Biochemical analysis of the methylic antigen of Paracoccidioides brasiliensis

Hamdan, Júnia Soares; Resende, Maria Aparecida de; Franzot, Sarah Piancastelli; Cisalpino, Eduardo Osório

doi:10.1590/S0036-46651992000600004

Abstracts

Yeast forms of five strains of Paracoccidioides brasiliensis (SN, 2, 18, 192 and JT- 1) were cultured in a synthetic medium for obtaining methylic antigens. These antigens were lyophilized and studied for each strain, to determine their partial biochemical composition, through measurements of total lipid, protein and carbohydrate contents. Lipids of methylic antigens were purified and analysed for sterols, phospholipids, glycolipids, li-poproteins, and partial characterization of sterols. Significant differences were found among antigenic preparations derived from distinct P. brasiliensis strains, in relation to the quantitative determinations. On the other hand, sterol analysis revealed the presence of ergosterol, lanosterol and squalene in all samples. The diversity verified in the biochemical characteristics of antigens derived from different P. brasiliensis strains, confirm the need of using a pool of fungal samples in order to produce antigen preparations for serological procedures without hampering their sensitivity.

Paracoccidioides brasiliensis; Antigens; Methylic antigens; Biochemical analysis

Cinco amostras de Paracoccidioides brasiliensis (SN, 2, 18, 192 e JT-1) em fase leveduriforme foram cultivadas em meio sintético para obtenção de antígenos metílicos. Os antígenos provenientes de cada amostra foram liofilizados e analisados quanto à sua composição bioquímica parcial, através da determinação do conteúdo total de lipídios, proteínas e carboidratos. Os lipídios dos antígenos metílicos foram purificados e analisados quanto ao teor de esterois, fosfolipídios, glicolipídios e lipoproteínas. Esterois foram parcialmente caracterizados. Em relação às medidas quantitativas, foram encontradas diferenças significantes entre as preparações antigênicas provenientes de amostras distintas de P. brasiliensis. Por outro lado, a análise dos esterois revelou a presença de ergosterol, lanosterol e esqualeno em todas as preparações. As diferenças verificadas nas características bioquímicas de antígenos derivados de amostras diferentes de P. brasiliensis confirmam a necessidade do uso de um pool de cepas para obtenção de preparações antigênicas a serem empregadas em procedimentos sorológicos, sem o que tais reações poderão ter sua sensibilidade comprometida.

IMMUNOLOGY

Biochemical analysis of the methylic antigen of Paracoccidioides brasiliensis

Análise bioquímica de antígeno metílico de Paracoccidioides brasiliensis

Júnia Soares Hamdan; Maria Aparecida de Resende; Sarah Piancastelli Franzot; Eduardo Osório Cisalpino

^{Address for correspondence} Address for correspondence: Dra. Júnia Soares Hamdan Departamento de Microbiologia; Instituto de Ciências Biológicas Universidade Federal de Minas Gerais Avenida Antônio Carlos, 6627 Caixa Postal 2486 CEP 31.270-901 Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil

SUMMARY

Yeast forms of five strains of Paracoccidioides brasiliensis (SN, 2, 18, 192 and JT- 1) were cultured in a synthetic medium for obtaining methylic antigens. These antigens were lyophilized and studied for each strain, to determine their partial biochemical composition, through measurements of total lipid, protein and carbohydrate contents. Lipids of methylic antigens were purified and analysed for sterols, phospholipids, glycolipids, li-poproteins, and partial characterization of sterols. Significant differences were found among antigenic preparations derived from distinct P. brasiliensis strains, in relation to the quantitative determinations. On the other hand, sterol analysis revealed the presence of ergosterol, lanosterol and squalene in all samples. The diversity verified in the biochemical characteristics of antigens derived from different P. brasiliensis strains, confirm the need of using a pool of fungal samples in order to produce antigen preparations for serological procedures without hampering their sensitivity.

Key words: Paracoccidioides brasiliensis; Antigens; Methylic antigens; Biochemical analysis.

RESUMO

Cinco amostras de Paracoccidioides brasiliensis (SN, 2, 18, 192 e JT-1) em fase leveduriforme foram cultivadas em meio sintético para obtenção de antígenos metílicos. Os antígenos provenientes de cada amostra foram liofilizados e analisados quanto à sua composição bioquímica parcial, através da determinação do conteúdo total de lipídios, proteínas e carboidratos. Os lipídios dos antígenos metílicos foram purificados e analisados quanto ao teor de esterois, fosfolipídios, glicolipídios e lipoproteínas. Esterois foram parcialmente caracterizados. Em relação às medidas quantitativas, foram encontradas diferenças significantes entre as preparações antigênicas provenientes de amostras distintas de P. brasiliensis. Por outro lado, a análise dos esterois revelou a presença de ergosterol, lanosterol e esqualeno em todas as preparações. As diferenças verificadas nas características bioquímicas de antígenos derivados de amostras diferentes de P. brasiliensis confirmam a necessidade do uso de um pool de cepas para obtenção de preparações antigênicas a serem empregadas em procedimentos sorológicos, sem o que tais reações poderão ter sua sensibilidade comprometida.

