Resumos
Introdução:
A exposição contínua da membrana peritoneal a soluções convencionais de diálise é um importante fator de risco para induzir alterações estruturais e funcionais.
Objetivo:
Comparar a viabilidade in vitro dos fibroblastos NIH-3T3 de camundongo após exposição à solução de diálise com pH neutro com células expostas à solução padrão.
Métodos:
Estudo experimental; ambas as soluções foram testadas em todas as concentrações de glicose comercialmente disponíveis. A viabilidade celular foi avaliada por ensaio colorimétrico de sal tetrazólio.
Resultados:
A viabilidade de fibroblastos foi melhor na solução de pH neutro em relação ao controle nas três concentrações de glicose (densidade óptica em nm-médias ± DP: 1,5% 0,295 ± 0,047 vs. 0,372 ± 0,042, p < 0,001; 2,3% 0,270 ± 0,036 vs. 0,337 ± 0,051, p < 0,001; 4,25% 0,284 ± 0,037 vs. 0,332 ± 0,032, p < 0,001; controle vs. pH neutro respectivamente, teste t de Student). Não houve diferença significativa na viabilidade celular entre as três concentrações de glicose quando solução padrão foi utilizada (ANOVA p = 0,218), embora a viabilidade celular tenha sido superior após exposição aos fluidos de diálise peritoneal neutros, pH 1,5% em comparação com 2,3 e 4,25% de concentrações de glicose (ANOVA p = 0,008: Bonferroni 1,5% vs. 2,3% p = 0,033, 1,5% vs. 4,25% p = 0,014, 2,3% vs. 4,25% p = 1,0).
Conclusão:
A viabilidade celular foi melhor em solução neutra de pH de diálise, especialmente nas menores concentrações de glicose. O pH fisiológico e com menos produtos de degradação de glicose podem ser responsáveis por estes resultados.
diálise peritoneal; fibroblastos; teste de materiais; técnicas de cultura de células
Introduction:
Continuous exposition of the peritoneal membrane to conventional dialysis solutions is an important risk factor for inducing structural and functional alterations.
Objective:
To compare in vitro mouse fibroblast NIH-3T3 cell viability after exposition to a neutral pH dialysis solution in comparison to cells exposed to a standard solution.
Methods:
Experimental study to compare the effects of a conventional standard or a neutral-pH, low-glucose degradation products peritoneal dialysis solution on the viability of exposed fibroblasts in cell culture. Both solutions were tested in all the commercially available glucose concentrations. Cell viability was evaluated with tetrazolium salt colorimetric assay.
Results:
Fibroblast viability was significantly superior in the neutral pH solution in comparison to control, in all three glucose concentrations (Optical density in nm-means ± SD: 1.5% 0.295 ± 0.047 vs. 0.372 ± 0.042, p < 0.001; 2.3% 0.270 ± 0.036 vs. 0.337 ± 0.051, p < 0.001; 4.25% 0.284 ± 0.037 vs. 0.332 ± 0.032, p < 0.001; control vs. neutral pH respectively, Student t Test). There was no significant difference in cell viability between the three concentrations of glucose when standard solution was used (ANOVA p = 0.218), although cell viability was higher after exposition to neutral pH peritoneal dialysis fluid at 1.5% in comparison to 2.3 and 4.25% glucose concentrations (ANOVA p = 0.008: Bonferroni 1.5% vs. 2.3% p = 0.033, 1.5% vs. 4.25% p = 0.014, 2.3% vs. 4.25% p = 1.00).
