Paratuberculose em caprinos e ovinos no Estado da Paraíba

Paratuberculosis in goats and sheep in the state of Paraiba

ANIMAIS DE PRODUÇÃO

Paratuberculose em caprinos e ovinos no Estado da Paraíba

Paratuberculosis in goats and sheep in the state of Paraiba

João M.A. Medeiros; Felício Garino Junior; Arthur P. Almeida; Erasmo A. Lucena; Franklin Riet-Correa ^*

Hospital Veterinário, Centro de Saúde e Tecnologia Rural (CSTR), Campus de Patos, Universidade Federal de Campina Grande, Patos, PB 58700- 000, Brasil

RESUMO

Mediante o teste de ELISA foi determinada a presença de anticorpos para Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis (map) em amostras de soro de 734 caprinos e 392 ovinos, sem sinais clìnicos aparentes, provenientes de 14 Municipios do semiárido Paraibano. Em caprinos, a frequência média de anticorpos de 44,86± 22,91% e em ovinos foi de 52,96±31,49. Das 46 propriedades estudadas, 44 (95,65%) apresentaram pelo menos um animal soropositivo. Nos 14 municípios avaliados houve presença de animais sorologicamente positivos, variando de 20% a 70%. Em caprinos sem raça definida e mestiços a frequência (48,56%) foi significativamente inferior (P<0,0270) que a de caprinos de raças puras (57,24%). Em ovinos com escore de 1 a 3 a frequência (59,39%) foi significativamente maior (P=0,0034) que a frequência em ovinos com escore superior a 3 (42,42%). Não houve diferença significativa nas frequências em caprinos e ovinos de diferentes idades, em caprinos com diferente escore corporal e em ovinos de diferentes raças. No exame microbiológico, em cultivos em meio HEYM com micobactina J, foram observadas colônias semelhantes às do Map em 9 (6,58%) das 180 amostras de fezes, sendo uma de caprinos e 8 de ovinos. Na coloração de Ziehl Nieelsen as bactérias apresentavam características morfo-tintorias de Map. Os resultados obtidos indicam alta frequência de caprinos e ovinos infectados com Map no semiárido da Paraíba, tornando-se necessário desenvolver pesquisas sobre a epidemiologia e forma de controle da doença nas condições de criação da região.

TERMOS DE INDEXAÇÃO: ELISA, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, paratuberculose, pequenos ruminantes.

ABSTRACT

Antibodies to paratuberculosis were determined by ELISA in serum samples of 734 goats and 392 sheep, without clinical signs, from 14 municipalities of the semiarid region of Paraíba state, Brazil. In goats, average frequency of antibodies was 44.86±22.91% and in sheep was 52.96±31.49%. All municipalities had affected animals with a frequency varying from 20% to 70%. In goats of unknown breed and crossbreds the prevalence (48.56%) was significantly lower (P=0.0270) than in pure breed goats (57.24%). In sheep with body scores of 1 to 3, the frequency (59.39%) was significantly higher (P=0.0034) than in sheep with body score from 3 to 5 (42.42%). No significant differences were observed in goats and sheep of different ages, in goats with different body score, and in sheep of different breeds. In the microbiologic examination, after 16 weeks of incubation in HEYM medium with mycobactin J, colonies similar to those of do Mycobacterium avium subsp. paratuber culosis were observed in cultures of 9 (6.58%) out of 180 fecal samples, being one from goats and 8 from sheep. In the Ziehl Nieelsen the bacteria had morphologic and staining characteristics similar to M. avium subsp. paratuberculosis. These results suggest that paratuberculosis is endemic with high prevalence in the semiarid region of Paraíba. It is necessary to develop research on the epidemiology and control measures of the disease in the conditions of this region. Also the risk for human beings should be determined, mainly in relation with milking goats.

INDEX TERMS: ELISA, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, paratuberculosis, small ruminants.

