Prevalência de Salmonella spp. em frangos vivos e carcaças

A partir dos estabelecimentos A e D não foi detectada nenhuma amostra positiva. Quanto às amostras cloacais de frangos vivos, apenas no matadouro E foi possível obter um isolado de Salmonella spp. (Quadro 1), o que provavelmente não representa a prevalência real de Salmonella spp. nos plantéis avícolas do estado do Rio de Janeiro. Assim como a baixa frequência obtida nesse trabalho (1,66%), em granjas no Ceará, foram coletados 1.000 suabes de cloaca, sendo apenas 0,2% positivos (^{Bezerra et al. 2016}). Resultados similares foram encontrados por ^{Mezalira et al. (2014)} no noroeste do Paraná, que ao analisarem 50 suabes de cloaca não detectaram a presença de Salmonella spp.. Em outro estudo no Paraná, onde foram coletados suabes de cloaca de 1.000 aves e suabes de arrasto dos mesmos galpões, também não foram obtidas amostras positivas, o que foi atribuído à ausência de Salmonella spp no ambiente (^{Ravagnani et al. 2012}). Entretanto, pesquisas que utilizaram suabes de arrasto para isolar Salmonella spp. em outras granjas obtiveram resultados positivos, com a prevalência variando entre 1,95% e 11,4% (^{Boni et al. 2011}, ^{Giombelli & Gloria 2014}, ^{Voss-Rech et al. 2015}, ^{Pandini et al. 2015}). O método de coleta com auxílio de suabes de cloaca pode ter influenciado na baixa positividade observada nas amostras de frangos vivos desse estudo e naqueles com resultados semelhantes. De acordo com ^{Van Hoorebeke et al. (2009)}, o suabe de cloaca parece não ser o melhor método de isolamento, subestimando a prevalência da Salmonella spp. quando esta é baixa no plantel, que aliada à sua excreção intermitente pelas aves podem explicar os resultados obtidos nesse estudo. Portanto, as diferentes prevalências desse microrganismo observadas em diversas regiões do país podem resultar da infecção dos lotes, da excreção pelas fezes e das diferentes condições higiênico-sanitárias dos matadouros.

Em relação à análise das carcaças, amostras positivas para Salmonella spp. foram encontradas em quatro (B, C, E, F) dos seis matadouros analisados, o que correspondeu a 67% dos estabelecimentos visitados. No total, foram obtidos 33 isolados de Salmonella spp. de 16 das 60 carcaças analisadas (Quadro 1). O plano de monitoramento de Salmonella spp. em carcaças de frangos e perus do MAPA, preconiza uma prevalência esperada de 20% por ciclo amostral em SIF (^{Brasil 2016a}). Analisando separadamente cada matadouro visitado em nosso estudo, nota-se que em três dos seis estabelecimentos, C, E e F, foi observado um limite acima do estabelecido pela legislação, com prevalência de 70%, 30% e 50%, respectivamente, sendo dois localizados na Região Serrana e um na Metropolitana. Apenas no matadouro B, localizado na Região Serrana, foi observada uma prevalência dentro da preconizada pelo MAPA, com uma carcaça (10%) positiva (Quadro 1). Apesar de não existir um plano estadual para esses estabelecimentos, espera-se que matadouros fiscalizados pelo SIE tenham um controle de qualidade similar aos fiscalizados pelo SIF.

A prevalência de 26,66% de Salmonella spp. em carcaças (Quadro 1) foi elevada quando comparada a estudo semelhante com sessenta carcaças de seis matadouros do estado do Rio de Janeiro, no qual foi observada uma positividade de carcaça de 6,67% (^{Panzenhagen et al. 2016}). Entretanto, variações de prevalência são descritas em diversos locais do Brasil. ^{Cardoso et al. (2015)} e ^{Yamatogi et al. (2016)}, no estado de São Paulo, analisaram carcaças provenientes de matadouros com SIF e encontraram, respectivamente, 14,6% e 58% de carcaças positivas para Salmonella spp.. Em outra pesquisa realizada no mesmo estado, em 60 pequenos matadouros com condições precárias, a prevalência de Salmonella spp. foi de 42% nas carcaças analisadas (^{Fuzihara et al. 2000}). Outros trabalhos no Ceará (^{Oliveira et al. 2006}), em Pernambuco (^{Duarte et al. 2009}) e em Goiás (^{Moreira et al. 2008}), relatam uma prevalência de Salmonella spp. mais baixa do que a encontrada nesse estudo, 14,3%, 9,6% e 14,32%, respectivamente. Sabe-se que boas práticas de fabricação e a aplicação do sistema APPCC podem influenciar a carga microbiana presente na linha de abate. O resultado desse estudo, onde foi observada a maior prevalência em carcaças, pode ter sido influenciado pela contaminação cruzada ocorrida no processamento tecnológico resultante do abate de lotes distintos no mesmo matadouro.

