Imunofluorescência realizada em cérebros de camundongos infectados com vírus rábico - cepa CVS, em diferentes estágios de decomposição

Valentini, Elizabeth Juliana Ghiuro; Albas, Avelino; Augusto, Vera Lúcia Mendes; Ito, Fumio Honma

doi:10.1590/S0036-46651991000300003

Resumos

O teste de imunofluorescência (IF) foi avaliado na detecção de vírus rábico presente em cérebros de carcaças de camundongos infectados com vírus da cepa CVS, os quais foram conseguidos através de uma combinação de tratamentos, em que se variaram as temperaturas (4,25 e -20ºC) e o tempo de armazenamento. No teste de IF realizado com impressões cerebrais de carcaças que haviam sido submetidas à temperatura de 25ºC por 12 -18 h, houve maior dificuldade de visualização imediata dos corpúsculos de inclusão, enquanto que nos materiais conservados a 4ºC por até 48 h, as inclusões foram facilmente reconhecidas. Carcaças mantidas a -20ºC mantiveram-se viáveis à identificação pela IF mesmo após terem sido armazenadas por 720 h quando foram feitas as últimas observações. Em carcaças mantidas a 25ºC por 10 h, com tratamento posterior a 4 e -20ºC, o antígeno rábico não pode ser identificado através da IF, em conseqüência da decomposição das carcaças que ocorrem, respectivamente, após 10 e 24 h. Recomenda-se, portanto, empregar o teste de IF, em caráter de rotina, no controle de qualidade da vacina contra a Raiva, no que diz respeito a prova de vírus residual (teste de verificação da inativação viral), de vez que ele permite esclarecer mortes assintomáticas ocorridas em animais inoculados com a vacina, durante o período de observação da prova (21 dias), bem como evitar a sua repetição quando essas mortes ocorrem, o que representa considerável economia de tempo.

Raiva; Imunofluorescência; Vírus cepa CVS; Camundongos; Decomposição cadavérica

The efficiency of the fluorescent antibody (FA) test in detecting rabies virus antigen in decomposed specimens was evaluated in simulated conditions of the safety test recommended for the assessment of residual virus in inactivated rabies vaccines. The CVS-infected mice were submitted to different treatments combining time and temperature in order to cause different stages of carcass decomposition and, the FA test was carried out sequentially at pre-determined time intervals. For the materials stored at 25 ºC, greater difficulties for prompt recognition of the inclusion bodies were found after 12 - 18h, whilst the specimens maintained at 4ºC, the inclusions were easily visualized for up to 48h. Brain smears of carcasses kept at -20ºC were suitable for adequate identification after 720 h of storage. In carcasses that had been maintained at 25ºC for 10 h with additional storage at 4 or -20ºC, rabies antigenicity could not be detected, respectively after 10 and 24 h, due to tissue decomposition. The authors recommend that the FA test, when applied as an additional tool for the control of the safety test of inactivated rabies vaccine using mice, care must be taken in order to avoid the use of decomposed materials.

ARTIGOS ORIGINAIS

Imunofluorescência realizada em cérebros de camundongos infectados com vírus rábico - cepa CVS, em diferentes estágios de decomposição

Fluorescent antibody test for detection of rabies virus in brain smears of CVS-infected mice at different stages of decomposition

Elizabeth Juliana Ghiuro Valentini^I; Avelino Albas^I; Vera Lúcia Mendes Augusto^I; Fumio Honma Ito^II

^IInstituto Butantã, Seção de Vírus Neurotrópicos. Av. Vital Brasil, 1500. CEP: 05504 São Paulo, SP, Brasil

^IIFaculdade de Medicina Veterinária e Zootécnia da Universidade de São Paulo. Av. Corifeu de Azevedo Marques, 2720 - Vila Lageado. CEP 05340 São Paulo, SP, Brasil

RESUMO

O teste de imunofluorescência (IF) foi avaliado na detecção de vírus rábico presente em cérebros de carcaças de camundongos infectados com vírus da cepa CVS, os quais foram conseguidos através de uma combinação de tratamentos, em que se variaram as temperaturas (4,25 e -20ºC) e o tempo de armazenamento.