Conclusion:
Cell viability was better in neutral pH dialysis solution, especially in the lower glucose concentration. A more physiological pH and lower glucose degradation products may be responsible for such results.
cell culture techniques; fibroblasts; materials testing; peritoneal dialysis
Introdução
Diálise peritoneal (DP) de longo prazo no tratamento de doença renal terminal (DRT)
somente é possível quando a estrutura e a função da membrana peritoneal são
adequadamente preservadas. Soluções padrão de DP são ácidas (pH = 5,5), tamponadas
com lactato, hiperosmolares (334-486 mOsm/L) e contêm altas concentrações de glicose
(75-220 mmol/L) e de produtos da degradação da glicose (GDP), elementos que
sabidamente afetam a função peritoneal.11. Topley N. Membrane longevity in peritoneal dialysis: impact of
infection and bio-incompatible solutions. Adv Ren Replace Ther
1998;5:179-84.
Apesar de representar o principal vetor no desenvolvimento de soluções biocompatíveis
para DP, a manutenção da integridade da membrana peritoneal em pacientes em diálise
peritoneal de longa duração ainda é um objetivo não alcançado. A exposição contínua
da membrana peritoneal a soluções ácidas parece ser um importante fator de risco para
alterações estruturais e funcionais. Estudos de biópsia peritoneal revelaram perda de
células mesoteliais, pequenas alterações vasculares e espessamento e fibrose na zona
compacta da camada submesotelial.22. Williams JD, Craig KJ, von Ruhland C, Topley N, Williams GT; Biopsy
Registry Study Group. The natural course of peritoneal membrane biology during
peritoneal dialysis. Kidney Int Suppl 2003:S43-9. DOI:
http://dx.doi.org/10.1046/j.1523-1755.2003.08805.x
http://dx.doi.org/10.1046/j.1523-1755.20...
Alterações
funcionais incluíram perda de ultrafiltração e redução da depuração de solutos
pequenos, além de falhas técnicas.33. Williams JD, Topley N, Craig KJ, Mackenzie RK, Pischetsrieder M, Lage
C, et al.; Euro Balance Trial Group. The Euro-Balance Trial: the effect of a new
biocompatible peritoneal dialysis fluid (balance) on the peritoneal membrane. Kidney
Int 2004;66:408-18. DOI:
http://dx.doi.org/10.1111/j.1523-1755.2004.00747.x
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A
utilização de soluções de diálise biocompatíveis é fundamental para a sobrevida de
longo prazo da membrana.44. Mackenzie R, Holmes CJ, Jones S, Williams JD, Topley N. Clinical
indices of in vivo biocompatibility: the role of ex vivo cell function studies and
effluent markers in peritoneal dialysis patients. Kidney Int Suppl 2003:S84-93. PMID:
14870881 DOI: http://dx.doi.org/10.1046/j.1523-1755.2003.08809.x
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Uma solução de
diálise com pH neutro e baixo nível de GDP apresentada em bolsa de câmara dupla foi
desenvolvida com vistas à melhora no nível de biocompatibilidade.33. Williams JD, Topley N, Craig KJ, Mackenzie RK, Pischetsrieder M, Lage
C, et al.; Euro Balance Trial Group. The Euro-Balance Trial: the effect of a new
biocompatible peritoneal dialysis fluid (balance) on the peritoneal membrane. Kidney
Int 2004;66:408-18. DOI:
http://dx.doi.org/10.1111/j.1523-1755.2004.00747.x
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Estudos clínicos e experimentais anteriores
indicaram seus efeitos benéficos.33. Williams JD, Topley N, Craig KJ, Mackenzie RK, Pischetsrieder M, Lage
C, et al.; Euro Balance Trial Group. The Euro-Balance Trial: the effect of a new
biocompatible peritoneal dialysis fluid (balance) on the peritoneal membrane. Kidney
Int 2004;66:408-18. DOI:
http://dx.doi.org/10.1111/j.1523-1755.2004.00747.x
http://dx.doi.org/10.1111/j.1523-1755.20...
