Reação de coaglutinação estafilocócica na identificação de micoplasmas

Timenetsky, Jorge; Curcio, Melissa

doi:10.1590/S0036-46651993000600012

Resumos

A reação de coaglutinação estafilocócica foi utilizada como metodologia de identificação rápida de micoplasmas para ser aplicada em laboratórios não especializados. Amostras selvagens de micoplasmas isoladas de humanos, culturas celulares, ratos e camundongos foram identificados através da reação de coaglutinação estafilocócica utilizando-se do Staphylococcus aureus produtor de proteína A (amostra Cowan I) sensibilizado com anticorpo de coelho contra amostra padrão micoplasma. Na identificação, os micoplasmas estavam em suspensão concentrada provenientes de 4,0 ml de cultivo. Quarenta e oito amostras de M.pulmonis, 6 de M. arthritidis, 8 de M.arginini, 3 de M.orale, 15 de A.laidlawii, 8 de M.hominis e 3 de M. pneumoniae foram identificadas pela coaglutinação estafilocócica e confirmadas pela inibição de crescimento. Parâmetros ótimos no preparo do conjugado e da reação de coaglutinação foram estabelecidos; o conjugado coaglutinante manteve-se estável por 90 dias quando adicionado com acetileisteína; a coaglutinação foi visualizada sem auxílio óptico. Os soros foram absorvidos com espécies padrões heterólogas e com o precipitado de caldo estéril.

Coaglutinação estafilocócica; Identificação de micoplasma

Staphylococcal Coagglutination was used as method for a rapid identification of mycoplasmas that could be performed by non specialized laboratories. Suspensions of Staphylococcus aureus (Cowan I) sensitized with rabbit antibodies against NCTC mycoplasma strains have identified these microorganisms and the strains isolated from humans, cell cultures rats and mice in concentrated suspensions from cultures of 4.0 ml. Fourty eight strains of M.pulmonis, 6 of M. arthritidis, 8 of M.arginini, 3 of M.orale, 15 of A.laidlawii, 8 of M.hominis and 3 of M.pneumomae were identified by staphylococcal coagglutination and confirmed by Growth Inhibition Test. Optimal parameters of coagglutination were established and the stability of the conjugates were preserved for 90 days when added with acetyl cistein. The reaction was visualized without optical resources. The sera were previously absorved with heterologous NCTC strains and with the pellet of the steril broth.

SOROLOGIA

Reação de coaglutinação estafilocócica na identificação de micoplasmas

Staphylococcal coagglutination for mycoplasma identification

Jorge Timenetsky^I; Melissa Curcio^II

^IProfessor Assistente Doutor do Departamento de Microbiologia do Instituto de Ciências Biomédícas da Universidade de São Paulo. São Paulo, SP,Brasil

^IIEstagiária em nível de Iniciação Científica (FAPESP). São Paulo, SP, Brasil

^{Endereço para correspondência} Endereço para correspondência: Dr. Jorge Timenetsky Depto. de Microbiologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo Av. Prof. Lineu Prestes 1374 05508-900 São Paulo, SP, Brasil

RESUMO

A reação de coaglutinação estafilocócica foi utilizada como metodologia de identificação rápida de micoplasmas para ser aplicada em laboratórios não especializados. Amostras selvagens de micoplasmas isoladas de humanos, culturas celulares, ratos e camundongos foram identificados através da reação de coaglutinação estafilocócica utilizando-se do Staphylococcus aureus produtor de proteína A (amostra Cowan I) sensibilizado com anticorpo de coelho contra amostra padrão micoplasma. Na identificação, os micoplasmas estavam em suspensão concentrada provenientes de 4,0 ml de cultivo. Quarenta e oito amostras de M.pulmonis, 6 de M. arthritidis, 8 de M.arginini, 3 de M.orale, 15 de A.laidlawii, 8 de M.hominis e 3 de M. pneumoniae foram identificadas pela coaglutinação estafilocócica e confirmadas pela inibição de crescimento. Parâmetros ótimos no preparo do conjugado e da reação de coaglutinação foram estabelecidos; o conjugado coaglutinante manteve-se estável por 90 dias quando adicionado com acetileisteína; a coaglutinação foi visualizada sem auxílio óptico. Os soros foram absorvidos com espécies padrões heterólogas e com o precipitado de caldo estéril.