No teste de IF realizado com impressões cerebrais de carcaças que haviam sido submetidas à temperatura de 25ºC por 12 -18 h, houve maior dificuldade de visualização imediata dos corpúsculos de inclusão, enquanto que nos materiais conservados a 4ºC por até 48 h, as inclusões foram facilmente reconhecidas. Carcaças mantidas a -20ºC mantiveram-se viáveis à identificação pela IF mesmo após terem sido armazenadas por 720 h quando foram feitas as últimas observações. Em carcaças mantidas a 25ºC por 10 h, com tratamento posterior a 4 e -20ºC, o antígeno rábico não pode ser identificado através da IF, em conseqüência da decomposição das carcaças que ocorrem, respectivamente, após 10 e 24 h. Recomenda-se, portanto, empregar o teste de IF, em caráter de rotina, no controle de qualidade da vacina contra a Raiva, no que diz respeito a prova de vírus residual (teste de verificação da inativação viral), de vez que ele permite esclarecer mortes assintomáticas ocorridas em animais inoculados com a vacina, durante o período de observação da prova (21 dias), bem como evitar a sua repetição quando essas mortes ocorrem, o que representa considerável economia de tempo.

Unitermos: Raiva; Imunofluorescência; Vírus cepa CVS; Camundongos; Decomposição cadavérica.

SUMMARY

The efficiency of the fluorescent antibody (FA) test in detecting rabies virus antigen in decomposed specimens was evaluated in simulated conditions of the safety test recommended for the assessment of residual virus in inactivated rabies vaccines.

The CVS-infected mice were submitted to different treatments combining time and temperature in order to cause different stages of carcass decomposition and, the FA test was carried out sequentially at pre-determined time intervals.

For the materials stored at 25 ºC, greater difficulties for prompt recognition of the inclusion bodies were found after 12 - 18h, whilst the specimens maintained at 4ºC, the inclusions were easily visualized for up to 48h. Brain smears of carcasses kept at -20ºC were suitable for adequate identification after 720 h of storage.

In carcasses that had been maintained at 25ºC for 10 h with additional storage at 4 or -20ºC, rabies antigenicity could not be detected, respectively after 10 and 24 h, due to tissue decomposition.

The authors recommend that the FA test, when applied as an additional tool for the control of the safety test of inactivated rabies vaccine using mice, care must be taken in order to avoid the use of decomposed materials.

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AGRADECIMENTO

Os autores agradecem à DRª EDDA DE RIZZO, Diretora do Serviço de Virologia do Instituto Butantã, pela discussão e revisão do manuscrito.

Recebido para publicação em 3/9/1990

Aceito para publicação em 16/4/1991

1. ATANASIU, P. - Animal inoculation and the Negri body. In: BAER, G.W. - The natural history of rabies. New York, Academic Press, 1975. v.1, p.373-400.
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3. FUENZALIDA, E. & PALACIOS, R. - Un metodo mejorado en la preparación de la vacuna antirrábica. Bol. Inst. bact. Chile, 8: 3-10, 1955.
4. GOLDWASSER, R.A. & KISSLING, R.E. - Fluorescent antibody staining of street and fixed virus antigens. Proc. Soc. exp. Biol. (N.Y.), 98: 219-223, 1958.
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6. KISSLING, R.E. - The fluorescent antibody test in rabies. In: BAER, G.M. - The natural history of rabies. New York, Academic Press certo. v.1,p.401-416.
7. KOPROWSKI, H. - Prueba de inoculación al raton. In: KAPLAN, M.M. & KOPROWSKI, H. - La rabia: tecnicas de laboratorio. 3.ed. Ginebra, Organización Mundial de la Salud, 1976. p.88-97 (OMS Monogr. Ser.nş 23).
8. LARGHI, O.P. - Prueba de anticuerpos fluorescentes para rabia. Ramos Mejia, Buenos Aires, Centro Panamericano de Zoonosis, OPS/OMS, 1975. (nota tecnica nş 8).
9. LÉPINE, P. - Diagnóstico histopatológico. In: KAPLAN, M.M. & KOPROWSKI, H. - La rabia: tecnicas de laboratorio. 3.ed. Ginebra, Organización Mundial de la Salud, 1976.p.58-74 (OMS Monogr. Ser.nş 23).
¹⁰
MANUAL de Produção e Controle de Vacina Contra a Raiva. Brasília, Ministério da Saúde, 1988.
11. SELIGMANN, E.B. - The NIH test for potency. In: KAPLAN, M.M. & KOPROWSKI, H. - Laboratory techniques in rabies. 3^rd ed.Geneva, World Health Organization, 1973.p.279-286 (WHO Monogr.Ser.23).
12. WACHENDÖRFER, Von G. - Fluoresceinmarkierte Antikörper in der Diagnostik von Viruskrankheiten, dargestellt am Modell der Tollwut. Dtsch. tierärztl. Wschr., 73: 446-452, 1966.
13. WINKLER, W.G. & ADAMS, D.B. Apud KISSLING, R.E. - The fluorescent antibody test in rabies. In: BAER, G.M. - The natural history of rabies. New York, Academic Press, 1975. v.1, 401-416.

