Scielo RSS <![CDATA[Brazilian Journal of Microbiology]]> vol. 39 num. 4 lang. en <![CDATA[SciELO Logo]]> <![CDATA[<strong><i>16S rRNA</i></strong><strong> region based PCR protocol for identification and subtyping of <i>Parvimonas micra</i></strong>]]> The present study established a PCR protocol in order to identify Parvimonas micra and to evaluate the intra-species diversity by PCR-RFLP of 16S rRNA partial sequence. The data indicated that the protocol was able to identify this species which could be clustered in five genotypes.<hr/>O presente estudo estabeleceu um protocolo de PCR com a finalidade de identificar a espécie Parvimonas micra e avaliar a diversidade intra-espécie utilizando a técnica PCR-RFLP do gene que codifica o rRNA 16S. Os dados indicaram que o protocolo possibilitou a identificação da espécie e a distinção de 5 grupos genotípicos. <![CDATA[Extended-spectrum β-lactamases producing <i>Klebsiella pneumoniae </i>isolated in two hospitals in Goiânia/Brazil: detection, prevalence, antimicrobial susceptibility and molecular typing]]> This study was developed to evaluate the prevalence of extended-spectrum β-lactamases (ESBL) producing Klebsiella pneumoniae in two hospitals (A and B) in Goiânia, GO, Brazil. The antimicrobial susceptibility of the isolates was determined using the MicroScan WalkAway (Dade Behring, USA). Tests to evaluate the genetic correlation between the isolates were also performed. For the ESBL phenotypic test, the Double-disk diffusion (DD) method was used. The strainsisolated in Hospital B were submitted to DNA analysis by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). The study showed high prevalence of ESBL-producing K. pneumoniae (25% in hospital A and 66.7% in hospital B), with high rates of antimicrobial resistance. The most active compound was imipenem (100% susceptibility in vitro). The PFGE test showed similiarity in five strains and variability in six strains.The high prevalence of ESBL-producing Klebsiella may be due to individual selection and to dissemination of a common strain.<hr/>Este estudo foi desenvolvido para avaliar a prevalência de Klebsiella pneumoniae produtoras de ESBLem dois hospitais (A e B) de Goiânia, GO, Brasil. Os isolados foram analisados quanto à resistência a antibióticos através do MicroScan WalkAway (Dade Behring, USA). A correlação genética entre isolados produtores de ESBL também foi avaliada. O teste fenotípico para ESBL foi realizado através de teste de Disco de Difusão Dupla (DD) e a análise do DNA de K. pneumoniae produtoras de ESBL, isoladas no Hospital B, realizada por Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). O estudo demonstrou alta prevalência de K. pneumoniae produtora de ESBL (25,0% no hospital A e 66,7% no hospital B) com altas taxas de resistência aos antimicrobianos. O composto mais ativo foi o imipenem (100% de sensibilidade in vitro). O PFGE mostrou similaridade em cinco isolados e variabilidade em seis isolados. A alta prevalência Klebsiella produtora de ESBL pode ser devida à seleção individual e à disseminação de uma cepa comum. <![CDATA[<strong>Evaluation of methods for detection and identification of Mycobacterium species in patients suspected of having pulmonary tuberculosis</strong>]]> Tuberculosis control is a priority for the Ministry of Health policies in Brazil. In the present work, the detection of Mycobacterium tuberculosis by the Polymerase Chain Reaction (PCR) was standardized, and the laboratory diagnosis of pulmonary tuberculosis was evaluated comparing baciloscopy, culture and PCR tests. The study was carried out with 117 sputum samples from different patients suspected of having pulmonary tuberculosis, for whom physicians had ordered a baciloscopy test. Baciloscopy was performed using the Ziehl-Neelsen method, and culture was performed by incubation of treated samples in Lowenstein-Jensen's medium at 37ºC for eight weeks. For PCR, DNA was amplified with a specific pair of primers to the M. tuberculosis complex, with a resulting product of 123 bp from the insertion element IS6110. Three (2.56%) samples presented a positive baciloscopy result and a positive PCR result (100% agreement), and nine (7.69%) presented Mycobacterium sp. growth in culture (P= 0.1384). Among six samples with positive results in culture, one was identified by PCR-RFLP as belonging to the M. tuberculosis complex and one was identified as a non-tuberculosis mycobacteria. Sensitivity and specificity of PCR compared to culture were 33.3% and 100%, respectively.<hr/>A tuberculose é um dos agravos prioritários para as políticas do Ministério da Saúde. No presente trabalho, o método de detecção de Mycobacterium tuberculosis pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) em amostras de escarro foi padronizado e o diagnóstico laboratorial da tuberculose pulmonar foi avaliado, comparando-se as metodologias de baciloscopia, cultura e PCR. Foram analisadas 117 amostras de escarro de diferentes pacientes com suspeita de tuberculose pulmonar, com solicitação de baciloscopia. A baciloscopia foi realizada com a coloração de Ziehl-Neelsen e a cultura pela semeadura das amostras em meio de Lowenstein-Jensen, incubadas a 37ºC por oito semanas. Para realização da PCR, o DNA foi amplificado com um par de oligonucleotídeos específicos para o complexo M. tuberculosis, resultando em um produto de 123 pb do elemento de inserção IS6110. Das 117 amostras analisadas, três (2,56%) apresentaram baciloscopia positiva e PCR positiva para M. tuberculosis (concordância de 100%), e nove (7,69%) tiveram crescimento de Mycobacterium sp. na cultura (P= 0,1384). Das seis amostras que tiveram resultado positivo somente por cultura, uma foi identificada ainda como pertencente ao complexo M. tuberculosis por PCR-RFLP, e outra foi identificada como micobactéria não tuberculosa. A sensibilidade e a especificidade da baciloscopia e da PCR em relação à cultura foram 33,3% e 100%, respectivamente. <![CDATA[<strong>Identification and Molecular Characterization of Norovirus in São Paulo State, Brazil</strong>]]> Norovirus (NoV), previously called Norwalk-like virus, represents an important group of human pathogens associated with outbreaks of nonbacterial gastroenteritis. Epidemiological surveys of outbreaks have shown that the most important routes of transmission are person-to-person contacts and contaminated food and water, with the virus affecting adults and children. NoV is classified into genogroups, being genogroups GI, GII and GIV found in humans. In view of the high genetic diversity of NoV and the lack of information about this virus in Brazil, the aim of the present study was the molecular characterization of NoV isolated from diarrheic stool samples of patients from São Paulo State. In this study, 204 stool specimens collected during diarrhea outbreaks were analyzed by RT-PCR, and 12 were sequenced for genogroup confirmation. One-step PCR was performed in order to amplify the B region of ORF 1 using the MON 431, 432, 433 and 434 primer pool. From total, 32 (15.7%) stool specimens were positive for NoV genogroup GII. Comparison of the sequences of the PCR products to GenBank sequences showed 88.8% to 98.8% identity, suggesting the presence of genogroup GII in gastroenteritis outbreaks in São Paulo State.<hr/>Norovírus (NoV), anteriormente chamado Norwalk-like vírus, constituem um importante grupo de patógeno humano associado a surtos de gastroenterites não bacterianas. Levantamentos epidemiológicos de surtos demonstram que as mais importantes vias de transmissão são contatos pessoa-pessoa, água e alimentos contaminados, afetando adultos e crianças. Os NoV são classificados em genogrupos, sendo os genogrupos GI, GII e GIV encontrados em humanos. A grande diversidade genética dos NoV e a falta de informação sobre esses vírus no Brasil determinaram o tema deste estudo que teve como objetivo a identificação e caracterização molecular de NoV em amostras fecais de pacientes com gastroenterites, provenientes de surtos de diarréia no estado de São Paulo. Neste estudo, 204 amostras de fezes coletadas durante surto de diarréia foram analisadas por RT-PCR, e 12 foram seqüenciadas para confirmar o genogrupo. O método one step PCR foi empregado para a amplificação da região B da ORF1 com o pool de primers MON 431, 432, 433 e 434. Do total, 32 (15,7%) amostras foram positivas para norovírus genogrupo GII. A comparação das seqüências dos produtos de PCR às seqüências do GenBank demonstrou 88,8% a 98,8% de identidade, sugerindo a presença de norovírus genogrupo GII em surtos de gastroenterites no Estado de São Paulo. <![CDATA[<strong>Epidemiologically relevant antimicrobial resistance phenotypes in pathogens isolated from critically ill patients in a Brazilian Universitary Hospital</strong>]]> Antimicrobial resistance is a threat to public health worldwide and is associated with higher mortality and morbidity. Despite the extensive knowledge about this problem, drug resistance has continued to emerge, especially in intensive care units (ICUs). The objective of this study was to evaluate the frequencies of epidemiologically relevant resistance phenotypes in pathogens isolated from ventilator-associated pneumonia (VAP), bloodstream infections (BSI) and urinary tract infections (UTI) in patients admitted in the adult intensive care unit (AICU) of the Clinical Hospital of Federal University of Uberlândia, during an one year period. Additionally, at the period of the study, the antibiotic consumption in AICU was verified. Coagulase-negative staphylococci and S. aureus were the main agents of BSI (43.9%), with 60.0% of oxacilin-resistance for both microorganisms, Klebsiella-Enterobacter group predominated in UTI (23.4%), with resistance to third generation cephalosporins in 58.0% of the isolates; and, Pseudomonas aeruginosa in VAP (42.0%), with 72.0% of resistance to imipenem. Cephalosporins (49.6%), vancomycin (37.4%) and carbapenems (26.6%) were the most prescribed antibiotics in the unit. The comparison of the results with a publication of the NNIS program evidenced a worse situation in the studied hospital, mainly between Gram-negative, that had surpassed the percentile 90% elaborated by that system. Based on these results a reconsideration on the empirical use of antibiotics and on prevention and control of nosocomial infections practices is recommended.