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Brazilian Journal of Microbiology

Print version ISSN 1517-8382

Abstract

BORKAR, Prita S.; BODADE, Ragini G.; RAO, Srinivasa R.  and  KHOBRAGADE, C.N.. Purificação e caracterização de uma lipase extracelular produzida por uma nova cepa: Pseudomonas aeruginosa SRT9. Braz. J. Microbiol. [online]. 2009, vol.40, n.2, pp. 358-366. ISSN 1517-8382.  http://dx.doi.org/10.1590/S1517-83822009000200028.

Uma lipase extracelular foi isolada e purificada a partir de um caldo de cultura de Pseudomonas aeruginosa SRT9 até homogeneidade visível empregando-se precipitação com sulfato de amônia, seguida de técnicas cromatográficas em colunas de fenil sefarose CL-4B e Mono Q HR 5/5, obtendo-se um fator de purificação de 98 vezes, e atividade especifica de 12307,8 U/mg. Por SDS_PAGE, estimou-se que o peso molecular da lipase purificada é 29kDa, com um ponto isoelétrico de 4,5. A lipase apresentou atividade máxima em uma ampla faixa de temperatura e pH, com ótimos a 55ºC e pH 6,9. A lípase foi mais ativa sobre triacilglicerois de cadeia longa (C14-C16). A lipase foi fortemente inibida por EDTA, o que sugere que a enzima pode ser uma metaloproteína. SDS e íons metálicos, como Hg2+, Zn2+,Cu2+, Ag2+ e Fe2+, diminuíram marcadamente a atividade da lipase. Sua grande estabilidade e atividade em solventes organicos sugerem que esta lípase pode ser uma excelente ferramenta tecnológica com várias aplicações como reações organosintéticas e preparação de produtos farmacêuticos enantiomericamente puros. Os valores de Km e Vmax para a enzima purificada na hidrólise de trioleina foram 1,11 mmol/L e 0,05 mmol/L/min, respectivamente.

Keywords : Pseudomonas aeruginosa SRT9; lipase extracelular; purificação; constante de Michaelis.

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