^{Giombelli & Gloria (2014)} não conseguiram correlacionar à ocorrência da Salmonella spp. na granja e em carcaças coletadas no matadouro. Em nosso estudo, podemos inferir que o único isolado de amostras de cloaca de frangos vivos pode estar relacionado com um isolado de carcaça do mesmo matadouro, pois os dois isolados pertencem ao mesmo sorotipo, compartilham do mesmo perfil de susceptibilidade antimicrobiana e foram isolados do mesmo lote, sugerindo fonte comum de contaminação (Quadro 2). Segundo ^{Yamatogi et al. (2016)}, as fases que precedem o abate, como a captura e o transporte, estressam as aves. Esse estresse causa um distúrbio das funções intestinais, diminuindo a resistência da ave e aumentando a disseminação da bactéria pelas fezes (^{Marin & Lainez 2009}), o que pode elevar a contaminação da carcaça e a disseminação do patógeno na linha de produção (^{Yamatogi et al. 2016}).

Sorotipos prevalentes de Salmonella spp.

Paralelamente, o estudo dos sorotipos de Salmonellaspp. isolados se destaca como uma importante ferramenta epidemiológica, pois permite que os pesquisadores avaliem o aparecimento de sorotipos emergentes na cadeia de produção, além dos historicamente associados a carne de aves, como Enteritidis, Typhimurium e Heidelberg (^{Shah et al. 2017}), estimando seus impactos na saúde humana (^{Yamatogi et al. 2016}).

No presente trabalho, sete sorotipos de Salmonella spp. foram identificados em carcaças, sendo Senftenberg (15%) o mais frequente e também o único isolado das amostras cloacais de frangos vivos (Quadro 3), seguido por Mbandaka (8,3%), Schwarzengrund (3,3%), Cerro (3,3%), Ohio (3,3%), Minnesota (1,66%) e Tennessee(1,66%). Em um isolado de carcaça não foi possível completar a caracterização antigênica (1,66%) e em quatro carcaças foram isolados mais de um sorotipo de Salmonella spp. (Quadro 4). Apesar da diferença significativa entre a frequência de sorotipos circulantes (p<0,05), esta diversidade era esperada, pois a variedade de sorotipos de Salmonella spp. em isolados de carcaças é grande, conforme descrito por inúmeros autores (^{Oliveira et al. 2006}, ^{Moreira et al. 2008}, ^{Duarte et al. 2009}, ^{Yamatogi et al. 2016}). Entende-se que o monitoramento dos sorotipos circulantes na cadeia avícola do estado é importante para o conhecimento do papel dessas salmonelas em casos de surtos de salmonelose em humanos pela ingestão de produtos avícolas.

No estado do Rio de Janeiro são escassos os dados sobre os sorotipos circulantes. ^{Panzenhagen et al. (2016)} isolaram Salmonella Typhimurium e Salmonella Albany de carcaças resfriadas, enquanto ^{Asensi et al. (2009)} isolaram, predominantemente, Salmonella Enteritidis seguida de Salmonella Mbandaka, Salmonella Saintpaul e Salmonella enterica subsp. houtenae em carcaças congeladas adquiridas na cidade do Rio de Janeiro. Os dois trabalhos, ao contrário dessa pesquisa, encontraram os dois sorotipos de Salmonellaspp. mais incriminados em casos de salmonelose humana por ingestão de produtos avícolas, ou seja, Salmonella Enteritidis e Salmonella Typhimurium. O monitoramento desses dois sorotipos de Salmonella na cadeia de produção avícola brasileira tem sido cada vez mais intenso o que pode ter influenciado na ausência dos mesmos nas amostras analisadas nesse estudo.

