significativa (p< 0,05). <![CDATA[<b>Bioconversão de hidrocarbonetos de petróleo no solo pelo uso de bagaço de maçã</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300004&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt The aim of this study was to investigate the feasibility of using apple filter cake, a fruit-processing waste to enhance the bioremediation of petroleum contaminated soil. A rotating barrel system was used to study the bioconversion of the xenobiotic compound by natural occurring microbial population. The soil had been accidentally polluted with a total petroleum hydrocarbon concentration of 41,000 ppm. Although this global value was maintained during the process, microbial intervention was evidenced through transformation of the petroleum fractions. Thus, fractions that represent a risk for the environment (GRO, Gasoline Range Organics i.e., C6 to C10-12; DRO, Diesel Range Organics i.e., C8-12 to C24-26 and RRO, Residual Range Organics i.e., C25 to C35) were significantly reduced, from 2.95% to 1.39%. On the contrary, heavier weight fraction from C35 plus other organics increased in value from 1.15% to 3.00%. The noticeable diminution of low molecular weight hydrocarbons content and hence environmental risk by the process plus the improvement of the physical characteristics of the soil, are promising results with regard to future application at large scale.<hr/>O objetivo deste estudo foi investigara viabilidade de aplicação de bagaço de maçã, um resíduo do processamento de frutas, para melhorar a biorremediação de solo contaminado com petróleo. Para estudar a bioconversão de compostos xenobióticos pela população microbiana naturalmente presente empregou-se um sistema de barril rotativo. O solo havia sido acidentalmente contaminado com um total de hidrocarbonetos de petróleo na concentração de 41.000 ppm. Embora esse valor tenha se mantido durante o processo, a intervenção microbiana ficou evidenciada através da transformação de frações do petróleo. Assim, as frações de risco para o meio ambiente (GRO, Gasoline Range Organics, i.e., C6 a C10-12; DRO, Diesel Ramge Organics, i.e. C8-12 a C24-26 e RRO, Residual Range Organics, i.e. C25 a C35) foram significativamente reduzidas de 2,95% para 1,39%. Por outro lado, frações mais pesadas, acima de C35, e outros compostos orgânicos aumentaram de 1,15% para 3,00%. A diminuição notável do conteúdo de hidrocarbonetos de baixo peso molecular e conseqüentemente do risco ambiental por esse processo, além da melhoria das características físicas do solo, são resultados promissores para uma futura aplicação em grande escala. <![CDATA[<b>Clonagem molecular do gene quitinase 33 (<i>chit</i>33) em <i>Trichoderma atroviride</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300005&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt In this study Trichoderma atroviride was selected as over producer of chitinase enzyme among 30 different isolates of Trichoderma sp. on the basis of chitinase specific activity. From this isolate the genomic and cDNA clones encoding chit33 have been isolated and sequenced. Comparison of genomic and cDNA sequences for defining gene structure indicates that this gene contains three short introns and also an open reading frame coding for a protein of 321 amino acids. The deduced amino acid sequence includes a 19 aa putative signal peptide. Homology between this sequence and other reported Trichoderma Chit33 proteins are discussed. The coding sequence of chit33 gene was cloned in pEt26b(+) expression vector and expressed in E. coli.<hr/>Neste estudo Trichoderma atroviride foi escolhido como superprodutor da enzima quitinase dentre 30 isolados de Trichoderma sp. com base na atividade específica de quitinase. Clones de cDNA e genômico codificando chit33 foram obtidos deste isolado e seqüenciados. A comparação das seqüências genômica e de cDNA para definir a estrutura do gene indicou que este contém três pequenos introns e uma fase aberta de leitura codificando uma proteína de 321 aminoácidos. A seqüência de aminoácidos deduzida inclui um possível peptídio sinal de 19 aminoácidos. Homologia entre esta seqüência e outras proteínas Chit33 descritas de Trichoderma é discutida. A seqüência codificadora do gene chit33 foi clonada no vetor de expressão pET26b(+) e expressa em E. coli. <![CDATA[<b>Controle da macha-parda do arroz (<i>Bipolaris oryzae</i>) pelo emprego de antioxidantes fenólicos</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300006&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Bipolaris oryzae is the causal agent of rice brown spot disease and is responsible for significant economic losses. In order to control this disease, three phenolic antioxidants were tested (salicylic acid, benzoic acid and hydroquinone). The antifungal activity of the tested substances were investigated against B. oryzae at different concentrations in vitro, as well as the efficacy of their exogenous application in controlling rice brown spot disease under field conditions. In vitro, benzoic acid or salicylic acid at 9 mM completely inhibited the growth of B. oryzae. Under field conditions, spraying of benzoic acid at 20 mM led to a significant reduction in disease severity (DS) and disease incidence (DI) on the plant leaves, in addition to a significant increase in the grain yield and its components. Some biochemical responses were also detected, where the application of the previous treatment led to a significant increase in the total photosynthetic pigments (chlorophyll a and b and carotenoids) in rice leaves and in the total carbohydrate and protein contents of the yielded grains.<hr/>Bipolaris oryzae é o agente causador da doença mancha-parda do arroz e é responsável por significativas perdas econômicas. Três antioxidantes fenólicos (ácido salicílico, ácido benzóico e hidroquinona) foram avaliados para o controle dessa doença do arroz. A atividade antifúngica destes compostos foi avaliada in vitro contra B. oryzae em diferentes concentrações e a eficiência de sua aplicação exógena no controle da mancha-parda foi avaliada em condições de campo. Nos ensaios in vitro, os ácidos benzóico e salicílico a 9 mM inibiram completamente a multiplicação de B. oryzae. Em condições de campo, a aspersão de ácido benzóico a 20 mM causou uma redução significativa na gravidade e incidência da doença na folhas da planta, além de aumentar significativamente o rendimento dos grãos e seus componentes. Algumas respostas bioquímicas foram também observadas, verificando-se que a aplicação do tratamento prévio causou um aumento significativo nos pigmentos fotossintéticos totais (clorofila a e b e carotenóides) nas folhas e no conteúdo de carboidratos e proteínas nos grãos. <![CDATA[<b>Caracterização da diversidade bacteriana em amostras de petróleo provenientes de reservatórios brasileiros</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300007&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt This study aimed at evaluating potential differences among the bacterial communities from formation water and oil samples originated from biodegraded and non-biodegraded Brazilian petroleum reservoirs by using a PCR-DGGE based approach. Environmental DNA was isolated and used in PCR reactions with bacterial primers, followed by separation of 16S rDNA fragments in the DGGE. PCR products were also cloned and sequenced, aiming at the taxonomic affiliation of the community members. The fingerprints obtained allowed the direct comparison among the bacterial communities from oil samples presenting distinct degrees of biodegradation, as well as between the communities of formation water and oil sample from the non-biodegraded reservoir. Very similar DGGE band profiles were observed for all samples, and the diversity of the predominant bacterial phylotypes was shown to be low. Cloning and sequencing results revealed major differences between formation water and oil samples from the non-biodegraded reservoir. Bacillus sp. and Halanaerobium sp. were shown to be the predominant components of the bacterial community from the formation water sample, whereas the oil sample also included Alicyclobacillus acidoterrestris, Rhodococcus sp., Streptomyces sp. and Acidithiobacillus ferrooxidans. The PCR-DGGE technique, combined with cloning and sequencing of PCR products, revealed the presence of taxonomic groups not found previously in these samples when using cultivation-based methods and 16S rRNA gene library assembly, confirming the need of a polyphasic study in order to improve the knowledge of the extent of microbial diversity in such extreme environments.