Efeito da adição de trolox e glutationa reduzida na viabilidade in vitro de espermetazoides de cães

Effect of trolox and glutathione reduced (GSH) addition on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm

Resumos

Com o objetivo de avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Trolox e Glutationa reduzida (GSH) na viabilidade in vitro de espermatozoides criopreservados de cães, amostras de sêmen foram colhidas de animais das raças Buldogue Francês (n=1), Basset Hound (n=2) e Rottweiler (n=1), por meio de manipulação digital. A seguir, procedeu-se à avaliação macroscópica e microscópica e divisão do volume de sêmen em alíquotas, de acordo com os experimentos e grupos experimentais, utilizando-se diferentes concentrações de Trolox (200 e 300 µM/L) ou GSH (2 e 5 µM/L). As amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL), criopreservadas em máquina de congelação e armazenadas em nitrogênio líquido. Após descongelação a 37 ºC (60 seg) e incubação durante 60 minutos, constatou-se que os resultados de motilidade, vigor e espermatozoides com acrossomas íntegros evidenciaram diferença significativa (P<0,05) apenas entre os tempos de incubação, nos três experimentos. No Exp. 2, a adição de 2 e 5 µM/L de GSH (G2 e G3) determinou maior (P<0,05) porcentual de células sem estresse oxidativo. Concluiu-se que GSH, nas concentrações de 2 e 5 µM/L, pode ser adicionada ao diluente de criopreservação do sêmen de cães.

Antioxidante; cães; criopreservação; sêmen; viabilidade

In order to evaluate the effect of adding Trolox and Glutathione reduced antioxidants on the in vitro viability of dog cryopreserved sperm, semen samples were harvested from animals of French Bulldog (n=1), Basset Hound (n=2) and Rottweiler (n=1) breeds, through digital manipulation. After macroscopic and microscopic evaluation, the volume of semen was divided in aliquots, according to the experiments and experimental groups, using different concentrations of Trolox (200 and 300 µM/L) or GSH (2 and 5 µM/L). The samples were packaged in straws (0.25 mL), cryopreserved in freezing machine and stored in liquid nitrogen. After thawing at 37ºC (60 sec) and incubation during 60 minutes, we verified that motility, vigor and sperm with intact acrosomes showed significant difference (P<0.05) only among incubation times, on the three experiments. In Exp. 2, the addition of 2 and 5 µM/L of GSH (G2 and G3) determined higher (P<0.05) percentage of sperm without oxidative stress. Therefore, we could conclude that GSH, on the concentration of 2 and 5 µM/L, can be added to diluent of dog semen cryopreservation.