INTRODUÇÃO

A paratuberculose ou doença de Johne é uma enfermidade infecto-contagiosa crônica, incurável, de distribuição mundial. Acomete bovinos, ovinos, caprinos, bubalinos e outros ruminantes selvagens e, com menor frequência, suínos, lebres e equinos. O agente etiológico é o Mycobacterium avium, subespécie paratuberculosis (Map), que causa enterite e linfadenite granulomatosas (Clarke 1997, Harris & Barletta 2001, Barker 2007, Riet-Correa & Driemeier 2007, Moravkova et al. 2008).

A doença é responsável por perdas econômicas importantes em vários países, principalmente nos EUA, onde foi verificado um prejuízo de 200 a 250 milhões de dólares por ano (Ott et al. 1999).

A infecção em ruminantes ocorre após o nascimento, principalmente pela ingestão de água e alimentos contaminados ou com fezes, leite e colostro de animais infectados (Clarke 1996). Ocorre também transmissão pela via intra-uterina (Radostits et al. 2007).

Em ovinos e caprinos, a doença manifesta-se, principalmente, por emaciação progressiva; a diarréia não é grave ou está ausente, diferente dos bovinos em que a diarreia é um sinal clínico característico. Os ovinos podem ser parcialmente anoréxicos e pode ocorrer perda de lã. Nos caprinos, a depressão e a dispnéia são evidentes, mas nos ovinos não são tão visíveis (Radostits et al. 2007). O diagnóstico dos casos subclínicos pode ser realizado por isolamento de bactérias das fezes ou leite e provas sorológicas. O diagnóstico confirmatório pode ser por material de necropsia e por estudo histológico das lesões (Riet-Correa & Driemeier 2007).

Diversos testes sorológicos têm sido utilizados para verificar a presença de anticorpos contra o Map nos rebanhos (Tripathi et al. 2006). ELISA é visto como teste sorológico de eleição, principalmente pela conveniência da coleção de amostras, procedimento laboratorial rápido e de baixo custo. A especificidade deste teste se torna elevada pela absorção do soro com outra micobactina, do Mycobacterium phlei, o que remove os anticorpos não específicos, evitando assim as reações cruzadas contra os antígenos do Map. Os testes comerciais que incorporam antígenos mais específicos ao Map proporcionam uma sensibilidade de detecção de 70% a 80 % e uma especificidade de 89% a 95% (Stabel 1998).

No Brasil há relatos da paratuberculose em bovinos em diversos Estados das regiões Sul e Sudeste (Portugal et al. 1979, Ramos et al.1986, Poester & Ramos 1994, Driemeier et al. 1999, Gomes et al. 2002) e também nos Estados de Pernambuco (Mota et al. 2007) e Paraíba (Oliveira et al. 2008). Em ovinos e caprinos a doença foi recentemente diagnosticada na Paraíba (Oliveira et al. 2010).

Devido às características da paratuberculose em caprinos e ovinos, causando emagrecimento ou menor produtividade, a doença pode ser confundida com outras causas de emagrecimento; portanto é provável que, na região semiárida do Brasil, seja subdiagnosticada, ocasionando perdas econômicas significativas. O objetivo deste trabalho foi estimar a frequência de anticorpos contra o Map em caprinos e ovinos no semiárido Paraibano.

MATERIAL E MÉTODOS

O projeto foi realizado no período de novembro de 2009 a dezembro de 2010. As amostras foram coletadas em rebanhos de quatro mesorregiões da Paraíba (Sertão, Cariri Ocidental, Cariri Oriental e Agreste) que tem o maior número de caprinos e ovinos do Estado. Foram testadas 734 amostras de soro de caprinos e 392 de ovinos, assintomáticos, de 46 rebanhos diferentes. Os rebanhos foram escolhidos de acordo com a possibilidade de acesso às fazendas e a concordância dos produtores. Em cada fazenda foram coletadas amostras de aproximadamente 10% dos animais. De cada animal foram coletados 10mL de sangue por venopunção da jugular com agulhas acopladas a tubos a vácuo. Foram coletadas, também, amostras de fezes, colhidas da ampola retal de 86 caprinos e 94 ovinos positivos na prova de ELISA. A seleção dos animais para a coleta das amostras também foi por conveniência. O acesso aos produtores foi através dos agentes de desenvolvimento rural sustentável do projeto Bioma Caatinga da Paraíba.

