Obtenção de exoantígenos de Histoplasma capsulatum em meio de neopeptona, glicose, tiamina e asparagina (NGTA)

Garcia, Nilma Maciel; Assis, Cezar Mendes de; Del Negro, Gilda Maria Barbaro; Lacaz, Carlos da Silva

doi:10.1590/S0036-46651990000500011

Resumos

O presente trabalho teve como objetivo a produção de exoantígenos H e M das amostras 58, B-679, A-811 e O187 de Histoplasma capsulatum, utilizando o meio NGTA (neopeptona, glicose, tiamina e asparagina) em períodos de cultivo de 1, 2 e 3 meses, a 36ºC, sob agitação constante (50 v.p.m.). Os antígenos brutos foram avaliados contra anti-soro e antígeno de Histoplasma capsulatum de referência (Center for Disease Control), 4 soros de pacientes portadores de paracoccidioidomicose, 7 de histoplasmose e soro hiperimune anti-H. capsulatum produzido em coelhos, através da reação de imunodifusão dupla. Verificou-se que, com exceção de B-679 com 1 mês de crescimento, todos os demais exoantígenos apresentaram as frações H e M de precipitação. Os exoantígenos obtidos de A-811 apresentaram só a banda H. Excetuando-se os exoantígenos 58 e B-679 com 1 mês de crescimento, todos os demais exoantígenos reagiram contra soros de pacientes com histoplasmose. Em relação aos soros de pacientes com paracoccidioidomicose, somente os exoantígenos 58 e O187 não apresentaram reação cruzada. Todos os exoantígenos reagiram frente ao soro hiperimune de coelho anti-H. capsulatum. Para obtenção de exoantígenos de H. capsulatum, sugerimos que as amostras sejam cultivadas sob as condições anteriormente descritas, adotando-se o período de 3 meses de crescimento, utilizando-se exoantígenos de referência como controles da reação.

Histoplasma capsulatum; Imunodifusão dupla; Exoantígenos H e M; Meio de NGTA

The purpose of this work is obtaining exocellular antigens H and M from 4 H. capsulatum strains using NGTA medium (neopeptone, glucose, thiamine and asparagine) for periods of 1,2 and 3 months, at 36ºC and continuously shaken. The exocellular antigens were evaluated by double immunodiffusion test against H. capsulatum rabbit antiserum, 7 histoplasmosis sera, 4 paracoccidioidomycosis sera and a reference antigen and antibody furnished by C.D.C. (Atlanta - USA). Except for the exocellular antigen from strain B.679 with 1 month of culture, all exocellular antigens obtained from the strains B.679, 58 and O187 showed the H and M bands. The A.811 strain demonstrated only the fraction H. All the exocellular antigens reacted positively with sera from histoplasmosis patients, except those obtained from strains 58 and B.679 with 1 month of culture. With regard to paracoc-cidioidomycosis patients sera, the exocellular antigens from strains 58 and O187 did not cross-react with them.

ENSAIOS TÉCNICOS

Obtenção de exoantígenos de Histoplasma capsulatum em meio de neopeptona, glicose, tiamina e asparagina (NGTA)

Histoplasma capsulatum exocellular antigens. Obtention in neopeptone, glucose, thiamine and asparagine medium (NGTA)

Nilma Maciel Garcia^I; Cezar Mendes de Assis^II; Gilda Maria Barbaro Del Negro^I; Carlos da Silva Lacaz^I

^ILaboratório de Micologia Médica do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo. Av. Dr. Arnaldo. 455 - 2º andar. CEP 01246 São Paulo. SP. Brasil