Datas de Publicação

Publicação nesta coleção
12 Set 2006
Data do Fascículo
Jun 1991

Histórico

Recebido
03 Set 1990
Aceito
16 Abr 1991

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

[1] 1. ATANASIU, P. - Animal inoculation and the Negri body. In: BAER, G.W. - The natural history of rabies. New York, Academic Press, 1975. v.1, p.373-400.

[2] 2. CONSALES, C.A.; VALENTINI, E.J.G.; ALBAS, A.; MENDONÇA, R.M.Z.; FUCHES, R.M.M.; SOARES, M.A. & PEREIRA, C.A. - The preparation of cultured rabies virus and production of antiserum of human use. J. biol. Stand. 16: 27-32, 1988.

[3] 3. FUENZALIDA, E. & PALACIOS, R. - Un metodo mejorado en la preparación de la vacuna antirrábica. Bol. Inst. bact. Chile, 8: 3-10, 1955.

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[5] 5. HABEL, K. - General consideration in safety and potency testing. In: KAPLAN, M.M. & KOPROWSKI, H. - Laboratory techniques in rabies, 3rd. ed. Geneva, World Health Organization,1973. p.271-275 (WHO Monogr.Ser.23).

[6] 6. KISSLING, R.E. - The fluorescent antibody test in rabies. In: BAER, G.M. - The natural history of rabies. New York, Academic Press certo. v.1,p.401-416.

[7] 7. KOPROWSKI, H. - Prueba de inoculación al raton. In: KAPLAN, M.M. & KOPROWSKI, H. - La rabia: tecnicas de laboratorio. 3.ed. Ginebra, Organización Mundial de la Salud, 1976. p.88-97 (OMS Monogr. Ser.nş 23).

[8] 8. LARGHI, O.P. - Prueba de anticuerpos fluorescentes para rabia. Ramos Mejia, Buenos Aires, Centro Panamericano de Zoonosis, OPS/OMS, 1975. (nota tecnica nş 8).

[9] 9. LÉPINE, P. - Diagnóstico histopatológico. In: KAPLAN, M.M. & KOPROWSKI, H. - La rabia: tecnicas de laboratorio. 3.ed. Ginebra, Organización Mundial de la Salud, 1976.p.58-74 (OMS Monogr. Ser.nş 23).

[10] ¹⁰
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[11] 11. SELIGMANN, E.B. - The NIH test for potency. In: KAPLAN, M.M. & KOPROWSKI, H. - Laboratory techniques in rabies. 3^rd ed.Geneva, World Health Organization, 1973.p.279-286 (WHO Monogr.Ser.23).

[12] 12. WACHENDÖRFER, Von G. - Fluoresceinmarkierte Antikörper in der Diagnostik von Viruskrankheiten, dargestellt am Modell der Tollwut. Dtsch. tierärztl. Wschr., 73: 446-452, 1966.

[13] 13. WINKLER, W.G. & ADAMS, D.B. Apud KISSLING, R.E. - The fluorescent antibody test in rabies. In: BAER, G.M. - The natural history of rabies. New York, Academic Press, 1975. v.1, 401-416.