Scielo RSS <![CDATA[Brazilian Journal of Microbiology]]> http://www.scielo.br/rss.php?pid=1517-838220090002&lang=en vol. 40 num. 2 lang. en <![CDATA[SciELO Logo]]> http://www.scielo.br/img/en/fbpelogp.gif http://www.scielo.br <![CDATA[<b>Bacteriocins from <i>Lactobacillus plantarum</i> production, genetic organization and mode of action</b>: <b>produção, organização genética e modo de ação</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200001&lng=en&nrm=iso&tlng=en Bacteriocins are biologically active proteins or protein complexes that display a bactericidal mode of action towards usually closely related species. Numerous strains of bacteriocin producing Lactobacillus plantarum have been isolated in the last two decades from different ecological niches including meat, fish, fruits, vegetables, and milk and cereal products. Several of these plantaricins have been characterized and the aminoacid sequence determined. Different aspects of the mode of action, fermentation optimization and genetic organization of the bacteriocin operon have been studied. However, numerous of bacteriocins produced by different Lactobacillus plantarum strains have not been fully characterized. In this article, a brief overview of the classification, genetics, characterization, including mode of action and production optimization for bacteriocins from Lactic Acid Bacteria in general, and where appropriate, with focus on bacteriocins produced by Lactobacillus plantarum, is presented.<hr/>Bacteriocinas são proteínas ou complexos protéicos biologicamente ativos que apresentam atividade bactericida contra espécies relacionadas. Nas ultimas duas décadas, várias cepas de Lactobacillus plantarum produtoras de bacteriocinas foram isoladas de diferentes nichos ecológicos como carnes, peixes, frutas, vegetais e produtos lácteos e de cereais. Várias plantaricinas foram caracterizadas e suas seqüências de aminoácidos determinadas. Diferentes aspectos do modo de ação, otimização da fermentação e organização genética já foram estudados. Entretanto, muitas bacteriocinas produzidas por diferentes cepas de Lactobacillus plantarum ainda não foram completamente caracterizadas.Nesse artigo, apresenta-se uma breve revisão sobre a classificação, genética, caracterização, modo de ação, e otimização da produção de bacteriocinas de bactérias láticas em geral, e, quando apropriado, de bacteriocinas de Lactobacillus plantarum. <![CDATA[<b>CLSI broth microdilution method for testing susceptibility of<i> Malasseziapachydermatis</i> to thiabendazole</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200002&lng=en&nrm=iso&tlng=en Thiabendazole, classified as antiparasitic and also used as an antifungal drug, can be found as otological solution indicated for treatment of parasitic and fungal external otitis in small animals. Malassezia pachydermatis is a yeast recognized as a normal inhabitant on the skin and mucous membranes of dogs and cats. However, it is considered an opportunistic agent that causes external otitis and dermatitis in these animals. The aim of this study was to evaluate the in vitro effect of thiabendazole against 51 isolates of M. pachydermatis using the CLSI Broth Microdilution method that has been adapted for this yeast species (NCCLS, 2002). Based on this test, the Minimum Inhibitory Concentrations (MIC) of thiabendazol was calculated. Subsequently, the susceptibility of each isolate against this antifungal was determined. It was observed that the MIC of thiabendazole against M. pachydermatis ranged from 0.03 to > 4 μg/mL. A total of 13.7% of the isolates were found to be resistant, 47.1% were intermediate and 39.2% were sensitive to the drug. The rate of resistance of the yeasts against thiabendazole was similar to the results previously obtained with other antifungals, while the adapted broth microdilution technique used in this study proved to be efficient.<hr/>Tiabendazol, um fármaco classificado como antiparasitário e também usado como antifúngico, pode ser encontrado como solução otologica indicada no tratamento da otite externa parasitária e fungica em pequenos animais. Malassezia pachydermatis é uma levedura considerada habitante normal da pele e das mucosas de cães e gatos. Entretanto, considera-se um agente do oportunista causador de otite externa e dermatite nestes animais. A finalidade deste estudo foi avaliar o efeito in vitro do tiabendazol frente a 51 amostras de M. pachydermatis através do método CLSI de Microdiluição em Caldo adaptado para esta espécie de levedura (NCCLS, 2002). Baseado neste teste calculou-se as Concentrações Inibitórias Mínimas (CIM) do tiabendazol e, subseqüentemente, foi detectada a suscetibilidade de cada amostra frente a este antifungico. Observou-se que a CIM do tiabendazol frente a M. pachydermatis variou de 0,03 a > 4 μg/mL. Estas amostras foram classificadas em resistente (13,7%), sensibilidade intermediária (47,1%) e sensível (39,2%). A resistência da levedura frente ao tiabendazol mostrou similaridade com resultados anteriormente observados com outros antifúngicos e a adaptação da técnica de Microdiluição em Caldo utilizada mostrou-se eficiente. <![CDATA[<b>Serum antileptospiral agglutinins in freshwater turtles from Southern Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200003&lng=en&nrm=iso&tlng=en In this study, we observed the presence of antileptospiral agglutinins in freshwater turtles of two urban lakes of Pelotas, Southern Brazil. Forty animals (29 Trachemys dorbigny and 11 Phrynops hilarii) were captured and studied. Attempts to isolate leptospires from blood and urine samples were unsuccessful. Serum samples (titer > 100) reactive to pathogenic strains were observed in 11 animals. These data encourage surveys of pet turtles to evaluate the risk of transmission of pathogenic leptospires to humans.<hr/>Neste estudo, observamos a presença de aglutininas anti-Leptospira em tartarugas de água doce de dois lagos urbanos de Pelotas, Sul do Brasil. Quarenta animais (29 Trachemys dorbigny e 11 Phrynops hilarii) foram capturados e estudados. Esforços para isolar leptospiras do sangue e urina não foram bem sucedidos. Amostras de soro positivas (títulos > 100), reativas para cepas patogênicas, foram observadas em 11 animais. Estes dados encorajam inquéritos para avaliação de tartarugas como potenciais transmissoras de leptospiras patogênicas para humanos. <![CDATA[<b>Identification of <i>Mycobacterium bovis</i> Isolates by a multiplex PCR</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200004&lng=en&nrm=iso&tlng=en Isolates from suggestive bovine tuberculosis lesions were tested by a multiplex polymerase chain reaction (m-PCR) targeting for RvD1Rv2031c and IS6110 sequences, specific for M. bovis and Mycobacterium tuberculosis complex respectively. The m-PCR successfully identified as M. bovis 88.24% of the isolates.<hr/>Colônias isoladas a partir de lesões sugestivas de tuberculose bovina foram testadas pela reação múltipla em cadeia da polimerase, usando oligonucleotídeos direcionados para as seqüências genômicas RvD1Rv2031c e IS6110, específicas para M. bovis e para o complexo Mycobacterium tuberculosis, respectivamente. A m-PCR identificou, com sucesso, 88,24% das colônias isoladas como M. bovis. <![CDATA[<b>Activation of the alternative complement pathway in canine normal serum by <i>Paracoccidioides brasiliensis</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200005&lng=en&nrm=iso&tlng=en The dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis is the etiological agent of paracoccidioidomycosis, a human granulomatous disease. Recently the first case of natural disease in dogs was reported. The complement system is an important effector component of humoral immunity against infectious agents. Therefore, the aim of this study was to evaluate the activation of the dog alternative complement pathway by P. brasiliensis. Initially, the ability of erythrocytes of guinea pig, rabbit, sheep, chicken and swine to activate the dog alternative pathway was evaluated. The guinea pig erythrocytes showed the greatest capacity to activate dog alternative pathway. The alternative (AH50) hemolytic activity was evaluated in 27 serum samples from healthy dogs and the mean values were 87.2 AH50/ml. No significant differences were observed in relation to sex and age. The alternative pathway activation by P. brasiliensis was higher in serum samples from adult dogs when compared to puppies and aged dogs (p < 0.05). This is the first report of dog alternative complement pathway activation by P. brasiliensis and suggests that it may play a protective role in canine paracoccidioidomycosis.