Níveis de alfa-tocoferol no soro e colostro de lactantes e associação com variáveis maternas

Alpha-tocopherol level in serum and colostrum of breastfeeding women and association with maternal variables

ARTIGO ORIGINAL

Níveis de alfa-tocoferol no soro e colostro de lactantes e associação com variáveis maternas

Alpha-tocopherol level in serum and colostrum of breastfeeding women and association with maternal variables

Larissa Queiroz de Lira^I; Penha Patrícia Cabral Ribeiro^I; Evellyn Câmara Grilo^I; Mayara Santa Rosa Lima^I; Roberto Dimenstein^II

^ICurso de Nutrição da Universidade Federal do Rio Grande do Norte – UFRN – Natal (RN), Brasil

^IIDepartamento de Bioquímica da Universidade Federal do Rio Grande do Norte – UFRN – Natal (RN), Brasil

^{Correspondência}

RESUMO

OBJETIVOS: Diagnosticar bioquimicamente o estado nutricional de vitamina E de lactantes por meio da análise do alfa-tocoferol no soro e no colostro, verificar sua associação com variáveis maternas e determinar a prevalência de deficiência de vitamina E nessas mulheres.

MÉTODOS: Participaram do estudo 103 puérperas que foram classificadas quanto às seguintes variáveis maternas: idade, estado nutricional pré-gestacional, ganho de peso gestacional, paridade e tipo de parto. Amostras de soro e colostro foram coletadas em jejum no pós-parto imediato e o alfa-tocoferol foi analisado por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Para definir o estado nutricional de vitamina E, foi adotado ponto de corte sérico (697,7 μg/dL). A análise estatística foi realizada com o uso do teste t de Student para amostras independentes e correlação de Pearson. As diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05.

RESULTADOS: A concentração média de alfa-tocoferol foi 1.125,1±551,0 μg/dL no colostro e 1.138,6±346,0 μg/dL no soro, indicativo de estado nutricional bioquímico adequado. Entretanto, ao analisar as puérperas individualmente, constatamos que 16% apresentaram valores abaixo do esperado para esta vitamina. As mulheres submetidas à cesárea apresentaram níveis de alfa-tocoferol no colostro (1.280±591 μg/dL) significativamente maiores em relação àquelas cuja via de parto foi a normal (961,7±370 μg/dL) (p<0,05). Verificou-se que as parturientes com excesso de peso pré-gestacional tiveram concentração da vitamina no colostro maior (1.331,5±548 μg/dL) quando comparadas às mulheres com baixo peso (982,1±374 μg/dL) ou eutrofia (992,3±346 μg/dL) (p<0,05). Entretanto, as demais variáveis estudadas não apresentaram associação com o alfa-tocoferol do colostro. Além disso, nenhuma variável mostrou estar relacionada aos níveis da vitamina no soro materno e não foi demonstrada correlação entre os níveis de alfa-tocoferol no soro e no leite.

CONCLUSÕES: Apesar do diagnóstico de satisfatório estado nutricional, as lactantes apresentaram risco importante de deficiência subclínica para vitamina E. Sugere-se que a concentração de alfa-tocoferol presente no colostro esteja associada ao tipo de parto e ao estado nutricional pré-gestacional da mulher.

Palavras-chave: Vitamina E, Sangue, Colostro, Deficiência de vitamina E, Cromatografia líquida de alta pressão

ABSTRACT

PURPOSE: To determine the nutritional status of vitamin E in breastfeeding women through the analysis of alpha-tocopherol concentration in serum and colostrum, to analyze its relation with maternal variables and to determine the prevalence of vitamin E deficiency in these women.

METHODS: The study included 103 mothers who were classified according to maternal variables: age, nutritional status before pregnancy, gestational weight gain, parity and mode of delivery. Colostrum and serum samples were collected under fasting conditions in the immediate postpartum period. Alpha-tocopherol was analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC). A serum cutoff of 697.7 μg/dL was adopted to define the nutritional status of vitamin E. Statistical analysis was performed with the Student's t test for independent samples and Pearson's correlation. Differences were significant when p<0.05.