<hr/>Este estudo teve como objetivo comparar as comunidades bacterianas de amostras de água de formação e de óleo de reservatórios de petróleo brasileiros com diferentes graus de biodegradação usando a técnica de PCR-DGGE. O DNA ambiental foi isolado e empregado em reações de PCR com primers bacterianos, com subseqüente separação dos fragmentos de DNAr 16S em DGGE. Os produtos de PCR foram também clonados e seqüenciados, visando à afiliação taxonômica dos membros da comunidade. Os fingerprints obtidos permitiram a comparação direta entre as comunidades bacterianas das amostras de óleo com diferentes graus de biodegradação, assim como entre as comunidades da água de formação e do óleo do reservatório não biodegradado. Perfis de DGGE muito similares foram observados para todas as amostras, e a diversidade dos filotipos bacterianos predominantes mostrou-se baixa. Os resultados de clonagem e seqüenciamento revelaram diferenças mais significativas entre as amostras de água de formação e de óleo do reservatório não biodegradado. Bacillus sp. e Halanaerobium sp. mostraram-se os componentes predominantes da comunidade bacteriana da presente na amostra de água de formação, ao passo que a amostra de óleo incluiu também Alicyclobacillus acidoterrestris, Rhodococcus sp., Streptomyces sp. e Acidithiobacillus ferrooxidans. A técnica de PCR-DGGE, combinada com clonagem e seqüenciamento dos produtos de PCR, revelou a presença de grupos taxonômicos não encontrados anteriormente nestas amostras quando métodos baseados em cultivo e na construção de bibliotecas de genes RNAr 16S foram utilizados, evidenciando a necessidade de um estudo polifásico a fim de contribuir para o conhecimento da diversidade microbiana em ambientes extremos como reservatórios de petróleo. <![CDATA[<b>População microbiana de solos contaminados pelo derramamento de petróleo no deserto Jordão-Iraque (região de Badia)</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300008&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Microbial populations' inhabitants in crude petroleum contaminated soils were analyzed in relation with the soil characteristics. A noticeable greater decline of bacterial counts and diversity but a prevalence of the genus Pseudomonas over the other identified genera in the fresh contaminated soils as compared to the old ones was observed.<hr/>Analisou-se a população microbiana de solos contaminados pelo derramamento de petróleo em função das características do solo. Uma diminuição notável foi observada nas contagens e diversidade bacterianas, mas observou-se a prevalência de Pseudomonas em relação aos demais gêneros identificados em solos recentemente contaminados, quando comparado com solos com contaminação antiga. <![CDATA[<b>Adesão de bactérias desnutridas por nitrogênio a solo</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300009&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt One of the main factors limiting the bioremediation of subsoil environments based on bioaugmentation is the transport of selected microorganisms to the contaminated zones. The characterization of the physiological responses of the inoculated microorganisms to starvation, especially the evaluation of characteristics that affect the adhesion of the cells to soil particles, is fundamental to anticipate the success or failure of bioaugmentation. The objective of this study was to investigate the effect of nitrogen starvation on cell surface hydrophobicity and cell adhesion to soil particles by bacterial strains previously characterized as able to use benzene, toluene or xilenes as carbon and energy sources. The strains LBBMA 18-T (non-identified), Arthrobacter aurescens LBBMA 98, Arthrobacter oxydans LBBMA 201, and Klebsiella sp. LBBMA 204-1 were used in the experiments. Cultivation of the cells in nitrogen-deficient medium caused a significant reduction of the adhesion to soil particles by all the four strains. Nitrogen starvation also reduced significantly the strength of cell adhesion to the soil particles, except for Klebsiella sp. LBBMA 204-1. Two of the four strains showed significant reduction in cell surface hydrophobicity. It is inferred that the efficiency of bacterial transport through soils might be potentially increased by nitrogen starvation.<hr/>Um dos principais fatores limitantes da biorremediação in situ de solos subterrâneos, baseada na bioaumentação, é o transporte dos microrganismos selecionados até o local contaminado. A caracterização das respostas fisiológicas dos microrganismos introduzidos no subsolo a condições de escassez nutricional, notadamente a avaliação de características que afetam a adesão celular ao solo, é fundamental para se prever o sucesso da bioaumentação. O objetivo deste trabalho foi determinar o efeito da desnutrição em meio com escassez de nitrogênio sobre a hidrofobicidade celular e a adesão ao solo de quatro isolados bacterianos previamente caracterizados como capazes de utilizar benzeno, tolueno ou xileno como fonte de carbono e energia. As linhagens LBBMA 18-T (não identificada), Arthrobacter aurescens LBBMA 98, Arthrobacter oxydans LBBMA 201, and Klebsiella sp. LBBMA 204-1 foram utilizadas nos experimentos. O cultivo das células em meio deficiente em nitrogênio causou uma redução significante na força de adesão das células às partículas do solo, exceto para a Klebsiella sp. LBBMA 204-1. Dois dos quatro isolados estudados sofreram alteração significativa na hidrofobicidade celular. Os resultados sugerem que a eficiência do transporte bacteriano através do solo pode ser aumentada pela desnutrição celular. <![CDATA[<b>Densidades populacionais e diversidade genética de actinomicetos associados a rizosfera de<i>Theobroma cacao</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300010&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt In spite of the acknowledged importance of growth-promoting bacteria, only a reduced number of studies were conducted with these microorganisms on Theobroma cacao. The objectives of this work were to study the population densities and genetic diversity of actinomycetes associated with the rhizosphere of cacao as a first step in their application in plant growth promotion and biological control. The populations densities of actinomycetes in soil and cacao roots were similar, with mean values of 1,0 x 10(6) CFU/g and 9,6 x 10(5) CFU/g, respectively. All isolates selected and used in this study were identified through sequencing analyses of a fragment of the rpoB gene that encodes the β-subunit of the RNA polymerase as species of the genus Streptomyces. In vitro cellulolytic, xilanolytic and chitinolytic activity, indolacetic acid production and phosphate solubilization activities were observed in most of the isolates tested. The data obtained in this study demonstrate that actinomycetes account for a higher percentage of the total population of culturable bacteria in soil than on cacao roots. Additionally, actinomycetes from the cacao rhizosphere are genetically diverse and have potential applications as agents of growth promotion.<hr/>Apesar da reconhecida importância das bactérias promotoras de crescimento, apenas um reduzido número de estudos foi conduzido com este grupo de microrganismos na cultura do cacaueiro. Os objetivos deste trabalho foram o estudo da densidade populacional e da diversidade genética de actinomicetos associados à rizosfera do cacaueiro como o primeiro passo para sua utilização na promoção de crescimento de mudas desta cultura e no controle biológico de doenças. As densidades populacionais de actinomicetos em amostras de solo e de raízes de cacaueiro foram semelhantes, com valores médios de 1,0 x 10(6) UFC/g e de 9,6 x 10(5) UFC/g, respectivamente. Todos os isolados selecionados para este estudo foram identificados através de análises de seqüências de um fragmento do gene rpoB, que codifica a β-subunidade da RNA polimerase, como pertencentes ao gênero Streptomyces. Dentre os isolados testados, constatou-se in vitro, a produção de celulase, xilanase, quitinase, ácido indolacético e a capacidade de solubilização de fosfato. Os dados obtidos demonstram que os actinomicetos representam uma maior proporção da população total de bactérias cultiváveis em solo do que em raízes. Adicionalmente, os actinomicetos da rizosfera do cacaueiro são geneticamente diversos e apresentam potencial para atuarem como agentes de promoção de crescimento. <![CDATA[<b>Detecção do <i>mycoplasma hyopneumoniae </i>pela reação em cadeia da polimerase em suínos apresentando problemas respiratórios</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300011&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Since Mycoplasma hyopneumoniae isolation in appropriate media is a difficult task and impractical for daily routine diagnostics, Nested-PCR (N-PCR) techniques are currently used to improve the direct diagnostic sensitivity of Swine Enzootic Pneumonia. In a first experiment, this paper describes a N-PCR technique optimization based on three variables: different sampling sites, sample transport media, and DNA extraction methods, using eight pigs. Based on the optimization results, a second experiment was conducted for testing validity using 40 animals. In conclusion, the obtained results of the N-PCR optimization and validation allow us to recommend this test as a routine monitoring diagnostic method for Mycoplasma hyopneumoniae infection in swine herds.