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ACKNOWLEDGMENTS

This work was supported by Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) and Pro-Reitoria de Pesquisa of Federal University of Minas Gerais (PRPq-UFMG) - Brasil.

Recebido para publicação em 9/03/1992.

Aceito para publicação em 3/09/1992.

1. BIAGIONI, L.M.V.; SADATSUNE, T.; FRANCO, M.F. & MATTOS, M.C.F.I. - A comparative study of eight Paracoccidioides brasiliensis isolates. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 28:281-286,1986.
2. BREIVIK, O. N. & OWADES, J. L. - Spectrophotometric semi-microdetennination of ergosterol in yeast J. Agric. Food Chem., 5:360-363,1957.
3. BURGOS, L. C.; CANO, L. E. & RESTREPO, A. -Purificación de antígenos somáticos del Paracoccidioides brasiliensis. Estudio preliminar. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 27: 76-81,1985.
4. CAMARGO, Z. P.; UNTERKIRCHER, C.; CAMPOY, S. P. & TRAVASSOS, L. R. - Production of Paracoccidioides brasiliensis exoantigens for immunodifusion tests. J. din. Microbiol., 26:2147-2151,1988.
5. CANO, L. E. & RESTREPO, A. - Predictive value of serologic tests in the diagnosis and follow-up of patients with paracoccidioidomycosis. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 29:276-283,1987.
6. CASOTTO, M. - Characterization of the cellular antigens of Paracoccidioides brasiliensis yeast form. J. clin. Microbiol., 28:1188-1193,1990.
7. CHEN, P. S.; TORIBARA, T. Y. & WARNER, H. -Microdetermination of phosphorus. Analyt. Chem., 28:1756-1758,1956.
8. CISALPINO, P. S. - Sorodiagnóstico da paracoccidioidomicose através da reaçăo de fixaçăo do complemento com antígenos metílicos do Paracoccidioides brasiliensis; comparaçăo com as reaçőes de imunofluorescęncia indireta e imunodifusăo em gel de agarose. Belo Horizonte, 1978. (Dissertaçăo de Mestrado - Instituto de Cięncias Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais).
9. CISALPINO, E. O.; OLIVEIRA, L. G. & CARDOSO, J. P. - Experięncia com um antígeno metílico para o diagnóstico da blastomicose sul-americana. Arq. Cent. Estud. Fac. Odont. Minas Gerais, 1:117-121,1964.
10. FAVA NETTO, C. - Imunologia da Paracoccidioidomicose. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 18:42-53, 1976.
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12. HAMDAN, J. S. - Fraçőes bioquímicas de Paracoccidioides brasiliensis e seu papel na gęnese da doença causada por este microrganismo. Estudo experimental em camundongos. Belo Horizonte, 1991. (Tese de Doutoramento - Faculdade de Medicina da Universidade Federal de Minas Gerais).
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20. MANOCHA, M. S. - Lipid composition of Paracoccidioides brasiliensis: comparison between the yeast and mycelial forms. Sabouraudia, 18:281-286, 1980.
21. MANOCHA, M. S.; SAN-BLAS, G. & CENTENO, S. -Lipid composition of Paracoccidioides brasiliensis: possible correlation with virulence of different strains. J. gen. Microbiol., 117:147-154,1980.
22. MENDES-GIANNINI, M. J.; BUENO, J. P.; SHIKANAI-YASUDA, M. A.; FERREIRA, A. W. & MASUDA, A. -Detection of the 43,000 molecular-weight glycoprotein in sera of patients with paracoccidioidomycosis. J. din. Microbiol., 27:2842-2845,1989.
23. MENDES-GIANNINI, M. J.; BUENO, J. P.; SHIKANAI-YASUDA, M. A.; STOLF, M. S.; MASUDA, A.; AMATO-NETO, V. & FERREIRA, A. W. - Antibody response to the 43 kDa glycoprotein of Paracoccidioides brasiliensis as a marker for the evaluation of patients under treatment. Amer. J. trop. Med. Hyg., 43:200-206, 1990.
24. MOORE, P. R. & BAUMANN, C. A. - Skin sterols. I. Colorimetric determination of cholesterol and other sterols in skin. J. biol. Chem., 195:615-621,1952.
25. MORENO, A. R. - Actualización sobre la paracoccidioidomicosis y su agente etiologico, 1986-1989. Intercięncia, 15:193-199,1990.
26. PUCCIA, R.; SCHENKMAN, S.; GORIN, P. A. & TRAVASSOS, L. R. - Exocellular components of Paracoccidioides brasiliensis: identification of a specific antigen. Infect. Immun., 53:199-206, 1986.
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30. SAN-BLAS, G. - Paracoccidioidomicose: a micose sistęmica da América Latina. Intercięncia, 15:191-192, 1990.
31. SCOTT, T. A. & MELVIN, E. H. - Determination of dext-ran with anthrone. Analyt. Chem., 25:1656-1661,1953.
32. SCROFERNEKER, M. L.; FAVA NETTO, C. & SCHALCH, A. L. O. - Contribuiçăo ao conhecimento da composiçăo antigęnica do Paracoccidioides brasiliensis. Estudo de 5 amostras. Rev. Microbiol., 19:293-305,1988a.
33. SCROFERNEKER, M. L.; FAVA NETTO, C.; SCHALCH, A. L. O. & MOTA NETO, A. A. - Soros hiperimunes anti-Paracoccidioides brasiliensis. Rev. Microbiol., 19:311-316,1988b.
34. STAMBUK, B. J.; PUCCIA, R.; ALMEIDA, M. L.; TRAVASSOS, L. R. & SCHENKMAN, S. - Secretion of the 43 kDa glycoprotein antigen by Paracoccidioides brasiliensis. J. med. vet. Mycol., 26:367-373,1988.
35. SUGAR, A. M. - Systemic fungal infections: diagnosis and treatment. I. Paracoccidioidomycosis. Infect. Dis. Clin. N. Amer., 2:913-924,1988.