Antioxidant; cryopreservation; dog; semen; viability

• AGARWAL, A.; PRABAKARAN, S.A.; SAID, T.M. Prevention of oxidative stress injury to sperm. Journal of Andrology, v.26, p.654 - 60, 2005.
• AGARWAL, A.; SALEH, R.A. BEDAIWY, M.A. Role of reactive oxygen species in the pathophysiology of human reproduction. Fertility and Sterility, v.4, p.829-843, 2003.
• AITKEN, R.J.; CLARKSON, J.S. Significance of reactive oxygen species and antioxidants in defining the efficacy of sperm preparation techniques. Journal of Andrology, v.9, p.367 - 376, 1988.
• ALVAREZ, J.G.; STOREY, B.T. Role of glutathione peroxidase in protectin mammalian spermatozoa from loss of motility caused by spontaneous lipid peroxidation. Gamete Research, v.23, p.77 - 90, 1989.
• BALL, B.A.; VO, A. Osmotic tolerance of equine spermatozoa and the effects of soluble cryoprotectant on equine sperm motility, viability and mitochondrial membrane potential. Journal of Andrology, v.22, p.1061-1069, 2001.
• BAUMBER, J.; BALL, B.A.; LINFOR, J.J. Assessment of the cryopreservation of equine spermatozoa in the presence of enzyme scavangers and antioxidants. American Journal of Veterinary Research, v.66, p.772 - 779, 2005.
• BECONI, M.T.; FRANCIA, C.R.; MORA, N.G.; AFFRANCHINO, M.A. Effect of natural antioxidants on frozen bovine semen preservation. Theriogenology, v.40, p.841, 1993.
• BILODEAU, J.F.; CHATTERJEE, S.; SIRARD, M.A.; GAGNON, C. Levels of antioxidant defenses are decreased in bovine spermatozoa after a cycle of freezing and thawing. Molecular Reproduction and Development, v.55, p.282 - 288, 2000.
• BREININGER, E.; BEORLEGUI, N.B.; O'FLAHERTY, C.M.; BECONI, M.T. Alpha-tocopherol improves biochemical and dynamic parameters in cryopreserved boar semen. Theriogenology, v.63, p.2126 - 2135, 2005.
• BROUWERS, J.F.H.; GADELLA, B.M. In situ detection and localization of lipid peroxidation in individual bovine sperm cells. Free Radical Biology & Medicine, v.35, p.1382 - 1391, 2003.
• BUENO, R.; COSTA, E.P.; GUIMARÃES, J.D. VALENTIM, F.M. Qualidade espermática do sêmen criopreservado de cães. I - efeito do meio diluidor. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v. 53, p. 364-371, 2001.
• CBRA. Colégio Brasileiro de Reprodução Animal. Manual para exame andrológico e avaliação de sêmen animal Belo Horizonte, 1996. 65p. (Elaborado conforme convênio CBRA/MA n. 017/1996). Acesso em: <http://pt.scribd.com/doc/151892128/Manual-para-Exame-Andrologico-e-Avaliacao-de-Semen-Animal>
• CHRISTIANSEN, I.J. Reprodução no cão e no gato São Paulo: Manole, 1986. 363p.
• COLETO, Z.F. Congelação de sêmen da espécie canina adicionando antioxidantes 2006. 103p. Tese (Doutorado em Ciência Veterinária) - Universidade Federal Rural de Pernambuco, Pernambuco. Disponível em http://www.tede.ufrpe.br/tde_busca/arquivo.php?codArquivo=796, acesso em outubro de 2013.
• De LEEUW, F.E.; COLENBRANDER, B.; VERKLEIJ, A.J. The role membrane damage plays in cold shock and freezing injury. Reproduction in Domestic Animals, v.1, p.95-104, 1991.
• DRÖGE, W.; MIHM, S.; BOCKSTETTE, M.; ROTH, S. Effect of reactive oxygen intermediates and antioxidants on proliferation and function of T lymphocytes. Methods in Enzymology, v.234, p.135 - 151, 1994.
• EVENSON, D.P.; JOST, L.K.; MARSHALL, D.; ZINAMAN, M.J.; CLEGG, E.; PURVIS, K.; DE ANGELIS, P.; CLAUSSEN, O.P. Utility of the sperm chromatin structure as a diagnostic and prognostic tool in the human fertility clinic. Human Reproduction, v.14, n.4, p.1039-1049, 1999.
• GADEA, J.; SELLÉS, E.; MARCO, M.A.; COY, P.; MATÁS, C.; ROMAR, R.; RUIZ, S. Decrease in glutathione content in boar sperm after cryopreservation. Effect of the addition of reduced glutathione to the freezing and thawing extenders. Theriogenology, v.62, p.690-701, 2004.
• GROSSFELD, R.; SIEG, B.; STRUCKMANN, C.; FRENZEL, A.; MAXWELL, W.M.; RATH, D. New aspects of boar semen freezing strategies. Theriogenology, v.70, n.8, p.1225-33, 2008.
• HERRERA, E.; BARBAS, C. Vitamin E: action, metabolism and perspectives. Journal of Physiology and Biochemistry, v.51, n.1, p.43-56, 2001.
• HOLT, W.V. Basic aspects of frozen storage of semen. Animal Reproduction Science, v.62, p.3-22, 2000.
• HSU, P.C.; LIU, M.Y.; HSU, C.C.; CHEN, L.Y.; GUO, Y.L. Effects of vitamin E and/or C on reactive oxygen species-related lead toxicity in rat sperm. Toxicology, v.128, p.169-179, 1998.
• JASKO, D.J. Procedures for cooling and freezing of equine semen. Ars Veterinaria, v.10, p.156-65, 1994.
• JELEZARSKY, L.; VAISBERG, C.H; CHAUSHEV, T.; SAPUNDJIEV, E. Localization and characterization of glutathione peroxidase (GPx) in boar accessory sex glands, seminal plasma, and spermatozoa and activity of . (GPx) in boar semen. Theriogenology, v.69, p.139-145, 2008.
