Identidade do Apple stem pitting virus em São Paulo, Brasil, confirmada por meio de RT-PCR

Identity of Apple stem pitting virus in São Paulo, Brazil, confirmed by RT-PCR

NOTAS FITOPATOLÓGICAS PHYTOPATHOLOGICAL NOTES

Identidade do Apple stem pitting virus em São Paulo, Brasil, confirmada por meio de RT-PCR

Identity of Apple stem pitting virus in São Paulo, Brazil, confirmed by RT-PCR

Juliana Freitas-Astua^I; Quelmo S. de Novaes^II; Juarez A. Betti^III; Jorge A. M. Rezende^II; Hugo Kuniyuki^III; Valdir A. Yuki^III

^IEmbrapa Milho e Sorgo / Centro APTA Citros 'Sylvio Moreira', CEP 13490-970, Cordeirópolis, SP

^IIDepartamento de Entomologia, Fitopatologia e Zoologia Agrícola, ESALQ, USP, CEP 13418-900, Piracicaba, SP

^IIICentro de Fitossanidade, Instituto Agronômico (IAC), CEP 13020-902, Campinas, SP, e-mail: [e-mail]

ABSTRACT

Biological indexing of apple (Malus domestica) clones Anna-EF 263/2 and Ohio Beauty 270/6B, collected in Angatuba and Paranapanema counties, Brazil, where shown to be infected by Apple stem pitting virus (ASPV). Thermotherapy associated with tip culture, produced clones Anna-EF T-711 and Ohio Beauty T-597, and biological indexing showed that clones were virus free. The RT-PCR with total RNAs extracted from clones using the primers that amplified a region within the coat protein gene of ASPV, confirmed the biological assays. Partial nucleotide and deduced amino acid sequences of the coat protein gene showed high similarity with sequences of ASPV in GenBank.

O vírus do estriamento do lenho da macieira (Apple stem pitting virus - ASPV), gênero Foveavirus, descrito em Virginia crab, causa sintomas em outras indicadoras (Acta Horticult. 386:72. 1995). No Brasil, a sua detecção biológica em macieira (Malus domestica Borkh.) envolveu as indicadoras M. platycarpa Rehd. (Summa Phytopathol. 5:29. 1979), Spy 227 (Fitopatol. bras. 8:620. 1983), Pyronia veitchii (Trabut) Guill. e Virginia crab (M. pumila Mill.) (Summa Phytopathol. 21:49. 1995). A mancha anelar do marmeleiro (Cydonia oblonga Mill.) (O Biológico 25:64. 1959), semelhante à doença "Quince sooty ringspot" atribuída ao ASPV (Acta Horticul. 386:148. 1995), provavelmente constitui o primeiro relato envolvendo esse vírus no Brasil.

Para confirmar a identidade do ASPV, foram utilizados quatro clones de macieira mantidos em casa de vegetação no IAC, em Campinas, SP e testados com as quatro indicadoras já citadas. Os clones infetados 263/2 (Anna-EF) e 270/6B (Ohio Beauty) foram coletados respectivamente em Angatuba e Paranapanema, SP. Os clones sadios T-711 e T-597 resultaram de termoterapia e propagação de ápices (Summa Phytopathol. 10:128. 1984) dos clones 263/2 e 270/6B, respectivamente.

Na ESALQ/USP, Piracicaba, SP, RNAs totais foram extraídos de tecidos foliares seguindo protocolo de Gibbs & Mackenzie (J. Virol. Meth. 63:9. 1997) e utilizados em análise de RT-PCR para ASPV com os iniciadores específicos ASP-C: (5'-CTCTTGAACCAGCTGATGGC-3') e ASP-A (5'-ATA GCCGCCCCGGTTAGGTT-3') (J. Phytopathol. 145:499. 1997). Fragmentos de 244-pb, correspondentes a uma região do gene que codifica a proteina da capa protéica (CP) do vírus, foram amplificados apenas a partir de RNAs extraídos dos clones de campo (263/2 e 270/6B) e não dos de termoterapia, confirmando os resultados dos testes biológicos.

O produto da RT-PCR obtido do clone 270/6B foi clonado, sequenciado e gerou dois consensos de 158 nucleotídeos: um deles, com dois clones e o outro, com quatro. As seqüências de nucleotídeos e de aminoácidos deduzidos da CP do consenso 1 apresentaram 85% e 96% de similaridade, respectivamente, com as seqüências do ASPV disponíveis no GenBank (acesso AF345892). Para o consenso 2, os valores de similaridade foram de 84% e 98%, respectivamente, quando comparados com os do acesso AF438522 do ASPV depositado no GenBank.Quando comparados entre si, os dois consensos apresentam 87% de identidade de nucleotídeos e 100% de aminoácidos deduzidos, indicando uma aparente variabilidade na seqüência de DNA, sem que haja implicações na tradução de proteína (Figura 1). Esses resultados confirmam a identidade de isolados do ASPV que ocorrem em macieira em São Paulo.

Aceito para publicação em 31/03/2004

Autor para correspondência: Juarez Antonio Betti

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  06 Jan 2005
• Data do Fascículo
  Dez 2004