<hr/>A Nested-PCR (N-PCR) tem como objetivo melhorar a sensibilidade do diagnóstico direto da Pneumonia Enzoótica Suína, pois o isolamento do Mycoplasma hyopneumoniae é trabalhoso tornando-se inviável na rotina. Neste trabalho, foi realizado um projeto piloto para a otimização da técnica de N-PCR, utilizando três variáveis: tipo de amostra biológica, meio de transporte da amostra e método de extração do DNA, utilizando oito animais. Os resultados obtidos foram empregados no segundo experimento para a validação do teste utilizando 40 animais. Os resultados obtidos, pela otimização da N-PCR, neste trabalho, permite sugerir esta prova como método de diagnóstico de rotina no monitoramento das infecções por Mycoplasma hyopneumoniae em granjas de suínos. <![CDATA[<b>Aspectos microbiológicos e histopatológicos da piometria canina</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300012&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt As pyometra is recognized as one of the main causes of disease and death in the bitch the purposes of this study were to evaluate microbiological and histopathological aspects of canine pyometra and to research the virulence factors of the E. coli isolates identifying possible risks to human health. The microbiological isolation from the intrauterine contents of 100 dogs with pyometra was carried out and the virulence factors in the E. coli strains were identified using PCR method. This study also consisted of the counting of microorganisms colonies forming units in samples of intrauterine content, tests of antimicrobial susceptibility of the E. coli isolates and the histological examination of the uterus. E. coli was the most prevalent microorganism isolated (76.6%) and 120 strains (79.5%) were positive for sfa, 86 (56.9%) were positive for cnf, 87 (57.6%) were positive for pap, 52 (34.4%) were positive for hly, 51 (33.8%) were positive for iuc and 5 (3.3%) were positive for afa genes. One observed more sensitivity of E. coli to norfloxacin, polimixin B, sulphazotrin, chloranfenicol and enrofloxacin. In 42% of the samples of uterine walls where microorganisms were isolated, the sizes of the areas of the inflammatory responses corresponded to 39-56%. Virulence factors were identified in 98.0% of the strains evaluated, demonstrating a high frequency of potentially pathogenic E. coli. It must be considered that dogs are animals that are living in close proximity to man for thousands of years and have an important role in the transmission of E. coli to other animals and to man.<hr/>A piometra é uma enfermidade da cadela adulta, sendo a doença reconhecida como uma das causas mais comuns de morte desta espécie animal. Os objetivos deste trabalho foram a avaliação de aspectos microbiológicos e histopatológicos da piometra canina e pesquisa de fatores de virulência de E. coli, identificando possíveis riscos para a saúde humana. Foi realizado o exame microbiológico de conteúdo intra-uterino de 100 cadelas com piometra bem como a contagem de unidades formadoras de colônias de microrganismos nestas amostras, testes de susceptibilidade "in vitro" aos antimicrobianos de E. coli e pesquisa de fatores de virulência nestas estirpes, e exame histopatológico de amostras de útero. Escherichia coli foi o microrganismo mais freqüentemente isolado (76,6%), sendo que 120 estirpes (79,5%) foram positivas para os genes sfa, 86 (56,9%) foram positivas para cnf, 87 (57,6%) foram positivas para pap, 52 (34,4%) foram positivas para hly, 51 (33,8%) foram positivas para iuc e 5 (3,3%) foram positivas para afa. Observou-se maior sensibilidade de E.coli à norfloxacina, polimixina B, sulfazotrim, cloranfenicol e enrofloxacina. Em 42% das amostras de parede uterina nas quais foram isolados microrganismos, os tamanhos das áreas de processo inflamatório corresponderam a 39-56%. Foram identificados fatores de virulência em 98,0% das estirpes de Escherichia coli avaliadas, demonstrando uma alta freqüência de E. coli potencialmente patogênica. Deve-se considerar que os cães são animais que vivem em proximidade aos homens há milhares de anos e possuem um papel importante na transmissão de E. coli aos outros animais e também ao homem. <![CDATA[<b>Comparação de anticorpos aglutinantes e neutralizantes do sorovar hardjo em fêmeas suínas imunizadas com duas bacterinas anti- leptospira comerciais</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300013&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt It was performed the comparison of the intensity and duration of agglutinating and neutralizing antibodies to serovar Hardjo in swines vaccinated with two commercial anti-leptospira bacterins. Sows no reactive to 24 Leptospira sp serovars in the microscopic agglutination test (MAT) were divided in three groups: Group A (n=08): received two vaccine A doses with 30 days interval, Group B (n=08) two vaccine B doses with 30 days interval and Group C (n=08): control no vaccinated against leptospirosis.Blood samples were collected each 30 days during six months following the first vaccination. The sera were tested by MAT and growth inhibition test (GIT) to serovar Hardjo in order to evaluate respectively agglutinating and neutralizing antibodies. It was found that neutralizing antibodies persisted for a longer time than the agglutinating ones and that the absence of agglutinating antibodies does not means in the absence of the neutralizing. The peaks of agglutinating antibodies was obtained at least 30 days earlier than that produced by neutralizing. The duration of both kinds of antibodies measured differed between the two bacterines tested. The period for inducing neutralizing antibodies against serovar Hardjo indicated that gilts must be immunized with two doses of whole culture anti-leptospira bacterines applied 30 days each other at least 90 days before the first mating. For the maintenance of hight levels of neutralizing antibodies the revaccinations must be performed every six months after the first vaccination.<hr/>Foi efetuada a comparação entre a intensidade e duração dos níveis de anticorpos neutralizantes e aglutinantes para o sorovar Hardjo em fêmeas suínas vacinadas com duas bacterinas comerciais anti-leptospirose. Animais caracterizados como não reatores para 24 sorovares de Leptospira sp pelo teste de soroaglutinação microscópica (SAM) e que nunca haviam sido vacinados contra a leptospirose foram divididos em três grupos: grupo A (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial anti-leptospirose A; grupo B (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias de bacterina comercial anti-leptospirose B e grupo C (n=08): controle, não vacinado contra a leptospirose. As colheitas de sangue foram efetuadas a cada 30 dias durante seis meses a partir da primeira vacinação. Os soros foram submetidos aos testes da SAM e de inibição do crescimento de leptospiras in vitro (ICL) para avaliar, respectivamente, os níveis de anticorpos aglutinantes e neutralizantes. Foi constatado que os anticorpos neutralizantes persistem por mais tempo que os aglutinantes e que a ausência de anticorpos neutralizantes não corresponde a ausência dos aglutinantes. Os picos de anticorpos aglutinantes foram obtidos pelo menos 30 dias antes dos produzidos pelos neutralizantes. Houve diferença nos níveis de anticorpos neutralizantes induzidos pelas duas bacterinas testadas. O período de indução de anticorpos neutralizantes contra o sorovar Hardjo indica que marrãs devem ser imunizadas com duas doses de bacterina anti-leptospirose aplicadas com 30 dias de intervalo e pelo menos 90 dias antes da primeira cobertura. A manutenção de níveis elevados de anticorpos neutralizantes exige revacinações semestrais. <![CDATA[<b>Isolamento e caracterização molecular de um isolado de <i>Ehrlichia canis</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300014&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt An Ehrlichia canis isolate was obtained from an naturally infected dog exhibiting clinical signs of ehrlichiosis in São Paulo Municipality, state of São Paulo, Brazil. The isolate was characterized by PCR and DNA sequencing of portions of the ehrlichial genes dsb, 16SrRNA, and p28. Partial dsb and 16S rRNA sequences were identical to three and five other E. canis strains, respectively, from different countries and continents (including North America, Africa, Asia and Europe). Conversely, the p28 partial sequence for this E. canis (São Paulo) differed by 1, 2, and 2 nucleotides from the corresponding sequences of the E. canis strains Jake (from USA), Oklahoma (USA), and VHE (Venezuela), respectively. The results in this study indicate that E. canis is the only recognized Ehrlichia species infecting dogs in Brazil.