• LEITE NETTO, L.M.C.; GÓES, P.A.A; RODRIGUES, M.P.; CARDOSO, P.B.S.; NICHI, M.; BARNABE, R.C.; BARNABE, V.H. Efeito da vitamina E e do levedo de cerveja na qualidade espermática de cães. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE REPRODUÇÃO ANIMAL, 17, 2007, Curitiba, PR. Anais ... Belo Horizonte, MG: CBRA, 2007. p.171. Disponível em: < https://docs.google.com/viewer?url=http%3A%2F%2Fwww.cbra.org.br%2Fportal%2F publicacoes%2Fanaisxviicbra%2FANAIS%2520do%2520XVII%2520CBRA.pdf>
• MARNETT, L.J. Oxyradicals and DNA damage. Carcinogenesis, v.21, p.361 - 370, 2000.
• MATÉS, J.M.; PÉREZ-GÓMEZ, C.; CASTRO, I.N. Antioxidant Enzymes and Human Diseases. Clinical Biochemistry, v.32, n.8, p.595 - 603, 1999.
• MEDEIROS, C.M.O.; FORELL, F.; OLIVEIRA, A.T.D.; RODRIGUES, J.L. Current status of sperm cryopreservation: why isn't it better? Theriogenology, v.57, p.327-344, 2002.
• MICHAEL, A.; ALEXOPOULOS, C.; PONTIKI, E.; HADJIPAVLOU-LITINA, D.; SARATSIS, P.; BOSCOS, C. Effect of antioxidant supplementation on semen quality and reactive oxygen species of frozen-thawed canine spermatozoa. Theriogenology, v.68, p.204-212, 2007.
• MIES FILHO, A. Reprodução dos animais e inseminação artificial nos cães. 6.ed. Porto Alegre: Sulina, 1987. 750p.
• MIESTER, A.; ANDERSON, L. Glutathione. Annual review of biochemistry, v.52, p.71-90, 1983.
• MOLLÁ, M.; SELLÉS, E.; MARCO, M.A.;  REMOHI, J.; BALLESTEROS, A.; GADEA, J. Freezing procedure produces a reduction in the human spermatozoa glutathione content. Journal of Andrology, v.25 (Suppl.), p.45, 2004.
• MORTON, D.B.; BRUCE, S.G. Semen evaluation, cryopreservation and factors relevant to the use of frozen semen in dogs. Journal of Reproduction and Fertility, v.39, p.311-316, 1989.
• MOURA, C.S.; CAVALCANTI, M.C.O.; GUERRA, M.M.P. et al. Teste de avaliação in vitro e criopreservação do sêmen de cão utilizando diferentes diluidores. Revista Brasileira de Ciência Veterinária, v.9, p.102-106, 2002.
• MOURA, C.S.; NUNES, A.K.S.; SILVA, B.S.; PEIXOTO, C.A.; SILVA, A.R.; SILVA, S.V.; GUERRA, M.M.P. Efeito da temperatura de descongelação na integridade de espermatozoides criopreservados de cães. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.65, n.4, p.1057-1064, 2013.
• OLIVEIRA, E.C.S.; JULIANI, G.C.; HENRY, M.; MARQUES JR, A.P. In vitro evaluation of canine spermatozoa cryopreserved in different extenders. Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia, v.58, p.1116-1122, 2006.
• PEIXOTO, A.L.V.A.; MONTEIRO Jr, P.L.J.; CÂMARA, D.R.; VALENÇA, R.M.B.; SILVA, K.M.G.; GUERRA, M.M.P. Efeito do tempo de incubação pós-descongelação sobre a viabilidade de espermatozóides ovinos criopreservados com tris-gema suplementado com vitamina C e Trolox. Ciência Veterinária nos Trópicos, v.11, n.1, p.16-24, 2008.
• POULOS, A.; DARIN-BENNETT, A.; WHITE, I.G. The phospholipid-bound fatty acids and aldehydes of mammalian spermatozoa. Comparative Biochemistry and Physiology, v.46, p.541-549, 1973.
• ROVER JUNIOR, L.; HOEHR, N.F.; VELLASCO, A.P.; KUBOTA, L.T. Sistema antioxidante envolvendo o ciclo metabólico da glutationa associado a métodos eletroanalíticos na avaliação do estresse oxidativo. Química Nova, v.24, n.1, p.112-119, 2001.
• SALEH, R.A.; AGARWAL, A. Oxidative stress and male infertility: from research bench to clinical practice. Journal of Andrology, v.23, n.6, p.737-752, 2002.
• SILVA, A.R.; CARDOSO, R.C.; SILVA, L.D.M. Criopreservação do sêmen canino: Revisão. Ciência Animal, v.11, n.2, p.119-129, 2001.
• SILVA, S.V.; GUERRA, M.M.P. Efeitos da criopreservação sobre as células espermáticas e alternativas para redução das crioinjúrias. Revista Brasileira de Reprodução Animal, v.35, n.4, p.370-384, 2011.
• SINHA, M.P.; SINHA, A.K.; SINGH, B.K.; PRASAD, R.L. The effect of glutathione on the motility, enzyme leakage and fertility of frozen goat semen. Theriogenology, v.41, p.237-243, 1996.
• SOARES, A.T.; GUERRA, M.M.P. Efeitos da criopreservação sobre a viabilidade espermática. Tecnologia & Ciência Agropecuária, v.3, n.2, p.53-63, 2009.
• STADTMAN, E.R.; LEVINE, R.L. Protein oxidation. Annals of the New York Academy of Sciences, v.899, p.191 - 208, 2000.
• WATSON, P.F. Recent developments and concepts in the cryopreservation of spermatozoa and assessment of their post-thawing function. Reproduction, Fertility and Development, v.7, p.871-891, 1995.
• WATSON, P.F. The causes of reduced fertility with cryopreserved semen. Animal Reproduction Science, v.60-61, p.481-492, 2000.
• YLÄ-HERTTUALA, S. Oxidized LDL and atherogenesis. Annals of the New York Academy of Sciences, v.874, p.134 - 137, 1999.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  13 Jan 2014
• Data do Fascículo
  Dez 2013

Histórico

• Recebido
  24 Ago 2008
• Aceito
  09 Set 2013