^IIInstituto Adolfo Lutz. São Paulo. SP. Brasil

RESUMO

O presente trabalho teve como objetivo a produção de exoantígenos H e M das amostras 58, B-679, A-811 e O187 de Histoplasma capsulatum, utilizando o meio NGTA (neopeptona, glicose, tiamina e asparagina) em períodos de cultivo de 1, 2 e 3 meses, a 36ºC, sob agitação constante (50 v.p.m.). Os antígenos brutos foram avaliados contra anti-soro e antígeno de Histoplasma capsulatum de referência (Center for Disease Control), 4 soros de pacientes portadores de paracoccidioidomicose, 7 de histoplasmose e soro hiperimune anti-H. capsulatum produzido em coelhos, através da reação de imunodifusão dupla. Verificou-se que, com exceção de B-679 com 1 mês de crescimento, todos os demais exoantígenos apresentaram as frações H e M de precipitação. Os exoantígenos obtidos de A-811 apresentaram só a banda H. Excetuando-se os exoantígenos 58 e B-679 com 1 mês de crescimento, todos os demais exoantígenos reagiram contra soros de pacientes com histoplasmose. Em relação aos soros de pacientes com paracoccidioidomicose, somente os exoantígenos 58 e O187 não apresentaram reação cruzada. Todos os exoantígenos reagiram frente ao soro hiperimune de coelho anti-H. capsulatum. Para obtenção de exoantígenos de H. capsulatum, sugerimos que as amostras sejam cultivadas sob as condições anteriormente descritas, adotando-se o período de 3 meses de crescimento, utilizando-se exoantígenos de referência como controles da reação.

Unitermos: Histoplasma capsulatum; Imunodifusão dupla; Exoantígenos H e M; Meio de NGTA.

SUMMARY

The purpose of this work is obtaining exocellular antigens H and M from 4 H. capsulatum strains using NGTA medium (neopeptone, glucose, thiamine and asparagine) for periods of 1,2 and 3 months, at 36ºC and continuously shaken. The exocellular antigens were evaluated by double immunodiffusion test against H. capsulatum rabbit antiserum, 7 histoplasmosis sera, 4 paracoccidioidomycosis sera and a reference antigen and antibody furnished by C.D.C. (Atlanta USA).

Except for the exocellular antigen from strain B.679 with 1 month of culture, all exocellular antigens obtained from the strains B.679, 58 and O187 showed the H and M bands. The A.811 strain demonstrated only the fraction H.

All the exocellular antigens reacted positively with sera from histoplasmosis patients, except those obtained from strains 58 and B.679 with 1 month of culture. With regard to paracoc-cidioidomycosis patients sera, the exocellular antigens from strains 58 and O187 did not cross-react with them.

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Recebido para publicação em 07/03/1990