<hr/>Foi obtido um isolado de Ehrlichia canis a partir de um cão naturalmente infectado com sinais clínicos de erliquiose, oriundo do município de São Paulo, SP, Brasil. O isolado foi caracterizado molecularmente pela PCR e seqüenciamento de porções dos genes dsb,16S rRNA, e p28. A seqüência parcial dos genes dsb e 16Sr RNA apresentaram-se idênticas a três e cinco seqüências respectivamente, de E. canis provenientes de diferentes países e continentes (América do Norte, África, Ásia e Europa). Contrariamente, a seqüência parcial do gene p28 do isolado São Paulo diferiu em um nucleotídeo do isolado Jake (EUA) e dois nucleotídeos dos isolados Oklahoma (EUA) e VHE (Venezuelan Human Ehrlichia Venezuela). Atualmente, a E. canis é a única espécie de Ehrlichia que acomete cães no Brasil. <![CDATA[<b>Diferenciação molecular de <i>Escherichia coli</i> aviária por RAPD-PCR</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300015&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Escherichia coli is one of the most important bacterial avian pathogens and a common inhabitant of the gastrointestinal tract of animals. Most pathogenic E. coli can not be differentiated biochemically or by classic microbiologic methods. Molecular typing methods, particularly PCR, facilitated epidemiological and ecological studies of bacteria. Here we describe the application of a random amplified polymorphic DNA- polymerase chain reaction (RAPD-PCR) for molecular genetic differentiation of E. coli isolates in Iran. In this study 58 E. coli isolates including 4 standard strains, 3 food originated isolates, 33 avian isolates, 8 isolates form diarrheic calves and 10 isolates from unweaned diarrheic lambs were analyzed by RAPD-PCR using primer 1247(5/-AAG AGC CCG T-3/). The RAPD analysis showed that these isolates could be grouped into 33 RAPD types and avian isolates were discriminated into 29 genotypes. It was shown that the primer could not differentiate E. coli isolated from lambs. Discriminatory index for entire isolates was 0.912 and for avian isolates was 0.990. We concluded that RAPD-PCR can be used as a method for molecular differentiation of E. coli isolates.<hr/>Escherichia coli é um dos patógenos aviários mais importantes e um habitante comum do trato gastrointestinal de animais. A maioria das cepas patogênicas não pode ser diferenciada por métodos bioquímicos ou outros métodos microbiológicos clássicos. Métodos de tipagem molecular, particularmente PCR, têm facilitado os estudos epidemiológicos e ecológicos a respeito desse microrganismo. Nesse estudo, descrevemos a aplicação do RAPD-PCR para a diferenciação molecular de isolados de E.coli do Irã. No estudo, 58 isolados, incluindo 4 isolados padrão, 3 isolados de alimentos, 33 isolados de aves, 8 isolados de bezerros diarréicos e 10 isolados de carneiros diarréicos foram analisados por RAPD-PCR com o primer 1247 (5'-AAG AGC CCG T-3'). A análise mostrou que esses isolados podiam ser agrupados em 33 tipos RAPD, sendo os isolados de aves agrupados em 29 genótipos diferentes. Verificou-se que o primer utilizado não diferenciou os isolados de carneiros. O índice discriminatório para todos os isolados foi 0,912 e para os isolados de aves foi 0,990. Concluiu-se que o RAPD-PCR pode ser usado como método para diferenciação molecular de isolados de E. coli. <![CDATA[<b>Isolamento de <i>Escherichia coli </i>extraintestinal patogênica de cachorros diarréicos e seu perfil de resistência antimicrobiana</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300016&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt From January to December 2006, 92 Escherichia coli isolates from 25 diarrheic dogs were analyzed by screening for the presence of adhesin-encoding genes (pap, sfa, afa), hemolysin and aerobactin genes. Virulence gene frequencies detected in those isolates were: 12% pap, 1% sfa, 10% hemolysin and 6.5% aerobactin. Ten isolates were characterized as extraintestinal pathogenic E. coli (ExPEC) strains; all showed a multidrug resistance phenotype that may represent a reason for concern due the risk of dissemination of antimicrobial resistant genes to the microbiota of human beings.<hr/>Entre Janeiro e dezembro de 2006, 92 cepas de Escherichia coli isoladas de 25 cachorros diarréicos foram analisadas para a detecção de genes codificadores de adesinas (pap, sfa e afa), hemoisina e aerobactina. As freqüências dos genes de virulência detectadas nestas cepas foram: 12% pap, 1% sfa, 10% hemolisina e 6,5% aerobactina. Dez cepas foram caracterizadas como E. coli extraintestinal patogênica (ExPEC) e todas as cepas apresentaram um fenótipo de multiresistência, o que pode representar um motivo de preocupação, por causa do risco de disseminação de genes de resistência a drogas antimicrobianas para a microbiota dos seres humanos. <![CDATA[<b>Isolamento e caracterização de <i>Leptospira interrogans</i> de suínos abatidos no Estado de São Paulo, Brasil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300017&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt With the aim of isolating Leptospira spp., blood serum, kidney, liver and genital tract of 137 female swine (40 sows and 97 gilts) and also urine samples from 22 sows were collected in a slaughterhouse in the State of São Paulo, from April 2003 to August 2004. Four isolates were obtained from animals that presented microagglutination test (MAT) titers > 100 for the serovar Pomona and one was obtained from an animal negative by MAT in which Leptospira was isolated from the liver and reproductive tract. The presence of leptospiral DNA was investigated by PCR, and positive results were found in kidneys of 11 females, liver of two, genital tract of two and urine of one of them. Nephrosis, interstitial multifocal nephritis, moderate to severe changing, hyalines cylinders and hemorrhagic focuses, hepatic and uterine horns congestion were histological lesions observed in higher frequency in animals positive for leptospira. The silver impregnation (Warthin Starry) confirmed the presence of spirochetes in renal tubules of four females with positive leptospira cultures from kidneys. The serogroup of the five isolates was identified as Pomona by cross agglutination with reference polyclonal antibodies. Molecular characterization of the isolates was carried out by variable-number tandem-repeats analysis. All the isolates revealed a pattern distinct from the L. interrogans Pomona type strain, but identical to a previously identified pattern from strains isolated in Argentina belonging to serovar Pomona.<hr/>Amostras de soro sanguíneo, rim, fígado e trato genital de 137 fêmeas suínas (40 matrizes e 97 marrãs) e de urina de 22 matrizes foram colhidas em abatedouro no Estado de São Paulo, no período de abril de 2003 a agosto de 2004 tendo como objetivo o isolamento de Leptospira spp. Quatro estirpes foram isoladas de animais que apresentaram títulos, no teste de soroaglutinação microscópica (SAM) > 100, para o sorovar Pomona e de um animal, não reagente na SAM, em que houve isolamento de leptospiras do fígado e aparelho reprodutor. A presença do DNA de leptospira foi investigada pela técnica da PCR e foram observados resultados positivos nos rins de 11 fêmeas, no fígado de duas, no aparelho reprodutor de duas e na urina de uma delas. Nefrose, nefrite intersticial multifocal variando de moderada a severa, cilindros hialinos e focos hemorrágicos, congestão hepática e de cornos uterinos foram lesões histológicas evidenciadas com freqüência mais alta em animais positivos para leptospira. A impregnação argêntica (Warthin Starry) confirmou a presença de espiroquetas nos túbulos renais das quatro fêmeas onde houve cultura positiva para leptospiras dos rins. O sorogrupo dos cinco isolados foi identificado como Pomona pela técnica de aglutinação cruzada com anticorpos policlonais de referência. A caracterização molecular dos isolados foi realizada pela análise do número variável de repetições em tandem (VNTR). Os mesmos revelaram um padrão distinto da estirpe padrão de L. interrogans sorovar Pomona, porém idêntico a um padrão previamente identificado em estirpes isoladas na Argentina, pertencentes ao sorovar Pomona. <![CDATA[<b>Dermatofitose por <i>Microsporum canis </i>e <i>Microsporum gypseum </i>em <i>Bradypus variegatus </i>(Schiz, 1825<i>)</i> de vida livre no estado de Pernambuco, Brasil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300018&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Three cases of dermatophytosis in free living brown-throated three-toed sloths (Bradypus variegatus) in the Zona da Mata, North of Pernambuco State, Brazil, were studied. Two animals presented areas of alopecia on the pelvic member and thorax and one animal on the pelvic member only. The three animals presented scabs. Hair and scabs samples were submitted to microscopical examination after treatment with a 30 % KOH and cultivated in Mycosel Agar. The direct examination indicated the presence of arthrospores in the hair. Colonies grown after seven days of culture were confirmed as Microsporum based on examination of the structure of the macroconidia. This is the first observation of dermatophytosis caused by Microsporum canis and Microsporum gypseum in free living sloths in the State of Pernambuco.