<hr/>A resistência aos antimicrobianos é uma ameaça a saúde pública mundial e está associada a uma maior mortalidade e morbidade. Apesar dos vastos conhecimentos sobre este problema, a resistência aos antibióticos continua a emergir, especialmente em unidades de terapia intensiva (UTI). O objetivo deste estudo foi avaliar a freqüência de fenótipos de resistência epidemiologicamente importantes em patógenos isolados de pneumonia associada à ventilação mecânica (PAV), infecções de corrente sangüínea (ICS) e de infecções de trato urinário (UTI) nos pacientes atendidos na unidade de terapia intensiva de adultos (UTIA) do Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia, durante o período de um ano. Adicionalmente, no período do estudo, foi analisado o consumo de antibióticos na UTIA. Staphylococcus spp coagulase negativo e S. aureus foram os principais agentes de ICS (43,9%), com 60,0% de resistência à oxacilina em ambos os microrganismos. O grupo Klebsiella-Enterobacter predominou nas ITU (23,4%), com resistência às cefalosporinas de terceira geração em 58,0% dos isolados; e, Pseudomonas aeruginosa nas PAV (42,0%), com 72,0% de resistência ao imipenem. As cefalosporinas (49,6%), vancomicina (37,4%) e os carbapenêmicos (26,6%) foram os antibióticos mais prescritos na unidade. A comparação dos resultados com publicações do programa NNIS evidenciou uma pior situação no hospital estudado, especialmente entre os Gram-negativos, que ultrapassaram o percentil 90% elaborado por este programa. De acordo com os resultados apresentados neste estudo, uma revisão do uso empírico de antibióticos e da prevenção e controle de infecções hospitalares é recomendada. <![CDATA[<strong>Oxacilin-resistant Coagulase-negative staphylococci (CoNS) bacteremia in a general hospital at São Paulo city, Brasil</strong>]]> In the last decades, coagulase-negative staphylococci (CoNS), especially Staphylococcus epidermidis have become an important cause of bloodstream infections. In addition, rates of methicillin-resistance among CoNS have increased substantially, leading to the use of glicopeptides for therapy. The objective of this study was to evaluate eleven consecutives clinically relevant cases of oxacillin-resistant CoNS bacteremia in a general hospital localized in São Paulo city, Brazil. Five different species were identified by different phenotypic methods, including S. epidermidis (5), S. haemolyticus (3), S. hominis (1), S. warneri (1) and S. cohnii subsp urealyticus (1). A variety of Pulsed Field Gel Electrophoresis profiles was observed by macrorestriction DNA analysis in S. epidermidis isolates, but two of three S. haemolyticus isolates presented the same profile. These data indicated the heterogeneity of the CoNS isolates, suggesting that horizontal dissemination of these microorganisms in the investigated hospital was not frequent. One S. epidermidis and one S. haemolyticus isolates were resistant to teicoplanin and susceptible to vancomycin. The selective pressure due to the use of teicoplanin in this hospital is relevant.<hr/>Staphylococcus coagulase negativos (SCoN), especialmente Staphylococcus epidermidis tem se tornado causa importante de infecções da corrente circulatória nas últimas décadas. Além disso, percentuais de resistência a meticilina entre os SCoN têm aumentado significativamente, levando ao uso de glicopeptídeos nestes pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar onze casos consecutivos de bacteremia clinicamente relevantes por SCoN oxacilina resistentes em um hospital localizado na cidade de São Paulo, Brasil. Cinco diferentes espécies foram identificadas por diferentes métodos fenotípicos, incluindo S. epidermidis (5), S. haemolyticus (3), S. hominis (1), S. warneri (1) e S. cohnii subsp urealyticus (1). Diferentes perfis eletroforéticos obtidos pela técnica de "Pulsed Field Gel Electrophoresis" foram observados na análise da macrorestrição do DNA nos isolados de S. epidermidis, mas dois dos três isolados de S. haemolyticus apresentaram o mesmo perfil. Esses dados indicam uma heterogeneidade nos isolados SCoN, sugerindo que a disseminação horizontal no hospital investigado não é freqüente. Um isolado de S. epidermidis e um de S. haemolyticus foram resistentes à teicoplanina e sensíveis à vancomicina. Observa-se a relevância da pressão seletiva pelo uso de teicoplanina nos pacientes deste hospital. <![CDATA[<strong>Horizontol dissemination of TEM- and SHV-typr beta-lactamase genes-carrying resistance plasmids amongst clonical isolates of <i>Enterobacteriaceae</i></strong>]]> The extended-spectrum β-lactamase (ESBL)-producing bacteria have been isolated at increasing frequency worldwide. Expression of ESBL is often associated with multidrug resistance and dissemination by resistance plasmids. During a two-month period in 2000, 133 clinical isolates of enterobacterial strains were randomly collected from outpatients and inpatients at a university hospital in Turkey. The ESBL producing strains were determined by double-disk synergy (DDS) testing. Twenty ESBL producing strains (15%) including Escherichia coli (n = 9), Klebsiella pneumoniae (n = 7), Klebsiella oxytoca (n = 2) and Enterobacter aerogenes (n = 2) were detected and further analyzed for their resistance transfer features, plasmid profile and nature of the resistance genes. Plasmid transfer assays were performed using broth mating techniques. TEM- and SHV- genes were analyzed by polymerase chain reaction (PCR) and hybridization using specific probes. EcoRI restriction enzyme analyses of R plasmids were used in the detection of epidemic plasmids. Fourteen plasmid profiles (A, B1, B2, C1, and C2 to L) were obtained with EcoRI restriction enzyme analysis. Most of these plasmids were detected to carry both TEM- and SHV-derived genes by PCR, and confirmed by localizing each gene by hybridization assay. Epidemiological evidence indicated that there was an apparent horizontal dissemination of conjugative R plasmids among multidrug-resistant enterobacterial genera and species in this hospital<hr/>O isolamento de bactérias produtoras de beta-lactamases de espectro expandido (ESBL) está aumentando no mundo todo. Freqüentemente, a expressão de ESBL está associada com resistência a múltiplas drogas e disseminação por plasmídios de resistência. Durante um período de dois meses em 2000, 133 isolados clínicos de cepas de enterobactérias foram obtidos aleatoriamente de pacientes internos e externos de um hospital universitário na Turquia. As cepas produtoras de ESBL foram identificadas pelo teste de sinergia em disco-duplo (DDS). Foram detectadas vinte cepas produtoras de ESBL, entre as quais Escherichia coli (n=9), Klebsiella pneumoniae (n=7), Klebsiella oxytoca (n=2) e Enterobacter aerogenes (n=2), que foram posteriormente analisadas quanto a suas características de transferência de resistência, perfil plasmidial e natureza dos genes de resistência. Os testes de transferência de plasmídios foram realizados empregando técnicas de conjugação em caldo. Os genes TEM e SHV foram analisados pela reação da polimerase em cadeia (PCR) e hibridização com sondas especificas. A detecção de plasmídios epidêmicos foi feita por análise dos plasmídios R com a enzima de restrição EcoRI. Através desta análise, foram obtidos catorze perfis plasmidiais (A, B1, B2, C1 e C2 até L).Observou-se pela PCR que a maioria dos plasmidios carregavam genes derivados de TEM e SHV, confirmados através da detecção dos genes pelos testes de hibridização. As evidencias epidemiológicas indicaram que havia uma aparente transferência horizontal dos plasmídios R conjugativos entre as enterobactérias multiresistentes neste hospital. <![CDATA[<strong>Distribution of Hepatitis C virus (HCV) genotypes in seropositive patients in the state of Alagoas, Brazil</strong>]]> We determined the frequency of hepatitis C virus (HCV) genotypes in anti-HCV seropositive patients in the state of Alagoas, Brazil, by means of nested-reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-nested-PCR) followed by restriction fragment length polymorphism (RFLP) of amplified fragments of the 5´NCR. The nested-PCR with genotype-specific primers from the core region was carried out when detection was not possible by the first approach. Detectable HCV-RNA was present in 115 (74.7%) of 154 serum samples. Genotype 1 was the most frequent (77.4%), against 20.9% of genotype 3 and 0.8% of genotype 2. Subtype 1b was predominant (65.2%), followed by subtypes 1a (8.7%), and 3a (6.1%). Coinfection (1a/3a) was detected in 0.8% of the samples. Indeed, there was no significant differences in the prevalence of genotype 1 compared to what has been obtained from anti-HCV seropositive patients from other locations in Brazil. Here we report for the first time the genotype 2 in the state of Alagoas.