RESULTS: The average concentration of alpha-tocopherol was 1.125±551.0 μg/dL in colostrum and 1,138.6±346.0 μg/dL in serum, indicating adequate biochemical nutritional status. However, when analyzing the mothers individually, a 16% rate of subclinical vitamin E deficiency was detected. Women undergoing cesarean delivery had significantly higher alpha-tocopherol levels in colostrum (1.280±591 μg/dL) compared with those undergoing normal delivery (961.7±370 μg/dL) (p<0.05). It was found that mothers who were overweight before pregnancy had higher vitamin concentration in colostrum (1,331.5±548 μg/dL) when compared to underweight women (982.1±374 μg/dL) or women of normal weight (992.3±346 μg/dL) (p<0.05). However, the other variables were not associated with alpha-tocopherol in colostrum. Moreover, no variable showed association with vitamin E levels in maternal serum and no correlation was demonstrated between the alpha-tocopherol levels in serum and in milk.

CONCLUSIONS: Despite the diagnosis of satisfactory nutritional status, breastfeeding women showed significant risk of subclinical vitamin E deficiency. We suggest that the concentration of alpha-tocopherol in colostrum be associated with type of delivery and pre-gestational nutritional status of women.

Keywords: Vitamin E, Blood, Colostrum, Vitamin E deficiency, Chromatography, Chromatography, high pressure liquid

Introdução

O termo vitamina E se refere a uma família de oito compostos relacionados quimicamente (α-, β-, γ- e δ-tocoferol e α-, β-, γ- e δ-tocotrienol), mas que diferem em estrutura e biodisponibilidade. O alfa-tocoferol é a forma mais biologicamente ativa dessa vitamina, representando aproximadamente 90% da quantidade encontrada em tecidos animais¹.

A função celular mais conhecida da vitamina E é a de antioxidante. Estudos sugerem que um bom estado antioxidante durante a gestação exerce efeito protetor, aumentando o crescimento intrauterino e o peso ao nascer¹, além de evitar o dano oxidativo causado ao DNA, às proteínas e aos lipídios².

Atualmente também têm sido atribuídas à vitamina E diversas funções não antioxidantes, como a de modulador a nível pós-transducional e transcricional e inibidor da proliferação celular, agregação plaquetária e da adesão de monócitos³.

Essa vitamina é extremamente importante durante os estágios iniciais da vida, desde o momento da concepção até o desenvolvimento pós-natal⁴. Entretanto, logo após o nascimento, em função da limitada transferência placentária de vitaminas lipossolúveis, o feto apresenta reservas corpóreas reduzidas de vitamina E¹. Além disso, a demanda do neonato encontra-se naturalmente aumentada devido ao alto risco de formação de espécies reativas de oxigênio, gerado por sua mudança para um ambiente hiperoxêmico¹.

Nesse contexto, o leite materno, especialmente o colostro, deverá garantir o fornecimento de vitamina E em quantidades que sustentem a formação de suas próprias reservas, garantam a proteção do organismo contra a toxicidade do oxigênio e estimulem o desenvolvimento do sistema imunológico.

O fornecimento insuficiente de vitamina E após o nascimento poderá implicar em deficiência vitamínica, principalmente entre a sexta e a oitava semanas de vida⁴. Essa condição possivelmente comprometerá o desenvolvimento do sistema imunológico e pulmonar do recém-nascido, além de torná-lo propenso a desenvolver anemia hemolítica, principalmente quando prematuro e com baixo peso⁵.

Variações na composição nutricional do leite humano dependem do estágio de lactação, período de alimentação, nutrição da mãe, idade gestacional do recém-nascido, entre outros aspectos individuais da lactante⁶.