<hr/>Foram estudados três casos de dermatofitose em preguiças-de-garganta-marrom (Bradypus variegatus) de vida livre na Zona da Mata, Norte do Estado de Pernambuco, Brasil. Dois animais apresentavam áreas de alopecia nos membros pélvicos e torácicos e um apenas no membro pélvico. Em todos os animais foi observada a presença de crostas. As amostras de pêlos e crostas foram submetidas ao exame microscópico direto com KOH a 30% e cultivo em Ágar Mycosel. Ao exame direto foram observados artrosporos nos pêlos e sete dias após o cultivo foram observadas colônias sugestivas do gênero Microsporum, confirmadas através da observação da estrutura dos macroconídeos. Trata-se do primeiro relato de ocorrência de dermatofitose por Microsporum canis e Microsporum gypseum em preguiças de vida livre no Estado de Pernambuco. <![CDATA[<b><i>Mycobacterium fortuitum</i></b>: <b>uma alternativa para a etapa de pré-adsorção no sorodiagnóstico da paratuberculose</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300019&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt ELISAs for paratuberculosis employ a preadsorption step with Mycobacterium phlei to diminish unspecific reactions As M. fortuitum is one of the most frequent environmental mycobacteria, the purpose of this pilot study was to evaluate its use as an alternative for the preadsorption in ELISAs for paratuberculosis. Results suggest that M. fortuitum can be an alternative instead of or associated to M. phlei with comparable results (κ > 0.8) to conventional ELISAs using M. phlei as a preadsorption antigen.<hr/>Ensaios de sorodiagnóstico de paratuberculose (ELISA) utilizam Mycobacterium phlei na etapa de pré-adsorção para diminuir reações inespecíficas. Uma vez que M. fortuitum é uma das micobactérias atípicas mais isoladas no Brasil, o objetivo central deste estudo foi averiguar a possibilidade de sua utilização como antígeno da etapa de pré-adsorção destes testes. Os resultados sugerem que M. fortuitum apresentou resultados comparáveis (κ > 0.8) aos alcançados com M. phlei e que, portanto poderia ser uma alternativa ao invés ou associado a M. phlei na etapa de pré-adsorção de ELISAs para paratuberculose. <![CDATA[<b>Comportamento de <i>L. monocytogenes</i> em mortadelas fatiadas e embaladas a vácuo</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300020&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt This study evaluated the growth of naturally occurring L. monocytogenes in sliced, vacuum-packed mortadella samples during storage at 5ºC until the expiration date. Tukey's test indicated that counts of L. monocytogenes on 0, 10, 20, 30 and 40 days of storage were significantly different (p<0.05), indicating growth during shelf life. In three trials, the mean increase was 1.72 log cycles. Vacuum packing and storage under refrigeration were not effective in controlling the growth of L. monocytogenes in sliced mortadella, indicating that good manufacturing practices and implemented HACCP programs are essential to assure safety of this product.<hr/>O presente trabalho avaliou a multiplicação de L. monocytogenes naturalmente presente em mortadelas fatiadas, embaladas a vácuo e estocadas a 5ºC durante sua vida de prateleira. O teste Tukey indicou que as populações de L. monocytogenes nos tempos 10, 20, 30 e 40 dias diferiram significativamente (p<0,05) indicando multiplicação durante o armazenamento. Em três repetições, o aumento médio foi de 1,80 ciclos log. A embalagem a vácuo e estocagem sob refrigeração não foram suficientes para o controle da multiplicação de L. monocytogenes em mortadelas fatiadas, indicando que as boas práticas de fabricação e um sistema HACCP implantado são fundamentais para assegurar a segurança desse produto. <![CDATA[<b>Persistência de <i>Arcobacter butzleri</i> CCUG 30404 em superfícies de plástico, aço inox e vidro</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300021&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt The persistence of A. butzleri CCUG 30484 on various surfaces under 32% and 64% relative humidity suspended in physiological saline or nutrient broth to simulate relatively clean or soiled conditions was studied using various isolation techniques. Our study revealed that A. butzleri CCUG 30484 cells were able to survive for a considerable period of time, even after the droplet of suspending medium has been visibly dried. An extended survival on polypropylene coupons at both humidity levels was observed, particularly at soiled conditions.<hr/>Estudou-se a persistência de Arcobacter butzleri CCUG 30404 em várias superfícies de contato com alimentos a 32% e 64% de umidade relativa, suspenso em salina fisiológica e caldo nutriente para simular condições limpas e sujas. Nosso estudo indicou que A. butzleri CCUG 30404 foi capaz de sobreviver por longo tempo, mesmo após a secagem da gota. Observou-se que a sobrevivência for mais prolongada nos cupons de polipropileno, especialmente em condições sujas. <![CDATA[<b>Incidência e distribuição de fungos filamentosos durante a fermentação, secagem e armazenamento de frutos e grãos de café (<i>Coffea arabica</i> L.)</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300022&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt The objective of this work was to isolate and characterize filamentous fungi present in different stages of harvest, fermentation, drying and storage of coffee beans processed by natural method. The cherries were hand-picked and then placed on a cement drying platform where they remained until reached 11% of humidity. Microbial counts were found in all samples during fermentation and drying of the coffee beans. Counts of fungi in the coffee cherries collected from the tree (time 0) were around 1.5 x 10³ CFU/g. This number increased slowly during the fermentation and drying reaching values of 2 x 10(5) CFU/g within 22 days of processing. Two hundred and sixty three isolates of filamentous fungi were identified. The distribution of species during fermentation and drying was very varied while there was a predominance of Aspergillus species during storage period. The genera found were Pestalotia (4), Paecelomyces (4), Cladosporium (26), Fusarium (34), Penicillium (81) and Aspergillus (112) and comprised 38 different species.<hr/>O objetivo deste estudo foi isolar e caracterizar fungos filamentosos presentes em diferentes estágios de beneficiamento de café processado pelo método natural, incluindo: colheita, fermentação, secagem e armazenamento. O café cereja foi colhido manualmente e então colocado em uma plataforma de cimento, onde permaneceu até atingir 11% de umidade. A contagem microbiana foi realizada em todas as amostras durante a fermentação e secagem do café. A população de fungos filamentosos no café cereja ainda nos pés (tempo 0) foi em torno de 1,5 x 10³ UFC/g. Este número aumentou vagarosamente durante a fermentação e secagem, alcançando valores de 2 x 10(5) UFC/g em 22 dias do processamento. Duzentos e sessenta e três isolados de fungos filamentosos foram identificados. A distribuição das espécies durante fermentação e secagem foi bastante variada, mas no armazenamento dos grãos ocorreu o predomínio de espécies de Aspergillus. Foram encontradas 38 espécies de fungos distribuídas nos seguintes gêneros: Pestalotia (4), Paecelomyces (4), Cladosporium (26), Fusarium (34), Penicillium (81) e Aspergillus (112). <![CDATA[<b>Avaliação quantitativa de <i>Listeria monocytogenes </i>em surubim (<i>Pseudoplatystoma</i> sp) fresco e processado</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300023&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt L. monocytogenes is a foodborne psychrotrophic bacterial pathogen of special importance for minimally processed foods. In this work, it was enumerated in samples of surubim fish by MPN technique. The population of L. monocytogenes was estimated as < 0.012 MPN/cm² in fresh and < 0.03 MPN/g in minimally processed fish.