<hr/>A frequência de genótipos do vírus da hepatite C (HCV) em pacientes soropositivos anti-HCV no estado de Alagoas, Brasil, foi determinada através da RT-PCR aninhada da região 5'NCR seguida pela análise do polimorfismo de comprimento dos fragmentos de restrição (RFLP). A RT-PCR aninhada utilizando primers genótipo-específicos da região core foi efetuada quando não foi possível determinar o genótipo pelo primeiro método. Níveis detectáveis de HCV-RNA estavam presentes em 115 (74,7%) das 154 amostras de soro. O genótipo 1 foi o mais freqüente (77,4%), contra 20,9% do genótipo 3 e 0,8% do genótipo 2. O subtipo 1b foi predominante (65,2%), seguido pelos subtipos 1a (8,7%) e 3a (6,1%). Co-infecção (1a/3a) foi detectada em 0,8% das amostras. Não foram encontradas diferenças significativas quanto à prevalência do genótipo 1 em relação ao que tem sido obtido de pacientes soropositivos anti-HCV de outras localidades do Brasil. Este é o primeiro relato da presença do genótipo 2 no estado. <![CDATA[<strong>Detection of oral streptococci in dental biofilm from caries-active and caries-free children</strong>]]> This work correlated the presence of oral streptococci in dental biofilm with clinical indexes of caries and oral hygiene in caries-active and caries-free children. S. mutans and/or S. sobrinus in the dental biofilm does not indicate a direct risk for developing dental caries.<hr/>Este trabalho correlacionou a presença de estreptococos orais no biofilme dental com índices clínicos de cárie dentária e higiene oral em crianças com alta e baixa atividade de cárie. S. mutans e/ou S. sobrinus no biofilme dental não significa o imediato desenvolvimento de lesões cariosas. <![CDATA[<strong>Genetic similarity between staphylococcus sp isolated from human and hospital settings, and susceptibility to different antimicrobials</strong>]]> One hundred and forty-three samples from human hands and hospital beds were collected at a teaching hospital in the city of Ribeirão Preto/SP by swabs, and placed in BHI broth. Following a 24 h incubation period at 37ºC, they were seeded on Petri dishes containing Agar "Staphylococcus Medium 110". Colonies typical of the genus Staphylococcus were collected and stored at 4ºC until tested for catalase, mannitol, hemolysis, DNAse and coagulase. Strains were analyzed by RAPD-PCR to verify their similarity, and tested for sensitivity to ten different antibiotics. From the ninety-two isolated strains, 67 (72,8%) were coagulase- negative and 25 (27,2%) coagulase-positive. Similarity analysis showed a great heterogeneity among strains, but some presented 100% similarity. Resistance to oxacilin was encountered in 39 (42%) of the strains. Two coagulase- negative strains were resistant to vancomycin, and eleven (12%) were considered multiresistant. Measures such as hand disinfection of the staff and hospital beds and rationalization of antibiotic use could contribute to decrease pathogen transmission and selection pressure, diminishing the frequency and lethality of nosocomial infections.<hr/>Foram coletadas 143 amostras de mãos de humanos e camas hospitalares, através de "swabs" no caldo BHI, em um hospital escola da cidade de Ribeirão Preto/SP. As amostras coletadas foram incubadas a 37ºC por 24 horas e após este período as culturas foram semeadas em placas de Petri contendo agar "Staphylococcus Médium 110". As colônias típicas do gênero Staphylococcus foram colhidas e estocados a 4ºC até o momento de elaboração das provas de catalase, manitol, hemólise, DNAse e coagulase. As cepas isoladas foram analisadas através da técnica de RAPD-PCR para verificar o grau de similaridade. A sensibilidade das cepas isoladas foi testada frente a 10 diferentes antibióticos. Das 92 cepas de Staphylococcus sp isoladas, 67 (72,8%) foram identificados como Staphylococcus coagulase-negativas e 25 (27,2%) como Staphylococcus coagulase-positivas. A análise de similaridade mostrou uma grande heterogeneidade entre as cepas, entretanto foram isoladas algumas cepas com 100% de similaridade. Resistência a oxacilina foi encontrada em 39 (42%) cepas. Duas cepas de estafilococos coagulase-negativos mostraram-se resistentes a vancomicina. Onze cepas (12%) de estafilococos foram consideradas multirresistentes. Medidas de desinfecção das mãos de pessoal e dos leitos hospitalares e a racionalização do uso indiscriminado de antibióticos podem contribuir para a queda da transmissão de patógenos e diminuição da pressão de seleção, e conseqüentemente diminuindo a freqüência e letalidade das infecções nosocomiais. <![CDATA[<strong>Distribution of biotypes and leukotoxic activity of <i>Aggregatibacter actinomycetemcomitans</i> isolated from Brazilian patients with chronic periodontitis</strong>]]> Aggregatibacter actinomycetemcomitans is an important etiologic agent of the periodontitis and is associated with extra-oral infections. In this study, the detection of the ltxA gene as well as the ltx promoter region from leukotoxic A. actinomycetemcomitans isolated from 50 Brazilian patients with periodontitis and 50 healthy subjects was performed. The leukotoxic activity on HL-60 cells was also evaluated. Leukotoxic activity was determined using a trypan blue exclusion method. The 530 bp deletion in the promoter region was evaluated by PCR using a PRO primer pair. A. actinomycetemcomitans was detected by culture and directly from crude subgingival biofilm by PCR using specific primers. By culture, A. actinomycetemcomitans was detected in nine (18%) of the periodontal patients and one (2%) healthy subject. However, by PCR, this organism was detected in 44% of the periodontal patients and in 16% of the healthy subjects. It was verified a great discrepancy between PCR detection of the ltx operon promoter directly from crude subgingival biofilm and from bacterial DNA. Only one periodontal sample harbored highly leukotoxic A. actinomycetemcomitans. Moreover, biotype II was the most prevalent and no correlation between biotypes and leukotoxic activity was observed. The diversity of leukotoxin expression by A. actinomycetemcomitans suggests a role of this toxin in the pathogenesis of periodontal disease and other infectious diseases.<hr/>Aggregatibacter actinomycetemcomitans é um importante agente etiológico da periodontite e produz infecções extra-bucais. Neste estudo, foram detectados os biótipos, o gene ltxA associado à produção de leucotoxina e o promotor ltx em A. actinomycetemcomitans de pacientes com e sem periodontite. A atividade leucotóxica sobre células HL-60 também foi avaliada. A atividade leucotóxica foi determinada através do método de exclusão do azul de tripam. A deleção de 530 bp no promotor ltx foi avaliada usando-se o par de iniciadores PRO. A. actinomycetemcomitans foi detectado por cultura e por PCR. Por cultura, A. actinomycetemcomitans foi detectado em nove pacientes com periodontite (18%) e em um indivíduo sadio (2%). Por PCR esse microrganismo foi detectado em 44% dos pacientes com periodontite e em 16% dos saudáveis. Verificou-se diferença estatística entre a detecção do promotor do operon ltx, por PCR, diretamente do biofilme subgengival e do DNA bacteriano. Somente uma amostra clínica apresentou A. actinomycetemcomitans altamente leukotóxico. O biótipo II foi o mais prevalente e não foi observada correlação biótipo-atividade leucotóxica. A expressão da leucotoxina por A. actinomycetemcomitans na doença periodontal e outras doenças infecciosas necessita ser avaliado. <![CDATA[<strong>Low Prevalence of <i>Helicobacter pylori</i> infection evaluated by stool antigen test in preschool and school children</strong>]]> The study evaluated the prevalence of Helicobacter pylori infection in toddlers using the stool antigen test. Helicobacter pylori was detected in 28/113 (13.1%). Crowding and age were risk factors significantly associated to the infection. We conclude there is a low prevalence of the infection in the studied children.<hr/>O estudo avaliou a prevalência da infecção por Helicobacter pylori em crianças pré-escolares com o teste do antígeno fecal. H. pylori foi detectado em 28/213 (13.1%), sendo fatores de risco número de pessoas no domicílio e idade. Concluímos que a infecção possui baixa prevalência na população estudada. <![CDATA[<strong>Antifungal suscepitibility profile of candida spp. oral isolates obtained from denture wearers</strong>]]> Denture stomatitis is an inflammatory condition that occurs in denture wearers and is frequently associated with Candida yeasts. Antifungal susceptibility profiles have been extensively evaluated for candidiasis patients or immunosupressed individuals, but not for healthy Candida carriers. In the present study, fluconazole, itraconazole, voriconazole, terbinafine and 5-flucytosin were tested against 109 oral Candida spp. isolates. All antifungal agents were effective against the samples tested except for terbinafine. This work might provide epidemiological information about Candida spp. drug susceptibility in oral healthy individuals.<hr/>A estomatite protética é uma condição inflamatória que ocorre em usuários de prótese total e está frequentemente associada a leveduras do gênero Candida, Os perfis de suscetibilidade a antifúngicos têm sido extensivamente estudados em pacientes com candidíase ou em indivíduos imunossuprimidos, mas não em portadores sadios de Candida. No presente estudo, fluconazol, itraconazol, voriconazol, terbinafina e 5-flucitosina foram testados contra 109 isolados orais de Candida spp. Todos os agentes antifúngicos mostraram-se eficazes contra as amostras avaliadas, exceto a Terbinafina. O presente trabalho pode fornecer dados epidemiológicos com relação à susceptibilidade a antifúngicos de Candida spp em indivíduos com saúde oral. <![CDATA[<strong><b>Evaluation of the results of <i>Mycobacterium tuberculosis</i> direct test (MTD) and Mycobacterial culture in urine samples</b></strong>]]> Tuberculosis remains a public health problem in Turkey. Rapid detection of Mycobacterium tuberculosis plays a key role in control of infection. In this article, the Gen-Probe Amplified Mycobacterium Tuberculosis Direct Test (MTD) was evaluated for detection of M. tuberculosis in urine samples. The performance of the MTD was very good and appropriate for routine laboratory diagnosis.