,55. Lage C, Pischetsrieder M, Aufricht C, Jörres A, Schilling H,
Passlick-Deetjen J. First in vitro and in vivo experiences with Stay-Safe Balance, a
pH-neutral solution in a dual-chambered bag. Perit Dial Int
2000;20:S28-32,66. Lee HY, Park HC, Seo BJ, Do JY, Yun SR, Song HY, et al. Superior
patient survival for continuous ambulatory peritoneal dialysis patients treated with
a peritoneal dialysis fluid with neutral pH and low glucose degradation product
concentration (Balance). Perit Dial Int 2005;25:248-55. O objetivo do presente estudo foi comparar a
viabilidade de fibroblastos de camundongos NIH-3T3 - uma linhagem celular bem
caracterizada - após exposição a ácido padrão e à solução de diálise com pH
neutro.
Métodos
Culturas de fibroblastos de camundongos NIH-3T3 foram colocadas em meio contendo a solução convencional de DP (Controle) ou fluido de DP com pH neutro. Todas as concentrações de glicose comercialmente disponíveis (1,5%; 2,3%; 4,25%) foram testadas.
Soluções para diálise
Ambas as soluções tinham glicose como agente osmótico. Peritosteril® (Fresenius Medical Care, Jaguariúna, Brasil) foi usada como solução de controle e Balance® (Fresenius Medical Care, Bad Homburg, Alemanha) como solução de pH neutro, fornecida em bolsa de câmara dupla. A composição de ambas as soluções de diálise é apresentada na Tabela 1. A bolsa de Balance® com glicose a 1,5% contém uma câmara alcalina com lactato de sódio (sódio: 75 mmol/L; lactato: 70 mmol/L) e uma segunda câmara com fluido ácido contendo eletrólitos e glicose (sódio: 193 mmol/L; cálcio: 3,5 mmol/L; magnésio: 1 mmol/L; cloro: 203 mmol/L; glicose: 166,5 mmol/L). A solução Balance® vem pronta para uso, bastando abrir o selo entre as duas câmaras e misturar e os seus conteúdos, resultando em fluido com pH na faixa de 6,8 a 7,4. Por sua vez, a solução Peritosteril® tem pH de 5,5. As bolsas de Peritosteril® e Balance® foram fornecidas pela Fresenius Medical Care.
Culturas celulares
A linhagem celular de fibroblastos de camundongos NIH-3T3 (American Type Culture
Collection CRL-1658, Manassas, VA, EUA) foi cultivada em frascos de 25 ml contendo
Meio Eagle Modificado por Dulbecco (DMEM), gentamicina a 0,025 g/L e
estreptomicina/penicilina a 0,1 g/L suplementado com 10% de soro fetal bovino
(SFB) (Gibco, Grand Island, NY, EUA). As incubações foram realizadas em atmosfera
úmida a 37 ºC e 5% de CO2. Todos os procedimentos foram realizados em
capela de fluxo laminar, observando-se técnicas assépticas para minimizar o risco
de contaminação microbiana. O crescimento de fibroblastos em cultura ocorreu em
monocamada aderente. As células foram lavadas com solução tampão fosfato-salino
(PBS) (Gibco, Grand Island, NY, EUA) e digeridas com solução tripsina-EDTA a 0,05%
(Gibco, Grand Island, NY, EUA). SFB foi utilizado para inativar a ação da
tripsina. A contagem celular foi realizada numa câmara de Neubauer. As células
foram semeadas em DMEM em placas de cultura de tecidos de 96 poços a uma densidade
de 0,5 x 1044. Mackenzie R, Holmes CJ, Jones S, Williams JD, Topley N. Clinical
indices of in vivo biocompatibility: the role of ex vivo cell function studies and
effluent markers in peritoneal dialysis patients. Kidney Int Suppl 2003:S84-93. PMID:
14870881 DOI: http://dx.doi.org/10.1046/j.1523-1755.2003.08809.x
http://dx.doi.org/10.1046/j.1523-1755.20...