Alguns estudos com enfoque para a vitamina E sob o aspecto materno-infantil^7-10 constataram a existência da associação de algumas variáveis maternas e do neonato com os níveis dessa vitamina no soro e/ou no leite materno. Esses estudos são importantes para verificar se características maternas e do parto são capazes de influenciar a composição nutricional do leite. Além disso, através desse tipo de estudo, pode-se identificar potenciais grupos com risco para deficiência sérica de alfa-tocoferol, bem como grupos de lactantes com possibilidade de ofertar colostro para seus recém-nascidos com concentrações mais baixas desse micronutriente.

Assim, o presente estudo tem como objetivos determinar a concentração de alfa-tocoferol no soro e colostro de puérperas atendidas em uma maternidade pública da região Nordeste do Brasil e verificar a existência de associação entre os níveis da vitamina e variáveis maternas.

Métodos

O estudo foi do tipo prospectivo e de caráter transversal, conduzido durante o período de janeiro a setembro de 2010 em uma maternidade pública de referência estadual, localizada no município de Natal (RN). O estudo obteve aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (Protocolo n° 325/09 – Hospital Universitário Onofre Lopes). O processo de definição da amostra foi baseado em demanda espontânea e, para isso, todas as puérperas que necessitaram de internação após o parto no período especificado foram submetidas aos critérios de triagem definidos para este estudo.

A amostragem foi obtida conforme os seguintes critérios de exclusão: existência de complicações maternas, como diabetes, neoplasias, doenças hepáticas, infecciosas e do trato gastrintestinal, cardiopatias, sífilis, HIV positivo, dentre outras; existência de má-formação fetal; presença de conceptos múltiplos; parto ocorrido há mais de 12 horas do momento da coleta de sangue; uso de suplementos vitamínicos contendo vitamina E durante a gestação e suplementação com megadose de vitamina A no pós-parto. Esse tipo de suplementação foi considerado critério de exclusão, uma vez que é composta de 200.000 UI de retinol palmitato associadas a 49,4 mg de all-rac-alfa-tocoferol. As puérperas recrutadas foram esclarecidas quanto aos objetivos da pesquisa e autorizaram sua inclusão no estudo assinando o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE). O grupo de trabalho foi composto de 103 puérperas saudáveis.

As informações maternas e fetais necessárias a esta pesquisa foram obtidas do cartão de acompanhamento pré-natal e do inquérito aplicado pelos pesquisadores, estruturado com questões relacionadas ao pré-natal e ao pós-parto. O estado nutricional antropométrico pré-gestacional foi determinado por meio do uso do Índice de Massa Corporal (IMC), calculado a partir do peso corpóreo da mulher antes da gestação e da medida de sua estatura. O ganho de peso gestacional foi obtido por meio da diferença estabelecida entre o peso corpóreo pré-parto e o peso pré-gestacional, sendo classificado como insuficiente, adequado ou excessivo¹¹.

Este estudo adotou como metodologia para dosagem de vitamina E em lactantes o pool de colostro em detrimento de análises em amostras únicas, com o intuito de evitar grandes variações do conteúdo vitamínico presente no leite das diferentes puérperas, agregando maior confiabilidade aos dados obtidos.

Com esse propósito, a partir do primeiro dia pós-parto, durante três dias consecutivos foram coletados 2 mL de colostro no período da manhã, após jejum noturno. Essas amostras foram obtidas por meio de expressão manual de uma única mama, no início e no final da mamada para evitar flutuações no teor de gordura. No primeiro dia pós-parto, sob mesma condição de jejum, também foram coletados 5 mL de sangue.

As amostras foram coletadas em tubos de polipropileno protegidos da luz, transportadas sob refrigeração. As alíquotas de sangue foram centrifugadas por 10 minutos (500 xg) para separação e remoção do soro, tendo sido mantidas sob atmosfera de nitrogênio à temperatura de -20ºC durante todo o procedimento, assim como as amostras de colostro, até o momento das análises. Finalizada a última coleta de colostro, as três amostras foram adicionadas a um único tubo, homogeneizadas e direcionadas à extração, compondo, assim, o pool de colostro. No momento da alta hospitalar, as puérperas foram suplementadas com a megadose de vitamina A, em conformidade com as recomendações do Ministério da Saúde¹².

