Crescimento micelial in vitro de cinco linhagens de Agaricus bisporus submetidas a diferentes condições de temperatura

In vitro mycelium growth of five Agaricus bisporus strains submitted to different temperature conditions

PRODUÇÃO VEGETAL

Crescimento micelial in vitro de cinco linhagens de Agaricus bisporus submetidas a diferentes condições de temperatura

In vitro mycelium growth of five Agaricus bisporus strains submitted to different temperature conditions

Meire Cristina Nogueira de Andrade^I,*; João Lucas Chavari^II; Marli Teixeira de Almeida Minhoni^II; Diego Cunha Zied^II

^ICoordenação de Pesquisas em Produtos Florestais, Instituto Nacional de Pesquisas da Amazônia, Av. André Araújo, 2936, Cx. Postal 478, 69060-001, Manaus, Amazonas, Brasil

^IIDepartamento de Produção Vegetal, Faculdade de Ciências Agronômicas, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, São Paulo, Brasil

RESUMO

Avaliou-se o crescimento micelial in vitro das linhagens ABI-05/03, ABI-06/04, ABI-04/02, ABI-06/05 e ABI-01/01 de Agaricus bisporus em meios de cultura sólidos à base de composto. As avaliações foram realizadas por meio de medições de quatro diâmetros das colônias, a cada 48h, durante 12 dias de incubação, no escuro, a 20 e 25ºC. O delineamento experimental foi o de blocos casualizados, com uso do teste de Tukey para a comparação das médias. Co m base nos resultados obtidos, verificou-se que: o crescimento micelial de A. bisporus é influenciado pela temperatura de incubação; a temperatura de 25ºC foi mais favorável para o crescimento micelial de todas as linhagens de A. bisporus; na temperatura de 20ºC, o melhor crescimento foi obtido com as linhagens ABI-06/05 e ABI-01/01; na temperatura de 25ºC, a linhagem ABI-01/01 apresentou crescimento significativamente maior que todas as demais.

Palavras-chave: champignon, micélio, cogumelo, crescimento micelial, linhagens.

ABSTRACT

The in vitro mycelium growth of Agaricus bisporus strains ABI-05/03, ABI-06/04, ABI-04/02, ABI-06/05 and ABI-01/01 was evaluated in solid culture media made up of compost. Evaluations were performed by means of measurements of four diameters of the colonies, every 48 hours, during 12 days of incubation in darkness under 20 and 25ºC. The experimental design consisted of randomized blocks, using the Tukey test to compare averages. Based on the obtained results, it was verified that: mycelium growth of A . bisporus is influenced by the temperature of incubation; the temperature of 25ºC was more favorable to the mycelium growth of all A . bisporus strains; under the temperature of 20ºC, the best growth was obtained with strains ABI-06/05 and ABI-01/01 and, under the temperature of 25ºC, strain ABI-01/01 showed significantly higher growth than all other strains.

Key words: champignon, mycelium, mushroom, mycelium growth, strains.

Introdução

O Agaricus bisporus (Lange) Imbach é um basidiomiceto, lignolítico e saprófita, comumente cultivado em compostos formulados pasteurizados (BONONI et al., 1999).

O fungo, em seu metabolismo, secreta exoenzimas que degradam compostos para obtenção de carbono, nitrogênio, enxofre e outros nutrientes (DONINI et al., 2005). A capacidade do fungo crescer e produzir cogumelos em substratos lignocelulósicos está relacionada com o vigor do micélio e com a capacidade de ativar mecanismos fisiológicos (MATA et al., 2001).

O cultivo in vitro busca elucidar as condições ótimas de crescimento do fungo, em relação a meios de cultura, temperatura e tempo de incubação (HATVANI, 2001), e este conhecimento é um prérequisito para o seu cultivo comercial, em substrato formulado.

O crescimento micelial do fungo, durante um período de tempo, pode ser traduzido por uma curva sigmoidal típica, com várias fases com propriedades fisiológicas típicas (MONTINI et al., 2006). A medida deste crescimento pode ser feita de diferentes formas, tais como crescimento radial, vigor, velocidade de crescimento e massa do micélio. Em condições experimentais, o uso de meio de cultura sólido para avaliação do crescimento de fungos é considerado adequado pois, na natureza, os fungos comumente desenvolvem-se em substratos sólidos, tais como resíduos vegetais e animais, ou no solo (BONONI et al., 1999). Savoie et al. (1995) recomendam o uso de um meio de cultura de composição semelhante a do substrato de cultivo. Este meio de cultura tem sido o de extrato de composto (MINHONI et al., 2005).