<hr/>O fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis é o agente etiológico da paracoccidioidomicose, uma doença granulomatosa humana. Recentemente, foi relatado o primeiro caso da doença natural em cães. O sistema complemento é um importante componente efetor da imunidade humoral contra agentes infecciosos. Portanto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a ativação da via alternativa do complemento canina pelo P. brasiliensis. Inicialmente, foi avaliada a capacidade de eritrócitos de cobaia, coelho, carneiro, galinha e suíno ativarem a via alternativa do complemento canino. Os eritrócitos de cobaia apresentaram maior capacidade de ativar a via alternative do complemento canino. A atividade hemolítica da via alternativa (AH50) foi avaliada em 27 amostras de soro de cães saldáveis e os valores médios observados foram de 87,2 AH50/ml. Não foi observada diferença significativa ao sexo e idade. A ativação da via alternativa pelo P. brasiliensis foi maior nas amostras de soro de cães adultos quando comparada aos cães filhotes e idosos (p < 0.05). Este é o primeiro relato da ativação da via alternative do complemento canino pelo fungo P. brasiliensis e sugere que pode ter um papel protetor na paracoccidioidomicose canina. <![CDATA[<b>Molecular analysis of the rRNA genes of <i>Babesia </i>spp and <i>Ehrlichia canis</i> detected in dogs from Ribeirão Preto, Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200006&lng=en&nrm=iso&tlng=en The partial DNA sequences of the 18S rRNA gene of Babesia canis and the 16S rRNA gene of Ehrlichia canis detected in dogs from Ribeirão Preto, Brazil, were compared to sequences from other strains deposited in GenBank. The E. canis strain circulating in Ribeirão Preto is identical to other strains previously detected in the region, whereas the subspecies Babesia canis vogeli is the main Babesia strain circulating in dogs from Ribeirão Preto.<hr/>As sequências parciais dos genes RNAr 18S de Babesia canis e RNAr 16S e Ehrlichiacanis detectados em cães de Ribeirão Preto, Brasil, foram comparadas à sequências de outras linhagens depositadas no GeneBank. A linhagem de E. canis circulando em Ribeirão Preto é idêntica a outras detectadas previamente na região, enquanto a sub-espécie B. canis vogeli é a principal linhagem de Babesia circulando em cães de Ribeirão Preto. <![CDATA[<b>Multidrug efflux systems in <i>Escherichia coli</i> and <i>Enterobacter cloacae</i> obtained from wholesome broiler carcasses</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200007&lng=en&nrm=iso&tlng=en Members of the Enterobacteriaceae family are present in the intestines of man and animals as commensals or are important disease causing agents. Bacteria bearing multidrug efflux systems (MDR) are able to survive adverse ecological niches. Multiresistant Escherichia coli and Enterobacter cloacae isolates from wholesome broiler carcasses were investigated for the presence of MDR. Lowering of Minimal Inhibitory Concentration for antimicrobials in the presence of a proton-motive force (PMF) uncoupler was tested as a potential display of the MDR phenotype. PCR amplification of the genes encoding AcrA and AcrB, components of a MDR system was performed. Diversity of each species was ascertained by Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) of DNA digested with endonuclease XbaI. For all the isolates, except E. coli 1 and E. cloacae 9, lowering of MIC or of the growth rate in the presence of antimicrobials was observed, indicating a PMF dependent resistance mechanism. Expected products of DNA amplification with acrAB derived primers was obtained with all E. coli strains and with two of the five E. cloacae strains. Dendrogram generated shows diverse pulsetypes, confirming the genetic diversity among the strains. An important issue and related public health is the fact that different models and mechanisms of antimicrobial resistance are present in a small number of non-pathogenic strains and isolated from the same origin. These may be sources of resistance genes to others microorganisms, among them, pathogenic strains.<hr/>Os membros da família Enterobacteriaceae estão presentes no intestino do homem e dos animais como comensais ou agentes causadores de doença importantes. Bactérias multirresistentes podem possuir sistemas de efluxo multidrogas (MDR) sendo capazes de sobreviver em nichos ecológicos adversos. Escherichia coli e Enterobacter cloacae, multirresistentes, isoladas de frangos sadios foram investigadas quanto à presença de MDR. A diminuição da concentração inibitória mínima de antimicrobianos, na presença de um desacoplador da força próton motora (PMF), foi usada para detectar o fenótipo MDR. Foi realizada PCR dos genes codificadores de AcrA e AcrB, componentes de um sistema MDR. A diversidade de cada isolado foi confirmada por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) usando a endonuclease XbaI. Observou-se em todos os isolados, exceto E. coli 1 e E. cloacae 9, uma diminuição das MICs ou das curvas de crescimento na presença dos antimicrobianos, indicando um mecanismo de resistência dependente da PMF. Os produtos amplificados esperados derivados de acrAB foram obtidos em todos os isolados de E. coli e em dois, dos cinco, de E. cloacae. O dendrograma gerado mostra diferentes perfis de bandas (pulsetypes), confirmando a diversidade genética entre os isolados. Uma questão importante e relacionada à saúde publica é o fato de que diferentes modelos e mecanismos de resistência aos antimicrobianos estão presentes em um número reduzidos de isolados não patogênicos e obtidos de uma mesma origem. Esses podem ser fontes de genes de resistência para outros microorganismos, entre eles, cepas patogênicas. <![CDATA[<b>Epidemiological aspects of <i>astrovirus</i> and <i>coronavirus</i> in poults in the South Eastern Region of Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200008&lng=en&nrm=iso&tlng=en A survey of Turkey Coronavirus (TCoV) and Astrovirus (TAstV-2) prevalence was carried out from February to December during 2006 year in semiarid region of Brazil, from a turkey producer area, localized in South Eastern of Brazil. To asses the risk factor related to clinical material, climatic condition and type of RT-PCR applied, cloacal swabs (CS), faeces, sera, bursa of Fabricius (BF), thymus (TH) and spleen (SP) and ileum-caeca region were collected from 30-day-old poults suffering of enteritis episode characterized as poult enteritis mortality syndrome (PEMS). The PEMS clinical features were characterized by watery to foamy faeces, light brown-yellow in colour and low mortality rate. Meteorological data (rainfall and relative humidity) observed during along the study presented monthly average temperature ranging from 39.3 and 31.2ºC, precipitation in rainy season from 40 to 270.3 mm/month, and no rain during dry season. Simplex RT-PCR gave odds ratio (OR) values suggesting that ileum-caeca region is at higher chance (OR=1.9; p=0.9741) to have both viral RNA than faeces (OR=1.5; p=0.7319). However, multiplex RT-PCR showed 3.98 (p=0.89982) more chance to give positive results in faeces than CS at dry season. The major risk factors seem to be low rate of humidity and high temperatures at winter, probably responsible for spread, easily, the TCoV and TAstv-2 among the flocks. The positive results of both virus suggested that they can play an important role in enteric disorders, associated to low humidity and high temperatures frequently found in tropical countries.<hr/>O presente estudo foi conduzido para avaliar a prevalência do Coronavirus dos perus (TCoV) e Astrovirus tipo 2 (TAstV-2) entre os meses de Fevereiro a Dezembro de 2006, em uma região produtora localizada no semi-árido a Sudeste do Brasil. Os principais fatores de risco associado a prevalência foram material clínico analisado, condições climáticas e tipo de técnica molecular empregada. Os sinais clínicos foram caracterizados como intenso fluido intestinal e baixo crescimento em aves jovens, sendo o material coletado swabs cloacais, fezes, soros, bursa de Fabrícius, segmentos do intestino delgado, timo e baço. Os dados meteorológicos (índice pluviométrico e umidade relativa) desta região, durante o período de estudo, foram de temperatura média mensal variando de 39.3 a 31.2ºC, precipitação na época chuvosa variando de 40 a 270.3mm/mês e ausência de chuva na estação fria e seca. A técnica de simplex RT-PCR resultou em valores de odds ratio (OR) que sugerem que a região do intestino delgado (junção íleo-cecal) possui alta chance (1.9 vezes) de gerar resultados positivos na amplificação de RNA viral que as fezes (1.5 vezes) analisadas. A técnica de multiplex RT-PCR demonstrou ser 3.98 vezes mais eficiente em promover resultados positivos nas fezes que nos swabs cloacais, durante a época de inverno. Os maiores fatores de risco encontrados foram baixa umidade relativa associada a altas temperaturas, durante a estação seca, o que pode permitir uma maior disseminação aérea do ambos os vírus entre os lotes estudados. A alta prevalência detectada para dois vírus sugerem que, no Brasil, estes representam os maiores responsáveis pelos surtos de enterite viral nas regiões semi-áridas, associado a baixas umidades e altas temperaturas típicas de países tropicais. <![CDATA[<b>Detection of methicillin resistance and <em>slime</em> factor production of <em>Staphylococcus aureus</em> in bovine mastitis</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200009&lng=en&nrm=iso&tlng=en This study aimed to detect methicillin resistant and slime producing Staphylococcus aureus in cases of bovine mastitis. A triplex PCR was optimized targetting 16S rRNA, nuc and mecA genes for detection of Staphylococcus species, S. aureus and methicillin resistance, respectively. Furthermore, for detection of slime producing strains, a PCR assay targetting icaA and icaD genes was performed. In this study, 59 strains were detected as S. aureus by both conventional tests and PCR, and 13 of them were found to be methicillin resistant and 4 (30.7%) were positive for mecA gene. Although 22 of 59 (37.2%) S. aureus isolates were slime-producing in Congo Red Agar, in PCR analysis only 15 were positive for both icaA and icaD genes. Sixteen and 38 out of 59 strains were positive for icaA and icaD gene, respectively. Only 2 of 59 strains were positive for both methicillin resistance and slime producing, phenotypically, suggesting lack of correlation between methicillin resistance and slime production in these isolates. In conclusion, the optimized triplex PCR in this study was useful for rapid and reliable detection of methicillin resistant S. aureus. Furthermore, only PCR targetting icaA and icaD may not sufficient to detect slime production and further studies targetting other ica genes should be conducted for accurate evaluation of slime production characters of S. aureus strains.