A técnica extrativa para alfa-tocoferol foi adaptada de Ortega et al.¹³, como descrito adiante. Para uma alíquota de 500 μL de colostro foram utilizados 500 μL de etanol a 95% (Merck, São Paulo, Brasil) para precipitação proteica e 2 mL de hexano (Merck, São Paulo, Brasil) para extração dos lipídios. Em seguida, as amostras foram homogeneizadas por 1 minuto e centrifugadas durante 10 minutos, após os quais o extrato hexânico foi transferido para outro tubo. Essa etapa foi realizada duas vezes, totalizando 4 mL do extrato, do qual foi retirada uma alíquota de 2 mL para evaporação sob atmosfera de nitrogênio em banho-maria a 37°C. No momento da análise, o extrato seco foi redissolvido em 250 μL de etanol absoluto grau CLAE (Merck, São Paulo, Brasil) e 20 μL foram aplicados no aparelho de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE).

Para extração da vitamina no soro, o procedimento metodológico foi o mesmo, exceto em relação às quantidades utilizadas, que foram: 1 mL da amostra, 1 mL de etanol a 95% e três etapas extrativas com hexano, totalizando 6 mL do extrato, dos quais foram evaporados 3 mL. O extrato seco foi redissolvido em 500 μL de etanol absoluto grau CLAE.

A concentração de alfa-tocoferol nas amostras foi determinada em cromatógrafo da marca Shimadzu. Esse equipamento é constituído de bomba LC-20 AT Shimadzu, acoplado a um Detector SPD-20A Shimadzu UV-VIS, coluna Shim-pack CLC-ODS (M) 4,6 mm x 15 cm e computador com programa LC solution (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japão) para processamento dos dados. A fase móvel utilizada para a análise de alfa-tocoferol foi metanol em grau de pureza para HPLC e água MiliQ (97:3), em sistema isocrático com fluxo de 1,5 mL/min. O comprimento de onda adotado para monitoramento da absorbância foi de 292 nm, obtendo-se um tempo de retenção de 8,2 minutos.

A identificação e a quantificação do α-tocoferol nas amostras se deram por comparação da área obtida no perfil cromatográfico e da área do padrão de α-tocoferol (Sigma, St. Louis, EUA). A concentração do padrão foi confirmada pelo coeficiente de extinção específico em etanol absoluto para alfa-tocoferol (ε 1%, 1 cm=75,8 a 292 nm)¹⁴.

Para a avaliação do estado nutricional bioquímico das puérperas de acordo com os níveis de alfa-tocoferol, adotou-se o valor 697,7 μg/dL como ponto de corte sérico, por indicar condição de risco para deficiência subclínica¹⁵.

Para análise estatística, foi utilizado o software Statistica 7 (StatSoft, Inc, Tulsa, OK, USA). Os resultados das dosagens de alfa-tocoferol no soro e colostro foram apresentados em média e desvio-padrão. As diferenças entre as médias dos dados numéricos paramétricos e a relação entre os dados bioquímicos e as características maternas foram avaliadas utilizando o teste t de Student para dados independentes. Para verificar a associação entre as concentrações de alfa-tocoferol no soro e no colostro foi realizada a correlação de Pearson. As diferenças foram consideradas significativas quando p<0,05.

Resultados

As puérperas incluídas no estudo (n=103) estavam na faixa etária entre 15 e 41 anos de idade. Cerca da metade apresentou estado nutricional pré-gestacional indicativo de eutrofia, mas 36% das mulheres apresentaram algum grau de excesso de peso prévio à gestação. Essa mesma situação se manteve na análise do ganho de peso gestacional. Embora a maior parcela das puérperas (54%) tenha mantido o ganho de peso corpóreo dentro da recomendação prevista, 20% ultrapassaram a média de peso estimada com base no estado nutricional prévio à gestação (Tabela 1).

Com relação às variáveis obstétricas, a maioria das puérperas (53%) era primípara, ou seja, acabara de conceber o primeiro filho. A cesariana foi a via de parto mais utilizada, com 51% das mulheres tendo sido submetidas a esse tipo de procedimento obstétrico (Tabela 1).