As amostras de sangue foram centrifugadas a 1700 x g por 15 minutos e os soros transferidos para 3 tubos de Eppendorf de 3mL cada, mantidos a -70ºC e, posteriormente testadas pelo teste de ELISA utilizando um kit comercial¹ anti-Map. Para a leitura do teste de ELISA utilizou-se uma Leitora de microplaca². Para a interpretação dos resultados dos animais positivos no teste de ELISA foi considerado um ponto de corte de P>0,250, conforme indicação do fabricante.

Para o exame microbiológico foram utilizadas amostras de fezes dos animais de cada propriedade que tiveram maior título no teste de ELISA. As amostras de fezes foram cultivadas de acordo com a metodologia descrita por Stabel (1997). As análises estatísticas foram realizadas por meio do teste de Qui-quadrado (x²) com correção de Yates e o nível de significância adotado foi de 5%. Os dados foram analisados estatisticamente utilizando o programa GRAPHPAD INSTAT versão 3.00 para Windows 95, GraphPad Software.

RESULTADOS

Os resultados dos testes sorológicos por fazenda, em caprinos e ovinos, apresentam-se nos Quadros 1 e 2, respectivamente. Das 46 propriedades estudadas, 44 (95,65%) apresentaram pelo menos um animal soropositivo. Em caprinos, a frequência média foi de 44,86±22,91%, em ovinos foi de 52,96±31,49%. Somente em uma propriedade de ovinos e uma de caprinos não foram encontrados animais positivos.

As frequências por município, raça, idade e escore corporal encontram-se nos Quadros 3, 4, 5, 6 e 7, respectivamente.

Nos 14 municípios estudados observou-se a presença de animais sorologicamente positivos, variando de 20%, em Maturéia, Soledade e Paulista, localizadas no sertão, a 70% em Campina Grande, localizado no agreste e São Mamede, no sertão.

Não foram encontradas diferenças significativas entre as raças (Quadro 4); no entanto, quando foram comparados os dados dos animais sem raça definida e mestiços, com frequência de 48,56%, com os das raças puras, com frequência de 57,24%, verificaram-se diferenças significativas (P=0,0270).

Em ovinos, a raça Santa Inês, em relação ao total de amostras, apresentou os maiores índices de animais soropositivos com 44,03% (Quadro 5), porém não houve diferença estatística entre as raças estudadas (P = 0,5830).

Não foram verificadas diferenças significativas na frequência entre animais de diferentes idades (Quadro 6). Quanto ao escore corporal dos animais avaliados (Quadro 7) também não foram encontradas diferença significativa de frequência entre animais com diferentes escores. No entanto,em ovinos quando agrupados os animais com escore de 1 a 3, a frequência (59,39% - 174/298) foi significativamente maior (P=0,034) que a frequência em ovinos com escore superior a 3 (42,42%-38/94).

No exame microbiológico, colônias semelhantes às do Map foram observadas em 9 (6,58%) das 180 amostras de fezes, sendo uma de caprinos e 8 de ovinos. Na coloração de Ziehl Nieelsen as bactérias apresentaram características morfo-tintorias de Map.

DISCUSSÃO

A alta frequência de anticorpos contra Map em caprinos e ovinos no semiárido da Paraíba alertam para a importância da doença na região. Essa frequência é maior que as observadas em outros países, sendo 11,7% em ovinos na Espanha (Mainar-Jaime et al. 1998), 4,6% a 15,3% em caprinos na Coréia (Kyung et al. 2006), 11,6% em ovinos e 4,6% em caprinos na Índia (Tripathi et al. 2007) e de 8,5% em ovinos jovens na Índia (Singh et al. 2007). As causas desta alta frequência devem ser investigadas; no entanto, é provável que seja devido ao tipo de manejo utilizado na região, onde apesar de muitos produtores utilizarem o manejo extensivo com animais a pastoreio na caatinga e baixa lotação, de 1 a 2 ovinos ou caprinos por hectare, os rebanhos são encerrados à noite, permanecendo misturados animais adultos com jovens e, frequentemente, em condições de higiene inadequadas. O estudo dos fatores de risco associados à ocorrência de anticorpos ajuda a esclarecer aspectos importantes da epidemiologia da doença na região.