Unitermos: Coaglutinação estafilocócica; Identificação de micoplasma.

SUMMARY

Staphylococcal Coagglutination was used as method for a rapid identification of mycoplasmas that could be performed by non specialized laboratories. Suspensions of Staphylococcus aureus (Cowan I) sensitized with rabbit antibodies against NCTC mycoplasma strains have identified these microorganisms and the strains isolated from humans, cell cultures rats and mice in concentrated suspensions from cultures of 4.0 ml. Fourty eight strains of M.pulmonis, 6 of M. arthritidis, 8 of M.arginini, 3 of M.orale, 15 of A.laidlawii, 8 of M.hominis and 3 of M.pneumomae were identified by staphylococcal coagglutination and confirmed by Growth Inhibition Test. Optimal parameters of coagglutination were established and the stability of the conjugates were preserved for 90 days when added with acetyl cistein. The reaction was visualized without optical resources. The sera were previously absorved with heterologous NCTC strains and with the pellet of the steril broth.

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AGRADECIMENTOS

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo. Instituto Butantan. Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo.

Recebido para publicação em 14/04/1993

Aceito para publicação em 20/08/1993

1. BARILE, M.F.; BOVE, S.M.; BRADBURY, J.M.; CASSEL, G.H.; CLYDE Jr., W.A.; COTTEW, G.S. & WHITTLESTONE, P. - Current status on control of mycoplasma diseases of man, animals, plants and insects. Bull. Inst. Pasteur, 83: 3339-3373, 1985.
2. BARILE, M.F. & McGARRITTY, G.J. - Isolation of mycoplasmas from cell cultures by agar culture medium techniques. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v.2, p. 159-166.
3. BARNHAM, M. & GLYN, A.A. - Identification of clinical isolates of N. gonorrhoeae by coagglutination test. J.clin. Path., 31: 189-193, 1978.
4. CASSELL, G.H.; DAVIDSON, M.K.; DAVIS, J.K. & LINDSEY, J.R. - Recovery and identification of murine mycoplasmas. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v.2, p. 129-142.
5. CLYDE Jr., W.A. - Recovery of mycoplasmas from respiratory tract. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v.2, sec. A-2.
6. CLYDE Jr., W.A. - Growth inhibition test. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 1, p. 404-410.
7. CUNHA, R.A.F.; TAKIMOTO, S. & CURY, M. - Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum: research in pregnants cervical mucus specimens. Rev. Microbiol., 19: 379-384, 1988.
8. DURIGON, E.L.; CANDEIAS, J.A.N.; JEREZ, J.A.; BITTENCOURT, M.J. & ORTOLAN, E.L. - Comparison of staphylococical co-agglutination with other assays for rapid diagnosis of rotavirus infection in humans, calves and piglets. J. med. Virol., 35: 73-77, 1991.
9. FREUNDT, E.A. - Culture media for classic mycoplasma. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 1, p. 127-145.
10. HEBERT, J.P. & CAILLET, R. - Intéraction du groupage des streptocoques Béta-Hémolytiques par agglutination sur lame. Path. et Biol., 3-4: 205-208, 1978.
11. KALUZEWSKI, S. & JAGLIESSKI, M. - Identification of mycoplasma by slide coagglutination test with specific antibodies complexed with the staphylococcal protein A. Med. doswiad. Mikrobiol., 31: 27-37, 1979.
12. MacGARRITY, G.J.; SARAMA J. & VANAMAN, V. - Cell cultures techniques. Amer. Soc. Microbiol. News, 51: 170-183, 1985.
13. MONGENSEN, S. & DISHON,T. - Rapid detection of herpes simplex virus and varicella zoster virus in clinical specimens by use of Staphylococcus aureus rich in protein A. Acta pathol. microbiol. immunol. scand, sect. B Microbiol., 91: 83-88. 1983.
14. MORENO, N.E.O. - Análise comparativa entre métodos microbiológicos, sorológicos e de hibridizaçăo de ADN, para diagnóstico de Mycoplasma pneumoniae em maiores de 14 anos. Săo Paulo, 1990. (Tese de Doutoramento - Instituto de Cięncias Biomédicas da Universidade de Sao Paulo.)
15. MONTASSIER, H.J.; ARAÚJO Jr., J.P.; MONTASSIER, M.F.S.; TAMANINI, M.L.F.; LIMA, A.E.G. & PINTO, A.A. - Storage and durability of coaggutination conjugates for use in direct diagnostic of foot and mouth disaease virus(FMDV). In: NATIONAL MEETING OF VIROLOGY. Săo Lourenço, MG., 1990. Abstracts. p. 100.
16. MORSY, M.A.; PANANGALA, V.S. & GRESHAM, M.M. - Identification of Mycoplasma gallisepticum by use of monoclonal antibody in a rapid slide coagglutination test. Amer. J. vet. Res., 52: 1602-1605, 1991.
17. RAJAGOPALAN, M.S. & JOHN, T.J. - Passive bacterial agglutination. A new sensitive technique for the detection of hepatitis B surface antigen. Indian J. med. Res., 78: 509-517, 1983.
18. ROCKHILL, R.C.; RUMANS, L.W. & LESMANA, M. - Slide coagglutination for S. thyphi antigen in broths inoculated with feces from thyphoid fever patients. Southeast Asian J. trop. Med. Publ. Hlth., 12: 528-532, 1981.
19. RODWELL, A.W. & WHITCOMB, R.F. - Method for direct and indirect measurement of mycoplasma growth. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 1, p. 185-196.
20. SENTERFIT, L.B. - Preparation of antigens and antisera. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 1, p. 401-403.
21. SUSANONG, M. & DAJANI, A.S. - Detection of H. influenza type B antigens in body fluid, using specific antibody coated staphylococci. J. clin. Microbiol., 5: 81-85, 1977.
22. TAYLOR-ROBINSON, D. - Recovery of mycoplasmas from genitourinary tract. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 2, p. 19-26.
23. YIDA, O. - Contribuiçăo ao estudo do diagnóstico microbiológico da micoplasmose murina. Săo Paulo, 1987.(Dissertaçăo de Mestrado-Instituto de Cięncias Biomédicas da Universidade de Săo Paulo).
24. YOH, M.; HONDA, T.; MIWATANI, T.; UEMURA, T.; KUWATA, H. & FUKAI, K.A. - Staphylococcical coagglutination test for detecting and serogroups Legionella pneumophila. Microbiol. Immunol., 29: 413-419, 1985.