A influência das características físicas e químicas dos substratos, no crescimento micelial de linhagens fúngicas, tem sido enfatizada em estudos recentes (SALES-CAMPOS et al., 2008; DONINI et al., 2006; ÕZÇELIK; PEKSEN, 2007), assim como as diferenças de crescimento micelial entre linhagens fúngicas cultivadas em um mesmo tipo de substrato e nas mesmas condições de cultivo (ANDRADE et al., 2007; SILVA et al., 2005; MAKI et al., 2001; BOYLE, 1998). No entanto, pela ampla diversidade de linhagens de A. bisporus, conhecer as condições mais adequadas de temperatura para o cultivo é fundamental.

Portanto, o presente trabalho tem como objetivo avaliar o efeito da temperatura no crescimento micelial de A. bisporus e comparar o desempenho de cinco linhagens submetidas a duas temperaturas de incubação.

Material e métodos

O experimento foi desenvolvido no Laboratório de Microbiologia, do Departamento de Produção Vegetal, da Faculdade de Ciências Agronômicas, Unesp, Botucatu, Estado de São Paulo.

Linhagens de Agaricus bisporus

Foram utilizadas cinco linhagens de A. bisporus: ABI-05/03, ABI-06/04, ABI-04/02, ABI-06/05 e ABI01/01, as quais se encontram armazenadas na Micoteca do Módulo de Cogumelos (FCA/UNESP). Todas as linhagens foram isoladas a partir de basidiomas coletados por fungicultores do interior do Estado de São Paulo: as linhagens ABI-01/01 e ABI-04/02 foram oriundas de Mogi das Cruzes; ABI-05/03 de Cabreúva; ABI-06/05 e ABI-06/04 de Itu.

Preparo dos meios de cultura

Para o preparo do meio de cultura à base de extrato de composto, inicialmente, coletou-se uma amostra mista de composto do final da Fase II da compostagem e com relação C/N em torno de 16/1. Esta amostra foi desidratada em estufa a 65ºC e triturada em moinho de facas com peneira 30 mesh. Posteriormente, foram misturados 60 g deste composto em 900 mL de água destilada e fervidos durante 15 min., sendo sequencialmente filtrados em peneira comum de malha fina. Completou-se o volume do filtrado para 1.000 mL e foram adicionados 15 g de ágar. Colocou-se o meio de cultura em frascos Duran e autoclavou-se a 121ºC, por 30 min.; após 24h, autoclavou-se novamente por mais 30 min. (Tindalização). Após resfriamento a aproximadamente 45-50ºC, o meio foi vertido em placas de Petri (20 mL placa^-1).

Inoculação, colonização e variável analisada

Discos de 4 mm de diâmetro de matriz secundária das linhagens ABI-05/03, ABI-06/04, ABI-04/02, ABI-06/05 e ABI-01/01 (cultivadas em placas de Petri, contendo meio de cultura à base de extrato de composto) foram depositados sobre os meios previamente preparados, compondo os tratamentos do presente experimento. As placas foram distribuídas em blocos casualizados e mantidas em estufa incubadora a 20 e 25ºC. Neste período, a cada 48h, foram realizadas medições do crescimento radial do A. bisporus na superfície do meio de cultura, por meio de quatro medições equidistantes entre si, até o momento em que, em um dos tratamentos, a colônia fúngica atingisse a proximidade das bordas da placa de Petri.

Delineamento experimental e análise estatística

O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados em esquema fatorial 5 x 2, cujos tratamentos corresponderam às combinações das cinco linhagens de A. bisporus e das duas condições de temperatura, com dez tratamentos no total. Cada tratamento foi composto por oito repetições, sendo cada repetição correspondente a uma placa de Petri, totalizando 80 placas.

Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey (5%) (SNEDECOR; COCHRAN, 1972).

Resultados e discussão

Os resultados do crescimento micelial das linhagens de A. bisporus, após 12 dias de incubação, em função de diferentes condições de temperatura, estão demonstrados na Tabela 1.