1. AJELLO, L. Histoplasmosis A dual entity: Histoplasmosis capsulati and Histoplasmosis duboisii. L'Igiene mod., 79: 3-30, 1983.
2. DEL NEGRO, G.M.B.; GIANNINI, M.J.M.; GARCIA, N.M. & ASSIS, C.M. Occurrence of 43 Kda glycoprotein (GP43) in different culture filtrates of P. brasiliensis (strain FMUSP 113). In: Jornada Científica do Instituto de Medicina Tropical de Săo Paulo, 3., Săo Paulo, 1989. Anais p. 101. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 31 (Supl. 7): 101, 1989.
3. EVANS, E.E. & KESSEL, J.P. The antigenic composition of Cryptococcus neoformans II. Serologic studies with the capsular polysaccharide. J. Immunol., 67: 109-114, 1952.
4. HEIMER, D.C. Diagnosis of histoplasmosis using precipitin reaction in agar gel. Pediatrics, 22: 616-627, 1958.
5. KAUFMAN, L. Micro agar-gel immunodiffusion tests. In: Manual of Standardized Serodiagnostic Procedures for Systemic Mycoses. Part 1: Agar Immunodiffusion tests. Washington, Pan American Health Organization, Department of Research Development and Coordination, 1972. p. 9-14.
6. KAUFMAN, L. & STANDARD, P. Improved version of the exoantigen tests for identification of Coccidioides immitis and Histoplasma capsulatum cultures. J. clin. Microbiol., 8: 42-45, 1978.
7. KAUFMAN, L. & STANDARD, P. Immuno-identification of cultures of fungi pathogenic to man. Curr. Microbiol., 1: 135-140, 1978.
8. KAUFMAN, L. Mycoserology: Its Vital Role in Diagnosis Systemic Mycotic Infections. Jap. J. med. Mycol., 24: 1-8, 1983.
9. KLEGER, B. & KAUFMAN, L. Detection and Identification of Diagnostic Histoplasma capsulatum precipitates by counterimmunoelectrophoresis. Appl. Microbiol., 26: 231-238, 1973.
10. NEGRONI, R. Nuevos estudios sobre antígenos para las pruebas serologicas en la blastomicosis sudamericana. Derm. ibero lat. amer., 4: 409-416, 1968.
11. OUCHTERLONY, O. Diffusion in gel methods for immunological analysis. Progr. Allergy, 6: 30-154, 1962.
12. PINE, L. Studies on the growth of Histoplasma capsulatum III. Effect of thiamin and vitamin on the growth of the yeast and mycelial phases of Histoplasma capsulatum. J. Bact., 74: 239-245, 1957.
13. PINE, L. & PEACOCK, C.L. Studies on the growth of Histoplasma capsulatum IV. Factors influencing conversion of the mycelial phase to the yeast phase. J. Bact., 75: 167-174, 1958.
14. PINE, L. Growth of Histoplasma capsulatum VI. Maintenance of the mycelial phase. Appl. Microbiol., 19: 413-420, 1970.
15. PINE, L.; GROSS, H.; MALCOM, G.B.; GEORGE, J.R.; GRAY, S.B. & MOSS, C.W. Procedures for the production and separation of the H and M antigens in histoplasmin: Clinical and serological properties of the isolated products. Mycopathologia (Den Haag), 61: 131-141, 1977.
16. SIQUEIRA, A.M. de Avaliaçăo da sensibilidade e especificidade de algumas provas sorológicas no diagnóstico, prognóstico e o controle de cura da paracoccidioidomicose. Caracterizaçăo imunoquímica do antígeno E₂ do Paracoccidioides brasiliensis. Săo Paulo, 1982. (Tese de Doutoramento Instituto de Cięncias Biomédicas da Universidade de Săo Paulo).
17. SMITH, C.D. & GOODMAN, N.L. Improved culture method for the isolation of Histoplasma capsulatum and Blastomyces dermatitides from contaminated specimens. Amer. J. clin. Path., 63: 276-280, 1975.
18. STANDARD, P.G. & KAUFMAN, L. Specific Immunological test for the rapid identification of members of the genus Histoplasma. J. clin. Microbiol., 3: 191-199, 1976.
¹⁹
U. S. Public Health Service. Standardized diagnostic complement fixation method and adaptation to micro test. Washington, D.C., U.S. Govt. Printing Office, 1965. (PH monograph nº 74, U.S. Public Health Serv. Publ. 1228)
20. WIGGINS, G.L. & SCHUBERT, J.H. Relationship of histoplasmin agar-gel bands and complement fixation titers in histoplasmosis. J. Bact., 89: 589-596, 1965.
21. YOSHINO, M.K.; TEIXEIRA, C.C.; SOARES, M.C.P.; FERREIRA, N.A.F. & RODRIGUES, M.S. Histoplasmose. Arq. bras. Med., 61: 89-92, 1987.

Datas de Publicação

Publicação nesta coleção
12 Set 2006
Data do Fascículo
Out 1990

Histórico

Recebido
07 Mar 1990

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[1] 1. AJELLO, L. Histoplasmosis A dual entity: Histoplasmosis capsulati and Histoplasmosis duboisii. L'Igiene mod., 79: 3-30, 1983.

[2] 2. DEL NEGRO, G.M.B.; GIANNINI, M.J.M.; GARCIA, N.M. & ASSIS, C.M. Occurrence of 43 Kda glycoprotein (GP43) in different culture filtrates of P. brasiliensis (strain FMUSP 113). In: Jornada Científica do Instituto de Medicina Tropical de Săo Paulo, 3., Săo Paulo, 1989. Anais p. 101. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 31 (Supl. 7): 101, 1989.

[3] 3. EVANS, E.E. & KESSEL, J.P. The antigenic composition of Cryptococcus neoformans II. Serologic studies with the capsular polysaccharide. J. Immunol., 67: 109-114, 1952.

[4] 4. HEIMER, D.C. Diagnosis of histoplasmosis using precipitin reaction in agar gel. Pediatrics, 22: 616-627, 1958.

[5] 5. KAUFMAN, L. Micro agar-gel immunodiffusion tests. In: Manual of Standardized Serodiagnostic Procedures for Systemic Mycoses. Part 1: Agar Immunodiffusion tests. Washington, Pan American Health Organization, Department of Research Development and Coordination, 1972. p. 9-14.