Endereço para correspondência:

Dr. Jorge Timenetsky

Depto. de Microbiologia do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo

Av. Prof. Lineu Prestes 1374

05508-900 São Paulo, SP, Brasil

Datas de Publicação

Publicação nesta coleção
03 Jul 2006
Data do Fascículo
Dez 1993

Histórico

Aceito
04 Ago 1993
Recebido
14 Abr 1993

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[1] 1. BARILE, M.F.; BOVE, S.M.; BRADBURY, J.M.; CASSEL, G.H.; CLYDE Jr., W.A.; COTTEW, G.S. & WHITTLESTONE, P. - Current status on control of mycoplasma diseases of man, animals, plants and insects. Bull. Inst. Pasteur, 83: 3339-3373, 1985.

[2] 2. BARILE, M.F. & McGARRITTY, G.J. - Isolation of mycoplasmas from cell cultures by agar culture medium techniques. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v.2, p. 159-166.

[3] 3. BARNHAM, M. & GLYN, A.A. - Identification of clinical isolates of N. gonorrhoeae by coagglutination test. J.clin. Path., 31: 189-193, 1978.

[4] 4. CASSELL, G.H.; DAVIDSON, M.K.; DAVIS, J.K. & LINDSEY, J.R. - Recovery and identification of murine mycoplasmas. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v.2, p. 129-142.

[5] 5. CLYDE Jr., W.A. - Recovery of mycoplasmas from respiratory tract. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v.2, sec. A-2.

[6] 6. CLYDE Jr., W.A. - Growth inhibition test. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 1, p. 404-410.

[7] 7. CUNHA, R.A.F.; TAKIMOTO, S. & CURY, M. - Mycoplasma hominis and Ureaplasma urealyticum: research in pregnants cervical mucus specimens. Rev. Microbiol., 19: 379-384, 1988.