células/poço e deixadas em
cultura por 24 horas. Após este prazo, 50 µL das soluções de teste (controle/DMEM
ou solução de pH neutro/DMEM) foram adicionados a cada poço, seguido de um tempo
de incubação de 48 horas. Os testes foram realizados em triplicata, misturando as
duas soluções de DP com DMEM em proporção de 1:1 com diferentes concentrações de
glicose. A proporção 1:1 para as soluções de DP e meio de cultura e o tempo de
incubação de 48 horas foram definidos depois de uma série de testes-piloto em que
a proliferação celular foi avaliada em soluções de diferentes proporções de
soluções de teste e meio de cultura (25%, 50%, 75% e 100% de fluido de diálise
peritoneal) por diferentes tempos de incubação (24, 48 e 72 horas). O crescimento
de fibroblastos foi deficiente em todos os tempos de incubação na presença de
soluções de DP a 75% ou 100%. Os poços de controle (DMEM 100%) com melhor
viabilidade celular foram obtidos no tempo de incubação de 48 horas.
Ensaio de viabilidade celular com MTT
A viabilidade celular foi avaliada com brometo de 3-(4,5-dimetiliazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio] (MTT) (Sigma, Saint Louis, MO, EUA). Após incubação por 48 horas, a solução DP/DMEM foi removida de todos os poços e as células foram lavadas com PBS (100 µL). DMEM com 10% de solução de MTT a 5 mg/ml (50 µL/poço) foi adicionada por mais um período de incubação de quatro horas. Em seguida, o MTT foi retirado e dimetilsulfóxido (DMSO; 100 µL; Sigma Co) adicionado. A conversão do produto do MTT - uma estimativa da viabilidade celular - foi medida por densidade óptica (DO) a 570 nm através de um espectrofotômetro equipado com um leitor de microplacas (Bio-Rad, Hercules, CA, EUA). A DO para o controle negativo (apenas DMEM) representou 100% de viabilidade celular. Todas as experiências foram repetidas três vezes e as análises das amostras foram realizadas em triplicata.
Análise estatística
As variáveis são apresentadas na forma de média e desvio padrão (DP). Foi utilizado o teste t de Student para comparar duas variáveis contínuas; normalidade foi testada pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. ANOVA, com teste ad hoc de Bonferroni, foi utilizada nas comparações múltiplas. As diferenças foram consideradas significativas para valores de p de 0,05 ou menos. O software Statistical Package for the Social Sciences s100 µL (SPSS, versão 17 para Windows, SPSS Inc, Chicago, IL, EUA) foi utilizado em todas as análises estatísticas.
Resultados
A viabilidade celular após exposição às soluções padrão (Controle) e de pH neutro com diferentes concentrações de glicose é ilustrada na Figura 1. A viabilidade celular foi significativamente maior em pH neutro do que em meio ácido, em todas as concentrações de glicose testadas, medida por densidade óptica (em nm): 0,295 ± 0,047 vs. 0,372 ± 0,042, p < 0,001 para glicose a 1,5% controle e pH neutro, respectivamente; 0,270 ± 0,036 vs. 0,337 ± 0,051, p < 0,001 para glicose a 2,3% controle e pH neutro, respectivamente; 0,284 ± 0,037 vs. 0,332 ± 0,032, p < 0,001 para glicose a 4,25% controle e pH neutro, respectivamente. Não foram observadas diferenças significativas de viabilidade celular entre as soluções de controle nas três concentrações de glicose (ANOVA para medidas repetidas: p = 0,218). No entanto, a viabilidade celular na solução com pH neutro foi maior após exposição a concentrações de glicose a 1,5% do que 2,3% ou 4,25% [ANOVA com Bonferroni post hoc: p = 0,033 (1,5% vs 2,3%); p = 0,014 (1,5% vs. 4,25%); p = 1,00 (2,3% versus 4,25%)].