A alta frequência de anticorpos sugere que a doença é importante na região e que causa prejuízos econômicos consideráveis; no entanto, é necessário quantificar essas perdas, determinando a ocorrência de doença clínica e subclínica. Para isso devem ser investigadas as causas de emagrecimento nos rebanhos caprino e ovino, estabelecendo o diagnóstico diferencial com outras causas de emagrecimento, incluindo as parasitoses e a subnutrição. A possibilidade de a doença estar ocasionando emagrecimento de animais é sugerida pela maior frequência de anticorpos em ovinos com escore corporal de 1 a 3, quando comparada à dos ovinos com escore corporal acima de 3. No entanto, em caprinos não foram observadas diferenças entre animais com diferente escore corporal.

Também devem ser pesquisados os possíveis fatores de riscos de transmissão da doença ao homem. Apesar de não comprovado é possível que o Map seja o agente da doença de Chron em humanos (Slana et al. 2009). Neste caso, a transmissão pode ocorrer através do leite, já que o Map resiste à pasteurização (Millar et al. 1996). A presença de Map no leite caprino comercializada no nordeste deve ser pesquisada, assim como possíveis medidas para evitar a transmissão deste agente ao homem.

Considerando a alta frequência de anticorpos para paratuberculose nos rebanhos ovino e caprino da Paraíba é difícil estabelecer medidas de controle, exceto recomendações de aspecto geral, úteis também, para o controle de outras doenças: higiene das instalações, separação dos animais por idade, e, na caprinocultura leiteira, separação dos cabritos com administração de colostro com tratamento térmico para CAE ou colostro de bovino. Recomenda-se, também, a eliminação de animais que permanecem magros, mesmo com boa alimentação. Neste ponto é necessário ressaltar que a prova de ELISA, recomendada para estimar a prevalência da doença nos rebanhos (Collins & Sockett 1993), não é adequada para o diagnóstico, identificação e possível eliminação de animais afetados (Rossiter & Burhans 1996). No Brasil, também em bovinos, espécie na qual a prevalência de casos clínicos é baixa, a frequência de anticorpos é alta, entre 30% a 60,24% (Rivera 1996, Laranja-da-Fonseca et al.1999).

No estudo microbiológico obteve-se uma baixo percentual de isolamento do Map, em 8 de 94 amostras de ovinos e em 1 de 86 amostras em caprinos. Esses resultados são semelhantes aos obtidos por outros autores (Coelho et al. 2007, Dimareli-Malli et al. 2009), confirmando a baixa sensibilidade do isolamento para o diagnóstico individual de paratuberculose.

CONCLUSÃO

Conclui-se que há uma alta frequência de anticorpos para Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis em rebanhos de caprinos e ovinos no Estado da Paraíba, sendo necessário desenvolver novas pesquisas para determinar a importância econômica da doença clínica, como causa de emagrecimento, ou subclínica, como causa de menores índices de produção. No caso de confirmar a importância econômica da enfermidade deverão ser estudadas, também, medidas de controle adequadas para a região.

Agradecimentos.- Aos Agentes de Desenvolvimento Regional e Sustentável do (Projeto Bioma Caatinga) o qual tem como parceiros o SEBRAE, Fundação Banco do Brasil, cooperativas e associações, pela colaboração na execução das coletas, e ao CNPq pela concessão da bolsa do Mestrado e financiamento do projeto (Proc.471783/2008-0).

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Recebido em 27 de junho de 2011.

Aceito para publicação em 10 de outubro de 2011.

1

Alamar Tecno-Científica Ltda, Diadema, SP, Brasil.

2

Pharma Nostra, São Paulo, Brasil.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  03 Abr 2012
• Data do Fascículo
  Fev 2012

Histórico

• Recebido
  27 Jun 2011
• Aceito
  10 Out 2011