<hr/>A tuberculose continua sendo um problema de saúde pública na Turquia. A detecção rápida de Mycobacterium tuberculosis tem um papel importante no controle da infecção. Nesse artigo, avaliou-se o Gen-Probe Amplified Mycobacterium Tuberculosis Test (MTD) para detecção de M. tuberculosis em amostras de urina. O desempenho do MTD foi muito bom e adequado para diagnóstico laboratorial de rotina. <![CDATA[<strong>Utilization of agroindustrial residues for lipase production by solid-state fermentation</strong>]]> The aim of this work was to produce lipases by solid-state fermentation (SSF) using, as substrate, agroindustrial residue supplemented with by-products from corn oil refining process or olive oil. For a group of ten fungi strains selected in the first steps, the lipase activity obtained by SSF varied from 7.7 to 58.6 U/g of dry substrate (gds). Among the evaluated strains, the Aspergillus niger mutant 11T53A14 was selected by presenting the best enzymatic production. For the fermentation tests, two substrates were also investigated: wheat bran and corn cob, both supplemented with olive oil. The best results were obtained with wheat bran. Additionally, three industrial by-products from corn oil refining (soapstock, stearin and fatty acids) were evaluated as substitutes to the olive oil in the function of lipases production inducer. Among them, soapstock and stearin were the best inducers, whereas fatty acids presented an inhibitor effect. The highest lipase activities using soapstock, stearin and fatty acids were 62.7 U/gds, 37.7 U/gds and 4.1 U/gds, respectively.<hr/>O objetivo deste trabalho foi produzir lipases por fermentação em estado sólido (FES) utilizando, como substrato, resíduo agroindustrial enriquecido com subprodutos do processo de refino do óleo de milho ou óleo de oliva. Para um conjunto de dez linhagens de fungos selecionadas nas primeiras etapas, a atividade lipásica obtida por FES variou de 7,7 a 58,6 U/g de substrato seco (gss). Dentre as linhagens avaliadas, o mutante Aspergillusniger 11T53A14 foi selecionado por apresentar a melhor produção enzimática.Para os testes de fermentação, dois substratos foram investigados: farelo de trigo e sabugo de milho, ambos enriquecidos com óleo de oliva. Nestes testes, os melhores resultados foram obtidos com farelo de trigo. Adicionalmente, três subprodutos industriais do refino do óleo de milho (borra, estearina e ácidos graxos) foram avaliados como substitutos do óleo de oliva na função de indutor para a produção de lipases. Dentre eles, borra e estearina demonstraram ser melhores indutores, enquanto ácidos graxos apresentaram um efeito inibidor. As mais altas atividades lipásicas utilizando borra, estearina e ácidos graxos foram 62,7 U/gss, 37,7 U/gss e 4,1 U/gss, respectivamente. <![CDATA[<strong>Cyclodextrin glycosyltransferase production by new </strong><em><b>Bacillus </b></em><strong>sp. strains isolated from brazilian soil</strong>]]> Three strains of Bacillus sp. (BACRP, BACNC-1 and BACAR) were isolated from soil adhered to cassava husk. CGTase specific activity for the three isolated strains was higher when cultivated at 40ºC. Potato starch, cassava starch, maltodextrin and glucose were used as carbon source and growth temperatures varied from 25 to 55ºC. The three isolates presented higher CGTase specific activity when cultivated with potato starch at 40ºC. Isolated BACRP and BACAR presented specific activity of 4.0x10-3 and 2.2x10-3 U/mg prot at pH 7.0, respectively, when cultivated in mediums added with NaCl 2%; at pH 10,0 their activities were of 3.4x10-3 and 3.0x10-3 U/mg prot, respectively, in the same concentration of NaCl. On the other hand, the isolated BACNC-1 presented activity specific of 2.4x10-3 U/mg prot when cultivated at pH 7.0 added of NaCl 1%, and at pH 10.0 the specific activity was of 3.4x10-3 U/mg prot without NaCl addition. This work also showed the presence of cyclodextrins formed during fermentation process and that precipitation with acetone or lyophilization followed by dialysis was efficient at removing CDs (cyclodextrins), thus, eliminating interference in the activity assays. The enzyme produced by the BACAR strain was partially purified and β-CD was liberated as a reaction product.<hr/>Três linhagens de Bacillus sp (BACRP, BACNC- 1 e BACAR) foram isoladas a partir de solo aderido em casca de mandioca. Foram utilizados amido de batata, amido de mandioca, maltodextrina e glicose como fonte de carbono, e temperaturas de crescimento de 25-55ºC, sendo que os três isolados apresentaram maior atividade específica de CGTase quando cultivados com amido de batata a 40ºC. Em pH 7,0 os isolados BACRP e BACAR apresentaram atividade específica de 4,0x 10-3 e 2,2x10-3 U/mg prot, respectivamente, quando cultivados em meios acrescidos de 2% de NaCl; em pH 10,0 suas atividades foram de 3,4x10-3 e 3,0x10-3 U/mg prot na mesma concentração de NaCl. Por outro lado, o isolado de BACNC-1 apresentou atividade específica 2,4x10-3 U/mg prot quando cultivado em pH 7,0 acrescido de 1% de NaCl, e em pH 10,0 sua atividade específica foi de 3,4x10-3 U/mg prot sem adição de NaCl. Também foi demonstrada neste trabalho que ciclodextrinas são formadas durante o processo fermentativo, e que a precipitação com acetona ou liofilização seguida de diálise foram eficientes na remoção destas CDs, eliminando sua interferência nos ensaios enzimáticos. A enzima produzida pela cepa BACAR foi purificada parcialmente liberando b-CD como produto da reação. <![CDATA[<strong>Production of actinomycin-D by the mutant of a new isolate of </strong><em><b>Streptomyces sindenensis</b></em>]]> An actinomycin-D producing strain was isolated from soil and characterized as Streptomyces sindenensis. The culture was subjected to UV irradiation and a mutant with 400% higher actinomycin-D production was isolated (400 mg/l-1 as compared to 80 mg/l-1 produced by the parent). Production medium was optimized and antibiotic yield with the mutant was enhanced to 850 mg/l-1 which is 963% higher as compared with the parent.<hr/>Uma cepa produtora de actinomicina-D foi isolada de solo e caracterizada como Streptomyces sindenensis. A cultura foi submetida à radiação UV, e um mutante capaz de produzir 400% mais actinomicina-D foi isolado (400mg/L comparado a 80mg/L produzido pela cepa parental). O meio de produção do antibiótico foi otimizado e o rendimento aumentou para 850 mg/L, ou seja, 963% mais alto que a cepa parental. <![CDATA[<strong>Culture Conditions stimulating high </strong><strong>γ</strong><strong>-Linolenic Acid accumulation by <i>Spirulina platensis</i></strong>]]> Gamma-linolenic acid (GLA) production by Spirulina platensis under different stress-inducing conditions was studied. Submerged culture studies showed that low temperature (25ºC), strong light intensity (6 klux) and primrose oil supplement (0.8%w/v) induced 13.2 mg/g, 14.6 mg/g and 13.5 mg linolenic acid per gram dry cell weight respectively. A careful observation of fatty acid profile of the cyanobacteria shows that, oleic acid and linoleic acid, in experiments with varying growth temperature and oil supplements respectively, helped in accumulating excess γ-linolenic acid. In addition, cultures grown at increasing light regimes maintained the γ-linolenic acid to the total fatty acid ratio(GLA/TFA) constant, despite any change in γ-linolenic acid content of the cyanobacteria.<hr/>Estudou-se a produção de ácido γ-linolênico por Spirulina platensis em diferentes condições de estresse. Culturas submersas indicaram que temperatura baixa (25ºC), forte intensidade de luz (6 klux) e suplementação com óleo de prímula (0,8% p/v) induziram a produção de ácido linolênico de 13,2 mg/g, 14,6 mg/g e 13,5 mg/g peso seco, respectivamente. Uma observação cuidadosa do perfil de ácidos graxos da cianobacteria indica que os ácidos oléico e linoléico, em experimentos com diferentes temperaturas de crescimento e suplementos de óleo, auxiliaram no acúmulo de excesso de ácido γ-linolênico. Além disso, as culturas obtidas em intensidades crescentes de luz mantiveram a relação ácido γ-linolênico/ácidos graxos totais constante, independentemente de qualquer mudança no conteúdo de ácido γ-linolênico da cianobactéria. <![CDATA[<strong>Isolation of Mucorales from processed maize (<i>Zea mays</i> L.) and screening for protease activity</strong>]]> Mucoraleswere isolated from maize flour, corn meal and cooked cornflakes using surface and depth plate methods. Rhizopus oryzae, Circinella muscae, Mucor subtilissimus,Mucor hiemalis f. hiemalis, Syncephalastrum racemosum, Rhizopus microsporus var. chinensis and Absidia cylindrospora showed protease activity.