<hr/>Este estudo objetivou a detecção de Staphylococcus aureus resistente a meticilina e produtor do fator slime em casos de mastite bovina. Um PCR triplex foi otimizado, com alvo no genes 16SrRNA, nuc e mecA para detecção de Staphylococcus spp, S. aureus e resistencia a meticilina, respectivamente. Para detecção das cepas produtoras do fator slime, empregou-se um PCR com alvo nos genes icaA e icaD. No estudo, 59 cepas foram identificadas como S. aureus por testes convencionais e PCR, sendo 13 resistentes a meticilina e quatro positivas para o gene mecA. Embora 22 das 59 cepas tenham sido produtoras do fator slime em Agar Vermelho Congo, no teste PCR somente 15 foram positivas para os genes icaA e icaD. Dezesseis e 38 das 59 cepas foram positivas para os genes icaA e icaD, respectivamente. Somente duas das 59 cepas foram positivas simultaneamente para resistência a meticilina e produção do fator slime, sugerindo falta de correlação entre estas características. Em conclusão, o PCR triplex otimizado neste trabalho mostrou-se ser um método rápido e confiável para detecção de S.aureus meticilina resistente. Por outro lado, somente PCR para os genes icaA e icaD pode não ser suficiente para detectar produção de fator slime e outros estudos com alvo em outros genes ica são necessários para um avaliação correta da produção do fator slime por S. aureus. <![CDATA[<b>Antimicrobial susceptibility of <i>Clostridium perfringens </i>strains isolated from broiler chickens</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200010&lng=en&nrm=iso&tlng=en Clostridium perfringens is a normal inhabitant of the intestinal tract of chickens as well as a potential pathogen that causes necrotic enteritis and colangio hepatitis. The minimum inhibitory concentration (MIC) of seven different compounds used for therapy, growth promotion or prevention of coccidiosis was determined by agar dilution method for 55 C. perfringens strains isolated from the intestines of broiler chickens. All strains showed high susceptibility to penicillin, avilamycin, monensin and narasin. Only 7.3% of the strains showed an intermediated sensitivity to lincomycin, and 49 (89.1%) were considered susceptible. For tetracycline and bacitracin, 41.8% and 47.3% of strains, respectively, were considered resistant.<hr/>Clostridium perfringens é um habitante normal da microbiota intestinal de frangos, sendo um agente potencialmente patogênico, causador de enterite necrótica e colangio-hepatite. A concentração inibitória mínima (CIM) de sete drogas utilizadas na terapêutica, como agentes promotores de crescimento ou na prevenção de coccidiose foi determinada pelo método de diluição em ágar para 55 estirpes de C. perfringens isoladas do intestino de frangos de corte. Todas as estirpes revelaram alta sensibilidade à penicilina, avilamicina, narasin e monensina, apenas 7,3% demonstraram CIM intermediário para lincomicina e 89.1% foram consideradas sensíveis. Para tetraciclina e bacitracina, 41,8% e 47.3% das amostras, respectivamente, foram consideradas resistentes. <![CDATA[<b>Detection of <i>Mycobacterium avium</i> in pet birds</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200011&lng=en&nrm=iso&tlng=en The present study is a report on the presence of Mycobacterium avium in four birds of the psittaciform order kept as pets. Anatomopathological diagnosis showed lesions suggestive of the agent and presence of alcohol-acid resistant bacilli (AARB) shown by the Ziehl-Neelsen staining. The identification of Mycobacterium avium was performed by means of PRA (PCR Restriction Analysis). DNA was directly extracted from tissue of the lesions and blocked in paraffin. The role of this agent in pet bird infection is discussed, as well as its zoonotic potential.<hr/>Este estudo relata a presença de Mycobacterium avium em quatro aves da ordem Psitaciformes, mantidos como animais de estimação. O exame anatomopatológico revelou a presença de bacilos álcool ácido resistentes na coloração de Ziehl-Neelsen, e o diagnostico definitivo foi feito pelo método PRA (PCR Restriction Analysis) a partir de tecidos emblocados em parafina. Este estudo visa alertar o possível potencial zoonótico deste agente em aves mantidas domiciliadas. <![CDATA[<b>Biochemical and molecular characterization of <i>Bacillus pumilus </i>isolated from coastal environment in Cochin, India</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200012&lng=en&nrm=iso&tlng=en Bacillus species constitute a diverse group of bacteria widely distributed in soil and the aquatic environment. In this study, Bacillus strains isolated from the coastal environment of Cochin, India were identified by detailed conventional biochemical methods, fatty acid methyl ester (FAME) analysis and partial 16S rDNA sequencing. Analysis of the data revealed that Bacillus pumilus was the most predominant species in the region under study followed by B. cereus and B. sphaericus. The B. pumilus isolates were further characterized by arbitrarily primed PCR (AP-PCR), antibiotic sensitivity profiling and PCR screening for known toxin genes associated with Bacillus spp. All B. pumilus isolates were biochemically identical, exhibited high protease and lipase activity and uniformly sensitive to antibiotics tested in this study. One strain of B. pumilus harboured cereulide synthetase gene cesB of B. cereus which was indistinguishable from rest of the isolates biochemically and by AP-PCR. This study reports, for the first time, the presence of the emetic toxin gene cesB in B. pumilus.<hr/>As espécies de Bacillus constituem um grupo diversificado de bactérias amplamente distribuídas no solo e no ambiente aquático. Neste estudo, cepas de Bacillus isoladas do ambiente costeiro de Cochin, Índia, foram identificadas através de métodos bioquímicos convencionais, análise de ésteres metílicos de ácidos graxos (FAME) e sequenciamento de 16S rDNA. A análise dos dados revelou que Bacillus pumilus foi a espécie predominante na região estudada, seguido de B. cereus e B. sphaericus. Os isolados de B. pumilus foram caracterizados através da reação em cadeia da polimerase com primers arbitrários (AP-PCR), perfil de sensibilidade a antibióticos e triagem por PCR de genes de toxinas associadas com Bacillus spp. Todos os isolados de B. pumilus foram bioquimicamente idênticos, apresentaram elevada atividade de protease e lipase e foram uniformemente sensíveis aos antibióticos estudados. Um dos isolados de B. pumilus apresentou o gene cesB de B. cereus, que não foinão distinguível dos demais isolados por testes bioquímicos nem por AP-PCR. Este é o primeiro relato da presença do gene cesB da toxina eméticaem B. pumilus. <![CDATA[<b>Genetic diversity of siderophore-producing bacteria of tobacco rhizosphere</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200013&lng=en&nrm=iso&tlng=en The genetic diversity of siderophore-producing bacteria of tobacco rhizosphere was studied by amplified ribosomal DNA restriction analysis (ARDRA), 16S rRNA sequence homology and phylogenetics analysis methods. Studies demonstrated that 85% of the total 354 isolates produced siderophores in iron limited liquid medium. A total of 28 ARDRA patterns were identified among the 299 siderophore-producing bacterial isolates. The 28 ARDRA patterns represented bacteria of 14 different genera belonging to six bacterial divisions, namely ?-, ?-, ?-Proteobacteria, Sphingobacteria, Bacilli,and Actinobacteria. Especially, ?-Proteobacteria consisting of Pseudomonas, Enterobacter, Serratia, Pantoea, Erwinia and Stenotrophomonasgenus encountered 18 different ARDRA groups. Results also showed a greater siderophore-producing bacterial diversity than previous researches. For example, Sphingobacterium (isolates G-2-21-1 and G-2-27-2), Pseudomonas poae (isolate G-2-1-1), Enterobacter endosymbiont (isolates G-2-10-2 and N-5-10), Delftia acidovorans (isolate G-1-15), and Achromobacter xylosoxidans (isolates N-46-11HH and N-5-20) were reported to be able to producesiderophores under low-iron conditions for the first time. Gram-negative isolates were more frequently encountered, with more than 95% total frequency. For Gram-positive bacteria, the Bacillus and Rhodococcus were the only two genera, with 1.7% total frequency. Furthermore, the Pseudomonas and Enterobacter were dominant in this environment, with 44.5% and 24.7% total frequency, respectively. It was also found that 75 percent of the isolates that had the high percentages of siderophore units (% between 40 and 60) belonged to Pseudomonas. Pseudomonas sp. G-229-21 screened out in this study may have potential to apply to low-iron soil to prevent plant soil-borne fungal pathogen diseases.