Evaluation of different immunization protocols with P. brasiliensis antigens in Guinea pigs

Kamegasawa, Amélia; Rezkallah Iwasso, Maria Tereza; Viero, Rosa; Franco, Marcello

doi:10.1590/S0036-46651992000300011

Abstracts

The objective of the present study was to develop an efficient and reproducible protocol of immunization of guinea pigs with P. brasiliensis antigens as an animal model for future studies of protective immunity mechanisms. We tested three different antigens (particulate, soluble and combined) and six protocols in the presence and absence of Freund's complete adjuvant and with different numbers of immunizing doses and variable lenght of time between the last immunizing dose and challenge. The efficacy of the immunizing protocol was evaluated by measuring the humoral and cellular anti-P. brasiliensis immune response of the animals, using immuno-diffusion, skin test and macrophage migration inhibition test. It was observed that: 1. Three immunizing doses of the antigens induced a more marked response than two doses; 2. The highest immune response was obtained with the use of Freund's complete adjuvant; 3. Animals challenged a long time (week 6) after the last immunizing dose showed good anti-P. brasiliensis immune response; 4. The particulate antigen induced the lowest immune response. The soluble and the combined antigens were equally efficient in raising good humoral and cellular anti-P. brasiliensis immune response

Paracoccidioides brasiliensis antigens; Guinea pigs; Immunization protocols

O objetivo deste trabalho foi desenvolver protocolo eficiente e reprodutível de imunização em cobaias com antígenos de P. brasiliensis, visando a obtenção de modelo experimental para futuros estudos de mecanismos de proteção imunológica. Testaram-se três diferentes antígenos (particulado, solúvel e composto) e seis protocolos nos quais foram avaliadas as influências dos seguintes fatores: presença ou ausência de adjuvante completo de Freund, número de doses imunizantes e intervalo de tempo entre a última dose imunizante e o desafio. A eficiência do protocolo de imunização foi estudada pela avaliação da resposta imune celular e humoral anti-P. brasiliensis, utilizando teste cutâneo e teste de inibição da migração do macrófago, e imunodifusão, respectivamente. Observou-se que: 1. Três doses imunizantes de antígeno induziram melhor resposta do que duas doses; 2. Maior resposta imune foi conseguida com a utilização de adjuvante completo de Freund; 3. Animais desafiados depois de longo tempo (6 semanas) da última dose imunizante mostraram melhor resposta imune anti-P. brasiliensis; 4. Os antígenos solúvel e composto foram igualmente eficientes induzindo maior resposta imune humoral e celular anti-P. brasiliensis enquanto que o antígeno particulado provocou menor reatividade

SEROLOGY

Evaluation of different immunization protocols with P. brasiliensis antigens in Guinea pigs

Avaliação de diferentes protocolos de imunização em cobaias utilizando antígenos de P. brasiliensis

Amélia Kamegasawa^I; Maria Tereza Rezkallah Iwasso^II; Rosa Viero^III; Marcello Franco^III

^IDepartment of Ophthalmology, Faculty of Medicine, UNESP, Botucatu, São Paulo, Brasil

^IIDepartment of Immunology, Institute of Biosciences, UNESP, Botucatu, São Paulo, Brasil

^IIIDepartment of Pathology, Faculty of Medicine, UNESP, Botucatu, São Paulo, Brasil

^{Correspondence address} Correspondence address: M. Franco Dept. Patologia, Fac. Medicina, UNESP 18610 Botucatu, São Paulo, Brasil

SUMMARY

The objective of the present study was to develop an efficient and reproducible protocol of immunization of guinea pigs with P. brasiliensis antigens as an animal model for future studies of protective immunity mechanisms. We tested three different antigens (particulate, soluble and combined) and six protocols in the presence and absence of Freund's complete adjuvant and with different numbers of immunizing doses and variable lenght of time between the last immunizing dose and challenge.

The efficacy of the immunizing protocol was evaluated by measuring the humoral and cellular anti-P. brasiliensis immune response of the animals, using immuno-diffusion, skin test and macrophage migration inhibition test. It was observed that: 1. Three immunizing doses of the antigens induced a more marked response than two doses; 2. The highest immune response was obtained with the use of Freund's complete adjuvant; 3. Animals challenged a long time (week 6) after the last immunizing dose showed good anti-P. brasiliensis immune response; 4. The particulate antigen induced the lowest immune response. The soluble and the combined antigens were equally efficient in raising good humoral and cellular anti-P. brasiliensis immune response.

Key words: Paracoccidioides brasiliensis antigens; Guinea pigs; Immunization protocols.

RESUMO

O objetivo deste trabalho foi desenvolver protocolo eficiente e reprodutível de imunização em cobaias com antígenos de P. brasiliensis, visando a obtenção de modelo experimental para futuros estudos de mecanismos de proteção imunológica.

Testaram-se três diferentes antígenos (particulado, solúvel e composto) e seis protocolos nos quais foram avaliadas as influências dos seguintes fatores: presença ou ausência de adjuvante completo de Freund, número de doses imunizantes e intervalo de tempo entre a última dose imunizante e o desafio.

A eficiência do protocolo de imunização foi estudada pela avaliação da resposta imune celular e humoral anti-P. brasiliensis, utilizando teste cutâneo e teste de inibição da migração do macrófago, e imunodifusão, respectivamente.

Observou-se que: 1. Três doses imunizantes de antígeno induziram melhor resposta do que duas doses; 2. Maior resposta imune foi conseguida com a utilização de adjuvante completo de Freund; 3. Animais desafiados depois de longo tempo (6 semanas) da última dose imunizante mostraram melhor resposta imune anti-P. brasiliensis; 4. Os antígenos solúvel e composto foram igualmente eficientes induzindo maior resposta imune humoral e celular anti-P. brasiliensis enquanto que o antígeno particulado provocou menor reatividade.

