Abstracts
A method to purify trypanosomastigotes of some strains of Trypanosoma cruzi (Y, CL, FL, F, "Berenice", "Colombiana" and "São Felipe") from mouse blood by using DEAE-cellulose columns was standardized. This procedure is a modification of the Lanham & Godfrey methods and differs in some aspects from others described to purify T. cruzi bloodstream trypomastigotes, mainly by avoidance of prior purifications of parasites. By this method, the broad trypomastigotes were mainly isolated, accounting for higher recoveries obtained with strains having higher percentages of these forms: processing of infected blood from irradiated mice could be advantageous by increasing the recovery of parasites (percentage and/or total number) and elution of more slender trypomastigotes. Trypomastigotes purified by this method presented normal morphology and motility, remained infective to triatomine bugs and mice, showing in the latter prepatent periods and courses parasitemia similar to those of control parasites, and also reproducing the polymorphism pattern of each strain. Their virulence and pathogenicity also remained considerably preserved, the latter property being evaluated by LD 50 tests, mortality rates and mean survival time of inoculated mice. Moreover, these parasites presented positive, clear and peripheral immunofluorescence reaction at titres similar to those of control organisms, thus suggesting important preservation of their surface antigens.
Usando colunas de DEAE-cellulose foi padronizado um método para purificação de tripomastigotas de várias cepas de Trypanosoma cruzi (Y, CL, FL, F, "Berenice", "Columbiana" e "São Felipe") a partir do sangue de camundongos. Este método é uma modificação daqueles descritos por Lanham & Godfrey e difere em vários aspectos de outros descritos para purificar as formas sanguíneas deste parasita, particularmente na dispensa de pré-purificações. Por ele foram isolados principalmente os tripomastigotas largos, oque certamente justifica as maiores percentagens de recuperação obtidas com cepas em que predominavam estas formas; por outro lado, o processamento de sangue infectado de camundongos irradiados podia ser vantajoso pela recuperação de maior número e percentagem de parasitas e eluição de mais formas finas. Os tripomastigotas purificados por este método apresentavam morfologia e motilidade normais e continuavam infectantes para barbeiros e camundongos. Nestes últimos apresentaram período pré-patente e curvas parasitêmicas semelhantes aos dos parasitas controles, além de reproduzirem o padrão de polimorfismo típico da cepa. Sua virulência e patogenicidade também manteve-se consideravelmente preservada, sendo que esta última propriedade foi avaliada por testes de DL 50, taxas de mortalidade e tempo médio de sobrevida de camundongos inoculados. Além do masi, os tripomastigotas purificados apresentaram reação de imunofluorescência positiva, nítida e periférica, cujos títulos eram comparáveis aos dos parasitas controles, assim sugerindo uma importante preservação de seus antígenos de superfície.
A simple method to purify biologically and antigenically preserved bloodstream trypomastigotes of Trypanosoma cruzi using Deae-cellulose columns
Maria Auxiliadora de Sousa1
Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brazil
A method to purify trypanosomastigotes of some strains of Trypanosoma cruzi (Y, CL, FL, F, "Berenice", "Colombiana" and "São Felipe") from mouse blood by using DEAE-cellulose columns was standardized. This procedure is a modification of the Lanham & Godfrey methods and differs in some aspects from others described to purify T. cruzi bloodstream trypomastigotes, mainly by avoidance of prior purifications of parasites. By this method, the broad trypomastigotes were mainly isolated, accounting for higher recoveries obtained with strains having higher percentages of these forms: processing of infected blood from irradiated mice could be advantageous by increasing the recovery of parasites (percentage and/or total number) and elution of more slender trypomastigotes. Trypomastigotes purified by this method presented normal morphology and motility, remained infective to triatomine bugs and mice, showing in the latter prepatent periods and courses parasitemia similar to those of control parasites, and also reproducing the polymorphism pattern of each strain. Their virulence and pathogenicity also remained considerably preserved, the latter property being evaluated by LD 50 tests, mortality rates and mean survival time of inoculated mice. Moreover, these parasites presented positive, clear and peripheral immunofluorescence reaction at titres similar to those of control organisms, thus suggesting important preservation of their surface antigens.
Usando colunas de DEAE-cellulose foi padronizado um método para purificação de tripomastigotas de várias cepas de Trypanosoma cruzi (Y, CL, FL, F, "Berenice", "Columbiana" e "São Felipe") a partir do sangue de camundongos. Este método é uma modificação daqueles descritos por Lanham & Godfrey e difere em vários aspectos de outros descritos para purificar as formas sanguíneas deste parasita, particularmente na dispensa de pré-purificações. Por ele foram isolados principalmente os tripomastigotas largos, oque certamente justifica as maiores percentagens de recuperação obtidas com cepas em que predominavam estas formas; por outro lado, o processamento de sangue infectado de camundongos irradiados podia ser vantajoso pela recuperação de maior número e percentagem de parasitas e eluição de mais formas finas. Os tripomastigotas purificados por este método apresentavam morfologia e motilidade normais e continuavam infectantes para barbeiros e camundongos. Nestes últimos apresentaram período pré-patente e curvas parasitêmicas semelhantes aos dos parasitas controles, além de reproduzirem o padrão de polimorfismo típico da cepa. Sua virulência e patogenicidade também manteve-se consideravelmente preservada, sendo que esta última propriedade foi avaliada por testes de DL 50, taxas de mortalidade e tempo médio de sobrevida de camundongos inoculados. Além do masi, os tripomastigotas purificados apresentaram reação de imunofluorescência positiva, nítida e periférica, cujos títulos eram comparáveis aos dos parasitas controles, assim sugerindo uma importante preservação de seus antígenos de superfície.
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Publication Dates
-
Publication in this collection
25 June 2009 -
Date of issue
Sept 1983