<hr/>A diversidade genética de bactérias de rizosfera de tabaco produtoras de sideróforos foi estudada por meio da técnica de análise de restrição do DNA ribossomal amplificado (ARDRA), homologia de seqüência de 16s rRNA e métodos de análise filogenética. Observou-se que 85% do total de 354 isolados produziram sideróforos em meio liquido com restrição de ferro. Entre os 299 isolados produtores de sideróforos identificou-se 28 padrões ARDRA, que representaram 14 gêneros bacterianos diferentes, pertencentes a seis divisões bacterianas: ?-, ?-, ?-Proteobacteria, Sphingobacteria, Bacilli e Actinobacteria. ?-Proteobacteria, consistindo de Pseudomonas, Enterobacter, Serratia, Pantoea, Erwinia e Stenotrophomonas, pertenceram a 18 grupos ARDRA. Os resultados também mostraram uma diversidade maior de bactérias produtoras de sideróforos do que a relatada em outros estudos. Por exemplo, Sphingobacterium (isolados G-2-21-1 e G-2-27-2), Pseudomonas poae (isolado G-2-1-1), Enterobacter endosymbiont (isolados G-2-10-2 e N-5-10), Delftia acidovorans (isolado G-1-15) e Achromobacter xylosoxidans (isolados N-46-1HH e N-5-20), capazes de produzir sideróforos em condições de baixa disponibilidade de ferro, foram relatados pela primeira vez. Isolados Gram negativos foram encontrados com maior freqüência, correspondendo a mais de 95% da freqüência total. Entre as bactérias Gram positivas, foram encontrados apenas os gêneros Bacillus e Rhodococcus, com 1,7% da freqüência total. Além disso, neste ambiente houve predominância de Pseudomonas e Enterobacter, com 44,5% e 24,7% da freqüência total, respectivamente. Verificou-se também que 75% dos isolados com alta porcentagem de unidades de sideróforos (% entre 40 e 60) pertenceram a Pseudomonas. Pseudomonas sp. G-229-21, selecionado neste estudo, apresenta potencial de aplicação em solos com baixo teor de ferro para prevenção de doenças fúngicas em plantas. <![CDATA[<b>Isolation and characterization of a novel strain of <i>Stenotrophomonas maltophilia</i> possessing various dioxygenases for monocyclic hydrocarbon degradation</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200014&lng=en&nrm=iso&tlng=en A Gram-negative bacterium, designated as strain KB2, was isolated from activated sludge and was found to utilize different aromatic substrates as sole carbon and energy source. On the basis of morphological and physiochemical characteristics and 16S rRNA gene sequence analysis, the isolated strain KB2 was identified as Stenotrophomonas maltophilia. Strain KB2 is from among different Stenotrophomonas maltophilia strains the first one described as exhibiting the activities of three types of dioxygenases depending on the structure of the inducer. The cells grown on benzoate and catechol showed mainly catechol 1,2- dioxygenase activity. The activity of 2,3-dioxygenase was detected after phenol induction. Protocatechuate 3,4-dioxygenase was found in crude cell extracts of this strain after incubation with 4-hydroxybenzoic acid, protocatechuic acid and vanillic acid. Because of broad spectrum of dioxygenases' types that Stenotrophomonas maltophilia KB2 can exhibit, this strain appears to be very powerful and useful tool in the biotreatment of wastewaters and in soil decontamination.<hr/>Uma bactéria Gram-negativa, denominada KB2, foi isolada de lodo ativado, verificando-se ser capaz de utilizar substratos aromáticos com única fonte de carbono e energia. Com base nas características morfológicas e físico-químicas, e na análise da sequencia do gene 16SrRNA, esta bactéria foi identificada como Stenotrophomonas maltophilia. Entre as diversas cepas de S. maltophilia já descritas, essa cepa é a primeira com atividade de três tipos de dioxigenases, dependendo da estrutura do indutor. As células cultivadas em benzoato e catecol apresentaram atividade de catecol 1,2-dioxigenase principalmente. A atividade de 2,3-dioxigenase foi detectada após indução com fenol. Após incubação com ácidos 4-hidrobenzoico, ácido protocatecuico e vanílico, encontrou-se protocatecuato 3,4-dioxigenase no extrato celular. Devido ao amplo espectro de atividade das diferentes dioxigenases de S. maltophilia KB2, esta cepa parece ser uma ferramenta poderosa e útil para o biotratamento de efluentes e descontaminação do solo. <![CDATA[<em><b>PtSRR1</b></em><b>, a putative <em>Pisolithus tinctorius</em> symbiosis related receptor gene is expressed during the first hours of mycorrhizal interaction with <em>Castanea sativa</em> roots</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200015&lng=en&nrm=iso&tlng=en PtSRR1 EST was previously identified in the first hours of Pisolithus tinctorius and Castanea sativa interaction. QRT-PCR confirmed PtSRR1 early expression and in silico preliminary translated peptide analysis indicated a strong probability that PtSRR1 be a transmembrane protein. These data stimulate the PtSRR1 gene research during ectomycorrhiza formation.<hr/>PtSRR1 foi isolado preliminarmente de P. tinctorius nas primeiras horas da interação com raízes de C. sativa. Análises de QRT-PCR confirmaram sua expressão positiva (12 h) e seu peptídeo putativo indicou forte possibilidade para proteína transmembranar. Estes dados estimulam o estudo do PtSRR1 durante a formação de ectomicorrizas. <![CDATA[<b>Spore production in <em>Paecilomyces lilacinus</em> (Thom.) samson strains on agro-industrial residues</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200016&lng=en&nrm=iso&tlng=en Paecilomyces lilacinus has potential for pests control. We aimed to analyze mycelial growth and spore production in P. lilacinus strains in several agro-industrial residues and commercial media. This study suggests alternative nutrient sources for fungi production and that the biotechnological potential of agro-industrial refuses could be employed in byproducts development.<hr/>Paecilomyces lilacinus apresenta potencial para controle de pragas. O objetivo deste trabalho foi analisar o crescimento micelial e a produção de esporos de linhagens de P. lilacinus em resíduos agro-industriais e meios comerciais. Este estudo sugere fontes alternativas para produção de fungos com potencial biotecnológico para desenvolvimento de bioprodutos. <![CDATA[<b>Analysis of methane biodegradation by <i>Methylosinus trichosporium</i> OB3b</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200017&lng=en&nrm=iso&tlng=en The microbial oxidation of methane in the atmosphere is performed by methanotrophic bacteria that use methane as a unique source of carbon and energy. The objective of this work consisted of the investigation of the best conditions of methane biodegradation by methanotrophic bacteria Methylosinus trichosporium OB3b that oxidize it to carbon dioxide, and the use of these microorganisms in monitoring methods for methane. The results showed that M. trichosporium OB3b was capable to degrade methane in a more effective way with an initial microorganism concentration of 0.0700 g.L-1, temperature of 30ºC, pH 6.5 and using 1.79 mmol of methane. In these same conditions, there was no bacterial growth when 2.69 mmol of methane was used. The specific rate of microorganism growth, the conversion factor, the efficiency and the volumetric productivity, for the optimized conditions of biodegradation were, respectively, 0.0324 h-1, 0.6830 gcells/gCH4, 73.73% and 2.7732.10-3 gcells/L.h. The final product of methane microbiological degradation, carbon dioxide, was quantified through the use of a commercial electrode, and, through this, the grade of methane conversion in carbon dioxide was calculated.<hr/>A oxidação microbiológica de metano na atmosfera é realizada por bactérias metanotróficas, que o utilizam como fonte única de carbono e energia. O objetivo deste trabalho consistiu na investigação das melhores condições de biodegradação do metano por bactérias metanotróficas Methylosinus trichosporium OB3b, que o oxidam a dióxido de carbono, para o emprego destes microrganismos em métodos de monitoração para metano. Os resultados obtidos mostraram que M.trichosporium OB3b foi capaz de degradar o metano de forma mais eficaz partindo-se de uma concentração inicial de microrganismos de 0.0700 g.L-1, a uma temperatura de 30ºC, pH igual a 6.5 e empregando-se 1.79 mmol de metano. Nestas mesmas condições, não houve crescimento bacteriano quando foram empregados 2.69 mmol de metano. A taxa específica de crescimento do microrganismo, o fator de conversão, a eficiência e a produtividade volumétrica para as condições otimizadas de biodegradação foram, respectivamente, 0.0324 h-1, 0.6830 gcélulas/gCH4, 73.73% e 2.7732.10-3 gcélulas/L.h. O produto final da degradação microbiológica do metano, o dióxido de carbono, foi quantificado através do emprego de um eletrodo comercial, e, através desta medida, foi calculado o percentual de conversão de metano em dióxido de carbono. <![CDATA[<b>Fungicide resistance and genetic variability in plant pathogenic strains of <i>Guignardia citricarpa</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200018&lng=en&nrm=iso&tlng=en Citrus black spot (CBS) is a plant disease of worldwide occurrence, affecting crops in Africa, Oceania, and South America. In Brazil, climate provides favorable conditions and CBS has spread to the Southeast and South regions. CBS is caused by the fungus Guignardia citricarpa (anamorph: Phyllosticta citricarpa) and its control is based on the use of fungicides, such as benzimidazoles. In South Africa, the disease was kept under control for 10 years with benomyl, until cases of resistance to high concentrations of this fungicide were reported from all citrus-producing areas. Azoxystrobin (a strobilurin) has been found effective in controlling phytopathogens, including CBS, in a wide range of economically important crops. The present study investigated in vitro the effects of the fungicides benomyl and azoxystrobin on 10 strains of G. citricarpa isolated from lesions in citrus plants from Brazil and South Africa. Benomyl at 0.5 µg/mL inhibited mycelial growth in all strains except PC3C, of African origin, which exhibited resistance to concentrations of up to 100.0 µg/mL. The spontaneous mutation frequency for resistance to benomyl was 1.25 ´ 10-7. Azoxystrobin, even at high concentrations, did not inhibit mycelial growth in any of the strains, but significantly reduced sporulation rates, by as much as 100%, at a concentration of 5.0 µg/mL. Variations in sensitivity across strains, particularly to the strobilurin azoxystrobin, are possibly related to genetic variability in G. citricarpa isolates.