[8] 8. DURIGON, E.L.; CANDEIAS, J.A.N.; JEREZ, J.A.; BITTENCOURT, M.J. & ORTOLAN, E.L. - Comparison of staphylococical co-agglutination with other assays for rapid diagnosis of rotavirus infection in humans, calves and piglets. J. med. Virol., 35: 73-77, 1991.

[9] 9. FREUNDT, E.A. - Culture media for classic mycoplasma. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 1, p. 127-145.

[10] 10. HEBERT, J.P. & CAILLET, R. - Intéraction du groupage des streptocoques Béta-Hémolytiques par agglutination sur lame. Path. et Biol., 3-4: 205-208, 1978.

[11] 11. KALUZEWSKI, S. & JAGLIESSKI, M. - Identification of mycoplasma by slide coagglutination test with specific antibodies complexed with the staphylococcal protein A. Med. doswiad. Mikrobiol., 31: 27-37, 1979.

[12] 12. MacGARRITY, G.J.; SARAMA J. & VANAMAN, V. - Cell cultures techniques. Amer. Soc. Microbiol. News, 51: 170-183, 1985.

[13] 13. MONGENSEN, S. & DISHON,T. - Rapid detection of herpes simplex virus and varicella zoster virus in clinical specimens by use of Staphylococcus aureus rich in protein A. Acta pathol. microbiol. immunol. scand, sect. B Microbiol., 91: 83-88. 1983.

[14] 14. MORENO, N.E.O. - Análise comparativa entre métodos microbiológicos, sorológicos e de hibridizaçăo de ADN, para diagnóstico de Mycoplasma pneumoniae em maiores de 14 anos. Săo Paulo, 1990. (Tese de Doutoramento - Instituto de Cięncias Biomédicas da Universidade de Sao Paulo.)

[15] 15. MONTASSIER, H.J.; ARAÚJO Jr., J.P.; MONTASSIER, M.F.S.; TAMANINI, M.L.F.; LIMA, A.E.G. & PINTO, A.A. - Storage and durability of coaggutination conjugates for use in direct diagnostic of foot and mouth disaease virus(FMDV). In: NATIONAL MEETING OF VIROLOGY. Săo Lourenço, MG., 1990. Abstracts. p. 100.

[16] 16. MORSY, M.A.; PANANGALA, V.S. & GRESHAM, M.M. - Identification of Mycoplasma gallisepticum by use of monoclonal antibody in a rapid slide coagglutination test. Amer. J. vet. Res., 52: 1602-1605, 1991.

[17] 17. RAJAGOPALAN, M.S. & JOHN, T.J. - Passive bacterial agglutination. A new sensitive technique for the detection of hepatitis B surface antigen. Indian J. med. Res., 78: 509-517, 1983.

[18] 18. ROCKHILL, R.C.; RUMANS, L.W. & LESMANA, M. - Slide coagglutination for S. thyphi antigen in broths inoculated with feces from thyphoid fever patients. Southeast Asian J. trop. Med. Publ. Hlth., 12: 528-532, 1981.

[19] 19. RODWELL, A.W. & WHITCOMB, R.F. - Method for direct and indirect measurement of mycoplasma growth. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 1, p. 185-196.

[20] 20. SENTERFIT, L.B. - Preparation of antigens and antisera. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 1, p. 401-403.

[21] 21. SUSANONG, M. & DAJANI, A.S. - Detection of H. influenza type B antigens in body fluid, using specific antibody coated staphylococci. J. clin. Microbiol., 5: 81-85, 1977.

[22] 22. TAYLOR-ROBINSON, D. - Recovery of mycoplasmas from genitourinary tract. In: RAZIN, S. & TULLY, J.G., ed. Methods in mycoplasmology. New York, Academic Press, 1983. v. 2, p. 19-26.

[23] 23. YIDA, O. - Contribuiçăo ao estudo do diagnóstico microbiológico da micoplasmose murina. Săo Paulo, 1987.(Dissertaçăo de Mestrado-Instituto de Cięncias Biomédicas da Universidade de Săo Paulo).

[24] 24. YOH, M.; HONDA, T.; MIWATANI, T.; UEMURA, T.; KUWATA, H. & FUKAI, K.A. - Staphylococcical coagglutination test for detecting and serogroups Legionella pneumophila. Microbiol. Immunol., 29: 413-419, 1985.