Destaca-se nesse estudo, o sorotipo Senftenberg, por ser ter sido o mais prevalente, sendo muito isolado atualmente no Brasil, tanto em produtos avícolas (^{Costa et al. 2013}, ^{Mattiello et al. 2015}, ^{Yamatogi et al. 2016}) como em amostras provenientes de granjas (^{Boni et al. 2011}, ^{Mattiello et al. 2015}). Apesar de estar listado como um dos sorotipos mais comumente isolados em produtos avícolas nos Estados Unidos, não foi encontrada relação significativa do consumo desses alimentos com casos de salmonelose humana ocasionada por Salmonella Senftenberg naquele país (^{Shah et al. 2017}). Entretanto, surtos por esse sorotipo foram associados à ingestão de outros tipos de alimentos, como carne bovina, frutas e verduras (^{Jackson et al. 2013}), cereais de bebê (^{Rushdy et al. 1998}), manjericão (^{Zweifel & Stephan 2012}) e pimenta preta (^{Van Doren et al. 2013}). ^{Shirota et al. (2012)} relataram que Salmonella Senftenberg é um patógeno persistente, resiste a altas temperaturas, contaminando primeiro a ração, espalhando-se pelo ambiente e, posteriormente para as aves, sendo prudente o seu monitoramento na alimentação animal e na contaminação de produtos avícolas. Todavia, sua epidemiologia, ecologia e virulência são pouco conhecidas, necessitando de mais estudos (^{Shah et al. 2017}).

O sorotipo Mbandaka, encontrado em cinco carcaças analisadas, foi recentemente associado a um surto de salmonelose em humanos após o contato com galinhas de fundo de quintal nos Estados Unidos (^{CDC 2014}). Na cadeia avícola brasileira, Salmonella Mbandaka é isolada com frequência (^{Fuzihara et al. 2000}, ^{Asensi et al. 2009}, ^{Duarte et al. 2009}, ^{Costa et al. 2013}, ^{Voss-Rech et al. 2015}, ^{Pandini et al. 2015}, ^{Yamatogi et al. 2016}). Porém, assim como o sorotipo Senftenberg, não tem sido associado à ocorrência de salmonelose humana por consumo de carne de frango (^{Jackson et al. 2013}, ^{Shah et al. 2017}). Alguns casos de salmonelose por este sorotipo foram relacionados ao consumo de carne de porco e ao consumo de brotos (^{Jackson et al. 2013}), como por exemplo, o de alfafa (^{Gill et al. 2003}).

Nesse estudo, outros sorotipos encontrados em menor proporção foram Schwarzengrund, Cerro, Ohio, Minnesota e Tennessee. De acordo com ^{Shah et al. (2017)}, surtos de salmonelose no homem ligados ao sorotipo Schwarzengrund foram relacionados à ingestão de carne de frango comprada em mercado de aves vivas nos Estados Unidos.

Entre 2007 e 2011 houve um aumento significativo no isolamento de Salmonella Senftenberg e Salmonella Mbandaka em carcaças e subprodutos avícolas, sugerindo que são sorotipos emergentes. Sorotipos como Schwarzengrund, Minnesota e Tennessee também foram isolados com frequência nesses produtos. O aumento desses sorotipos pode estar relacionado ao nicho deixado pela redução na ocorrência de Salmonella Enteritidis. Essa diminuição é, provavelmente, um reflexo das ações implementadas pelo PNSA na tentativa de controle desse sorotipo e do sorotipo Typhimurium em granjas de reprodução (^{Costa et al. 2013}). Tais dados corroboram com os resultados encontrados nessa pesquisa.

Diversos sorotipos de Salmonella podem ser encontrados nas aves e nos seus subprodutos. Entretanto, se faz necessário um estudo mais aprofundado do potencial patogênico de cada sorotipo em causar doença em humanos e o monitoramento e compilação de dados relacionados à prevalência desses sorotipos na salmonelose humana no Brasil.

Perfil de susceptibilidade antimicrobiana

Dos trinta e três isolados avaliados, vinte e nove (87,87%) foram sensíveis a todos os antimicrobianos testados e somente quatro (12,12%) se mostraram resistentes a pelo menos um antimicrobiano (Quadro 2). Contudo, esse percentual de resistência é baixo quando comparado a outros trabalhos que relatam um percentual entre 39% e 100% de resistência a pelo menos um dos antimicrobianos testados em cepas de Salmonella spp. no Brasil (^{Oliveira et al. 2006}, ^{Duarte et al. 2009}, ^{Costa et al. 2013}, ^{Fitch et al. 2016}, ^{Mattiello et al. 2015}, ^{Pandini et al. 2015}, ^{Bezerra et al. 2016}, ^{Yamatogi et al. 2016}).

Em relação às fluoroquinolonas, todos os isolados foram sensíveis a norfloxacina e a ciprofloxacina. ^{Panzenhagen et al. (2016)}, em estudo no estado do Rio de Janeiro, relataram que as cepas de Salmonella spp. isoladas foram sensíveis as fluoroquinolonas testadas. Esses resultados sugerem que a resistência as fluoroquinolonas não é frequente em cepas circulantes no estado do Rio de Janeiro. Como sugerido por ^{Gyles (2008)}, pode-se notar uma tendência no padrão de resistência em função da região onde a cepa foi isolada. Entretanto são necessários mais estudos sobre a resistência das cepas de Salmonella spp. circulantes na cadeia avícola do estado.