<hr/>L. monocytogenes é um patógeno psicrotrófico transmitido por alimentos, de importância especial para alimentos minimamente processados. Neste trabalho, a bactéria foi enumerada em amostras de peixe surubim utilizando-se a técnica do NMP. A população de L. monocytogenes foi estimada como < 0.012 NMP/cm² do peixe fresco e < 0.03 NMP/g do peixe minimamente processado. <![CDATA[<b>Quantificação e perfil molecular de <i>Salmonella</i> isolada de alimentos envolvidos em surtos de salmonelose no Rio Grande do Sul</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300024&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Data concerning the prevalence and populations of Salmonella in foods implicated in outbreaks may be important to the development of quantitative microbial risk assessments of individual food products. In this sense, the objective of the present study was to assess the amount of Salmonella sp. in different foods implicated in foodborne outbreaks in Rio Grande do Sul occurred in 2005 and to characterize the isolated strains using phenotypic and genotypic methods. Nineteen food samples involved in ten foodborne outbreaks occurred in 2005, and positive on Salmonella isolation at the Central Laboratory of the Health Department of the State of Rio Grande do Sul, were included in this study. Food samples were submitted to estimation of Salmonella using the Most Probable Number (MPN) technique. Moreover, one confirmed Salmonella colony of each food sample was serotyped, characterized by its XbaI-macrorestriction profile, and submitted to antimicrobial resistance testing. Foods containing eggs, mayonnaise or chicken were contaminated with Salmonella in eight outbreaks. Higher counts (>10(7) MPN.g-1) of Salmonella were detected mostly in foods containing mayonnaise. The isolation of Salmonella from multiple food items in five outbreaks probably resulted from the cross-contamination, and the high Salmonella counts detected in almost all analyzed samples probably resulted from storing in inadequate temperature. All strains were identified as S. Enteritidis, and presented a unique macrorestriction profile, demonstrating the predominance of one clonal group in foods involved in the salmonellosis outbreaks. A low frequency of antimicrobial resistant S. Enteritidis strains was observed and nalidixic acid was the only resistance marker detected.<hr/>Dados sobre a prevalência e a população de Salmonella em alimentos implicados em surtos podem contribuir na condução de análises de risco. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi determinar a quantidade de Salmonella sp. presente em alimentos implicados em surtos ocorridos no Rio Grande do Sul em 2005 e caracterizar os isolados por meio de técnicas fenotípicas e genotípicas. Dezenove amostras de alimentos obtidas em dez surtos ocorridos em 2005 e identificadas como positivas para Salmonella no Laboratório Central da Secretaria da Saúde do Estado do Rio Grande do Sul foram incluídas no estudo. A quantificação de Salmonella foi feita pela técnica do Número Mais Provável (NMP). Ao lado disto, uma colônia de Salmonella obtida de cada amostra de alimento foi submetida à sorotipificação, macro-restição com XbaI e determinação de resistência a antimicrobianos. Salmonella esteve presente em alimentos a base de ovos, maionese e frango em oito surtos. As contagens mais elevadas (>10(7) NMP.g-1) foram detectadas principalmente em alimentos contendo maionese. O isolamento de Salmonella de vários alimentos em cinco surtos resultou, provavelmente, da contaminação cruzada, enquanto as elevadas contagens encontradas, em quase todos os alimentos, podem ser explicadas por armazenamento em temperatura inadequada. Todos os isolados foram identificados como S. Enteritidis, e apenas um perfil foi encontrado na macro-restrição, demonstrando a predominância de um grupo clonal desse sorovar nos surtos de salmonelose. Uma baixa freqüência de isolados de S. Enteritidis resistentes a antimicrobianos foi encontrada, sendo a resistência ao ácido nalidíxico o único perfil encontrado. <![CDATA[<b>Produção de xilanase com resíduos lignocelulósicos ricos em xilana por uma cepa local de <i>Trichoderma viride </i>isolada de solo</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300025&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt In the present study, cultural and nutritional conditions for enhanced production of xylanase by a local soil isolate of Trichoderma viride, using various lignocellulosic substrates in submerged culture fermentation have been optimized. Of the lignocellulosics used, maize straw was the best inducer followed by jowar straw for xylanase production. The highest activity achieved was between 14 to 17 days of fermentation. A continuous increase in xylanase production was observed with increasing level of lignocellulosics in the medium and highest activity was observed with maize straw at 5% level. Xylanase production with higher levels of lignocellulosics (3 to 5%) of maize, jowar and barseem was found to be higher as compared to that with commercial xylan as carbon source. Sodium nitrate was the best nitrogen source among the six sources used. Maximum xylanase production was achieved with initial medium pH of 3.5-4.0 and incubation temperature of 25ºC.The enzyme preparation was effective in bringing about saccharification of different lignocellulosics. The xylanase production could be further improved by using alkali treated straw as carbon source.<hr/>Neste estudo, otimizou-se as condições culturais e nutricionais para produção aumentada de xilanase por uma cepa local de Trichoderma viride isolada de solo, empregando-se vários substratos lignocelulósicos, em fermentação submersa. Entre os substratos utilizados, o melhor indutor de produção de xilanase foi palha de milho, seguido de palha de sorgo. A atividade mais alta foi obtida entre 14 e 17 dias de fermentação. Com palha de milho observou-se um aumento contínuo na produção de xilanase com o aumento da concentração dos substratos lignocelulósicos no meio, sendo que a melhor atividade foi obtida com 5% de palha de milho. A produção de xilanase com níveis mais altos de (3 a 5%) de milho, sorgo e forragem verde (barseem) foi mais levada do que com xilana comercial como fonte de carbono. Entre as fontes de nitrogênio testadas, a melhor foi nitrato de sódio. Produção máxima de xilanase foi obtida quando o pH inicial do meio foi 3,5 4,0 e a temperatura de incubação 25ºC. A enzima foi eficiente na sacarificação de diferentes substratos lignocelulósicos. A produção de xilanase poderia ser aumentada empregando-se álcali ao invés de palha tratada como fonte de carbono. <![CDATA[<b>Identificação de <i>Lactobacillus</i> UFV H2b20 (linhagem probiótica) através de hibridização DNA-DNA</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300026&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Sequence analyses of the 16S rDNA gene and DNA-DNA hybridization tests were performed for identification of the species of the probiotic Lactobacillus UFV H2b20 strain. Using these two tests, we concluded that this strain, originally considered Lact. acidophilus, should be classified as Lact. delbrueckii.<hr/>Análise da seqüência do gene 16S rDNA e ensaios de hibridização DNA_DNA foram empregados para identificar a espécie da cepa probiótica Lactobacillus UFV H2b20. Empregando-se estes dois testes, concluímos que esta cepa, originalmente considerada Lact. acidophilus, deve ser classificada como Lact. delbrueckii. <![CDATA[<b>α</b><b>-amilase alcalina termoestável de <i>Bacillus</i> sp AB68 halotolerante-alcalifílico</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300027&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt An alkaliphilic and highly thermostable α-amylase producing Bacillus sp. was isolated from Van soda lake. Enzyme synthesis occurred at temperatures between 25ºC and 40ºC. Analysis of the enzyme by SDS-PAGE revealed a single band which was estimated to be 66 kDa. The enzyme was active in a broad temperature range, between 20ºC and 90ºC, with an optimum at 50ºC; and maximum activity was at pH 10.5. The enzyme was almost completely stable up to 80ºC with a remaining activity over 90% after 30 min pre-incubation. Thermostability was not increased in the presence of Ca2+. An average of 75% and 60ºC of remaining activity was observed when the enzyme was incubated between pH 5 and 9 for 1 h and for 2 h, respectively. The activity of the enzyme was inhibited by SDS and EDTA by 38% and 34%, respectively.<hr/>Bacillus sp AB68 alcalifílico produtor de α-amilase alcalina termoestável foi isolado do lago Van soda. A síntese da enzima ocorreu entre 25ºC e 40ºC. A análise da enzima por SDS-PAGE revelou uma única banda estimada em 66 kDa. A enzima foi ativa em uma ampla faixa de temperatura, entre 20ºC e 90ºC, com um ótimo a 50ºC. A atividade máxima foi em pH 10,5. A enzima foi estável até 80ºC, mantendo 90% de atividade após 30 min de pré-incubação. A termoestabilidade não aumentou na presença de Ca2+. Quando incubada em pH entre 5 e 9 por 1h e por 2h, a enzima manteve 75% e 60% de atividade, respectivamente. SDS e EDTA causaram redução de 38% e 34% na atividade da enzima, respectivamente. <![CDATA[<b>Um novo protocolo de PCR para a identificação de <i>Fusarium graminearum</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300028&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt The main objective of this work was to develop a PCR protocol for the identification of Fusarium graminearum, based on a pair of primers targeted to a segment of the 3' coding region of the gaoA gene that codes for the enzyme galactose oxidase (GO). This region has low homology with the same region of GO genes from other fungi. Genomic DNA from 17 strains of Fusarium spp. isolated from diseased cereals, from several other Fusarium species, and from other fungi genera was analyzed in a PCR assay using this primer set. The 17 strains of Fusarium spp. were also analyzed for the GO enzyme production in submerse fermentation in a new formulated liquid medium. All strains that were morphologically and molecularly identified as F. graminearum were able to secrete the enzyme and had a positive result in the used PCR protocol. No DNA fragment was amplified using genomic DNA from other Fusarium species and species of other fungi genera. The results suggest that the proposed PCR protocol is specific and can be considered as a new molecular tool for the identification of F. graminearum. In addition, the new formulated medium is a cheap alternative for screening for GO screening production by F. graminearum.