Abstract

LOPES, Francis Julio Fagundes et al. Restriction enzyme improves the efficiency of genetic transformations in Moniliophthora perniciosa, the causal agent of witches’ broom disease in Theobroma cacao. Braz. arch. biol. technol. [online]. 2008, vol.51, n.1, pp. 27-34. ISSN 1516-8913.  http://dx.doi.org/10.1590/S1516-89132008000100004.

A presença de enzima de restrição na mistura de transformação aumentou a eficiência da transformação em Moniliophthora perniciosa. A influência da forma do vetor (linear ou circular), o padrão de integração do plasmídeo nos sítios genômicos e a influência do promotor usado para expressar o gene marcador foram também analisados. A adição de BamHI ou NotI aumentou o número de transformantes 3-10 vezes e 3 vezes, respectivamente, em relação ao controle sem a adição da enzima. O uso de plasmídeos pré-linearizados não aumentou a eficiência da transformação quando comparado à eficiência obtida com plasmídeos circulares. No entanto, a freqüência de transformantes multi-cópias aumentou significativamente. Juntos os procedimentos reportados aqui resultaram em processos mais eficientes de produção de protoplastos e transformação, onde o tempo necessário para o aparecimento dos transformantes e o número de inserções múltiplas foi reduzido.

Keywords : Moniliophthora perniciosa; transformation; restriction enzyme.