^{Costa et al. (2013)}, ^{Fitch et al. (2016)}, ^{Voss-Rech et al. (2015)} e ^{Yamatogi et al. (2016)} também relatam alta susceptibilidade às fluoroquinolonas em estudos realizados no Brasil. Porém, um percentual de cepas, variando entre 4.9% e 19.2%, que apresentaram resistência à enrofloxacina foi observado em estudos realizados no Brasil (^{Fitch et al. 2016}, ^{Medeiros et al. 2011}, ^{Yamatogi et al. 2016}). Nesse trabalho, apenas um isolado demonstrou susceptibilidade intermediária à enrofloxacina (Quadro 2). Observa-se que este antimicrobiano é usado exclusivamente na medicina veterinária e seu uso indiscriminado nas criações avícolas pode resultar em aumento da resistência, como já relatado em estudos em outros países (^{Antunes et al. 2003}, ^{Donado-Godoy et al. 2012}). No entanto, de acordo com a maioria dos autores (^{Gyles 2008}, ^{Duarte et al. 2009}, ^{Costa et al. 2013}, ^{Fitch et al. 2016}, ^{Yamatogi et al. 2016}), tem se observado baixa resistência às fluoroquinolonas no Brasil, principalmente à ciprofloxacina, importante antimicrobiano utilizado no tratamento de casos graves de salmonelose no ser humano (^{WHO 2016a}).

A resistência a betalactâmicos foi observada em quatro amostras. Todas as quatro cepas foram resistentes à ampicilina, a cefalotina e a cefotaxima, três à amoxicilina/ácido clavulânico, uma ao ceftiofur e duas apresentaram resistência intermediária também ao ceftiofur (Quadro 2). Em uma análise de 1.939 amostras de Salmonella spp. provenientes do Programa de Monitoramento desse patógeno em estabelecimentos com SIF (^{Brasil 2016a}), 62% dos isolados foram resistentes ao menos um dos antimicrobianos testados. O maior índice de resistência foi aos betalactâmicos (21,4%), sendo 10% das amostras resistentes à ampicilina (^{Fitch et al. 2016}). Esses resultados condizem com os encontrados nesse trabalho, onde 12,12% das amostras testadas foram resistentes a este antimicrobiano, além de outros betalactâmicos, como a cefalotina e a cefotaxima. Além disso, ^{Medeiros et al. (2011)} também encontraram cepas com um alto índice de resistência aos betalactâmicos, principalmente à ampicilina e ao ceftiofur. A resistência observada aos betalactâmicos nessa pesquisa é preocupante, pois foi observada resistência à cefalosporinas de terceira geração, como ao ceftiofur, antimicrobiano geralmente administrado intraovo ou no primeiro dia de vida do pintinho, visando inibir a contaminação por Salmonellaspp. provenientes das matrizes (^{Palermo-Neto & Borsoi 2013}).

A transmissão horizontal de genes por plasmídios que codificam as betalactamases são uma constante preocupação no controle da resistência aos betalactâmicos (^{Gyles 2008}). As cefalosporinas de terceira geração assim como as quinolonas são consideradas medicamentos críticos no tratamento de salmonelose invasiva no homem (^{WHO 2016b}), sendo a circulação de cepas resistentes a estes medicamentos um ponto importante de controle na cadeia alimentar, pois constituem uma ameaça à saúde pública.

Das quatro cepas resistentes, três pertenciam ao sorotipo Senftenberg e um ao sorotipo Minnesota. Segundo ^{Shah et al. (2017)}, cepas multirresistentes de Salmonella Senftenberg, principalmente às cefalosporinas de terceira geração, foram isoladas de fontes animais, incluindo aves. Todavia, há relatos de cepas sensíveis a antimicrobianos que foram correlacionadas com casos de salmonelose em humanos em hospitais nos Estados Unidos (^{Kay et al. 2007}), reiterando a importância do monitoramento dos sorotipos circulantes, além do estudo da resistência.

Uma pesquisa realizada no Brasil entre 2007 e 2011, com 12.582 cepas de Salmonella spp., aponta para o crescimento exponencial de cepas com perfis multirresistentes, incluindo as cefalosporinas de terceira geração, assim como o aumento do número de sorotipos com esse perfil, abrangendo os de alta e baixa prevalência, sugerindo a propagação destes no ambiente (^{Costa et al. 2013}). Para evitar a propagação de cepas resistentes, é necessário que haja cautela e responsabilidade no uso de antimicrobianos na medicina veterinária e na medicina humana, além de um monitoramento epidemiológico contínuo.