<hr/>O principal objetivo deste trabalho foi desenvolver um novo protocolo de PCR para identificação de isolados de Fusarium graminearum, baseado no uso de um par de iniciadores direcionado para um segmento da região 3' codificadora do gene gaoA que codifica a enzima galactose oxidase (GO). Esta região possui baixa homologia com a mesma região de genes da GO de outros fungos. O DNA genômico de 17 cepas de Fusarium spp. isoladas de cereais infectados com sintomas, de vários outras espécies de Fusarium e de outros gêneros de fungos foi analisado em um protocolo de PCR utilizando os iniciadores desenhados. Os 17 isolados de Fusarium spp. também foram analisados para a produção da enzima GO em fermentação submersa em um novo meio líquido. Todas as cepas que foram morfologicamente e molecularmente identificadas como F. graminearum foram capazes de secretar a enzima e tiveram um resultado positivo no protocolo de PCR, utilizando os iniciadores direcionados para o gene gaoA. Nenhum fragmento de DNA foi amplificado quando foi utilizado o DNA genômico de várias outras espécies de Fusarium e de espécies de outros gêneros de fungos. Os resultados sugerem que o protocolo de PCR gerado é específico e pode ser considerado como uma nova ferramenta molecular para a identificação de cepas de F. graminearum. Além disso, o meio líquido formulado é uma alternativa barata para a avaliação da produção de GO por F. graminearum. <![CDATA[<b>Condições de cultivo em meio líquido para produção de biomassa e metabólitos antibacterianos por <i>Polyporus tricholoma</i> Mont.</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300029&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Basidiomycete fungi of the Polyporus genus are a source of secondary metabolites which are of medicinal interest as antibacterial compounds. As these substances are produced in a small amount by the fungi, the study of the cultivation conditions in vitro that could possibly optimize their production seems of major importance. The effects of glucose and lactose, pH and agitation on biomass concentration and on the specific growth rate caused by the basidiomycete Polyporus tricholoma were investigated. The initial pH (4.5, 6.5 and 8.5) was autoregulated at pH 5.5, and the agitation increased the mycelial growth and the specific growth rate. The high concentration of carbon sources (4%) increased biomass production. The lactose concentration and the absence of agitation were determinant in the production of antibacterial metabolites. The characterization of the antibacterial substance by GC-MS indicated a major compound, isodrimenediol, produced by the fungus Polyporus tricholoma with activity against Staphylococcus aureus.<hr/>Os fungos basidiomicetos do gênero Polyporus são fonte de metabólitos secundários de interesse medicinal como os compostos antibacterianos. Como estas substâncias são produzidas em pequenas quantidades pelos fungos, o estudo de condições de cultivo in vitro que otimizem sua produção, é de fundamental importância. Os efeitos da glicose e lactose, pH e agitação na concentração da biomassa e na velocidade específica de crescimento realizada pelo basidiomiceto Polyporus tricholoma foram investigados. O pH inicial (4.5, 6.5 e 8.5) foi autoregulado para pH 5.5, e a agitação aumentou o crescimento micelial e a velocidade específica de crescimento. A maior concentração das fontes de carbono (4%) incrementou a produção de biomassa. A concentração de lactose e a ausência de agitação foram determinantes na produção dos metabólitos antibacterianos. A caracterização da substância antibacteriana por CG-EM mostrou como componente majoritário o isodrimenediol, produzido pelo fungo Polyporus tricholoma, com atividade contra Staphylococcus aureus. <![CDATA[<b>Atividade antibacteriana de quatro anti-sépticos bucais contendo triclosan contra <i>Staphylococcus aureus</i> da saliva</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300030&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt The maximum inhibitory dilution (MID) of triclosan-based mouthwashes against 28 Staphylococcus aureus strains was evaluated. Dilutions ranging from 1/10 to 1/655,360 were prepared. Strains were inoculated using a Steers multipoint inoculator. The MID was considered as the maximum dilution capable of inhibiting microorganism growth. The mouthwashes presented different MIDs.<hr/>A Diluição Inibitória Máxima (DIM) de anti-sépticos bucais à base de triclosan contra 28 cepas de Staphylococcus aureus foi avaliada. Diluições de 1/10 a 1/655.360 foram preparadas. As cepas foram inoculadas com inoculador multipontual Steers. A DIM foi a maior diluição do anti-séptico que inibiu crescimento microbiano. Os anti-sépticos apresentaram diferentes DIMs. <![CDATA[<b>Infecção por papilomavírus humano em mulheres atendidas em um serviço de prevenção ao câncer do colo do útero em Natal, Brasil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300031&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt We analyzed cervical specimens of 202 women, aged 15 to 64 years, attended at Luis Antonio Hospital, Natal, Brazil, to determine the prevalence of HPV and identify the more frequent genotypes and risk factors for HPV infection in women attended at a cervical cancer screening service. Two specimens were collected from each patient: one for cytological examination and the other to detect HPV DNA by PCR, and typing by dot blot hybridization. A total of 54.5% of the sample had normal cytology and 45.5% had cytological alterations. HPV was detected in 24.5% of the cytologically normal women and in 59.8% of those with altered cytology. Both single and double HPV infection increased the likelihood of cytological alterations. Thirteen types of HPV were identified, most of which were high risk. HPV 16 was the most prevalent single-type infection, followed by HPV 58. The most frequent double infection was the association between HPV 56 and 57. The prevalence of HPV in cytologically normal women was greater than that reported for countries on all the continents except Africa. The inverse was observed in women with cytological alterations. The distribution of HPV types was similar to that described for the Americas, with some differences. Multiple sexual partners was the only risk factor showing an association with the presence of HPV infection.<hr/>Foram analisados espécimes cervicais de 202 mulheres, com idade variando de 15 e 64 anos, atendidas no Hospital Luis Antonio, Natal-RN, objetivando determinar a prevalência do HPV, identificar genotipos do vírus e possíveis fatores de risco para a infecção por esse patógeno, em mulheres atendidas em um serviço de rastreamento do câncer do colo do útero. De cada paciente foram coletados dois espécimes: um destinado ao exame citológico e outro para detecção do HPV por PCR, com tipagem por hibridização "dot blot". Das pacientes incluídas no estudo, 54,5% apresentaram citologia normal e 45,5% tinham alterações citológicas. HPV foi detectado em 24,5% das mulheres com citologia normal, e em 59,8% das que apresentaram citologia alterada. Tanto a infecção por um único tipo de HPV, quanto a infecção simultânea por dois tipos diferentes do vírus aumentaram a chance de ocorrência de alterações citológicas. Foram identificados treze tipos de HPV, a maioria de alto risco. Nas infecções por um único tipo, o HPV 16 foi o mais prevalente, seguido do HPV 58. Na infecção dupla a associação mais freqüente foi entre HPV 56 e 57. A prevalência do HPV nas mulheres com citologia normal foi superior a relatada para países de todos os continentes, exceto África. Nas mulheres com alterações citológicas observou-se resultado inverso. A distribuição dos tipos de HPV foi semelhante à descrita para Américas, com algumas diferenças. Dos fatores de risco analisados, o relacionamento sexual com múltiplos parceiros foi o único que apresentou associação com a presença de infecção por HPV. <![CDATA[<b>Isolamento de cepas de <i>Pseudomonas aeruginosa</i> provenientes do meio ambiente e de equipos dentarios em clinicas dentarias em Barretos, São Paulo, Brasil; analises da susceptibilidade das cepas a drogas antimicrobianas</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300032&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt A wide variety of opportunistic pathogens has been detected in the tubing supplying water to odontological equipment, in special in the biofilm lining of these tubes. Among these pathogens, Pseudomonas aeruginosa, one of the leading causes of nosocomial infections, is frequently found in water lines supplying dental units. In the present work, 160 samples of water, and 200 fomite samples from forty dental units were collected in the city of Barretos, State of São Paulo, Brazil and evaluated between January and July, 2005. Seventy-six P. aeruginosa strains, isolated from the dental environment (5 strains) and water system (71 strains), were tested for susceptibility to six antimicrobial drugs most frequently used against P. aeruginosa infections. Susceptibility to ciprofloxacin, followed by meropenem was the predominant profile. The need for effective means of reducing the microbial burden within dental unit water lines is emphasized, and the risk of exposure and cross-infection in dental practice, in special when caused by opportunistic pathogens like P. aeruginosa, are highlighted.