Avaliação da eficácia de crioprotetores permeantes e não permeantes no descongelamento rápido e lento do sêmen canino

Evaluating the effectiveness of permeating and non-permeating cryoprotectants in fast and slow defrosting of canine semen

Resumos

O objetivo do trabalho foi avaliar o efeito da associação entre crioprotetores ainda pouco estudados no Brasil como a dimetilformamida e a trealose em meio diluidor, por meio de protocolos de descongelamento rápido e lento. Foram utilizados três cães machos, adultos, sadios da raça Labrador do Retrievier, que foram submetidos a uma coleta de sêmen semanal durante o período de cinco semanas. Os três meios diluentes utilizados neste estudo foram: (D1)-tris-citrato, acrescido de 3% de dimetilformamida + 3% de glicerol, (D2)-3% de dimetilformamida e de trealose e (D3)-4% de glicerol. No descongelamento, metade das amostras de cada meio diluente foi descongelada pelo método rápido, em banho-maria a 75ºC por sete segundos, seguido de nova imersão a 37 ºC por 1 minuto. A outra metade foi descongelada pelo método lento, em banho-maria à 37 ºC por 1 minuto. O sêmen foi avaliado quanto à motilidade progressiva, vigor espermáticos e integridade de membrana. Pra isso, as amostras foram submetidas aos testes hipo-osmótico e de integridade da membrana plasmática e do acrossoma (fluorescência). Os resultados indicam que o uso do glicerol como crioprotetor em diluidor TRIS proporciona maior eficácia na criopreservação dos espermatozoides da espécie canina, quando comparados com a dimetilformamida associada ao glicerol ou trealose.

cão; criopreservação; dimetilformamida; glicerol; trealose

The aim of this study was to evaluate the association between cryoprotectants little studied in Brazil such as dimethylformamide and trehalose amid thinner, using protocols of fast and slow defrosting. Three adult Labrador Retrievier male, healthy dogs, weekly submitted to one semen collection during five-weeks period, were used. The base diluent medium used in this study was tris-citrate added with 3% of dimethylformamide + 3% glycerol (D1), 3% dimethylformamide and trehalose (D2) and 4% glycerol (D3). At defrosting, half of the semen samples from each diluent medium was defrosted by rapid method in water-bath at 75 °C for seven minutes, followed by a new immersion at 37 °C for 1 minute. The other half of the samples was defrosted by slow method, in water-bath at 37 °C for 1 minute. The semen was evaluated for sperm progressive motility and vigor, besides membrane integrity. For this, the semen samples were submitted to either hyposmotic and membrane integrity tests of the plasmatic membrane and acrosome (fluorescence). The results indicated that the use of glycerol as cryoprotector in TRIS diluter provides greater efficacy in cryopreserving spermatozoa of the canine species, when compared to dimethylformamide associated with trehalose or glycerol.