<hr/>A Mancha Preta dos Citros (MPC) tem ocorrência mundial afetando a produção de citros na África, Oceania e América do Sul. No Brasil, onde o clima é favorável ao seu desenvolvimento, a doença está espalhada nas regiões Sul e Sudeste. O controle da MPC, causada pelo fungo Guignardia citricarpa (anamorfo: Phyllosticta citricarpa) é baseado na aplicação de fungicidas, como os benzimidazóis. Na África do Sul, após 10 anos de controle da doença com o fungicida benomil, os casos de resistência a altas concentrações deste fungicida atingiram todas as áreas produtoras. O fungicida estrolilurina chamado azoxistrobina tem se mostrado eficiente no controle dos fitopatógenos de uma grande variedade de culturas economicamente importantes, incluindo a MPC. Neste trabalho foram investigados os efeitos in vitro dos fungicidas benomil e azoxistrobina em 10 linhagens de G. citricarpa isoladas de lesões em plantas cítricas no Brasil e na África do Sul. Houve inibição do crescimento micelial a 0,5 µg/mL do fungicida benomil entre as linhagens testadas, com exceção de PC3C de origem sul-africana, que apresentou resistência até a concentração de 100,0 µg/mL de benomil. A freqüência de mutação espontânea para resistência ao benomil foi de 1,25 <FONT FACE=Symbol>´</font> 10-7. A estrobilurina azoxistrobina, mesmo em altas concentrações, não inibiu o crescimento micelial dos isolados, entretanto reduziu significativamente a produção de esporos, chegando a 100% de inibição em concentrações de 5,0 µg/mL de azoxistrobina. A variação na sensibilidade das linhagens, principalmente com a estrobilurina azoxistrobina, possivelmente está relacionada com a variabilidade genética dos isolados de G. citricarpa. <![CDATA[<b>Characterization of <i>Mycobacterium tuberculosis</i> complex isolated from iranian and afghani patients by spoligotyping method</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200019&lng=en&nrm=iso&tlng=en Designing newer drugs, vaccines, and diagnostic techniques is dependent on better understanding of M. tuberculosis virulence mechanism. In this study the prevalence of pcaA gene was determined in M. tuberculosis strains typed by spoligotyping. The associated risk factors among patients with different nationalities residing in Iran were also determined. The isolated M. tuberculosis strains have been characterized by performing susceptibility tests against four first-line antituberculosis drugs and were then subjected to spoligotyping characterization. PCR was used for detection of pcaA gene and its nucleotide sequence was also determined. Spoligotyping of M. tuberculosis strains resulted in 140 different patterns. One hundred twenty two (87.1%) of these spoligotype isolates were unique and reported for the first time. The remaining18 (12.8%) spoligotype patterns were previously reported from other geographical regions of the world. Haarlem family was most prevalent than other genotype. Antibiotic resistances were higher in those isolated from the Iranian patients. The pcaA gene was detected in M. tuberculosis clinical isolates but not in saprophyte strains such as M. kansasi. The results showed that, spread of M. tuberculosis strains belonging to the Beijing family among Iranian patients has to be considered seriously. This study confirmed the widespread existenceof pcaA gene in almost all the clinical isolates. It is also important to undertake studiesto identify which factors are the most significant to considerin tuberculosis control program.<hr/>O desenvolvimento de novas drogas, vacinas e técnicas de diagnóstico depende de uma melhor compreensão dos mecanismos de virulência de Mycobacterium tuberculosis. Neste estudo, a prevalência do gene pcaA em cepas de M. tuberculosis foi avaliada através de da técnica de spoligotyping. Os fatores de risco associados nos pacientes de diferentes nacionalidades vivendo no Irã foram também determinados. As cepas de M. tuberculosis isoladas foram submetidas a testes de sensibilidade a quatro drogas anti-tuberculose de primeira linha e à caracterização por spoligotyping. Empregou-se PCR para detectar o gene pcaA, determinado-se também a sequencia de nucleotidios. A espoligotipagem resultou em 140 grupos diferentes, sendo 120 (87,1%) reportados pela primeira vez. Os demais espoligotipos (12,8%) já foram descritos em outras regiões geográficas no mundo. A família Haarlem foi mais comum que os demais genótipos. A resistencia a antibióticos foi maior nas cepas isoladas dos pacientes iranianos. O gene pcaA foi detectado em isolados clínicos de M. tuberculosis mas não em cepas saprófitas, como M. kansasi. Os resultados indicaram a existência de M. tuberculosis pertencente à família Beijing nos pacientes iranianos. Este estudo confirmou a presença do gene pcaA em quase todos os isolados clínicos. Estudos que identifiquem os fatores mais significantes nos programas de controle da tuberculose são necessários. <![CDATA[<b>Candidiasis in pediatric patients with cancer interned in a university hospital</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200020&lng=en&nrm=iso&tlng=en Fungi are common causes of infection in immunocompromised patients. Candida species are frequently involved in these cases. In order to investigate candidiasis in pediatric patients with cancer, clinical samples were collected from one hundred and twenty two patients interned in the Oswaldo Cruz University Hospital in Recife, Brazil. Yeasts were isolated from thirty-four clinical samples. The species isolated were: Candida albicans (fourteen isolates), C. parapsilosis (nine isolates), C. guilliermondii (two isolates) and C. tropicalis (two isolates). We found that candidemia was most frequent in patients with malignant hematology and that C. parapsilosis infections caused the highest mortality.<hr/>Os fungos são causas comuns de infecções em pacientes imunocomprometidos e espécies de Candida são freqüentemente envolvidas nesses casos. A fim de investigar infecção fúngica em pacientes pediátricos com câncer, amostras clínicas foram coletadas de cento e vinte dois pacientes internados no Hospital Universitário Oswaldo Cruz em Recife, Brasil. Leveduras foram isoladas de trinta e quatro amostras clínicas. As leveduras isoladas foram: Candida albicans (catorze isolados), C. parapsilosis (nove isolados), C. guilliermondii (dois isolados) e C. tropicalis (dois isolados). Descobrimos que candidemia foi mais freqüente em doentes com hematologias malignas e que C. parapsilosis apresentou maior mortalidade. <![CDATA[<b>Candida isolates in tertiary hospitals in northeastern Brazil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200021&lng=en&nrm=iso&tlng=en Candida is an opportunistic pathogen that affects highrisk patients who are either immunocompromised or critically ill and is associated with almost 80% of all nosocomial fungal infections, representing the major cause of fungemia with high mortality rates (40%). Candida albicans is the main cause of candidemia and among the non-albicans species C. parapsilosis, C. glabrata and C. tropicalis are the most frequent agents. The aim of this study was to evaluate the distribution of Candida species in two tertiary hospitals in Recife, Northeastern Brazil. It began by surveying all positive Candida cultures processed by the microbiology laboratory from September 2003 to September 2006. The cultures, originated from various types of biological material (blood, urine, tracheal, catheter and others), were processed by Vitec® system (Biomerieux SA, France). A total of 1.279 (hospital A: 837; hospital B: 442) sample isolates were positive for Candida. The most frequent species in both hospitals were: C. albicans (367), C. tropicalis (363), C. parapsilosis (147), C. glabrata (81), C. krusei (30) and C. guillermondii (14). The isolates were obtained from 746 hospitalized patients. A total of 221 positive hemocultures were detected in 166 different patients in both hospitals, and 113 (68.1%) of these patients with positive hemocultures presented Candida in other body sites.This study shows thatCandida non-albicans was the main isolated agent and evidences the importante of C. tropicalis in nosocomial fungal infections.