Viabilidade dos fibroblastos após exposição a soluções ácida e de pH neutro em diferentes concentrações de glicose
Discussão
O presente experimento revelou que a viabilidade celular foi maior quando os
fibroblastos foram expostos in vitro à solução com pH neutro do que
à solução padrão para DP. Evidenciou-se, ainda, maior viabilidade das células
expostas à solução de pH neutro com glicose a 1,5% do que a 2,3% ou 4,25%. O
significado destes resultados ainda não é claro, mas é razoável supor que um pH
neutro e menos produtos de degradação da glicose sejam melhores para a viabilidade
celular e que tal efeito pode ser amplificado em concentrações mais baixas de
glicose. A melhor viabilidade celular na solução de pH neutro não significa que a
mesma não seja tóxica ou que não induza fibrose. Fibroblastos foram usados como
modelo experimental.77. Wieslander AP, Nordin MK, Kjellstrand PT, Boberg UC. Toxicity of
peritoneal dialysis fluids on cultured fibroblasts, L-929. Kidney Int 1991;40:779.
DOI: http://dx.doi.org/10.1038/ki.1991.182
http://dx.doi.org/10.1038/ki.1991.182...
8. Witowski J, Jörres A. Peritoneal cell culture: fibroblasts. Perit
Dial Int 2006;26:292-9. PMID: 16722018-99. Ogata S, Naito T, Yorioka N, Kiribayashi K, Kuratsune M, Kohno M.
Effect of lactate and bicarbonate on human peritoneal mesothelial cells, fibroblasts
and vascular endothelial cells, and the role of basic fibroblast growth factor.
Nephrol Dial Transplant 2004;19:2831-7. DOI:
http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfh478
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Seria desejável avaliar os efeitos de tal
exposição em outros modelos celulares ou animais.1010. Fernández-Perpén A, Pérez-Lozano ML, Bajo MA, Albar-Vizcaino P,
Sandoval Correa P, del Peso G, at al. Influence of bicarbonate/low-GDP peritoneal
dialysis fluid (BicaVera) on in vitro and ex vivo epithelial-to-mesenchymal
transition of mesothelial cells. Perit Dial Int 2012;32:292-304. DOI:
http://dx.doi.org/10.3747/pdi.2010.00315
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,1111. Leung JC, Chan LY, Tam KY, Tang SC, Lam MF, Cheng AS, et al.
Regulation of CCN2/CTGF and related cytokines in cultured peritoneal cells under
conditions simulating peritoneal dialysis. Nephrol Dial Transplant 2009;24:458-69.
DOI: http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfn524
http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfn524...
O uso in
vivo da solução de diálise com pH neutro resultou em melhoria nos
marcadores de ultrafiltração peritoneal e integridade da membrana peritoneal.33. Williams JD, Topley N, Craig KJ, Mackenzie RK, Pischetsrieder M, Lage
C, et al.; Euro Balance Trial Group. The Euro-Balance Trial: the effect of a new
biocompatible peritoneal dialysis fluid (balance) on the peritoneal membrane. Kidney
Int 2004;66:408-18. DOI:
http://dx.doi.org/10.1111/j.1523-1755.2004.00747.x
http://dx.doi.org/10.1111/j.1523-1755.20...
,1212. Choi HY, Kim DK, Lee TH, Moon SJ, Han SH, Lee JE, et al. The
clinical usefulness of peritoneal dialysis fluids with neutral pH and low glucose
degradation product concentration: an open randomized prospective trial. Perit Dial
Int 2008;28:174-82. Melhorias também foram observadas na viabilidade e proliferação de
células mesoteliais.1313. Witowski J, Korybalska K, Ksiazek K, Wisniewska-Elnur J, Jörres A,
Lage C, et al. Peritoneal dialysis with solutions low in glucose degradation products
is associated with improved biocompatibility profile towards peritoneal mesothelial
cells. Nephrol Dial Transplant 2004;19:917-24. DOI:
http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfh013
http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfh013...