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Recebido para publicação em 8/11/1991.

Aceito para publicação em 22/4/1992.

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17. TUESTA, W.E.G. - Relaciones biológicas entre Paracoccidioides, Blastomyces e Histoplasma. An. Fac. Med. (Lima), 49: 80-108, 1966.

Correspondence address:

M. Franco

Dept. Patologia, Fac. Medicina, UNESP

18610 Botucatu, São Paulo, Brasil

Publication Dates

Publication in this collection
11 Sept 2006
Date of issue
June 1992

History

Accepted
22 Apr 1992
Received
08 Nov 1991

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[1] 1. BIAGIONI, L.; SOUZA, M.J.; CHAMMA, L.G.; MENDES, R.P.; MARQUES, S.A.; MOTA, N.G.S. & FRANCO, M. - Serology of paracoccidioidomycosis. II. Correlation between class-specific antibodies and clinical forms of the disease. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 78: 617-621, 1984.

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[3] 3. CARVALHO, T.P.; VIERO, R.M. & FRANCO, M.F. - Paracoccidioidina com antígeno polissacarídico de P. brasiliensis em pacientes com paracoccidioidomicose; leitura macro e microscópica e correlaçăo clínica. In: ENCONTRO SOBRE PARACOCCIDIOIDOMICOSE, 1, Barra Bonita, 1979. Anais. Barra Bonita, Faculdade de Medicina, Universidade Estadual Paulista, 1979. p. 19.

[4] 4. DEFAVERI, J.; REZKALLAH-IWASSO, M.T. & FRANCO, M.F. - Experimental pulmonary paracoccidioidomycosis in mice: morphology and correlation of lesions with humoral and cellular immune response. Mycopathologia (Den Haag), 77: 3-11, 1982.

[5] 5. FAVA NETTO, C. - Estudos quantitativos sobre a fixaçăo do complemento na blastomicose sul-americana, com antígenos polissacarídicos. Arq. Cirurg. clin. exp., 18: 197-254, 1955.

[6] 6. KAMEGASAWA, A.; VIERO, R.M.; REZKALLAH-IWASSO, M.T. & FRANCO, M.F. - Protective effect of prior immunization on ocular paracoccidioidomycosis in guinea -pigs. Mycopathologia (Den Haag), 103: 35-42, 1988.

[7] 7. KONG, Y.M.; SAVAGE, D.C. & KONG, L.N.L. - Delayed dermal hypersensitivity in mice to spherule and mycelial extracts of Coccidioides immitis. J. Bact., 91: 867-883, 1966.

[8] 8. LOWRY, O.H.; ROSEMBOURG, N.J.; FARR, A.L. & RANDALL, R.J. - Protein measurement with the Folin phenol reagent. J. biol. Chem., 193: 265-275, 1951.

[9] 9. MARQUES, S.A.; FRANCO, M.F.; MENDES, R.P.; SILVA, N.C.A.; BACCILI, C.; CURCELLI, G.D.; FERACINI, A.C.M.; OLIVEIRA, C.S.; TAGLIARINI, J.V. & DILLON, N.L - Aspectos epidemiológicos da paracoccidioidomicose na área endęmica de Botucatu (Săo Paulo - Brasil). Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 25: 87-92, 1983.

[10] 10. MENDES, E. & RAPHAEL, A. - Impaired delayed hypersensitivity in patients with South American Blastomycosis. J. Allergy, 47: 17-22, 1971.

[11] 11. MOTA, N.G.S.; REZKALLAH-IWASSO, M.T.; PERAÇOLI, M.T.S.; AUDI, R.G.; MENDES, R.P.; MARCONDES, J.; MARQUES, S.A.; DILLON, N.L. & FRANCO, M.F. - Correlation between cell-mediated immunity and clinical forms of paracoccidioidomycosis. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 79: 765-772, 1985.

[12] 12. MUSATTI, C.C.; REZKALLAH, M.T.; MENDES, E. & MENDES, N.F. - In vivo and in vitro evaluation of cell - mediated immunity in patients with paracoccidioidomycosis. Cell. Immunol., 24: 365-378, 1976.

[13] 13. PAPPAGIANIS, D.; HECTOR, R.; LEVINE, H.B. & COLLINS, M.S. - Immunization of mice against coccidioidomycosis with a subcellular vaccine. Infect. Immun., 25: 440-445, 1979.

[14] 14. PERAÇOLI, M.T.S.; MOTA, N.G.S. & MONTENEGRO, M.R. - Experimental paracoccidioidomycosis in the Syrian hamster: morphology and cell-mediated immunity. Mycopathologia (Den Haag), 79: 7-17, 1982.

[15] 15. PRESTES, F.R.C.; REZKALLAH-IWASSO, M.T. & FRANCO, M.F. - Contribuiçăo ao estudo da imunidade celular ao Paracoccidioides brasiliensis no camundongo. Rev. Cięnc. bioméd. (S. Paulo), 4: 77-84, 1983.

[16] 16. RESTREPO, A.; RESTREPO, M.; RESTREPO, F.; ARISTIZABAL, L.H.; MONCADA, L.H. & VELEZ, H. - Immune responses in paracoccidioidomycosis. A controlled study of 16 patients before and after treatment. Sabouraudia, 16: 151-163, 1978.

[17] 17. TUESTA, W.E.G. - Relaciones biológicas entre Paracoccidioides, Blastomyces e Histoplasma. An. Fac. Med. (Lima), 49: 80-108, 1966.

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