<hr/>Candida é um patógeno oportunista que afeta pacientes de alto risco que estão também imunocomprometidos ou criticamente doentes, estando associada a quase 80% de todos os casos de infecções fúngicas nosocomiais, representando a maior causa de fungemia com alta taxa de mortalidade (40%). Candida albicans é a principal causa de candidemia e dentre as espécies não-albicans a C. parapsilosis, C. glabrata e C. tropicalis são os agentes mais frequentes. O objetivo deste estudo foi avaliar a distribuição das espécies de Candida em dois hospitais terciários no Recife, nordeste do Brasil. Foi realizado um levantamento de todas as culturas positivas para Candida processadas pelo laboratório de microbiologia de Setembro de 2003 a Setembro de 2006. Todas as culturas originadas de vários tipos de material biológico (sangue, urina, traquéia, catéter e outros) foram processadas pelo sistema Vitec® (Biomerrieux SA, France). Um total de 1.279 amostras (hospital A:837; hospital B: 442) foram positivas para Candida. As espécies mais frequentes em ambos os hospitais foram: C.albicans (367), C. tropicalis (363), C. parapsilosis (147), C. glabrata (81), C. krusei (30) e C. guillermondii (14). Os isolados foram obtidos de 746 pacientes hospitalizados. Um total de 221 hemoculturas positivas foram detectadas em 166 diferentes pacientes em ambos os hospitais, e 113 (68,1%) destes pacientes com hemoculturas positivas apresentavam Candida em outros locais do corpo. Este estudo mostrou que Candida não-albicans foi o principal agente isolado e prova a importância da C. tropicalis em infecções fúngicas nosocomiais. <![CDATA[<b>High incidence of co-infection with Malaria and Typhoid in febrile HIV infected and AIDS patients in Ekpoma, Edo State, Nigeria</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200022&lng=en&nrm=iso&tlng=en This survey was designed to determine the prevalence of Plasmodium falciparum and Salmonella Typhi among febrile HIV/AIDS patients in Ekpoma. Malaria and typhoid risk factors in Ekpoma included occupation, poor health facilities and poor sanitation. Malaria and typhoid are highly prevalent among Ekpoma HIV/AIDS patients.<hr/>Esta pesquisa investigou a prevalência de Plasmodium falciparum e Salmonella typhi entre pacientes febris com HIV/AIDS em Ekpoma. Os fatores de risco para malária e febre tifóide incluem atividade profissional, baixas condições de saúde e saneamento deficiente. A prevalência de malária e febre tifóide entre os pacientes com HIV/AIDS em Ekpoma é elevada. <![CDATA[<b>Antibody responses elicited in mice immunized with <i>Bacillus subtilis</i> vaccine strains expressing Stx2B subunit of enterohaemorragic <i>Escherichia coli</i> O157:H7</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200023&lng=en&nrm=iso&tlng=en No effective vaccine or immunotherapy is presently available for patients with the hemolytic uremic syndrome (HUS) induced by Shiga-like toxin (Stx) producedbyenterohaemorragic Escherichia coli (EHEC) strains, such as those belonging to the O157:H7 serotype. In this work we evaluated the performance of Bacillus subtilis strains, a harmless spore former gram-positive bacterium species, as a vaccine vehicle for the expression of Stx2B subunit (Stx2B). A recombinant B. subtilis vaccine strain expressing Stx2B under the control of a stress inducible promoter was delivered to BALB/c mice via oral, nasal or subcutaneous routes using both vegetative cells and spores. Mice immunized with vegetative cells by the oral route developed low but specific anti-Stx2B serum IgG and fecal IgA responses while mice immunized with recombinant spores developed anti-Stx2B responses only after administration via the parenteral route. Nonetheless, serum anti-Stx2B antibodies raised in mice immunized with the recombinant B. subtilis strain did not inhibit the toxic effects of the native toxin, both under in vitro and in vivo conditions, suggesting that either the quantity or the quality of the induced immune response did not support an effective neutralization of Stx2 produced by EHEC strains.<hr/>Até o presente o momento, não há vacina ou imunoterapia disponível para pacientes com Síndrome Hemolítica Urêmica (SHU) induzida pela toxina Shiga-like (Stx) produzida por linhagens de Escherichia coli entero-hemorragica (EHEC), tais como as pertencentes ao sorotipo O157:H7. Neste trabalho, avaliamos a performance de Bacillus subtilis, uma espécie bacteriana gram-positiva não-patogênica formadora de esporos, como veículo vacinal para a expressão da subunidade B da Stx2B (Stx2B). Uma linhagem vacinal recombinante de B. subtilis expressando Stx2B, sob o controle de um promoter induzível por estresse, foi administrada a camundongos BALB/c por via oral, nasal ou subcutânea usando células vegetativas e esporos. Camundongos imunizados com células vegetativas e esporos pela via oral desenvolveram títulos anti-Stx2B baixos, mas específicos, de IgG sérico e IgA fecal, enquanto camundongos imunizados com esporos recombinates desenvolveram resposta anti-Stx2B apenas após a administração pela via parenteral. No entanto, anticorpos produzidos em camundongos imunizados com a linhagem recombinante de B. subtilis não inibiram os efeitos tóxicos da toxina nativa em condições in vitro e in vivo, sugerindo que a quantidade e/ou a qualidade da resposta imune gerada não suportam uma neutralização efetiva da Stx2 produzidas por linhagens de EHEC. <![CDATA[<b>Carbapenem-resistant <i>Acinetobacter baumannii</i> outbreak at university hospital</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200024&lng=en&nrm=iso&tlng=en Nineteen clonally related imipenem-resistant Acinetobacter baumannii isolates were recovered from eight intensive care unit patients. All isolates harboured blaOXA-51-like β-lactamase genes and showed the absence of 22 kDa fraction in outer membrane porin profile analysis. It suggests a combination of two mechanisms as responsible for carbapenemresistant phenotypes.<hr/>Foram isoladas 19 cepas monoclonais de 8 pacientes da unidade de terapia intensiva, resistentes aos carbapenêmicos. Todas as cepas apresentaram o gene blaOXA-51-like e por análise do perfil de proteínas de membrana notou-se ausência da fração de 22 kDa, sugerindo a combinação de dois mecanismos de resistência aos carbapenêmicos. <![CDATA[<b>Lipid formation and </b><b>γ</b><b>-linolenic acid production by <i>Mucor circinelloides</i> and <i>Rhizopus sp.,</i> grown on vegetable oil</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200025&lng=en&nrm=iso&tlng=en The fungi strains were tested in Bioscreen automated system to select the best nutritional source. Following, shaking submserse cultures were studied in media containing sole carbon or nitrogen source. The growth of these strains improved in media containing vegetable oil, with high concentration of lipids. The high concentration of γ-linolenic acid was obtained with M. circinelloides in culture containing sesame oil.<hr/>Linhagens de fungos foram testadas em sistema automatizado Bioscreen para selecionar melhor fonte nutricional. Em seguida, foram estudadas culturas submersas em meios contendo uma única fonte de carbono e de nitrogênio. As linhagens contendo alta concentração de lipídeos tiveram melhor crescimento em meio contendo óleos de gergelim ou de dendê. Maior concentração de ácido γ-linolênico foi obtida com M. circinelloides nas culturas em óleo de gergelim. <![CDATA[<b>Screening for ligninolytic enzymes from autochthonous fungi and applications for decolorization of Remazole Marine Blue</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200026&lng=en&nrm=iso&tlng=en This study presents new and alternative fungal strains for the production of ligninolytic enzymes which have great potential to use in industrial and biotechnological processes. Thirty autochthonous fungal strains were harvested from Bornova-Izmir in Turkiye. In the fresh fruitbody extracts laccase, manganese peroxidase and lignin peroxidase activities, which are the principal enzymes responsible for ligninocellulose degradation by Basidiomycetes, were screened. Spores of some of the basidiomycetes species such as Cortinarius sp., Trametes versicolor, Pleurotus ostreatus, Abortiporus biennis, Lyophyllum subglobisporium, Ramaria stricta, Ganoderma carnosum, Lactarius delicious ve Lepista nuda were isolated and investigated optimum cultivation conditions in submerged fermentation for high yields of ligninolytic enzyme production. In addition, isolated fungal strains were monitored on agar plates whether having the capability of decolorization of a textile dye Remazol Marine Blue.<hr/>Este estudo apresenta novas cepas de fungos produtores de enzimas ligninolíticas com potencial de aplicação em processos industriais e biotecnológicos. Trinta cepas de fungos autóctones foram obtidos em Bornova-Izmir, Turquia. Os extratos frescos dos corpos de frutificação foram submetidos à triagem de atividade de lacase, manganês peroxidase e lignina peroxidase, que são as principais enzimas de degradação de ligninocelulose pelos Basidiomycetes. Foram isolados esporos de Cortinarius sp, Tramnetes versicolor, Pleorotus ostreatus, Abortiporus biennis, Lyophyllum subglobisporium, Ramaria stricta, Ganoderma carnosum, Lactarius delicius ve Lepista desnuda, investigando-se as condições ótimas de cultivo em fermentação submersa para produção de enzimas ligninolíticas com elevado rendimento. Além disso, as cepas fúngicas isoladas foram monitoradas em placas de ágar quanto a capacidade de descoloramento do corante têxtil Remazole Marine Blue. <![CDATA[<b>Use of <em>Bacillus pumilus </em>CBMAI 0008 and <em>Paenibacillus </em>sp. CBMAI 868 for colour removal from paper mill effluent</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200027&lng=en&nrm=iso&tlng=en Bacillus pumilus and Paenibacillus sp. were applied on the paper mill effluent to investigate the colour remotion. Inocula were individually applied in effluent at pH 7.0, 9.0 and 11.0. The real colour and COD remotion after 48h at pH 9.0 were, respectively, 41.87% and 22.08% for B. pumilus treatment and 42.30% and 22.89% for Paenibacillus sp. Gel permeation chromatography was used to verify the molar masses of compounds in the non-treated and treated effluent, showing a decrease in the compounds responsible for the paper mill effluent colour.