A viabilidade celular foi avaliada através de ensaio colorimétrico com brometo de
3-(4,5-dimetiliazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio] (MTT). Seu uso permite aferir
citotoxicidade, proliferação celular e ativação celular. O ensaio é baseado em
desidrogenases mitocondriais de células viáveis para transformar o MTT em azul de
formazano insolúvel em água. O método de ensaio é barato, não é demorado, e permite a
utilização de espectrofotometria de varredura multiwall.1414. Gerlier D, Thomasset N. Use of MTT colorimetric assay to measure
cell activation. J Immunol Methods 1986;94:57-63. DOI:
http://dx.doi.org/10.1016/0022-1759(86)90215-2
http://dx.doi.org/10.1016/0022-1759(86)9...
Fibroblastos também já foram utilizados em
estudo anterior, em que não foram identificadas diferenças na proliferação celular
com incubação em solução de diálise glicose contendo icodextrina ou solução
padrão.1515. Cooker LA, Choo CG, Luneburg P, Lamela J, Holmes CJ. Effect of
icodextrin peritoneal dialysis solution on cell proliferation in vitro. Adv Perit
Dial 1999;15:17-20. O estudo foi realizado em
soluções com pH ajustado misturadas com meio de cultura, uma grande diferença em
relação ao presente trabalho, em que a diferença do pH das soluções de teste foi a
principal característica avaliada. Curiosamente, a solução de glicose a 4,25%
esterilizada por calor causou redução significativa no crescimento celular in
vitro, em comparação com a solução esterilizada por filtração,
supostamente por conta do aumento da nível de GDP.1515. Cooker LA, Choo CG, Luneburg P, Lamela J, Holmes CJ. Effect of
icodextrin peritoneal dialysis solution on cell proliferation in vitro. Adv Perit
Dial 1999;15:17-20. A ocorrência de GDP e baixo pH parece ser um fator importante
relacionado à biocompatibilidade das soluções de DP. GDP tem sido associado à
formação de produtos de glicação avançada (AGEs) ocorrida durante o processo de
esterilização por calor. A presença de AGEs tem sido associada à redução do
crescimento in vitro de células mesoteliais.1616. Breborowicz A, Witowski J, Polubinska A, Pyda M, Oreopoulos D.
L-2-oxothiazolidine-4-carboxylic acid reduces in vitro cytotoxicity of glucose
degradation products. Nephrol Dial Transplant 2004;19:3005-11. DOI:
http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfh539
http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfh539...
Foi anteriormente demonstrado que as células expostas
in vitro a concentrações mais baixas de glicose (1,5% ou 2,27%)
crescem melhor do que em concentrações mais elevadas (3,86%).1717. Cooker LA, Luneburg P, Faict D, Choo C, Holmes CJ. Reduced glucose
degradation products in bicarbonate/lactate-buffered peritoneal dialysis solutions
produced in two-chambered bags. Perit Dial Int 1997;17:373-8. Estes resultados estão em concordância com os resultados do
presente estudo, o que sugere que os GDP inibem significativamente o crescimento
celular in vitro (17), podendo estar relacionados a consequências
clínicas.1818. Yokoi H, Kasahara M, Mori K, Ogawa Y, Kuwabara T, Imamaki H, et al.
Pleiotrophin triggers inflammation and increased peritoneal permeability leading to
peritoneal fibrosis. Kidney Int 2012;81:160-9. PMID: 21881556 DOI:
http://dx.doi.org/10.1038/ki.2011.305
http://dx.doi.org/10.1038/ki.2011.305...
,1919. González-Mateo GT, Aroeira LS, López-Cabrera M, Ruiz-Ortega M, Ortiz
A, Selgas R. Pharmacological modulation of peritoneal injury induced by dialysis
fluids: is it an option? Nephrol Dial Transplant 2012;27:478-81. A solução de diálise peritoneal com pH neutro
foi concebida como uma bolsa de duas câmaras, uma contendo o componente alcalino com
lactato e outra com eletrólitos e glicose. Tal abordagem permite um pH mais elevado e
esterilização com formação reduzida de GDP. Os fluidos dos dois compartimentos são
misturados imediatamente antes da infusão, através da ruptura do selo entre as
câmaras.