A concentração média de alfa-tocoferol constatada no grupo total de puérperas foi 1.138,6±346,0 μg/dL no soro e 1.125,1±551,0 μg/dL no colostro. Dessa forma, o estado nutricional para vitamina E foi considerado adequado com base no ponto de corte sérico utilizado. No entanto, ao analisar individualmente as participantes deste trabalho, foi verificado que os níveis séricos de alfa-tocoferol indicaram deficiência subclínica em 16% das mulheres.

Não foi demonstrada correlação entre o alfa-tocoferol do soro e do colostro no grupo total de puérperas (p=0,22, r=-0,12). Também não houve correlação entre os valores médios presentes no soro e no colostro após a categorização da população conforme as variáveis maternas e do parto estudadas (p>0,05) (Tabela 2).

Com a aplicação do teste t de Student, foi verificada diferença significativa entre os níveis de alfa-tocoferol no colostro dentro das variáveis estado nutricional pré-gestacional e tipo de parto, sendo os níveis da vitamina significativamente maiores no colostro de puérperas com excesso de peso (p=0,01) e nas que foram submetidas à cesariana (p<0,001). Já a categorização conforme a idade materna, a paridade e o ganho de peso gestacional não resultou em diferença significativa entre os níveis de alfa-tocoferol no soro e no colostro dessas lactantes (Tabela 2).

Discussão

As lactantes têm sido consideradas como grupo biologicamente vulnerável e sob risco de apresentar estado nutricional marginal ou deficiente em vários micronutrientes⁸. O estado nutricional materno constitui um determinante crítico do resultado da gravidez, tanto para a mãe como para o concepto¹⁶.

Os estados de saúde e nutrição da lactante e do recém-nascido estão intimamente ligados com o leite materno, sendo este o elo fundamental. A inter-relação da concentração vitamínica no leite materno e de sua concentração no plasma infantil tem sido demonstrada¹⁷. Mães com estado nutricional deficiente e baixa ingestão dietética provavelmente possuem menores níveis de vitamina E no leite e, em consequência, seus filhos podem se tornar vulneráveis à deficiência vitamínica^18,19.

Desde 1996, a Organização Mundial de Saúde (OMS)²⁰ recomenda a análise bioquímica do leite materno como o único capaz de conferir informação sobre o estado nutricional da mãe e do lactente de forma simultânea. A análise de retinol em leite materno já tem seu uso como indicador padrão do estado nutricional em vitamina A evidenciado^21,22. Entretanto, embora seja enfoque de diversos estudos nesta área^7,9,10,23, a dosagem de alfa-tocoferol no leite materno não apresenta registros sobre sua aplicação como parâmetro de avaliação do estado nutricional de vitamina E para o binômio mãe-filho.

Os valores de alfa-tocoferol verificados no soro das lactantes deste estudo foram condizentes com os constatados em trabalhos no Brasil⁸ e nos Estados Unidos da América²⁴ e superiores aos de mulheres cubanas²⁵. Os níveis presentes no colostro se assemelham aos de pesquisas conduzidas com lactantes brasileiras⁸ e cubanas²³.

O diagnóstico do estado nutricional bioquímico para o grupo total de puérperas deste estudo foi considerado satisfatório a partir de sua dosagem sérica. Entretanto, ao analisar individualmente essas mulheres verificou-se que 16% delas apresentavam deficiência de alfa-tocoferol no soro. Isso pode sugerir que a deficiência de vitamina E, embora rara em humanos, possa se desenvolver em grupos vulneráveis, como as lactantes.

Não houve associação entre os níveis séricos de alfa-tocoferol e as variáveis maternas analisadas. Enquanto isso, o leite parece ser mais fortemente influenciado por condições bioquímicas ou fisiológicas⁷, de forma que foi encontrada associação significante entre as variáveis "tipo de parto" e "estado nutricional" das puérperas e os níveis de alfa-tocoferol no colostro desse grupo. Essas evidências também podem estar relacionadas à ausência de correlação entre os níveis de alfa-tocoferol no soro e no leite, previamente discutida.