[6] 6. KAUFMAN, L. & STANDARD, P. Improved version of the exoantigen tests for identification of Coccidioides immitis and Histoplasma capsulatum cultures. J. clin. Microbiol., 8: 42-45, 1978.

[7] 7. KAUFMAN, L. & STANDARD, P. Immuno-identification of cultures of fungi pathogenic to man. Curr. Microbiol., 1: 135-140, 1978.

[8] 8. KAUFMAN, L. Mycoserology: Its Vital Role in Diagnosis Systemic Mycotic Infections. Jap. J. med. Mycol., 24: 1-8, 1983.

[9] 9. KLEGER, B. & KAUFMAN, L. Detection and Identification of Diagnostic Histoplasma capsulatum precipitates by counterimmunoelectrophoresis. Appl. Microbiol., 26: 231-238, 1973.

[10] 10. NEGRONI, R. Nuevos estudios sobre antígenos para las pruebas serologicas en la blastomicosis sudamericana. Derm. ibero lat. amer., 4: 409-416, 1968.

[11] 11. OUCHTERLONY, O. Diffusion in gel methods for immunological analysis. Progr. Allergy, 6: 30-154, 1962.

[12] 12. PINE, L. Studies on the growth of Histoplasma capsulatum III. Effect of thiamin and vitamin on the growth of the yeast and mycelial phases of Histoplasma capsulatum. J. Bact., 74: 239-245, 1957.

[13] 13. PINE, L. & PEACOCK, C.L. Studies on the growth of Histoplasma capsulatum IV. Factors influencing conversion of the mycelial phase to the yeast phase. J. Bact., 75: 167-174, 1958.

[14] 14. PINE, L. Growth of Histoplasma capsulatum VI. Maintenance of the mycelial phase. Appl. Microbiol., 19: 413-420, 1970.

[15] 15. PINE, L.; GROSS, H.; MALCOM, G.B.; GEORGE, J.R.; GRAY, S.B. & MOSS, C.W. Procedures for the production and separation of the H and M antigens in histoplasmin: Clinical and serological properties of the isolated products. Mycopathologia (Den Haag), 61: 131-141, 1977.

[16] 16. SIQUEIRA, A.M. de Avaliaçăo da sensibilidade e especificidade de algumas provas sorológicas no diagnóstico, prognóstico e o controle de cura da paracoccidioidomicose. Caracterizaçăo imunoquímica do antígeno E₂ do Paracoccidioides brasiliensis. Săo Paulo, 1982. (Tese de Doutoramento Instituto de Cięncias Biomédicas da Universidade de Săo Paulo).

[17] 17. SMITH, C.D. & GOODMAN, N.L. Improved culture method for the isolation of Histoplasma capsulatum and Blastomyces dermatitides from contaminated specimens. Amer. J. clin. Path., 63: 276-280, 1975.

[18] 18. STANDARD, P.G. & KAUFMAN, L. Specific Immunological test for the rapid identification of members of the genus Histoplasma. J. clin. Microbiol., 3: 191-199, 1976.

[19] ¹⁹
U. S. Public Health Service. Standardized diagnostic complement fixation method and adaptation to micro test. Washington, D.C., U.S. Govt. Printing Office, 1965. (PH monograph nº 74, U.S. Public Health Serv. Publ. 1228)

[20] 20. WIGGINS, G.L. & SCHUBERT, J.H. Relationship of histoplasmin agar-gel bands and complement fixation titers in histoplasmosis. J. Bact., 89: 589-596, 1965.

[21] 21. YOSHINO, M.K.; TEIXEIRA, C.C.; SOARES, M.C.P.; FERREIRA, N.A.F. & RODRIGUES, M.S. Histoplasmose. Arq. bras. Med., 61: 89-92, 1987.

Brasil

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Obtenção de exoantígenos de Histoplasma capsulatum em meio de neopeptona, glicose, tiamina e asparagina (NGTA)

Histoplasma capsulatum exocellular antigens. Obtention in neopeptone, glucose, thiamine and asparagine medium (NGTA)

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