<hr/>Mucorales foram isolados da farinha de milho, fubá e flocos de milho pré-cozidos pelos métodos de plaqueamento em superfície e em profundidade. Rhizopus oryzae, Circinella muscae, Mucor subtilissimus,Mucor hiemalis f. hiemalis, Syncephalastrum racemosum, Rhizopus microsporus var. chinensis e Absidia cylindrospora exibiram atividade proteásica. <![CDATA[<strong>Identification of an antifungal metabolite produced by a potential biocontrol Actinomyces strain A01</strong>]]> Actinomyces strain A01 was isolated from soil of a vegetable field in the suburb of Beijing, China. According to the morphological, cultural, physiological and biochemical characteristics, and 16S rDNA sequence analysis, strain A01 was identified as Streptomyces lydicus. In the antimicrobial spectrum test strain A01 presented a stable and strong inhibitory activity against several plant pathogenic fungi such as Fusarium oxysporum, Botrytis cinerea, Monilinia laxa, etc. However, no antibacterial activity was found. In pot experiments in greenhouse, the development of tomato gray mold was markedly suppressed by treatment with the fermentation broth of the strain A01, and the control efficacy was higher than those of Pyrimethanil and Polyoxin. A main antifungal compound (purity 99.503%) was obtained from the fermentation broth of strain A01 using column chromatography and HPLC. The chemical structural analysis with UV, IR, MS, and NMR confirmed that the compound produced by the strain A01 is natamycin, a polyene antibiotic produced by S. chattanovgensis, S. natalensis, and S. gilvosporeus, widely used as a natural biological preservative for food according to previous reports. The present study revealed a new producing strain of natamycin and its potential application as a biological control agent for fungal plant diseases.<hr/>A cepa Actinomyces A01 foi isolada do solo de um campo agrícola no subúrbio de Beijing, China. De acordo com as características morfológicas, culturais, fisiológicas e bioquímicas, e análise da sequência 16S rDNA , a cepa A01 foi identificada como Streptomyces lydicus. Nos testes de espectro antimicrobiano, a cepa A01 apresentou atividade inibitória intensa e estável contra vários fungos patogênicos para plantas, como Fusarium oxysporum, Botrytis cinerea, Monilia laxa, etc. Entretanto, não foi encontrada atividade antibacteriana. Em experimentos em estufas, o desenvolvimento do fungo cinza do tomate foi fortemente inibido pelo tratamento com o caldo de fermentação da cepa A01, com eficiência superior à do pyremethanil e polyoxin. Por cromatografia em coluna e HPLC, obteve-se um composto fúngico (pureza 99,503%), cuja análise estrutural por UV, IR, MS e NMR revelou ser natamicina, um antibiótico polienico produzido por S. chattanovgensis, S. natalensis e S.gilvosporeus, empregado como conservador biológico natural em alimentos. O presente estudo relata a detecção de uma nova cepa produtora de natamicina e sua aplicação potencial como um agente de controle biológico de doenças fúngicas em plantas. <![CDATA[<strong>A new approach to microbial production of gallic acid</strong>]]> In a new approach to microbial gallic acid production by Aspergillus fischeri MTCC 150, 40gL-1 of tannic acid was added in two installments during the bioconversion phase of the process (25gL-1 and 15gL-1 at 32 and 44h respectively). The optimum parameters for the bioconversion phase were found to be temperature: 35ºC, pH: slightly acidic (3.3-3.5), aeration: nil and agitation: 250 rpm. A maximum of 71.4% conversion was obtained after 71h fermentation with 83.3% product recovery. The yield was 7.35 g of gallic acid per g of biomass accumulated and the fermenter productivity was 0.56 g of gallic acid produced per liter of medium per hour.<hr/>Em uma nova abordagem para produção de ácido gálico por Aspergillus fischeri MTCC 150, adiciona-se 40 g.L-1 de ácido tânico em dois momentos da fase de bioconversão do processo (25 g.L-1 e 15 g.L-1 a 32h e 44h, respectivamente). Os parâmetros ótimos para a fase de bioconversão foram: temperatura 35ºC, pH levemente ácido (3,3 a 3,5), nenhuma aeração e agitação 250 rpm. Um máximo de 71,4% de conversão foi obtido após 71h de fermentação, com 83,3% de recuperação do produto. O rendimento foi 7,35g de ácido gálico por g de biomassa acumulada e a produtividade do fermentador foi 0,56g de ácido gálico por litro de meio por hora. <![CDATA[<strong>Production of 6-pentyl-</strong><strong>α</strong><strong>-pyrone by trichoderma harzianum in solid-state fermentation</strong>]]> Many Trichoderma species are able to produce 6-pentyl-α-pyrone (6-PP), a lactone with coconut-like aroma. In the present work, several culture parameters were studied to enhance the production of 6-PP by Trichoderma harzianum 4040 in solid-state fermentation. Green coir powder added to a nutrient solution was used as support material for fermentation. A Plackett-Burman screening technique was applied, followed by a fractionary factorial design. The best culture conditions within the experimental domain studied were (100 g support)-1: sucrose, 3 g; NaNO3, 0.24 g; (NH4)2SO4, 0.18 g; KH2PO4, 0.1 g; inoculum concentration, 2.2 x 10(6) spores; moisture level, 55%. The temperature established was 28ºC. The fermentation under the selected conditions led to a 6-PP production six times higher (5.0 mg/g dry matter) than the initial one (0.8 mg/g dry matter) after seven days of cultivation.<hr/>Muitas espécies do gênero Trichoderma são capazes de produzir a substância 6-pentil-α-pirona (6-PP), uma lactona com aroma característico de coco. No presente trabalho, vários parâmetros de cultura foram estudados para aumentar a produção de 6-PP por Trichoderma harzianum 4040 em fermentação em estado sólido. Pó da casca de coco verde adicionado à uma solução nutriente foi usado como material de suporte para a fermentação. Um planejamento experimental de varredura segundo a técnica de Plackett-Burman foi aplicado, seguido de um planejamento fatorial fracionário. No domínio experimental estudado, as melhores condições de cultura foram (100 g suporte)-1: sacarose, 3 g; NaNO3, 0,24 g; (NH4)2SO4, 0,18 g; KH2PO4, 0,1 g; produção do inóculo, 2,2 x 10(6) esporos; umidade, 55%. A temperatura estabelecida foi de 28ºC. Esse estudo conduziu à concentração de 6-PP seis vezes maior (5,0 mg/g de matéria seca) do que a inicial (0,8 mg/g de matéria seca) após sete dias de cultivo. <![CDATA[<strong>Polyphasic characterization of <i>Gluconacetobacterdiazotrophicus</i> isolates obtained from different sugarcane varieties</strong>]]> A polyphasic approach was applied to characterize 35 G. diazotrophicus isolates obtained from sugarcane varieties cultivated in Brazil. The isolates were analyzed by phenotypic (use of different carbon sources) and genotypic tests (ARDRA and RISARFLP techniques). Variability among the isolates was observed in relation to the carbon source use preference. Glucose and sucrose were used by all isolates in contrast to myo-inositol, galactose and ribose that were not metabolized. The results of the analysis showed the presence of two groups clustered at 68% of similarity. The genetic distance was higher when RISA-RFLP analysis was used. Analysis of 16S rDNA sequences from isolates showed that all of them belonged to the G. diazotrophicus species. Neither effect of the plant part nor sugarcane variety was observed during the cluster analysis. The observed metabolic and genetic variability will be helpful during the strain selection studies for sugarcane inoculation in association with sugarcane breeding programs.<hr/>Foi realizado a caracterização polifásica de 35 isolados obtidos de variedades de cana-de-açúcar cultivadas no Brasil, através de testes fenotípicos (uso de fontes diferentes de carbono) e genotípicos (técnicas de ARDRA e RISA-RFLP). Houve variação entre os isolados com relação à utilização de fontes de carbono. Glicose e sacarose foram usadas por todos isolados, diferentemente de mio-inositol, galactose e ribose que não foram metabolizados. Os resultados da análise polifásica dos dados confirmam a formação de dois grupos, que apresentaram 68% de similaridade. Observou-se maior distância genética entre os isolados quando a técnica de RISA-RFLP foi aplicada. O sequênciamento da região 16S do rDNA mostrou que todos os isolados pertencem à espécie G. diazotrophicus. Não foi observado efeito da parte da planta ou variedade de cana-de-açúcar no agrupamento dos isolados. Em conjunto, esses resultados poderão auxiliar no estudo de seleção de estirpes para inoculação em cana-de-açúcar, orientando programas de melhoramento vegetal. <![CDATA[<strong>Kinetics of high-Level of ß-glucosidase production by a 2-deoxyglucose-resistant mutant of <i>Humicola lanuginosa</i> in submerged fermentation</strong>]]> A 2-deoxyglucose-resistant mutant (M7) of Humicola lanuginosa was obtained by exposing conidia to γ-rays and permitting expression in broth containing 0.6% 2-deoxyglucose (DG) and cellobiose (1%) before plating on DG esculin-ferric ammonium citrate agar medium from which colonies showing faster and bigger blackening zones were selected. Kinetic parameters for enhanced ß-glucosidase (BGL) synthesis by M7 were achieved when corncobs acted as the carbon source. The combination between corncobs and corn steep liquor was the best to support higher values of all product formation kinetic parameters. Effect of temperature on the kinetic and thermodynamic attributes of BGL production equilibrium in the wild organismand M7was studied using batch process at eight different temperatures in shake-flask studies. The best performance was found at 45ºC and 20 g L-1 corncobs in 64 h. Both growth and product formation (17.93 U mL-1) were remarkably high at 45ºC and both were coupled under optimum working conditions. Product yield of BGL from the mutant M7 (1556.5 U g-1 dry corncobs) was significantly higher than the values reported on all fungal and bacterial systems. Mutation had thermo-stabilization influence on the organism and mutant required lower activation energy for growth and lower magnitudes of enthalpy and entropy for product formation than those demanded by the wild organism, other mesophilic and thermo-tolerant organisms. In the inactivation phase, the organisms needed lower values of activation energy, enthalpy and entropy for product formation equilibrium, confirming thermophilic nature of metabolic network possessed by the mutant organism.