Houve interação positiva entre as linhagens de A. bisporus e as temperaturas de incubação (Tabela 1). As maiores médias de crescimento micelial ocorreram quando foram submetidas à temperatura de 25ºC. Na condição de temperatura de 20ºC, as linhagens ABI-06/05 e ABI-01/01 obtiveram as maiores médias de crescimento micelial, após 12 dias de incubação. Já na condição de temperatura de 25ºC, a linhagem ABI-01/01 obteve a maior média de crescimento micelial entre todas as avaliadas. A temperatura é um dos mais importantes fatores que influenciam o crescimento micelial dos fungos. No cultivo de diferentes linhagens de Lyophyllum decastes em meio à base de batata-dextrose-ágar, Kinuta (1991) utilizou seis linhagens que foram incubadas a 24ºC e outras cinco linhagens que foram incubadas a 27ºC; após seis dias de cultivo, avaliou o diâmetro da colônia formada e observou que o crescimento miceliano da linhagem NLD0003 foi o maior de todas as linhagens estudadas, obtendo diâmetro de colônia de 34 mm a 24ºC e 41 mm a 27ºC.

A eficiência da biodegradação por fungos varia em função da linhagem (ROYSE; SANCHEZ-VAZQUEZ, 2001). As diferenças de crescimento micelial entre linhagens fúngicas já foram relatadas por muitos pesquisadores (ANDRADE et al., 2008a; ANDRADE; GRACIOLLI, 2005; BOYLE, 1998; MAKI et al., 2001; SILVA et al., 2005). Domm et al. (2005), avaliando a velocidade de crescimento micelial de linhagens de Pleurotus spp. em diferentes substratos, observaram diferenças significativas na interação entre linhagens, substratos e dias de avaliação. Andrade et al. (2008a), ao avaliar o crescimento micelial de duas linhagens de L. edodes submetidas a dez tipos de meio de cultura, verificaram que a linhagem LE-96/18 obteve médias de crescimento micelial superiores às da linhagem LE-95/01 em todos os meios de cultura testados.

As diferenças de crescimento micelial entre as linhagens de A. bisporus testadas no presente trabalho estão de acordo com Bilay et al. (2000) que, ao avaliarem o crescimento de 30 espécies de cogumelos comestíveis em diferentes meios de cultura, concluíram que o crescimento micelial das espécies estudadas é diferente e depende do tipo de meio utilizado e do pH. Dias et al. (2003) avaliando a produção do Pleurotus sajor-caju em diferentes resíduos agrícolas (palha de feijão, palha de milho e casca de café), observaram que o crescimento micelial, a produção e a eficiência biológica dependem do composto utilizado. Andrade et al. (2008b) testando a produção de quatro linhagens de A. bisporus em três formulações de compostos também concluíram que o crescimento micelial é influenciado pelas linhagens, bem como pelos substratos de cultivo.

Pelas diferenças existentes entre linhagens de A. bisporus, conhecer os genótipos fúngicos mais adaptados a determinados substratos lignocelulósicos é um modo para aumentar a produção de A. bisporus, uma vez que, como já relatado por Silva et al. (2005), o crescimento do micélio influencia a produção de cogumelos. De acordo com estes autores, a taxa de formação de primórdios está diretamente relacionada com a biomassa micelial, que é formada durante o crescimento fúngico.

Os dados referentes ao crescimento micelial das linhagens de A. bisporus foram ajustados a um modelo linear (Figura 1). Para a condição de incubação de 20ºC, a linhagem ABI-06/05 manteve-se com crescimento micelial superior ao das demais linhagens durante todo o período de avaliação (Figura 1a). Já a 25ºC, esta linhagem obteve maior crescimento que a ABI-01/01 somente após dois dias de incubação (Figura 1b); após quatro dias de avaliação, ambas as linhagens obtiveram crescimentos semelhantes; já nas avaliações posteriores, a linhagem ABI-01/01 obteve médias de crescimento micelial superiores às das demais linhagens.

Conclusão

Com base nos resultados obtidos e de acordo com a condução do experimento proposto, verificou-se que: o crescimento de A. bisporus é influenciado pela temperatura de incubação; a temperatura de 25ºC foi mais favorável para o crescimento micelial de todas as linhagens de A. bisporus; na temperatura de 20ºC, o melhor crescimento foi obtido com as linhagens ABI-06/05 e ABI-01/01 e, na temperatura de 25ºC, a linhagem ABI-01/01 apresentou crescimento significativamente maior que todas as demais.

Received on May 6, 2007.

Accepted on October 31, 2007.

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  24 Nov 2011
• Data do Fascículo
  Mar 2010

Histórico

• Aceito
  31 Out 2007
• Recebido
  06 Maio 2007