Abstracts
Paracoccidioidomycosis (South American blastomycosis) is a systemic disease, strikingly more frequent in males, caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. A radiometric assay system has been applied to study the metabolic activity and the effect of drugs on this fungus "in vitro". The Y form of the yeast, grown in liquid Sabouraud medium was inoculated into sterile reaction vials containing the 6B aerobic medium along with 2.0 μCi of 14C-substrates. Control vials, prepared in the same way, contained autoclaved fungi. To study the effects of amphotericin B (AB) (0.1 and 10 μg/ml) and diethylstilbestrol (DSB) (1.0, 5.0 and 10 μg/ml) extra controls with live fungi and no drug were used. All vials were incubated at 35°C and metabolism measured daily with a Bactec instrument. 14CO2 production by P. brasiliensis was slow and could be followed for as long as 50 days. AB at 10mg/ml and DSB at 5 μg/ml inhibited the metabolism and had a cidal effect on this fungus. The results with DSB might explain the low incidence of the disease in females. This technique shows promise for studying metabolic pathways, investi gating more convenient 14C-substrates to expedite radiometric detection and for monitoring the effects of other drugs and factors on the metabolism of P. brasiliensis "in vitro".
Paracoccidioides brasiliensis; Radiometric assay; 14C-Substrates; Amphotericin B; Diethylstilbestrol
A paracoccidiodomicose (blastomicose sul-americana) é uma doença sistêmica muito mais freqüente no sexo masculino, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. Um sistema radiométrico foi utilizado para estudar a atividade metabólica e o efeito deftrogas sobre este fungo "in vitro". A forma Y do fungo, cultivada em Sabouraud líquido, foi inoculada em frascos estéreis contendo o meio aeróbio 6B, juntamente com 2,0 uCi de substâncias marcadas com carbono-14. Frascos-controle, preparados da mesma forma, foram inoculados com fungos autoclavados. Para estudar os efeitos da anfotericina B (AB) (0,1 e 10 μg/ml) e do dietilestilbestrol (DEB) (1, 5 e 10 μg/ml), controles adicionais foram preparados, contendo fungos viáveis mas não a droga. Todos os frascos foram incubados a 35°C e o metabolismo medido diariamente com uma máquina Bactec. A produção de 14CO2 pelo P. brasiliensis foi lenta e pôde ser acompanhada por 50 dias. Concentrações de 10 μg/ml de AB e 5 μg/ml de DEB inibiram o metabolismo e tiveram efeito fungicida. Os resultados com DEB poderiam explicar a baixa incidência da doença em mulheres. Esta técnica é promissora para estudar as vias metabólicas, investigar substâncias marcadas mais adequadas para tornar mais rápida a detecção radiométrica do fungo e para acompanhar os efeitos de outras drogas e fatores sobre o metabolismo do P. brasiliensis "in vitro".
ORIGINAL ARTICLES
Radiometric detection of metabolic activity of Paracoccidioides brasiliensis and its susceptibility to amphotericin B and diethylstilbestrol
Detecção radiométrica da atividade metabólica do Paracoccidioides brasiliensis e da sua sensibilidade à Anfotericina B e ao Dietilestilbestrol
Edwaldo E. Camargo; Maria K. Sato; Gilda M. B. Del Negro; Carlos da Silva Lacaz
Centro de Medicina Nuclear, Laboratório de Micologia Médica do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo e Laboratório de Investigação Médica (LIM-53) da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo
Address for correspondence Address for correspondence: Dr. Edwaldo E. Camargo Centro de Medicina Nuclear da Universidade de Sâo Paulo Caixa Postal 22022. CEP 01499 São Paulo, SP., Brasil
SUMMARY
Paracoccidioidomycosis (South American blastomycosis) is a systemic disease, strikingly more frequent in males, caused by the dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. A radiometric assay system has been applied to study the metabolic activity and the effect of drugs on this fungus "in vitro". The Y form of the yeast, grown in liquid Sabouraud medium was inoculated into sterile reaction vials containing the 6B aerobic medium along with 2.0 μCi of 14C-substrates. Control vials, prepared in the same way, contained autoclaved fungi. To study the effects of amphotericin B (AB) (0.1 and 10 μg/ml) and diethylstilbestrol (DSB) (1.0, 5.0 and 10 μg/ml) extra controls with live fungi and no drug were used. All vials were incubated at 35°C and metabolism measured daily with a Bactec instrument. 14CO2 production by P. brasiliensis was slow and could be followed for as long as 50 days. AB at 10mg/ml and DSB at 5 μg/ml inhibited the metabolism and had a cidal effect on this fungus. The results with DSB might explain the low incidence of the disease in females. This technique shows promise for studying metabolic pathways, investi gating more convenient 14C-substrates to expedite radiometric detection and for monitoring the effects of other drugs and factors on the metabolism of P. brasiliensis "in vitro".
Key words:Paracoccidioides brasiliensis; Radiometric assay; 14C-Substrates; Amphotericin B; Diethylstilbestrol
RESUMO
A paracoccidiodomicose (blastomicose sul-americana) é uma doença sistêmica muito mais freqüente no sexo masculino, causada pelo fungo dimórfico Paracoccidioides brasiliensis. Um sistema radiométrico foi utilizado para estudar a atividade metabólica e o efeito deftrogas sobre este fungo "in vitro". A forma Y do fungo, cultivada em Sabouraud líquido, foi inoculada em frascos estéreis contendo o meio aeróbio 6B, juntamente com 2,0 uCi de substâncias marcadas com carbono-14. Frascos-controle, preparados da mesma forma, foram inoculados com fungos autoclavados. Para estudar os efeitos da anfotericina B (AB) (0,1 e 10 μg/ml) e do dietilestilbestrol (DEB) (1, 5 e 10 μg/ml), controles adicionais foram preparados, contendo fungos viáveis mas não a droga. Todos os frascos foram incubados a 35°C e o metabolismo medido diariamente com uma máquina Bactec. A produção de 14CO2 pelo P. brasiliensis foi lenta e pôde ser acompanhada por 50 dias. Concentrações de 10 μg/ml de AB e 5 μg/ml de DEB inibiram o metabolismo e tiveram efeito fungicida. Os resultados com DEB poderiam explicar a baixa incidência da doença em mulheres. Esta técnica é promissora para estudar as vias metabólicas, investigar substâncias marcadas mais adequadas para tornar mais rápida a detecção radiométrica do fungo e para acompanhar os efeitos de outras drogas e fatores sobre o metabolismo do P. brasiliensis "in vitro".
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Recebido para publicação em 19/1/87
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Publication Dates
-
Publication in this collection
17 Feb 2011 -
Date of issue
Oct 1987
History
-
Received
19 Jan 1987
