Quality evaluation of DNA obtained from stored human saliva and its applicability to identification in Forensic Dentistry

Carvalho, Suzana Papile Maciel; Sales-Peres, Arsenio; Ribeiro-Bicudo, Lucilene Arilho; Silva, Ricardo Henrique Alves da

doi:10.1590/S1980-65232010000100010

Abstracts

PURPOSE: This study evaluated the quality of DNA obtained from stored human saliva and its applicability to human identification. METHODS: The saliva samples of 20 subjects, collected in the form of saliva in natura and from mouth swabs and stored at -20ºC, were analyzed. After 7 days, the DNA was extracted from the 40 saliva samples and subjected to PCR and electrophoresis. After 180 days, the technique was repeated with the 20 swab samples. RESULTS: The first-stage results indicated that DNA was successfully extracted in 97.5% of reactions, 95% of saliva in natura and 100% of swab saliva samples, with no statistically significant difference between the forms of saliva. In the second phase, the result was positive for all 20 analyzed samples (100%). Subsequently, in order to analyze the quality of the DNA obtained from human saliva, the SIX3-2 gene was tested on the 20 mouth swab samples, and the PCR products were digested using the MbO1 restriction enzyme to evaluate polymorphisms in the ADRA-2 gene, with positive results for most samples. CONCLUSION: It was concluded that the quantity and quality of DNA from saliva and the techniques employed are adequate for forensic analysis of DNA.

Human identification; Forensic Dentistry; Forensic Medicine; DNA; molecular biology; saliva

OBJETIVO: Este trabalho objetivou avaliar a qualidade do DNA obtido de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade da identificação de pessoas. METODOLOGIA: Analisaram-se amostras salivares de n=20 sujeitos da pesquisa, coletadas nas formas de saliva in natura e de swab bucal, sendo armazenadas a 20ºC. Após 7 dias, o DNA foi extraído das 40 amostras de saliva e submetido à PCR e à eletroforese. Após 180 dias repetiu-se a técnica nas 20 amostras de swab. RESULTADOS: Os resultados da primeira etapa indicaram que o DNA foi extraído com sucesso em 97,5% das reações, e, analisando-se separadamente, em 95% de saliva in natura e em 100% da saliva do swab, não havendo diferenças estatisticamente significantes entre as duas formas de saliva. Na segunda fase, o resultado foi positivo para as 20 amostras analisadas (100%). Posteriormente, para analisar a qualidade do DNA obtido da saliva humana, o gene SIX3-2 foi testado nas 20 amostras de swab bucal e foi feita a digestão do produto da PCR com a enzima de restrição MbO1 para avaliar polimorfismo do gene ADRA-2 obtendo-se resultados positivos para a maioria das amostras. CONCLUSÃO: Concluiu-se que a quantidade e a qualidade do DNA advindo de saliva e as técnicas empregadas estão adequadas à análise forense do DNA.

Identificação humana; Odontologia Legal; Medicina Legal; DNA; biologia molecular

ORIGINAL ARTICLE

Quality evaluation of DNA obtained from stored human saliva and its applicability to identification in Forensic Dentistry

Avaliação da qualidade do DNA extraído de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade na identificação em Odontologia Legal

Suzana Papile Maciel Carvalho^I; Arsenio Sales-Peres^II; Lucilene Arilho Ribeiro-Bicudo^III; Ricardo Henrique Alves da Silva^IV

^IDoutorado em Odontologia Social, Universidade de São Paulo, São Paulo, SP, Brasil

^IIFaculdade de Odontologia de Bauru, Universidade de São Paulo, Bauru, SP, Brasil

^IIIHospital de Reabilitações de Anomalias Crânio-faciais de Bauru, Universidade de São Paulo, Bauru, SP, Brasil

^IVFaculdade de Odontologia de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, SP, Brasil

^{Correspondence} Correspondence: Suzana Papile Maciel Carvalho Rua Christiano Pagani, 8-51, Apto. 61B, Vila Engler Bauru, SP rasil 17047-144 E-mail: sumaciel@uol.com.br

ABSTRACT

PURPOSE: This study evaluated the quality of DNA obtained from stored human saliva and its applicability to human identification.