<hr/>Bacillus pumilus e Paenibacillus sp. foram aplicados separadamente no efluente da indústria papeleira a pH 7,0, 9,0 e 11,0, para verificação da remoção da cor e da DQO. As remoções da cor real e DQO após 48h a pH 9,0 foram, respectivamente, de 41,87% e 22,08% após o tratamento com B. pumilus e 42,30% e 22,89% após tratamento com Paenibacillus sp. As massas molares dos compostos presentes no efluente não tratado e tratado foram determinadas por cromatografia de permeação em gel. O emprego dos microrganismos reduziu os compostos responsáveis pela cor do efluente da indústria papeleira. <![CDATA[<b>Purification and characterization of extracellular lipase from a new strain</b>: <b><i>Pseudomonas aeruginosa</i></b><b> SRT 9</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200028&lng=en&nrm=iso&tlng=en An extra cellular lipase was isolated and purified from the culture broth of Pseudomonas aeruginosa SRT 9 to apparent homogeneity using ammonium sulfate precipitation followed by chromatographic techniques on phenyl Sepharose CL- 4B and Mono Q HR 5/5 column, resulting in a purification factor of 98 fold with specific activity of 12307.8 U/mg. The molecular weight of the purified lipase was estimated by SDS-PAGE to be 29 kDa with isoelectric point of 4.5. Maximum lipase activity was observed in a wide range of temperature and pH values with optimum temperature of 55ºC and pH 6.9. The lipase preferably acted on triacylglycerols of long chain (C14-C16) fatty acids. The lipase was inhibited strongly by EDTA suggesting the enzyme might be metalloprotein. SDS and metal ions such as Hg2+, Zn2+, Cu2+, Ag2+ and Fe2+ decreased the lipase activity remarkedly. Its marked stability and activity in organic solvents suggest that this lipase is highly suitable as a biotechnological tool with a variety of applications including organo synthetic reactions and preparation of enantiomerically pure pharmaceuticals. The Km and Vmax value of the purified enzyme for triolein hydrolysis were calculated to be 1.11 mmol/L and 0.05 mmol/L/minrespectively.<hr/>Uma lipase extracelular foi isolada e purificada a partir de um caldo de cultura de Pseudomonas aeruginosa SRT9 até homogeneidade visível empregando-se precipitação com sulfato de amônia, seguida de técnicas cromatográficas em colunas de fenil sefarose CL-4B e Mono Q HR 5/5, obtendo-se um fator de purificação de 98 vezes, e atividade especifica de 12307,8 U/mg. Por SDS_PAGE, estimou-se que o peso molecular da lipase purificada é 29kDa, com um ponto isoelétrico de 4,5. A lipase apresentou atividade máxima em uma ampla faixa de temperatura e pH, com ótimos a 55ºC e pH 6,9. A lípase foi mais ativa sobre triacilglicerois de cadeia longa (C14-C16). A lipase foi fortemente inibida por EDTA, o que sugere que a enzima pode ser uma metaloproteína. SDS e íons metálicos, como Hg2+, Zn2+,Cu2+, Ag2+ e Fe2+, diminuíram marcadamente a atividade da lipase. Sua grande estabilidade e atividade em solventes organicos sugerem que esta lípase pode ser uma excelente ferramenta tecnológica com várias aplicações como reações organosintéticas e preparação de produtos farmacêuticos enantiomericamente puros. Os valores de Km e Vmax para a enzima purificada na hidrólise de trioleina foram 1,11 mmol/L e 0,05 mmol/L/min, respectivamente. <![CDATA[<b>Novel agents for enzymatic and fungal hydrolysis of stevioside</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200029&lng=en&nrm=iso&tlng=en A comparative study on the potential of some biological agents to perform the hydrolysis of stevioside was carried out, aiming at establishing an alternative methodology to achieve the aglycon steviol or its rearranged derivative isosteviol, in high yields to be used in the preparation of novel bioactive compounds. Hydrolysis reactions were performed by using filamentous fungi (Aspergillus niger, Rhizopus stolonifer and Rhizopus arrhizus), a yeast (Saccharomyces cerevisiae)andenzymes (pancreatin and lipases PL250 and VFL 8000). Pancreatin showed the best hydrolytic activity, furnishing isosteviol at 93.9% of yield, at pH 4.0, using toluene as a co-solvent. Steviol was produced using both pancreatin at pH 7.0 (20.2% yield) and A. niger at pH 7 (20.8% yield).<hr/>Um estudo comparativo do potencial de alguns agentes biológicos capazes de hidrolisar o esteviosídeo foi realizado, objetivando-se estabelecer uma metodologia alternativa para a obtenção da aglicona esteviol ou seu produto de rearranjo, isoesteviol, em rendimentos elevados que permitam o uso destas agliconas para o preparo de novos compostos bioativos. As reações de hidrólise foram realizadas usando fungos filamentosos (Aspergillus niger, Rhizopus stolonifer e Rhizopus arrhizus), uma levedura (Saccharomyces cerevisiae)e enzimas(pancreatina, lipase PL250 e lipase VFL 8000). A pancreatina mostrou a melhor atividade hidrolítica dentre os sistemas testados, fornecendo isoesteviol com rendimento de 93,9% em pH 4,0, usando tolueno como co-solvente. Esteviol foi produzido tanto usando pancreatina em pH 7,0 (20,2% de rendimento) quanto usando A. niger em pH 7,0 (20,8% de rendimento). <![CDATA[<b>Evaluation of a lipopeptide biosurfactant from <em>Bacillus natto</em> TK-1 as a potential source of anti-adhesive, antimicrobial and antitumor activities</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200030&lng=en&nrm=iso&tlng=en A lipopeptide biosurfactant produced by Bacillus natto TK-1 has a strong surface activity. The biosurfactant was found to be an anti-adhesive agent against several bacterial strains, and also showed a broad spectrum of antimicrobial activity. The biosurfactant induced a significant reduction in tumor cells viability in a dose- dependent manner.<hr/>Um lipopeptídio biosurfactante produzido por Bacillus natto TK-1 apresenta intensa atividade de superfície. Verificou-se que o biosurfactante apresentou atividade antiadesiva contra várias cepas bacterianas, e também atividade antimicrobiana de amplo espectro. O biosurfactante causou uma redução significativa na viabilidade de células tumorais, de forma dose-dependente. <![CDATA[<b>Free radical scavenging and antimicrobial properties of extracts of wild mushrooms</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200031&lng=en&nrm=iso&tlng=en Antioxidant and antimicrobial potentials of extracts obtained from four wild mushrooms, Termitomyces clypeatus (TCE), Termitomyces robustus (TRE), Lentinus subnudus (LSE) and Lenzites species (LZE) collected in Nigeria were investigated. LSE and LZE displayed good scavenging activity against 2, 2-Diphenyl-1-Picrylhydrazyl (DPPH) and ferrous ion radicals at concentration of 2 mg/mL. However, TRE and TCE exhibited better superoxide anion scavenging effect at 2 mg/mL. All extracts (TCE, TRE, LSE and LZE) had comparable scavenging effect on hydroxyl radicals as butylated Hydroxytoluene (BHT) used as control. Moreover, extracts from the wild mushrooms were able to inhibit the growth of all indicator organisms at concentrations between 12.5 mg/mL to 100 mg/mL. LSE and LZE, however, showed better antimicrobial effect on the indicator organisms. The results suggest that extracts obtained from the four wild mushrooms may serve as sources of new bioactive compounds with effective antioxidant and antimicrobial activity.<hr/>Foram investigadas as propriedades antioxidantes e antimicrobianas de extratos obtidos de quatro cogumelos selvagens da Nigéria: Termitomyces clypeatus (TCE), Termitomyces robustus (TRE), Lentinus subnudus (LSE) and Lenzites species (LZE). LSE e LZE, na concentração de 2 mg/ml, apresentaram boa atividade sequestrante contra 2,2'-difenil-b-picrilhidrazil (DPPH•) e radicais ferrosos. Entretanto, TER e TCE a 2 mg/ml apresentaram melhor efeito sequestrador de anions superóxido .Todos os extratos apresentaram feito semelhante de seqüestro de radicais hidroxila como BHT usado como controle. Além disso, todos os extratos dos cogumelos selvagens, na concentração de 12,5 mg/ml até 100 mg/ml, foram capazes de inibir a multiplicação de todos os microrganismos indicadores testados, mas LSE e LZE apresentaram efeito antimicrobiano mais intenso. Os resultados sugerem que os extratos obtidos dos quatro cogumelos selvagens podem ser fontes de novos compostos bioativos com atividade antimicrobiana e antioxidante. <![CDATA[<b>Combined application of origanum vulgare l. essential oil and acetic acid for controlling the growth of staphylococcus aureus in foods</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200032&lng=en&nrm=iso&tlng=en This study evaluated the occurrence of an enhancing inhibitory effect of the combined application of Origanum vulgare L. essential oil and acetic acid against Staphylococcus aureus by the determination of Fractional Inhibitory Concentration (FIC) index and kill-time assay in nutrient broth, meat broth and in a food model (meat pieces). Acetic acid showed MIC and MFC of 0.6 and 1.25 µL.mL-1, respectively. For O. vulgare essential oil MIC and MBC were 1.25 and 2.5 µL.mL-1, respectively. FIC indexes of the mixture of essential oil and acetic acid at MIC x ½ were £ 1.0, showing an additive effect. No synergy was found at kill-time study. Anti-staphylococcal effect of the antimicrobials alone or in mixture (MIC x ½) was lower in meat than in nutrient and meat broths. The effective combination of essential oils and organic acids could appear as an attractive alternative for the food industry, as the doses to inhibit the microbial growth in foods can be lowered.