Nesse contexto, a dosagem de vitamina E no leite materno, assim como de outras vitaminas, é mais sensível às mudanças do estado nutricional em detrimento de suas dosagens séricas, visto que sua concentração plasmática é controlada homeostaticamente⁷. Essa característica torna a dosagem de vitamina E no leite materno um bom indicador para mensurar o impacto de programas de intervenção na mãe e no infante²¹.

Contrapondo-se aos resultados verificados no presente estudo, ao analisar puérperas de Bangladesh²⁶ foi visto que a concentração de micronutrientes no colostro dessas mulheres não demonstrou associação com seu estado nutricional. Esses achados estão de acordo com os verificados em lactantes do Sudeste brasileiro⁷, para as quais também não foi encontrada associação entre o IMC materno e os níveis de tocoferóis no leite e plasma de mães adolescentes. Já em pesquisa desenvolvida com indivíduos adultos na Suécia²⁷, os autores constataram que participantes com maiores medidas antropométricas apresentavam níveis superiores de alfa-tocoferol sérico. Uma vez que cerca de 90% do total corporal de vitamina E encontra-se armazenado na forma de gotículas de lipídeos²⁸, é provável que a maior reserva de tecido adiposo apresentada por esses indivíduos seja a responsável pelo estabelecimento da associação exposta anteriormente.

Visto que a composição do leite materno é mais sensível a fatores como o estado nutricional em detrimento das oscilações séricas, é ainda sob o enfoque do papel do tecido adiposo frente ao estoque de vitamina E que se justifica a constatação de maiores níveis de alfa-tocoferol no leite de puérperas com excesso de peso.

Estudos realizados com puérperas na Espanha²⁹, em Bangladesh²⁶ e no Nordeste brasileiro³⁰ verificaram que as variáveis "idade materna" e "paridade" não mostram associação com os níveis séricos de vitamina E, estando, dessa forma, de acordo com os resultados encontrados nesse estudo. Em contrapartida, foi verificado em puérperas nigerianas³¹ que o alfa-tocoferol do leite materno tende a diminuir com o avançar da idade e possui associação com a paridade, apesar de não ter sido verificada diferença estatisticamente significativa entre os níveis da vitamina.

Quanto ao tipo de parto, o estudo conduzido com puérperas espanholas²⁹ encontrou associação entre essa variável e a concentração de vitamina E sérica, tendo sido constatados níveis mais elevados no grupo das mulheres que tiveram parto normal em comparação às submetidas ao parto cesárea, com diferença significativa. No entanto, no presente estudo a associação entre alfa-tocoferol e o tipo de parto se estabeleceu somente quando considerados seus níveis no colostro. Assim, foram constatados níveis de alfa-tocoferol significativamente maiores no colostro de mulheres submetidas à cesariana em relação às que tiveram parto normal.

Diante das associações encontradas neste estudo entre os níveis de alfa-tocoferol no colostro e o tipo de parto e estado nutricional pré-gestacional materno, outros estudos devem ser realizados para corroborar ou refutar essa associação, a fim de que sejam identificados grupos mais vulneráveis a possuir menores níveis de vitamina E no colostro, suscitando um maior monitoramento e acompanhamento desses grupos, principalmente em relação ao aconselhamento nutricional.

Agradecimentos

À Maternidade Januário Cicco, por permitir a coleta das amostras biológicas, e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) pelo apoio financeiro.

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Recebido 01/06/2012

Aceito com modificações 16/07/2012

Conflito de interesses: não há.

Trabalho realizado na Universidade Federal do Rio Grande do Norte – UFRN – Natal (RN), Brasil.

Correspondência

Roberto Dimenstein

Departamento de Bioquímica, Centro de Biociências da Universidade Federal do Rio Grande do Norte

Avenida Senador Salgado Filho, 3.000 – Lagoa Nova

CEP: 59072-970

Natal (RN), Brasil

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  15 Out 2012
• Data do Fascículo
  Ago 2012