METHODS: The saliva samples of 20 subjects, collected in the form of saliva in natura and from mouth swabs and stored at -20ºC, were analyzed. After 7 days, the DNA was extracted from the 40 saliva samples and subjected to PCR and electrophoresis. After 180 days, the technique was repeated with the 20 swab samples.

RESULTS: The first-stage results indicated that DNA was successfully extracted in 97.5% of reactions, 95% of saliva in natura and 100% of swab saliva samples, with no statistically significant difference between the forms of saliva. In the second phase, the result was positive for all 20 analyzed samples (100%). Subsequently, in order to analyze the quality of the DNA obtained from human saliva, the SIX3-2 gene was tested on the 20 mouth swab samples, and the PCR products were digested using the MbO1 restriction enzyme to evaluate polymorphisms in the ADRA-2 gene, with positive results for most samples.

CONCLUSION: It was concluded that the quantity and quality of DNA from saliva and the techniques employed are adequate for forensic analysis of DNA.

Key words: Human identification; Forensic Dentistry; Forensic Medicine; DNA; molecular biology; saliva

RESUMO

OBJETIVO: Este trabalho objetivou avaliar a qualidade do DNA obtido de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade da identificação de pessoas.

METODOLOGIA: Analisaram-se amostras salivares de n=20 sujeitos da pesquisa, coletadas nas formas de saliva in natura e de swab bucal, sendo armazenadas a 20ºC. Após 7 dias, o DNA foi extraído das 40 amostras de saliva e submetido à PCR e à eletroforese. Após 180 dias repetiu-se a técnica nas 20 amostras de swab.

RESULTADOS: Os resultados da primeira etapa indicaram que o DNA foi extraído com sucesso em 97,5% das reações, e, analisando-se separadamente, em 95% de saliva in natura e em 100% da saliva do swab, não havendo diferenças estatisticamente significantes entre as duas formas de saliva. Na segunda fase, o resultado foi positivo para as 20 amostras analisadas (100%). Posteriormente, para analisar a qualidade do DNA obtido da saliva humana, o gene SIX3-2 foi testado nas 20 amostras de swab bucal e foi feita a digestão do produto da PCR com a enzima de restrição MbO1 para avaliar polimorfismo do gene ADRA-2 obtendo-se resultados positivos para a maioria das amostras.

CONCLUSÃO: Concluiu-se que a quantidade e a qualidade do DNA advindo de saliva e as técnicas empregadas estão adequadas à análise forense do DNA.

Palavras-chave: Identificação humana; Odontologia Legal; Medicina Legal; DNA; biologia molecular; saliva

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Received: March 23, 2009

Accepted: November 16, 2009

1. Oliveira RN, Daruge E, Galvão LCC, Tumang AJ. Contribuição da odontologia legal para a identificação post-mortem. Rev Bras Odontol 1998;55:117-22.
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22. Allen M, Saldeen T, Gyllensten U. PCR- Based DNA typing of saliva on stamps and envelopes. Biotechniques1994;17:546-52.

Correspondence:

Suzana Papile Maciel Carvalho

Rua Christiano Pagani, 8-51, Apto. 61B,

Vila Engler Bauru, SP

rasil 17047-144

E-mail:

sumaciel@uol.com.br

Publication Dates

Publication in this collection
26 Aug 2011
Date of issue
2010

History

Received
23 Mar 2009
Accepted
16 Nov 2009

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[1] 1. Oliveira RN, Daruge E, Galvão LCC, Tumang AJ. Contribuição da odontologia legal para a identificação post-mortem. Rev Bras Odontol 1998;55:117-22.

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