<hr/>Um mutante de Hemicola lanuginosa resistente a 2-deoxiglucose(M7) foi obtido através de exposição de conídios a raios γ, permitindo a expressão em caldo contendo 0,6% de 2-deoxiglucose (DG) e celobiose (1%) antes da semeadura em ágar DG esculina citrato de ferro amoniacal, da qual foram selecionadas as colônias com halo negro. Os parâmetros cinéticos para produção aumentada de ß-glucosidase (BGL) foram obtidos empregando-se sabugo de milho como fonte de carbono. A combinação de espiga de milho com água de maceração de milho foi a que forneceu os valores mais altos nos parâmetros cinéticos de formação de todos os produtos. O efeito da temperatura na cinética e atributos termodinâmicos da produção de BGL pelas cepas selvagem e M7 foi avaliado empregando-se processo de batelada em oito temperaturas diferentes in frascos em agitação. O melhor desempenho foi observado a 45ºC e 20g.l-1 de espiga de milho em 64h. Tanto a multiplicação quanto a formação do produto foram muito altas a 45ºC e ambas estavam ligadas em condições ótimas de trabalho. O rendimento de BGL produzido pelo mutante M7 (1556 U.g-1 de espiga seca) foi significativamente superior aos valores reportados para todos os sistemas fúngicos e bacterianos. A mutação influenciou a termoestabilização no microrganismo, sendo que o mutante necessitou de energia de ativação mais baixa para multiplicação e valores mais baixos de entalpia e entropia para a formação do produto quando comparado à cepa selvagem e a outros microrganismos mesofilicos e termotolerantes. Na fase de inativação, os microrganismos necessitaram valores mais baixos de energia de ativação, entalpia e entropia para o equilíbrio da formação de produto, confirmando a natureza termofílica da máquina metabólica do mutante. <![CDATA[<strong>Efficacy of terbinafine and itraconazole on a experimental model of systemic sporotrichosis</strong>]]> Itraconazole is currently considered the drug of choice to treat the diverse clinical presentation of sporotrichosis. On the other hand terbinafine by virtue of its excellent in vitro activity is under comparative evaluation for its therapeutic potential for a wide range of fungal infections. In this study, our aim was to determine the in vivo efficacy of terbinafine and itraconazole on a experimental model of systemic sporotrichosis. 120 rats Wistar received an injection of 2x10³ S. schenckii cells by via the lateral tail vein. After 3 days the animals were treated with terbinafine (250mg/kg) and itraconazole (100 mg/kg) and their respective diluents. In our model, terbinafine and itraconazole were effective in reducing the number of clinical lesions and positive organ cultures. There was statistical difference between the groups treated with the antifungals in relation to the control groups (p<0,05) concerning the clinical alterations, anatomic-pathological findings and in the positive organ cultures of the agent, being that the treated animals resulted in the absence and/or reduction of all the evaluated parameters. As for the treatments, terbinafine showed similar or higher activity that itraconazole in the evaluation of the testicle alteration (p=0,0004), as well as in the positive organ cultures of microorganism from the organ (p=0,0142). With these results it is possible to conclude that the antifungals studied are effective in the treatment of experimental systemic sporotrichosis.<hr/>Itraconazol é atualmente considerado a droga de escolha para o tratamento das diferentes formas clínicas da esporotricose. Por outro lado a terbinafina devido a sua excelente atividade in vitro está sendo avaliada quanto ao seu potencial terapêutico frente a diversas infecções fúngicas. O objetivo deste estudo foi determinar a eficácia in vivo da terbinafina e itraconazol em um modelo de esporotricose experimental sistêmica. 120 ratos Wistar receberam uma injeção de 2x10³ células de S. schenckii pela veia lateral da cauda. Após 3 dias os animais foram tratados com terbinafina (250mg/kg) e itraconazol (100mg/kg) e os seus respectivos diluentes. No modelo experimental estudado, a terbinafina e itraconazol se mostraram efetivos reduzindo o número de sintomas clínicos e retroisolamento positivo para o agente. Houve diferenças estatísticas entre os grupos tratados com os antifúngicos em relação aos grupos controle (p<0,05) nas alterações clínicas, achados anatomopatológicos e no retroisolamento do agente, sendo que os animais tratados resultaram na ausência e/ou diminuição de todos os parâmetros avaliados. Quanto aos tratamentos a terbinafina se mostrou com atividade similar ou superior ao itraconazol quando avaliado as alterações anatomopatológicos do testículo (p=0,0004), assim como no retoisolamento do órgão (p=0,0142). Com estes resultados permite-se concluir que os antifúngicos estudados são efetivos no tratamento da esporotricose sistêmica experimental. <![CDATA[<b>Antimicrobial resistance in Campylobacter spp isolated from broiler flocks</b>]]> The aim of this study was to assess the antimicrobial susceptibility of 62 Campylobacter spp. strains obtained from broiler flocks using the agar diffusion method. The Campylobacter spp strains were isolated from 22 flocks aged between 3 and 5 weeks of life, isolated from cloacae swabs, stools and cecal droppings in the farm and from the carcass rinsing in the slaughterhouse. Campylobacter spp strains were tested on Mueller-Hilton (MH) agar (27 samples) and MH plus TTC agar (35 samples). The antimicrobial susceptibility test revealed a 62.5% resistance to at least one drug, especially to enrofloxacin (71%), neomycin (50%), lincomycin (50%), tetracycline (43%), penicillin (42%), ceftiofur (33%) amoxicillin (27%), spiramycin (20%), ampicillin (18%) and norfloxacin (14%), whereas a lower percentage of strains was resistant to erythromycin (10%) and doxycycline (10%). All strains were sensitive to gentamicin and lincomycin-spectinomycin and 80% of them to colistin. These results indicate that it is necessary to reduce the use of antimicrobials in veterinary and human medicine.<hr/>O objetivo deste estudo foi verificar a susceptibilidade antimicrobiana de 62 amostras de Campylobacter spp. em amostras isoladas de 22 lotes de frango de corte, pelo método de difusão em Agar. As amostras de Campylobacter spp foram isoladas de frangos com idade entre 3 e 5 semanas, isoladas a partir de swabs cloacais, fezes e descarga cecal obtidos nas granjas e de rinsagem de carcaças no abatedouro. Das 62 amostras avaliadas, 27 foram testadas em ágar MH e 35 no ágar MH com TTC. O perfil de susceptibilidade antimicrobiana apresentou 62,5% de resistência para, no mínimo, uma droga, sobretudo para enrofloxacina (71%), neomicina (50%), lincomicina (50%), tetraciclina (43%), penicilina (42%), ceftiofur (33%) amoxicilina (27%), espiramicina (20%), ampicilina (18%) e norfloxacina (14%), enquanto uma percentagem menor foi observada frente eritromicina (10%) e doxiciclina (10%). Todas as amostras foram sensíveis a gentamicina e linco-espectinomicina e 80% à colistina. Pelo exposto, faz-se necessária a redução do uso dos antimicrobianos na medicina veterinária e em humanos. <![CDATA[<b>Virulence factors and antimicrobial resistance of escherichia coli isolated from urinary tract of swine in southern of Brazil</b>]]> The present study determined the molecular and resistance patterns of E. coli isolates from urinary tract of swine in Southern of Brazil. Molecular characterization of urinary vesicle samples was performed by PCR detection of virulence factors from ETEC, STEC and UPEC. From a total of 82 E. coli isolates, 34 (38.63%) harbored one or more virulence factors. The frequency of virulence factors genes detected by PCR were: pap (10.97%), hlyA (10.97%), iha (9.75%), lt (8.53%), sta (7.31%) sfa (6.09%), f4 (4.87%), f5 (4.87%), stb (4.87%), f6 (1.21%) and f41 (1.21%). Isolates were resistant to penicillin (95.12%), lincomycin (93.9%), erythromycin (92.68%), tetracycline (90.24%), amoxicillin (82.92%), ampicillin (74.39%), josamycin (79.26%), norfloxacin (58.53%), enrofloxacin (57.31%), gentamicin (39.02%), neomycin (37.8%), apramycin (30.48%), colistine (30.48%) and cefalexin (6.09%). A number of 32 (39.02%) E. coli isolates harbored plasmids.<hr/>O presente estudo teve por objetivo determinar os padrões moleculares e de resistência aos antimicrobianos de isolados de E. coli provenientes do trato urinário de suínos no Sul do Brasil. Os fatores estudados dividiram os patotipos ETEC, STEC e UPEC. Trinta e quatro (38,63%) isolados avaliados apresentavam um ou mais dos fatores de virulência pesquisados. A freqüência dos genes de virulência detectados foram: pap (10,97%), hlyA (10,97%), iha (9,75%), lt (8,53%), sta (7,31%) sfa (6,09%), f4 (4,87%), f5 (4,87%), stb (4,87%), f6 (1,21%) e f41 (1,21%). Os isolados foram resistentes à penicilina (95,12%), lincomicina (93,9%), eritromicina (92,68%), tetraciclina (90,24%), amoxacilina (82,92%), ampicilina (74,39%), josamicina (79,26%), norfloxacina (58,53%), enrofloxacina (57,31%), gentamicina (39,02%), neomicina (37,8%), apramicina (30,48%), colistina (30,48%) e cefalexina (6,09%). Trinta e dois (39,02%) isolados de E. coli continham plasmídeos. <![CDATA[<strong>Isolation of leptospira Serovars Canicola and Copenhageni from cattle urine in the state of Paraná, Brazil</strong>]]> In 2001, 698 urine samples were randomly collected from cattle at a slaughterhouse in the State of Paraná, Brazil. Direct examination using dark field microscopy was carried out immediately after collection. Five putative positive samples were cultured in modified EMJH medium, yielding two positive cultures (LO-14 and LO-10). Typing with monoclonal antibodies revealed that the two isolates were similar to Canicola (LO-14) and Copenhageni (LO-10). Microscopic agglutination test results show that Hardjo is the most common serovar in cattle in Brazil. Rats and dogs are the common maintenance hosts of serovars Copenhageni and Canicola. The excretion of highly pathogenic serovars such as Copenhageni and Canicola by cattle can represent an increasing risk for severe leptospirosis is large populations, mainly living in rural areas.