<hr/>Este estudo avaliou a ocorrência de um efeito inibitório potencializado quando da aplicação combinada do óleo essencial de O. vulgare e ácido acético sobre Staphylococcus aureus através da determinação Concentração Inibitória Fracional (FIC) e de ensaios de tempo de morte em caldo nutriente, caldo base carne e em um modelo alimentar (pedaços de carne). O ácido acético mostrou um valor de CIM e CBM de 0,6 e 1,25 µL.mL-1, respectivamente. Estudos prévios encontraram valores de CIM e CBM para o óleo essencial de O. vulgare sobre as cepas teste de S. aureus de 1,25 e 1,5 µL.mL-1, respectivamente. Valores de índices de CIF da mistura do óleo essencial e ácido acético na concentração de CIM x ½ foram £ 1,0 caracterizando uma interação de adição. Nenhum efeito sinérgico foi encontrado nos ensaios de tempo de morte. O efeito anti-estafilocócico dos antimicrobianos isolados ou em combinação (CIM x ½) foi menor quando aplicado em carne em comparação a sua adição em caldo nutriente e caldo carne. A efetiva combinação de óleos essenciais e outros agentes preservativos pode ser reconhecida como uma alternativa promissora para a indústria de alimentos, podendo viabilizando a diminuição de doses de antimicrobianos aplicadas para inibir o crescimento microbiano em alimentos. <![CDATA[<b>Adherence assays and Slime production of <i>Vibrio alginolyticus</i> and <i>Vibrio parahaemolyticus</i></b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200033&lng=en&nrm=iso&tlng=en In this study we investigated the phenotypic slime production of Vibrio alginolyticus and Vibrio parahaemolyticus strains, food-borne pathogens, using a Congo red agar plate assay. Furthermore, we studied their ability to adhere to abiotic surfaces and Vero cells line. Our results showed that only V. alginolyticus ATCC 17749 was a slime-producer developing almost black colonies on Congo red agar plate. Adherence to glace tube showed that all V. alginolyticus strains were more adherent than V. parahaemolyticus. Only V. alginolyticus ATCC 17749 was found to be able to form biofilm on polystyrene microplate wells (OD570 = 0.532). Adherence to Vero cells showed that all tested strains were non adherent after 30 min, however after 60 min all the studied strains become adherent. The percentage of adherence ranged from1.23% to 4.66%.<hr/>Neste estudo, investigou-se a produção de muco por cepas de Vibrio alginolyticus e Vibrio parahaemolyticus através do teste em placa de ágar com vermelho congo. Estudou-se também a capacidade de adesão à superfícies abióticas e células Vero. Os resultados indicaram que somente V. alginolyticus ATCC 17749produziu muco, formando colônias quase negras nas placas de ágar com vermelho congo. O teste de adesão a tubos de vidro indicou que as cepas de V. alginolyticus foram mais aderentes do que as de V. parahaemolyticus. Somente V. alginolyticus ATCC 17749 foi capaz de formar biofilme nos poços das microplacas de poliestireno (OD570=0,532). Testes de adesão a células Vero mostraram que nenhuma das cepas apresentou adesão em 30 min, mas todas aderiram após 60 min. A porcentagem de adesão variou de 1,23% a 4,66%. <![CDATA[<b><i>In vitro</i></b><b> establishment and propagation of a Brazilian strain of<i>Anaplasma marginale</i> with appendage in IDE8 (<i>Ixodes scapularis</i>) cells</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200034&lng=en&nrm=iso&tlng=en A Brazilian isolate of Anaplasma marginale with appendage was successfully established and maintained in vitro in a tick cell line (IDE8). Infection was confirmed by optical and transmission electron microscopy. In addition, primers MSP1aNF2 and MSP1aNR2 amplified products from DNA extracted from infected IDE8 cells. Comparisons with partial sequences of the msp1α gene and the complete genome of A. marginale confirmed that the sequences of amplified fragments were from the A. marginale genome. This is the first establishment of a Brazilian A. marginale isolate in tick cells, representing a new system for biological and molecular studies and also a new source of material for diagnosis and development of vaccines.<hr/>Uma amostra brasileira de Anaplasma marginale com apêndice foi estabelecida e mantida in vitro em uma linhagem de células de carrapatos (IDE8). A infecção foi confirmada através de microscopia ótica e eletrônica de transmissão. Além disso, os primers MSP1aNF2 e MSP1aNR2 amplificaram produtos do DNA extraído das células infectadas. Comparações de sequências parciais do gene msp1α e do genoma completo de A. marginale confirmaram que as sequências dos fragmentos amplificados pertenciam ao genoma de A. marginale. Este é o primeiro estabelecimento in vitro de uma amostra brasileira de A. marginale em células de carrapatos, representando um novo sistema para estudos biológicos e moleculares, além de ser uma nova fonte de material para o desenvolvimento de testes diagnósticos e de vacinas. <![CDATA[<b>Comparative growth of trichoderma strains in different nutritional sources, using bioscreen c automated system</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200035&lng=en&nrm=iso&tlng=en Trichoderma is one of the fungi genera that produce important metabolites for industry. The growth of these organisms is a consequence of the nutritional sources used as also of the physical conditions employed to cultivate them. In this work, the automated Bioscreen C system was used to evaluate the influence of different nutritional sources on the growth of Trichoderma strains (T. hamatum, T. harzianum, T. viride, and T. longibrachiatum) isolated from the soil in the Juréia-Itatins Ecological Station (JIES), São Paulo State - Brazil.The cultures were grown in liquid culture media containing different carbon- (2%; w/v) and nitrogen (1%; w/v) sources at 28ºC, pH 6.5, and agitated at 150 rpm for 72 h. The results showed, as expected, that glucose is superior to sucrose as a growth-stimulating carbon source in the Trichoderma strains studied, while yeast extract and tryptone were good growth-stimulating nitrogen sources in the cultivation of T. hamatum and T. harzianum.<hr/>Trichoderma é um dos gêneros de fungos produtores de metabólitos de interesse industrial. O crescimento destes organismos é conseqüência das fontes nutricionais utilizadas, juntamente com as condições físicas de cultivo. Neste trabalho, o sistema automatizado Bioscreen C foi utilizado para avaliar a influência de diferentes fontes nutricionais sobre o crescimento de linhagens de Trichoderma (T. hamatum, T. harzianum, T. viride e T. longibrachiatum) isoladas do solo da Estação Ecológica da Juréia-Itatins (JIES), São Paulo - Brasil. Os cultivos foram feitos em meios líquidos de cultura contendo diferentes fontes de carbono (2%; w / v) e nitrogênio (1%; w / v) a 28ºC, pH 6,5 e agitados a 150 rpm durante 72 h. Os resultados mostraram, conforme esperado, que a glicose é melhor do que a sacarose como fonte de carbono indutora de crescimento das linhagens de Trichoderma testadas, enquanto que, o extrato de leveduras e a triptona foram boas fontes de nitrogênio indutoras de crescimento para os cultivos de T. hamatum e T. harzianum. <![CDATA[<b>Structural and Functional Analysis of Giant Strong Component of <i>Bacillus thuringiensis</i> Metabolic Network</b>]]> http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822009000200036&lng=en&nrm=iso&tlng=en The purpose of this work was to study the giant strong component (GSC) of B. thuringiensis metabolic network by structural and functional analysis. Based on so-called "bow tie" structure, we extracted and studied GSC with its functional significance. Global structural properties such as degree distribution and average path length were computed and indicated that the GSC is also a small-world and scale-free network. Furthermore, the GSC was decomposed and functional significant for metabolism of these divisions were investigated by comparing to KEGG metabolic pathways.<hr/>O objetivo deste trabalho foi realizar uma análise estrutural e funcional do GSC (Giant Strong Component) da rede metabólica de Bacillus thurigiensis. Baseando-se na estrutura bow-tie, o GSC foi extraído e analisado quanto ao sue significado funcional. Propriedades estruturais globais tais como grau de distribuição e tamanho médio da via metabólica foram mensuradas, concluindo-se que o GSC é também uma rede small world e scalefree. Além disso, a rede GSC foi decomposta e as divisões com significância funcional no metabolismo foram comparadas às vias metabólicas KEGG.