Determinação da capacidade antioxidante de produtos naturais in vitro
               pelo método do DPPH•: estudo de revisão

Os antioxidantes podem ser de grande benefício para a melhoria da qualidade de vida, já que eles têm a capacidade de proteger um organismo dos danos causados pelos radicais livres, prevenindo ou adiando o início de várias doenças. Uma das técnicas atualmente utilizada para detectar a presença de compostos antioxidantes, é um método baseado na eliminação do radical livre estável 1,1-difenil-2-picrilhidrazil (DPPH•). Este método é considerado fácil, preciso, rápido, simples, e econômico, sendo adequado para a determinação da capacidade antioxidante de substâncias puras e misturas. O objetivo deste artigo de revisão é fornecer informações sobre esse método. A pesquisa foi realizada usando o termo radical DPPH•, capacidade antioxidante-DPPH• e método DPPH• em periódicos, tais como: Pubmed, Wiley Online Library, ACS Publications, SpringerLink e ScinceDirect até janeiro de 2014.

Antioxidantes; método DPPH•; capacidade antioxidante

Autoria

G.L.S. OLIVEIRA

Curso de Licenciatura em Ciências Biológicas, Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Piauí, Praça da Liberdade, 1597, 64000-040, Centro, Teresina (PI) - Brasil.Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do PiauíBrazilTeresina, PI, BrazilCurso de Licenciatura em Ciências Biológicas, Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Piauí, Praça da Liberdade, 1597, 64000-040, Centro, Teresina (PI) - Brasil.

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FIGURA 1.
Estrutura do radical livre estável DPPH•

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FIGURA 2.
Mecanismos de reação entre o radical DPPH• e um antioxidante através da transferência de um átomo de hidrogênio.

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FIGURA 3.
Estabilização do radical DPPH• pelo deslocamento do elétron desemparelhado.

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FIGURA 4.
Ligação química do metanol com o radical DPPH• e o aumento da localização do elétron desemparelhado no átomo de nitrogênio (N•a) do radical DPPH•

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TABELA 1.
Modificações ou adaptações do método DPPH•

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FIGURA 1. Estrutura do radical livre estável DPPH•

FIGURA 2. Mecanismos de reação entre o radical DPPH• e um antioxidante através da transferência de um átomo de hidrogênio.

FIGURA 3. Estabilização do radical DPPH• pelo deslocamento do elétron desemparelhado.

FIGURA 4. Ligação química do metanol com o radical DPPH• e o aumento da localização do elétron desemparelhado no átomo de nitrogênio (N•a) do radical DPPH•

