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Entamoeba histolytica: detection of coproantigens by purified antibody in the capture sandwich ELISA

Entamoeba histolytica: detecção de coproantígenos por ELISA de captura utilizando anticorpo purificado

Abstracts

A sensitive and specific Capture Sandwich ELISA (CSE) was developed using polyclonal purified rabbit antibodies against three different axenic strains of Entamoeba histolytica: CSP from Brazil and HM1 - IMSS from Mexico, for the detection of coproantigens in fecal samples. Immunoglobulin G (IgG) againstis E. histolytica was isolated from rabbits immunized with throphozoites whole extract in two stages: affinity chromatography in a column containing E. histolytica antigens bound to Sepharose 4B was followed by another chromatography in Sepharose antibodies 4B-Protein A. A Capture Sandwich ELISA using purified antibodies was able to detect 70ng of amebae protein, showing a sensitivity of 93% and specificity of 94%. The combination of microscopic examination and CSE gave a concordance and discordance of 93.25% and 6.75%, respectively. It was concluded that CSE is highly specific for the detection of coproantigens of E. histolytica in feces of infected patients, is quicker to perform, easier and more sensitive than microscopic examination.

Entamoeba histolytica; Amebiasis; Coproantigens; Immunodiagnostic; Purified antibody; Capture Sandwich ELISA (CSE)


Foi desenvolvido um teste de ELISA de Captura usando anticorpos policlonais purificados obtidos em coelhos contra três diferentes cepas axênicas de Entamoeba histolytica (ICB-CSP and ICB-462 do Brasil e HM1 do México) para detecção de coproantígenos em amostras de fezes de indivíduos: a) sintomáticos, b) assintomáticos, c) com outros parasitos intestinais, e d) sadios. Imunoglobulina G (IgG) contra E. histolytica foi isolada de imune soro de coelho, em duas etapas: cromatografia de afinidade em uma coluna contendo antígenos de E. histolytica unidos à Sepharose 4B, seguido por outra cromatografía em Sepharose 4B Proteína A. O teste de ELISA usando anticorpos purificados, foi capaz de detectar até um só trofozoíto por lâmina ou 70 ng de proteína de ameba por orifício, apresentando uma sensibilidade de 93% e uma especificidade de 94%. A combinação do exame microscópico com o método de ELISA de Captura teve uma concordância e discordância de 93,25% e 6,75%, respectivamente. Pode-se concluir que o teste de ELISA de Captura utilizando anticorpo purificado é altamente específico para a detecção de coproantígenos de E. histolytica em fezes de pacientes infectados, rápido, fácil e mais sensível que o exame microscópico.


IMMUNOLOGY

Entamoeba histolytica: detection of coproantigens by purified antibody in the capture sandwich ELISA

Entamoeba histolytica: detecção de coproantígenos por ELISA de captura utilizando anticorpo purificado

Haidee UrdanetaI; Semíramis GuimarãesII; Edward F. SilvaIII; Carlos A. P. TavaresIV

IDepartment of Biology, Los Andes University, Venezuela

IIDepartment of Parasitology, Biociences Institute, Estadual Paulista University, Botucatu, São Paulo, Brazil

IIIDepartment of Biochemistry and Immunology

IVParasitology, Institute of Biological Sciences, Federal University of Minas Gerais, Belo Horizonte, MG, Brazil

Correspondence to Correspondence to: Semíramis Guimarães Departamento de Parasitologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista CEP 18618-000 Botucatu, SP, Brasil FAX (0149) 21 3744

SUMMARY

A sensitive and specific Capture Sandwich ELISA (CSE) was developed using polyclonal purified rabbit antibodies against three different axenic strains of Entamoeba histolytica: CSP from Brazil and HM1 - IMSS from Mexico, for the detection of coproantigens in fecal samples. Immunoglobulin G (IgG) againstis E. histolytica was isolated from rabbits immunized with throphozoites whole extract in two stages: affinity chromatography in a column containing E. histolytica antigens bound to Sepharose 4B was followed by another chromatography in Sepharose antibodies 4B-Protein A. A Capture Sandwich ELISA using purified antibodies was able to detect 70ng of amebae protein, showing a sensitivity of 93% and specificity of 94%. The combination of microscopic examination and CSE gave a concordance and discordance of 93.25% and 6.75%, respectively. It was concluded that CSE is highly specific for the detection of coproantigens of E. histolytica in feces of infected patients, is quicker to perform, easier and more sensitive than microscopic examination.

Keywords:Entamoeba histolytica; Amebiasis; Coproantigens; Immunodiagnostic; Purified antibody; Capture Sandwich ELISA (CSE).

RESUMO

Foi desenvolvido um teste de ELISA de Captura usando anticorpos policlonais purificados obtidos em coelhos contra três diferentes cepas axênicas de Entamoeba histolytica (ICB-CSP and ICB-462 do Brasil e HM1 do México) para detecção de coproantígenos em amostras de fezes de indivíduos: a) sintomáticos, b) assintomáticos, c) com outros parasitos intestinais, e d) sadios. Imunoglobulina G (IgG) contra E. histolytica foi isolada de imune soro de coelho, em duas etapas: cromatografia de afinidade em uma coluna contendo antígenos de E. histolytica unidos à Sepharose 4B, seguido por outra cromatografía em Sepharose 4B Proteína A. O teste de ELISA usando anticorpos purificados, foi capaz de detectar até um só trofozoíto por lâmina ou 70 ng de proteína de ameba por orifício, apresentando uma sensibilidade de 93% e uma especificidade de 94%. A combinação do exame microscópico com o método de ELISA de Captura teve uma concordância e discordância de 93,25% e 6,75%, respectivamente. Pode-se concluir que o teste de ELISA de Captura utilizando anticorpo purificado é altamente específico para a detecção de coproantígenos de E. histolytica em fezes de pacientes infectados, rápido, fácil e mais sensível que o exame microscópico.

Full text available only in PDF format.

Texto completo disponível apenas em PDF.

ACKNOWLEDGMENTS

This work was supported by FAPEMIG, FINEP and CNPq.

We are grateful to Dr. Fausto G. Araujo and Antony Rowlands for their critical review of the manuscript; and João da Costa Viana, Edna Pires, Marinete L. Ludgero and Roberto Teodoro da Costa for their technical assistance, and Elói Aparecido Pereira for drawing the graphics.

Recebido para publicação em 23/04/1993

Aceito para publicação em 10/10/1994

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  • Correspondence to:

    Semíramis Guimarães
    Departamento de Parasitologia, Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista
    CEP 18618-000 Botucatu, SP, Brasil
    FAX (0149) 21 3744
  • Publication Dates

    • Publication in this collection
      05 July 2006
    • Date of issue
      Dec 1994

    History

    • Accepted
      10 Oct 1994
    • Received
      23 Apr 1993
    Instituto de Medicina Tropical de São Paulo Av. Dr. Enéas de Carvalho Aguiar, 470, 05403-000 - São Paulo - SP - Brazil, Tel. +55 11 3061-7005 - São Paulo - SP - Brazil
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