<hr/>No ano de 2001, 698 amostras de urina foram colhidas aleatoriamente, durante o abate em um frigorífico do Estado do Paraná, Brasil. O exame direto em microscópio de campo escuro foi realizado imediatamente após a colheita. As cinco amostras de urina positivas neste exame foram semeadas em meio EMJH modificado, sendo possível o crescimento de leptospiras em duas (LO-14 e LO-10). As estirpes isoladas foram tipificadas, por painel de anticorpos monoclonais, como mais similares ao perfil das amostras de referência dos sorovares Canicola (LO-14) e Copenhageni (LO-10). No Brasil, inquéritos sorológicos utilizando a prova de soroaglutinação microscópica mostram o predomínio de reações para o sorovar Hardjo em bovinos. Roedores e cães são os reservatórios mais comuns dos sorovares Copenhageni e Canicola, respectivamente. A eliminação dos sorovares Canicola e Copenhageni pela espécie bovina pode resultar em um aumento na ocorrência de casos graves de leptospirose humana, principalmente na população rural. <![CDATA[<strong><i>Plesiomonasshigelloides</i></strong><strong> and Aeromonadaceae family pathogens isolated from marine mammals of Southern and Southeastern Brazilian coast</strong>]]> The aquatic environment is the habitat of many microorganisms, including Plesiomonasshigelloides and Aeromonas species which are pathogenic to human and animals. In the present investigation, we evaluated the occurrence of these pathogens from marine mammals beached or accidentally captured by fishing net in southeastern (RJ) and southern (RS) coastal Brazilian regions. A total of 198 swabs from 27 specimens of marine mammals, including 11 different species, were collected by DEENSP and GEMARS-CECLIMAR/UFRGS Institutes and sent to LRNCEB/IOC/FIOCRUZ. The samples were enriched in Alkaline Peptone Water (APW) added with 1% of sodium chloride (NaCl), APW plus 3% NaCl and incubated at 37ºC for 18-24 hours. Following, samples were streaked onto Pseudomonas-Aeromonas Selective Agar Base (GSP Agar) and suspected colonies were biochemically characterized. The results revealed 114 strains, including ten Aeromonas species and P.shigelloides. The main pathogens isolated were A.veronii biogroup veronii (19.3%), A. caviae (12.3%), A. hydrophila (9.6%) and P.shigelloides (7%). The pathogens were isolated in both coastal and offshore marine mammals. These data point the importance of epidemiological surveillance and microbiological monitoring and reinforce the need to implement environmental protection programs, especially related to endangered cetacean species.<hr/>O ambiente aquático é o habitat de vários microrganismos, incluindo Plesiomonasshigelloides e espécies de Aeromonas, os quais são patogênicos para o homem e os animais. Na presente investigação, foi avaliada a ocorrência destes patógenos a partir de swabs coletados de mamíferos marinhos encalhados ou capturados acidentalmente em redes de pesca nas regiões costeiras do sudeste (RJ) e sul (RS) do Brasil. O total de 198 swabs de 27 espécimes de mamíferos marinhos, incluindo 11 espécies distintas, foi coletado por profissionais dos institutos DEENSP, GEMARS-CECLIMAR/UFRGS e enviado ao LRNCEB/IOC/FIOCRUZ. Em seguida, as amostras foram submetidas a enriquecimento em Água Peptonada Alcalina (APA) adicionada de 1% de cloreto de sódio (NaCl) e APA com 3% de NaCl (37ºC/18-24 h). Posteriormente, as amostras foram semeadas em meio Agar Seletivo para Pseudomonas-Aeromonas (Agar GSP) e as colônias suspeitas submetidas à caracterização bioquímica. Um total de 114 cepas foram identificadas, incluindo dez espécies de Aeromonas e P.shigelloides. Os principais patógenos isolados foram A.veronii biogrupo veronii (19,3%), A. caviae (12,2%), A. hydrophila (9,6%) e Plesiomonasshigelloides (7%). Os patógenos foram encontrados tanto em espécies de mamíferos marinhos costeiros como oceânicos. Esses dados apontam para a importância da vigilância epidemiológica e monitoramento microbiológico, além de reforçar a necessidade de implantação de programas de proteção ambiental, particularmente relacionados aos mamíferos marinhos ameaçados de extinção. <![CDATA[<strong>Antibacterial activity of plant extracts from Brazil against fish pathogenic bacteria</strong>]]> The aim of this work was to evaluate the antibacterial activity of Brazilian plants extracts against fish pathogenic bacteria. Forty six methanolic extracts were screened to identify their antibacterial properties against Streptococcus agalactiae, Flavobacterium columnare and Aeromonas hydrophila. Thirty one extracts showed antibacterial activity.<hr/>O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antibacteriana de extratos de plantas brasileiras contra bactérias patogênicas para peixes. A atividade antibacteriana de quarenta e seis extratos metanólicos de plantas foi avaliada contra os agentes Streptococcus agalactiae, Flavobacterium columnare e Aeromonas hydrophila. Trinta e um extratos apresentaram atividade antibacteriana. <![CDATA[<strong>A toxic cyanobacterial bloom in an urban coastal lake, Rio Grande do Sul state, Southern Brazil</strong>]]> Reports of cyanobacterial blooms developing worldwide have considerably increased, and, in most cases, the predominant toxins are microcystins. The present study reports a cyanobacterial bloom in Lake Violão, Torres, Rio Grande do Sul State, in January 2005. Samples collected on January 13, 2005, were submitted to taxonomical, toxicological, and chemical studies. The taxonomical analysis showed many different species of cyanobacteria, and that Microcystis protocystis and Sphaerocavum cf. brasiliense were dominant. Besides these, Microcystis panniformis, Anabaena oumiana,Cylindrospermopsis raciborskii, and Anabaenopsis elenkinii f. circularis were also present. The toxicity of the bloom was confirmed through intraperitoneal tests in mice, and chemical analyses of bloom extracts showed that the major substance was anabaenopeptin F, followed by anabaenopeptin B, microcystin-LR, and microcystin-RR.<hr/>O número de relatos de ocorrências de florações de cianobactérias em todo o mundo vem aumentando consideravelmente e na maioria desses episódios, as toxinas dominantes são as microcistinas. O presente estudo relata a ocorrência de floração na Lagoa do Violão, município de Torres, RS, em janeiro de 2005. As amostras coletadas em 13/01/2005 foram submetidas a estudos taxonômicos, toxicológicos e químicos. O exame microscópico do fitoplancton mostrou a dominância das espécies Microcystis protocystis e Sphaerocavum cf. brasiliense; foram observadas, também, Microcystis panniformis, Anabaena oumiana,Cylindrospermopsis raciborskii e Anabaenopsis elenkinii f. circularis. A toxicidade da floração foi confirmada através de ensaio intraperitonial em camundongos e a análise química de extratos obtidos da biomassa liofilizada mostrou que a substância majoritária era a anabaenopeptina F, seguida por anabaenopeptina B, microcistina-LR e microcistina-RR. <![CDATA[<strong>Optimization of nutritional requirements for mycelial growth and sporulation of entomogenous fungus </strong><em><b>Aschersonia aleyrodis </b></em><strong>Webber</strong>]]> The objective of the present study was to investigate the optimal nutritional requirements for mycelial growth and sporulation of entomopathogenic fungus Aschersonia aleyrodis Webber by orthogonal layout methods. Herein the order of effects of nutrient components on mycelial growth was tryptone > Ca2+ > soluble starch > folacin, corresponding to the following optimal concentrations: 1.58% Soluble Starch, 3.16% Tryptone, 0.2 mmol l-1 Ca2+ and 0.005% Folacin. The optimal concentration of each factors for sporulation was 1.16% lactose, 0.394% tryptone, 0.4 mmol l-1 Fe2+ and 0.00125% V B1, and the effects of medium components on sporulation were found to be in the order lactose > V B1 > Fe2+ > tryptone. Under the optimal culture conditions, the maximum production of mycelial growth achieved 20.05 g l-1 after 7 days of fermentation, while the maximum spore yield reached 5.23 ×10(10) spores l-1 after 22 days of cultivation. This is the first report on optimization of nutritional requirements and design of simplified semi-synthetic media for mycelial growth and sporulation of A. aleyrodis.<hr/>O objetivo deste estudo foi investigar as exigências nutricionais ótimas para o crescimento micelial e esporulação do fungo entomopatogênico Aschersonia aleyrodis Webber. A ordem dos efeitos dos nutrientes na multiplicação micelial foi triptona>Ca2+>amido solúvel>folacina, com as seguintes concentrações ótimas: amido solúvel 1,58%, tritona 3,16%, Ca2+ 0,2mmol.l-1 e folacina 0,005%. Para a esporulação, a concentração ótima de cada fator foi: lactose 1,16%, triptona 0,394%, Fe2+ 0,4mmol.l-1 e V B1 0,00125%, na seguinte ordem: lactose> V B1> Fe2+>tritona. Em condições ótimas de cultura, a produção máxima de micélio foi 20,05g.l-1 após 7 dias de fermentação, enquanto o rendimento máximo de esporos foi 5,23 x 10(10) esporos.l-1 após 22 dias de cultivo. Esse é o primeiro relato sobre otimização das exigências nutricionais e desenvolvimento de meio de cultura semi-sintético para crescimento micelial e esporulação de A. aleyrodis. <![CDATA[<strong>Isolation and preliminary characterization of a<i> o</i>-nitrobenzaldehyde-degrading <i>Alcaligenes</i> sp. </strong><strong>ND1</strong>]]> This paper reports the isolation and characterization of a new o-nitrobenzaldehyde (ONBA)-degrading bacterium, Alcaligenes sp. ND1. ND1 degraded almost all ONBA (100 mg L-1) in M9 medium within 36 hours. The key enzyme(s) involved in the initial biodegradation was a constitutively intracellular enzyme(s). This bacterium has great potential utility for bioremediation.