TABELA 1. Modificações ou adaptações do método DPPH•

Método DPPH•
Concentração inicial da solução de DPPH•	Tempo de Reação (minutos)	Quantidade da solução de DPPH• utilizado	Tipos de solventes utilizados	Absorbância	Referência
0,1 mM	30	50 uL	Metanol	515 nm	(Yao et al., 2012YAO, H. et al. Screening and quantitative analysis of antioxidants in the fruits of Livistona chinensis R. Br using HPLC-DAD-ESI/MS coupled with pre-column DPPH assay., Food Chemistry v. 135, n. 4, p. 2802-2807, 2012.)
0,5 mM	30	2 mL	Metanol	517 nm	(Alam et al., 2012ALAM, M. N.; BRISTI, N. J.; RAFIQUZZAMAN, M. Review on in vivo and in vitro methods evaluation of antioxidant activity. Saudi Pharmaceutical Journal, v. 21, n. 2, p. 143-152, 2013.)
6 × 10-5 M	1 e 5	975 uL	Etanol	515 nm	(Amira et al., 2012AMIRA, E. A. et al. Effects of the Ripening Stage on Phenolic Profile, Phytochemical Composition and Antioxidant Activity of Date Palm Fruit. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2012.)
31,5 uM	0 a 120	1 mL	Etanol	518 nm	(Fagali; Catalá, 2008FAGALI, N.; CATALÁ, A. Antioxidant activity of conjugated linoleic acid isomers, linoleic acid and its methyl ester determined by photoemission and DPPH techniques. Biophysical Chemistry, v. 137, n. 1, p. 56-62, 2008.)
0,06 mM	0 a 9	3,9 mL	Metanol	515 nm	(Rufino et al., 2009RUFINO, M. S. M. et al. Free radical-scavenging behaviour of some north-east Brazilian fruits in a DPPH system., Food Chemistry v. 114, n. 2, p. 693-695, 2009.)
3,8 mM	6	20 uL	Etanol	520 nm	(Moţ; Silaghi-Dumitrescu; Sârbu, 2011MOŢ, A. C.; SILAGHI-DUMITRESCU, R.; SÂRBU, C. Rapid and effective evaluation of the antioxidant capacity of propolis extracts using DPPH bleaching kinetic profiles, FT-IR and UV-vis spectroscopic data., Journal of Food Composition and Analysis v. 24, n. 4-5, p. 516-522, 2011.)
100 mM	20	700 uL	Metanol	515 nm	(Locatelli et al., 2009LOCATELLI, M. et al. Study of the DPPH-scavenging activity: Development of a free software for the correct interpretation of data., Food Chemistry v. 114, n. 3, p. 889-897, 2009.)
60 uM	Monitorado a até o estado de equilíbrio (6 horas)	1,95 mL	Metanol	515 nm	(López-Giraldo et al., 2009LO‍́PEZ-GIRALDO, L. J. et al. Kinetic and Stoichiometry of the Reaction of Chlorogenic Acid and Its Alkyl Esters against the DPPH Radical., Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 57, n. 3, p. 863-870, 2009.)
0.4 mM/L	Monitorado no tempo de 30 minutos, 2, 6, 12, 24, 36, 48, 72, 96, 120 e 144 horas	0,5 mL	Etanol	517	(Liang et al., 2010LIANG, X.L. et al. Improved in Vitro Assays of Superoxide Anion and 1,1-Diphenyl- 2-picrylhydrazyl (DPPH) Radical-Scavenging Activity of Isoflavones and Isoflavone Metabolites., Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 58, n. 22, p. 11548-11552, 2010.)
100 mM	Monitorado ao longo de 5 h	2,9 mL	Etanol	516	(Ordoudi et al., 2006ORDOUDI, S. A. et al. Structure−DPPH• Scavenging Activity Relationships: Parallel Study of Catechol and Guaiacol Acid Derivatives., Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 54, n. 16, p. 5763-5768, 2006.)
0,3 mM	A cada 10 minutos até 1 hora	1 mL	Etanol	540	(Liu et al., 2008LIU, D. et al. The scavenging capacity and synergistic effects of lycopene, vitamin E, vitamin C, and β-carotene mixtures on the DPPH free radical., LWT - Food Science and Technology v. 41, n. 7, p. 1344-1349, 2008.)
0,1 mM	A cada 15 minutos até o estado de equilíbrio	2 mL	Metanol	517	(Lu; Yeap Foo, 2000LU, Y.; YEAP FOO, L. Antioxidant and radical scavenging activities of polyphenols from apple pomace., Food Chemistry v. 68, n. 1, p. 81-85, 2000.)
100 μM	30	2,95	Acetato de etila	520	(Prevc et al., 2013PREVC, T. et al. DPPH assay of vegetable oils and model antioxidants in protic and aprotic solvents., Talanta v. 109, n. 0, p. 13-19, 2013.)
0.025 mM	180	20 mL	Tampão fosfato de sódio em pH 7.0	517	(Niu et al., 2012NIU, Y. et al. Temperature-dependent stability and DPPH scavenging activity of liposomal curcumin at pH 7.0., Food Chemistry v. 135, n. 3, p. 1377-1382, 2012.)
1.55 × 10− 4 M	60	-	Agua e etanol em uma mistura de 1/1	524	(Friaa et al., 2008FRIAA, O.; BRAULT, D. Kinetics of the reaction between the antioxidant Trolox and the free radical DPPH in semi-aqueous solution., Organic & Biomolecular Chemistry v. 4, n. 12, p. 2417-23, 2006.)
3.8 mg/50 mL	30	0,975 mL	Acetona, hexano e metanol	515	(Fernandez-Orozco et al., 2011FERNANDEZ-OROZCO, R. et al. DPPH-scavenging capacity of chloroplastic pigments and phenolic compounds of olive fruits (cv. Arbequina) during ripening. Journal of Food Composition and Analysis, v. 24, n. 6, p. 858-864, 2011.)
0,4 mM	30	3 mL	Solução metanólica 0,004%	517	(Liang; Jin; Liu, 2011LIANG, B.; JIN, M.; LIU, H. Water-soluble polysaccharide from dried Lycium barbarum fruits: Isolation, structural features and antioxidant activity. Carbohydrate Polymers, v. 83, n. 4, p. 1947-1951, 2011.)
0.05 mM	5	0,5 mL	Solução aquosa de micela	528	(Noipa et al., 2011NOIPA, T. et al. New approach for evaluation of the antioxidant capacity based on scavenging DPPH free radical in micelle systems. Food Research International, v. 44, n. 3, p. 798-806, 2011.)

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