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Acta Amazonica

Print version ISSN 0044-5967On-line version ISSN 1809-4392

Acta Amaz. vol.18  supl.1-2 Manaus  1988

http://dx.doi.org/10.1590/1809-43921988185321 

INTERDISCIPLINAR

O uso da cultura celular (Hela) para triagem de novas drogas com ação "antitumoral"

Beatriz D. O. Miranda da Cruz *  

Marilda Meirelles de Oliveira *  

Joyce Biondi *  

Ana Esmeralda Roxo *  

Clélia Helena O. Martinez **  

*Instituto Biológico, São Paulo - SP

**Instituto Adolfo Lutz, São Paulo - SP

RESUMO

A descoberta de novas drogas (produtos naturais e substâncias sintéticas) com atividade antineoplástica vem sendo dificultada devido ao teste de laboratório "in vitro". Optou-se, então por usar para triagem dessas drogas antitumorais a cultura de cálula humana neoplástica cultivada de modo contínuo: a linhagem de célula Hela derivada por Gey de uma carcinoma uterino humano. Foi utilizada uma cultura de célula estacionária, diluída 0-20 mcg/ml (conteúdo proteico celular, segundo técnica de Oyama e Eagle) em meio basal de Eagle com 10% de soro de vitelo, acrescido de penicilina 100 unidades/ml, estreptomicina 100 mcg/ml e fungizon 5 mcg/ml. A essa cultura adicionou-se o material a ser testado em doses compreendidas entre 0,001 mcg/ml a 100 mcg/ml. Após 72 horas, os resultados foram analisados para determinar-se a DI 50 (dose que inibe 50% do crescimento celular comparado ao controle). O numero de experimentos foram constantes para uma mesma droga. Foram testados 18 substâncias sintéticas e 16 produtos naturais. Consideraram-se ativas as amostras com DI 50≤40 mcg/ml para produtos naturais e com DI 50≤8 mcg/ml para substâncias sintéticas devido a menor sensibilidade da referida linhagem celular em relação a KB (derivada de carcinoma epidermóide de nasofaringe humana) cultura utilizada pelo National Cancer Institute (U.S.A) para objetivos similares ao proposto no presente trabalho.

ABSTRACT

Screening has been and continues to be the most useful productive method of detecting antitumor agents. "In vitro" assay is less expensive and require less test material and time. The antitumor assay for screening plants extracts since 1960, by NCI (National Cancer Institute) has been sligthly modified. It has been used hela cell culture (cell line derived from human carcinoma of uterus) instead of the original KB (cell line derived from human carcinoma of nasopharynx). Hela cells were cultivated on Eagle's basal medium plus 10% serum added of antibiotics: penicillin 100 units/ml, streptomycin 100 mcg/ml and amphotericin 5 mcg/ml. To a dilute stock cells of 10-20 mcg/ml (protein values according to method of Oyama and Eagle) in complete media was simultaneously added test material (range concentration 1-100 mcg/ml) test material were either synthetics or natural products.

Total volume was approximately 4 ml. Also a blank and control was done. After 72 hours was conducted a protein analysis of tests, control and at least three protein standard and media blank tubes. Results were expressed as the dose that inhibts growth to 50% of control growth (ED 50). The criteria of activity for synthetics was an ED 50≤12 mcg/ml on the first test and an ED 50≤4 mcg/ml on the second and confirmation tests; and for natural products were an ED 50≤60 mcg/ml on the first test and an ED 50≤40 mcg/ml on the second and confirmation tests.

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