cryopreservation; dimethylformamide; dogs; glycerol; trehalose

• ¹
  Rossi T.C., Papa F.O., Santos T.B., Macedo L.P., Alvarenga M.A., Melo C.M., Dell'Aqua Junior J.A. Efeito da utilização de diferentes crioprotetores e suas associações no processo de congelação de sêmen eqüino com meio MP50. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 2003; 27:350-352.
• ²
  Madeira V.L.H., Monteiro C.L.B., Barbosa C.C. Efeito de diferentes protocolos de descongelação sobre o sêmen canino criopreservado em diluidor à base água de coco em pó (ACP-106®). Ciência Animal Brasileira, 2010;11(4):845-852.
• ³
  Farstad W. Semen cryopreservation in dogs and foxes. Animal Reproduction Science, 1996;42:251-260,
• ⁴
  Barros T.B. Toniolli R. Uso potencial da água de coco na tecnologia de sêmen. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 2011:35:400-407.
• ⁵
  Cardoso J.F.S., Paula N.R.O., Uchoa D.C., Silva, L.D.M. Diferentes concentrações de gema de ovo na qualidade do sêmen canino diluído em ACP®-106 e resfriado a 4 °C. Comunicata Scientiae, 2010; 2:146-152.
• ⁶
  Silva A.F., Costa E.P., Oliveira F.A. Uso da dimetil-formamida associada ou não ao glicerol na criopreservação de sêmen caprino. Revista Brasileira de Zootecnia, 2006; 35:452-456.
• ⁷
  Watson P.F. Recent developments and concepts in the cryopreservation of spermatozoa and assessment of their post-thawing function. Reproduction, Fertility and Development, 1995;7:871-891.
• ⁸
  Cotorello ACP, Henry M Princípios da criopreservação, congelação e avaliação do sêmen eqüino (Revisão de Literatura). Revista Brasileira de Reprodução Animal, 2002: 26(1):14-25.
• ⁹
  Peña A., Linde-Forsberg C. Effects of Equex, one- or two-step dilution, and two freezing and thawing rates on post-thaw survival of dog spermatozoa. Theriogenology, 2000;54(6):859-875.
• ¹⁰
  Zimmermann, M., Santos, T.E., Fidelis, A.A.G., Blume, H., Mondadori, R.G. Uso de dimetil-formamida e água de coco na criopreservação de sêmen canino. Bioscience Journal, 2007; 23:96-100.
• ¹¹
  Colégio Brasileiro de Reprodução Animal - CBRA. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal. 2.ed. Belo Horizonte: CBRA, 1998. 49p. Português
• ¹²
  Hancock K.L. The morphology of boar spermatozoa. Journal Reproduction Microscopy Social, 1957; 76:84-97.
• ¹³
  Blom, E. Pathological condictions in the genital organs and in the semen of group for rejection of breeding bulls for import or export to and from Denmark, Nordisk. Veterinaer Medicin, ;35:105-130.
• ¹⁴
  Rota A., Strom B., Linde-Forsberg C. Effects of seminal plasma and three extenders on canine semen stored at 4°C. Theriogenology, 1995; 44: 885-900.
• ¹⁵
  Bueno R. Qualidade espermática do sêmen canino criopreservado. II Utilização de dois protocolos de resfriamento. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, 2001;53(3): 372-379.
• ¹⁶
  Peña A.I., Barrio F., Quintela L.A. Effect of glycerol treatments on frozen-thawed dog sperm longevit and acrossomal integrity. Theriogenology, 1998;50:163-174.
• ¹⁷
  Silva A. R., Cardoso R. C.S., Silva L.D.M. Efeito do processo de descongelamento sobre a viabilidade do sêmen canino in vitro. Ciência Animal, 1998;8:75-80.
• ¹⁸
  Larsson B., Rodriguez-Martínez H. Can we use in vitro fertilization testes to predict semen fertility. Animal Reproduction Science, 2000;60-61:327-336.
• ¹⁹
  Dimitropoulos R. La signification du test de la thermorésitance dans l'appreciation de la valeur fécondante du sperme congelé. Annuarie Médecine Vétérinaire, 1967;4:215-224,
• ²⁰
  Harrison R.A.P., Vickers C.E. Use of fluorescent probes to access membrane integrity in mammalian spermatozoa. Journal of Reproduction and Fertility, 1990;88:343-352,
• ²¹
  Zúccari C.E.S.N. Efeito da criopreservação sobre a integridade estrutural da célula espermática eqüina. [tese]. Botucatu: Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, 1998, 121p. Português
• ²²
  SAEG. SAEG: sistema para análises estatísticas. Versão 9.1. Viçosa: UFV, 2007
• ²³
  Johnston S.D. Performing a complete canine semen evaluation in a small animal hospital. The Veterinary clinics of North America. Small animal practice, 1991;21:545-551,
• ²⁴
  Linde-Forsberg C. Achieving canine pregnancy by using frozen or chilled extend semen. The Veterinary clinics of North America. Small animal practice, 1991;v.21:467-485.
• ²⁵
  Bordignon V., Deschamps J.C., Sechin A. Efeito da trealose sobre a motilidade, acrossoma e fertilidade do sêmen congelado de suínos. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 1996;20:54-62.
• ²⁶
  Snoeck P.P.N., Henry M., Santos L.M.G. Avaliação de crioprotetores no congelamento de sêmen eqüino. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 2001;25(3):454-455.
• ²⁷
  Medeiros A.S.L., Gomes G.M., Carmo M.T. Cryopreservation of stallion sperm using different amides. Theriogenology, 2002;58:273-276.
• ²⁸
  England G.C.W., Allen W.E. Factors affecting the viability of canine spermatozoa. Theriogenology, 1992;37:373-381.
• ²⁹
  Watson P.F. The roles of lipid and protein in the protection of ram spermatozoa at 5°C by egg-yolk lipoprotein. Journal of Reproduction and Fertility, 1981;62:483-492.
• ³⁰
  Sodesquist L., Madrid-Bury N., Rodriguez-Martinez H. Assesment of ram sperm membrane integrity following different thawing procedures. Theriogenology, 1997;48:1115-1125.
• ³¹
  Neild D., Chaves G., Flores M. Hypoosmotic test in equine spermatozoa. Theriogenology, 1999;51:721-727.
• ³²
  Kumi-Diaka J. Subjecting canine semen to the hypo-osmotic test. Theriogenology, 1993;39:1279-1289.
• ³³
  Curry M.R. Cryopreservation of semen from domestic livestock. Reviews of Reproduction, 2000;5:46-52.
• ³⁴
  Domeniconi R.F., Orsi A.M., Justulin J.R. Leme Beu C.C., Felisbino S.L. Immunolocalization of aquaporins 1, 2 and 7 in rete testis, efferent ducts, epididymis and vas deferens of adult dog. Cell and Tissue Research, 2008;332:329-335.
• ³⁵
  Okuda Y., Seita Y., Hisamatsu S., Sonoki S., Shino M., Masaoka T., Inomata T., Kamijo S., Kashiwazaki N. Fertility of spermatozoa cryopreserved with 2% acetamide or glycerol through artificial insemination in the Japanese White Rabbit. Experimental Animals, 2007;56:29-34.
• ³⁶
  Forero-Gonzalez RA, Celeghini ECC, Raphael FC, Andrade, AF, Bressan FF, Arruda RP. Effects of bovine sperm cryopreservation using different freezing techniques and cryoprotective agents on plasma, acrosomal and mitochondrial membranes. Andrologia, 2012;44:154-159.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  14 Abr 2014
• Data do Fascículo
  Mar 2014

Histórico

• Recebido
  26 Ago 2013
• Aceito
  12 Nov 2013