Address for correspondence:

Dra. Júnia Soares Hamdan

Departamento de Microbiologia; Instituto de Ciências Biológicas

Universidade Federal de Minas Gerais

Avenida Antônio Carlos, 6627

Caixa Postal 2486

CEP 31.270-901 Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil

Publication Dates

Publication in this collection
11 Sept 2006
Date of issue
Dec 1992

History

Accepted
03 Sept 1992
Received
09 Mar 1992

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

[1] 1. BIAGIONI, L.M.V.; SADATSUNE, T.; FRANCO, M.F. & MATTOS, M.C.F.I. - A comparative study of eight Paracoccidioides brasiliensis isolates. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 28:281-286,1986.

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[4] 4. CAMARGO, Z. P.; UNTERKIRCHER, C.; CAMPOY, S. P. & TRAVASSOS, L. R. - Production of Paracoccidioides brasiliensis exoantigens for immunodifusion tests. J. din. Microbiol., 26:2147-2151,1988.

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[6] 6. CASOTTO, M. - Characterization of the cellular antigens of Paracoccidioides brasiliensis yeast form. J. clin. Microbiol., 28:1188-1193,1990.

[7] 7. CHEN, P. S.; TORIBARA, T. Y. & WARNER, H. -Microdetermination of phosphorus. Analyt. Chem., 28:1756-1758,1956.

[8] 8. CISALPINO, P. S. - Sorodiagnóstico da paracoccidioidomicose através da reaçăo de fixaçăo do complemento com antígenos metílicos do Paracoccidioides brasiliensis; comparaçăo com as reaçőes de imunofluorescęncia indireta e imunodifusăo em gel de agarose. Belo Horizonte, 1978. (Dissertaçăo de Mestrado - Instituto de Cięncias Biológicas da Universidade Federal de Minas Gerais).

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[14] 14. HAMDAN, J. S. & ROCHA, R. L. - Epidemiologia da paracoccidioidomicose. An. Fac. Med. Minas Gerais, 36:52-61,1987.

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[21] 21. MANOCHA, M. S.; SAN-BLAS, G. & CENTENO, S. -Lipid composition of Paracoccidioides brasiliensis: possible correlation with virulence of different strains. J. gen. Microbiol., 117:147-154,1980.

[22] 22. MENDES-GIANNINI, M. J.; BUENO, J. P.; SHIKANAI-YASUDA, M. A.; FERREIRA, A. W. & MASUDA, A. -Detection of the 43,000 molecular-weight glycoprotein in sera of patients with paracoccidioidomycosis. J. din. Microbiol., 27:2842-2845,1989.

[23] 23. MENDES-GIANNINI, M. J.; BUENO, J. P.; SHIKANAI-YASUDA, M. A.; STOLF, M. S.; MASUDA, A.; AMATO-NETO, V. & FERREIRA, A. W. - Antibody response to the 43 kDa glycoprotein of Paracoccidioides brasiliensis as a marker for the evaluation of patients under treatment. Amer. J. trop. Med. Hyg., 43:200-206, 1990.

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[34] 34. STAMBUK, B. J.; PUCCIA, R.; ALMEIDA, M. L.; TRAVASSOS, L. R. & SCHENKMAN, S. - Secretion of the 43 kDa glycoprotein antigen by Paracoccidioides brasiliensis. J. med. vet. Mycol., 26:367-373,1988.

[35] 35. SUGAR, A. M. - Systemic fungal infections: diagnosis and treatment. I. Paracoccidioidomycosis. Infect. Dis. Clin. N. Amer., 2:913-924,1988.

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