Em conclusão, a viabilidade dos fibroblastos foi mais elevada na solução de diálise com pH neutro, especialmente nas concentrações mais baixas de glicose. É possível que um pH mais fisiológico e níveis mais baixos de GDP estejam associados a tais resultados.
-
Bolsas de Peritosteril® e Balance® foram fornecidas pela Fresenius Medical Care.
Agradecimentos
As bolsas de Peritosteril® e Balance® foram fornecidas pela Fresenius Medical Care. O Laboratório de Nefrologia recebeu apoio da Fundação de Amparo à Pesquisa no Rio Grande do Sul (FAPERGS), Conselho Nacional de Pesquisa (CNPq), Coordenadoria de Aperfeiçoamento de Pessoal de Ensino Superior (CAPES) e Pontifícia Universidade Católica do Rio Grande do Sul (PUCRS). Poli-de-Figueiredo é pesquisador do CNPq.
References
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1Topley N. Membrane longevity in peritoneal dialysis: impact of infection and bio-incompatible solutions. Adv Ren Replace Ther 1998;5:179-84.
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2Williams JD, Craig KJ, von Ruhland C, Topley N, Williams GT; Biopsy Registry Study Group. The natural course of peritoneal membrane biology during peritoneal dialysis. Kidney Int Suppl 2003:S43-9. DOI: http://dx.doi.org/10.1046/j.1523-1755.2003.08805.x
» http://dx.doi.org/10.1046/j.1523-1755.2003.08805.x -
3Williams JD, Topley N, Craig KJ, Mackenzie RK, Pischetsrieder M, Lage C, et al.; Euro Balance Trial Group. The Euro-Balance Trial: the effect of a new biocompatible peritoneal dialysis fluid (balance) on the peritoneal membrane. Kidney Int 2004;66:408-18. DOI: http://dx.doi.org/10.1111/j.1523-1755.2004.00747.x
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4Mackenzie R, Holmes CJ, Jones S, Williams JD, Topley N. Clinical indices of in vivo biocompatibility: the role of ex vivo cell function studies and effluent markers in peritoneal dialysis patients. Kidney Int Suppl 2003:S84-93. PMID: 14870881 DOI: http://dx.doi.org/10.1046/j.1523-1755.2003.08809.x
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5Lage C, Pischetsrieder M, Aufricht C, Jörres A, Schilling H, Passlick-Deetjen J. First in vitro and in vivo experiences with Stay-Safe Balance, a pH-neutral solution in a dual-chambered bag. Perit Dial Int 2000;20:S28-32
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6Lee HY, Park HC, Seo BJ, Do JY, Yun SR, Song HY, et al. Superior patient survival for continuous ambulatory peritoneal dialysis patients treated with a peritoneal dialysis fluid with neutral pH and low glucose degradation product concentration (Balance). Perit Dial Int 2005;25:248-55.
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7Wieslander AP, Nordin MK, Kjellstrand PT, Boberg UC. Toxicity of peritoneal dialysis fluids on cultured fibroblasts, L-929. Kidney Int 1991;40:779. DOI: http://dx.doi.org/10.1038/ki.1991.182
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8Witowski J, Jörres A. Peritoneal cell culture: fibroblasts. Perit Dial Int 2006;26:292-9. PMID: 16722018
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9Ogata S, Naito T, Yorioka N, Kiribayashi K, Kuratsune M, Kohno M. Effect of lactate and bicarbonate on human peritoneal mesothelial cells, fibroblasts and vascular endothelial cells, and the role of basic fibroblast growth factor. Nephrol Dial Transplant 2004;19:2831-7. DOI: http://dx.doi.org/10.1093/ndt/gfh478
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Datas de Publicação
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Publicação nesta coleção
Apr-Jun 2014
Histórico
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Recebido
29 Mar 2012 -
Aceito
12 Out 2013