<hr/>Esse trabalho relata o isolamento e a caracterização de uma nova bactéria degradadora de o-nitrobenzaldeido (ONBA), Alcaligenes sp ND1. A bactéria ND1 decompôs todo o ONBA (100 mg.L-1) do meio M9 em 36 horas. A enzima-chave envolvida na biodegradação inicial foi uma enzima constitutiva intracelular. Esta bactéria apresenta um potencial de aplicação para bioremediação. <![CDATA[<strong>Application of a bacterial extracellular polymeric substance in heavy metal adsorption in a co-contaminated aqueous system</strong>]]> The application of a bacterial extracellular polymeric substance (EPS) in the bioremediation of heavy metals (Cd, Zn and Cu) by a microbial consortium in a hydrocarbon co-contaminated aqueous system was studied. At the low concentrations used in this work (1.00 ppm of each metal), it was not observed an inhibitory effect on the cellular growing. In the other hand, the application of the EPS lead to a lower concentration of the free heavy metals in solution, once a great part of them is adsorbed in the polymeric matrix (87.12% of Cd; 19.82% of Zn; and 37.64% of Cu), when compared to what is adsorbed or internalized by biomass (5.35% of Cd; 47.35% of Zn; and 24.93% of Cu). It was noted an increase of 24% in the consumption of ethylbenzene, among the gasoline components that were quantified, in the small interval of time evaluated (30 hours). Our results suggest that, if the experiments were conducted in a larger interval of time, it would possibly be noted a higher effect in the degradation of gasoline compounds. Still, considering the low concentrations that were evaluated, it is possible that a real system could be bioremediated by natural attenuation process, demonstrated by the low effect of those levels of contaminants and co-contaminants over the naturally present microbial consortium.<hr/>A aplicação de uma substância polimérica extracelular (EPS) bacteriana na biorremediação de metais pesados (Cd, Zn e Cu) por um consórcio microbiano em um sistema aquoso co-contaminado com hidrocarbonetos foi estudada. Nas baixas concentrações usadas neste trabalho (1,00 ppm de cada metal), não foi observado um efeito inibitório no crescimento celular. Por outro lado, a aplicação da EPS bacteriana levou a uma menor concentração de metais livres em solução, uma vez que grande parte destes fica adsorvido na matriz polimérica (87,12% de Cd; 19,82% de Zn; e 37,64% de Cu) quando comparado ao que é adsorvido ou interiorizado pela biomassa (5,35% de Cd; 47,35% de Zn; e 24,93% de Cu). No pequeno intervalo de tempo avaliado (30 horas) e na baixa concentração de gasolina utilizada (0,1% (v/v)), foi percebido um aumento de 24% no consumo de etilbenzeno, entre os componentes da gasolina que foram quantificados. Nossos resultados sugerem que, se os experimentos fossem conduzidos em um intervalo de tempo maior, possivelmente poderia ter sido observado um maior efeito na degradação dos componentes da gasolina. Ainda, considerando as baixas concentrações avaliadas, é provável que um sistema real pudesse ser biorremediado pelo processo de atenuação natural, tendo em vista o baixo efeito desses níveis de contaminantes e co-contaminantes sobre o consórcio microbiano naturalmente presente. <![CDATA[<strong>Effect of gamma radiation on the inactivation of aflatoxin B1 in food and feed crops</strong>]]> Samples of food crops (peanut, peeled pistachio, unpeeled pistachio, rice, and corn) and feed (barley, bran, corn) were autoclave-sterilized, and inoculated with 10(6) of spore suspension of an isolate of Aspergillus flavus fungus known to produce aflatoxin B1 (AFB1) . Following a 10-day period of incubation at 27 C to allow for fungal growth, food and feed samples were irradiated with gamma radiation at the doses 4, 6, and 10 kGy. Results indicated that degradation of AFB1 was positively correlated with the increase in the applied dose of gamma ray for each tested sample. At a dose of 10 kGy percentages of AFB1 degradation reached highest values at 58.6, 68.8, 84.6, 81.1 and 87.8% for peanuts, peeled pistachios, unpeeled pistachios, corn and rice samples, respectively. In feed samples percentages of AFB1 degradation were 45, 66, and 90% in barley, 47, 75, and 86% in bran, and 31, 72, and 84% in corn for the doses of 4, 6, and 10 kGy, respectively. AFB1 degradation in food samples correlated negatively with oil content in irradiated samples. Thus, in peanuts, which contained the highest oil content, percentage of AFB1 degradation at 10 kGy was not more than 56.6%, whereas, the corresponding value in corn, which contained the lowest oil content, reached as high as 80%. The above results indicate the possibility of using gamma radiation as a means of degradation of AFB1 in food and feed crops to levels lower than the maximum allowed levels.<hr/>Amostras de alimentos (amendoim, pistache descascada, pistache com casca, arroz e milho) e de ração (cevada, farelo de trigo e milho) foram esterilizadas por autoclavação e inoculadas com uma suspensão de esporos (10(6)) de um isolado de Aspergillus flavus produtor de aflatoxina B1 (AFB1). Após incubação por 10 dias a 27ºC para multiplicação do fungo, as amostras foram irradiadas com radiação gama nas doses de 4, 6 e 10 kGy. Os resultados indicaram que a degradação da AFB1 correlacionou-se positivamente com o aumento da dose de radiação gama. As porcentagens de degradação da AFB1 foram mais altas na dose de 10kGy, obtendo-se valores de 58,6, 68,8, 84,6, 81,1 e 87,8% para amendoim, pistache descascada, pistache com casca, milho e arroz, respectivamente. Nas rações, as porcentagens de degradação de AFB1 foram 45, 66 e 90% para cevada, 47, 75 e 86% para farelo de trigo e 31, 72 e 84% para milho, nas doses de 4, 6 e 10 kGy, respectivamente. A degradação de AFB1 correlacionou-se negativamente com o teor de gordura nas amostras irradiadas. Assim, em amendoim, que apresentou o teor de gordura mais alto, a porcentagem de degradação com 10 kGy foi inferior a 56,6%, enquanto o valor correspondente em milho, que apresentou o teor de gordura mais baixo, foi de 80%. Os resultados indicam a possibilidade de uso da radiação gama como meio de degradação de AFB1 em alimentos e ração a níveis inferiores ao máximo permitido. <![CDATA[<strong>Comparison of methodologies for conidia production by </strong><em><b>Alternaria alternata </b></em><strong>from citrus</strong>]]> Conidia production is a problem in the study of Alternaria alternata from citrus. Thus, this study aimed to compare existing methodologies for conidial production of A. alternata isolated from Ponkan tangerine (2 isolates), Cravo lemon (1 isolate), Pêra orange (2 isolates) and Murcott tangor (1 isolate). The methodologies used were conidia production with 12 and 24 hours under white fluorescent light, evaluation with 24 and 48 hours after applying fungal mycelium stress technique, cold stress followed by injury of mycelium and evaluation with 24 hours, using healthy vegetable tissue and the use of black fluorescent near ultraviolet (NUV) lamp. Satisfactory result was obtained with A. alternata isolate from Murcott tangor, with the production of 2.8 x 10(5) conidia mL-1, when fungal mycelium was stressed (Petri dish with 66.66% of fungi growth) and subsequently 24 h of growth. The use of white light (24 h) and black fluorescent NUV lamp also induced expressive conidia production by one isolate of Ponkan tangerine, which produced 17.2 x 10(5) and 10.1 x 10(5) conidia mL-1 and another of Murcott tangor, which produced 13.9 x 10(5) and 10.1 x 10(5) conidia mL-1, respectively. The remaining methodologies analyzed in this study were not able to induce conidia production in satisfactory quantity. The use of both mycelium stress technique and white light (24 h) and black fluorescent NUV lamp allowed the production of enough quantities of conidia to be used in vitro (detection of fungitoxic substances)and in vivo (pathogenicity test)assays, respectively.<hr/>A produção de conídios consiste em problema no estudo de Alternaria alternata do citros. Assim, este estudo objetivou comparar metodologias existentes para a produção de conídios de A. alternata por dois isolados de tangerina Ponkan, um de limão Cravo, dois de laranja Pêra e um de tangor Murcott. As metodologias empregadas foram a produção de conídios com 12 e 24 horas sob luz branca, avaliação com 24 e 48 horas após estressamento do micélio do fungo, choque térmico com imediato estressamento do micélio e avaliação com 24 horas, produção de conídios pelo emprego de tecido vegetal sadio e o emprego de luz negra ultravioleta. Produção satisfatória de conídios foi obtida com o isolado de A. alternata de tangor Murcott, a qual foi de 2,8 x 10(5) conídios mL-1, mediante emprego da técnica de estressamento da colônia e cultivo do fungo por 24 horas. Os empregos de luz branca (24 h) e negra ultravioleta promoveram expressiva produção de conídios por um isolado de tangerina Ponkan, a qual foi de 17,2 x 10(5) e 10,1 x 10(5) conidios mL-1 e por outro de tangor Murcott, a qual foi de 13,9 x 10(5) e 10,1 x 10(5) conídios mL-1, respectivamente. As outras metodologias analisadas neste estudo não foram capazes de induzir a produção de conídios em quantidade satisfatória. Com o emprego das técnicas de estressamento do micélio e a utilização de luz branca (24 h) e negra ultravioleta, tornou-se possível obter quantidades de conídios suficientes para serem utilizadas em testes in vitro (detecção de substâncias fungitóxicas)e in vivo (testes de patogenicidade), respectivamente.