<hr/>Uma ampla variedade de patógenos oportunistas tem sido detectadas nos tubos de alimentação de água dos equipos odontológicos, particularmente no biofilme formado na superfície do tubo. Entre os patógenos oportunistas encontrados nos tubos de água, Pseudomonas aeruginosa é reconhecida como uma das principais causadoras de infecções nosocomiais. Foram coletadas 160 amostras de água e 200 amostras de fomites em quarenta clinicas odontológicas na cidade de Barretos, São Paulo, Brasil, durante o período de Janeiro a Julho de 2005. Setenta e seis cepas de P. aeruginosa, isoladas a partir dos fomites (5 cepas) e das amostras de água (71 cepas), foram analisadas quanto à susceptibilidade à seis drogas antimicrobianas freqüentemente utilizadas para o tratamento de infecções provocadas por P. aeruginosa. As principais suscetibilidades observadas foram para a ciprofloxacina, seguida pelo meropenem. A necessidade de um mecanismo efetivo para reduzir a contaminação bacteriana dentro dos tubos de alimentação de água dos equipos odontológicos foi enfatizada, e o risco da exposição ocupacional e infecção cruzada na prática odontológica, em especial quando causada por patógenos oportunistas como a P. aeruginosa foi realçado. <![CDATA[<b>Diversidade genética e suscetibilidade a antifúngicos de <i>Trichosporon asahii</i> isolado de pacientes de Unidades de Terapia Intensiva</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300033&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Trichosporon asahii is an opportunistic pathogen, associated with a high mortality rate in immunocompromised patients. In this study, ten isolates, recovered from oral cavity and urine of patients in Intensive Care Units (ICU) over six months, were identified by classical and molecular methods, typed by RAPD and tested in vitro for susceptibility to fluconazole, itraconazole, 5-flucytosine and amphotericin B. A total agreement between the identification of Trichosporon sp by PCR based on sequences of the Internal Transcribed Spacer Regions (ITS) and on the sequences of small-subunit (SSU) ribosomal DNA (rDNA) was found. Randomly amplified of polymorphic DNA (RAPD), with primers P6 and M13, was used to determine the genomic profiles. The dendogram analysis indicated that almost all strains showed similarity >0.9 among them and all strains were multidrug-resistant. This study brings new results on the identification and genotyping of T. asahii isolated from Brazilian ICU patients and information about their antifungal drugs susceptibility.<hr/>Trichosporon asahii é um patógeno oportunista que apresenta altos índices de mortalidade em pacientes imunocomprometidos. No presente trabalho, dez cepas foram isoladas da cavidade bucal e urina de pacientes internados na Unidade de Terapia Intensiva (UTI) por seis meses. Todos os isolados foram identificados por métodos clássicos e moleculares, tipados por RAPD e testados in vitro quanto à sensibilidade ao fluconazol, itraconazol, 5-fluorocitosina e anfotericina B. Houve concordância total entre a identificação de Trichosporon sp por PCR baseado na seqüência da região ITS (Internal Transcribed Spacer) e na seqüência da subunidade menor do DNA ribossômico (rDNA). Os perfis genéticos foram determinados por RAPD utilizando dois iniciadores P6 e M13. A análise do dendrograma mostrou que a maioria das amostras apresentou alta similaridade entre elas (>0.9) e todas foram multidrogas resistentes. Este estudo traz novos resultados em relação à identificação e genotipagem de isolados brasileiros de T. asahii em pacientes internados em UTI, bem como dados sobre o perfil de sensibilidade aos antifúngicos. <![CDATA[<b>Produção de quatro linhagens de <i>Agaricus bisporus</i> em três formulações de compostos e análises bromatológicas dos cogumelos produzidos</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300034&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Three compost formulations, consisting of two varieties of Cynodom dactylon (L.) Pers. (Coast-cross and Tyfton) and oat (Avena sativa) straw were tested for the cultivation of A. bisporus strains ABI-01/01, ABI-04/02, ABI-05/03, and ABI-06/04. A completely randomized experimental design in a factorial scheme was adopted, with 12 treatments (4 A. bisporus strains × 3 types of compost) and 8 replicates. Each experimental unit corresponded to one box containing 12 12.5 kg fresh wet compost. The data were submitted to analysis of variance and the means were compared by Tukey test. According to the results, productivity of mushrooms was influenced by strain and/or compost type. It was also verified that crude protein, ash, and crude fiber contents in the mushroom varied with A. bisporus strain and straw used in the formulation of the compost.<hr/>Três formulações de composto, à base de palhas de Cynodom dactylon (L.) Pers. (cultivares Coast-cross e Tyfton) e Aveia-Avena sativa, foram testadas no cultivo das linhagens ABI-01/01, ABI-04/02, ABI-05/03 e ABI-06/04 de A. bisporus. O delineamento experimental foi em esquema fatorial, inteiramente casualizado com 12 tratamentos (4 linhagens de A. bisporus x 3 tipos de composto) e 8 repetições. Cada unidade experimental constou de uma caixa com 1212,5 kg de composto fresco úmido. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey. De acordo com os resultados obtidos verificou-se que a produção de cogumelos foi influenciada pela linhagem e/ou pelo tipo de composto. Também verificou-se que o teor de proteína bruta, cinzas e fibra bruta de basidiomas variou com a linhagem de A. bisporus e com o tipo de palha utilizada na formulação do composto. <![CDATA[<b>Caracterização morfológica e citoquímica dos esporos e lamelas de <i>Lepista sordida</i> (Fungi: Basidiomycota)</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300035&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt Some ultrastructural and cytochemical aspects of Lepista sordida are described. Basidiospores with verruculose and irregular ornamentations were observed through scanning electron microscopy. Confocal microscopy indicated that most of them exhibited a single large lipid body, no acidic vesicles and nucleus localized in the cell periphery.<hr/>Este trabalho descreve aspectos ultraestruturais e citoquímicos de Lepista sordida. Basidiósporos recobertos com ornamentações verruculosas e irregulares foram observados através de microscopia eletrônica de varredura. Através de microscopia confocal verificou-se que a maioria apresentava um grande corpo lipídico, ausência de vesículas ácidas e núcleo localizado na periferia. <![CDATA[<b>Melhoramento da produção de xilanase por <i>Cochliobolus sativus </i>por fermentação em estado sólido</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822008000300036&lng=pt&nrm=iso&tlng=pt The xylanase production by Cochliobolus sativus strain Cs6 was improved under solid state fermentation (SSF). High xylanase activity (1079 U/g) was obtained when wheat straw was used after 8 days of incubation. Combinations of sodium nitrate with peptone or yeast extract resulted in an increased xylanase production (1543 and 1483 U/g, respectively). The Cs6 strain grown in SSF in a simple medium, proved to be a promising microorganism for xylanase production.<hr/>A produção de xilanase por Cochliobolus sativus cepa Cs6 SATIVUS por fermentação em estado sólido (SSF) foi melhorada. Com o emprego de palha de trigo, obteve-se elevada atividade de xilanase (1079 U/g) após 8 dias de incubação. Combinações de nitrato de sódio com peptona ou extrato de levedura aumentaram a produção de xilanase (1543 e 1483 U/g, respectivamente). Comprovou-se que a cepa Cs6, cultivada em SSF em meio simples, é um microrganismo promissor para produção de xilanase.