Efeito de diferentes protocolos de superovulação sobre a concentração plasmática de progesterona e de metabólitos lipídicos de vacas Nelore

Effect of different superovulation protocols on plasma progesterone concentration and lypidic metabolites in Nelore cows

MEDICINA VETERINÁRIA

Efeito de diferentes protocolos de superovulação sobre a concentração plasmática de progesterona e de metabólitos lipídicos de vacas Nelore

Effect of different superovulation protocols on plasma progesterone concentration and lypidic metabolites in Nelore cows

A.F. Ramos^{I, IV}; E.F. Neves^I; V.S. Marques^I; F.P.C. Lima^I; D.L. Drumond^II; A.P. Marques JrIII, ^*

^IAluno de pós-graduação - EV-UFMG

^IIMédico veterinário autônomo

^IIIEscola de Veterinária - UFMG Caixa Postal 567 30123-970 - Belo Horizonte, MG

^IVBolsista da CAPES

RESUMO

Avaliaram-se as concentrações plasmáticas de triglicérides, colesterol, aspartato transaminase (AST) e progesterona (P4) em vacas Nelore não lactantes com elevado escore corporal, superovuladas com diferentes protocolos. Foram utilizados três grupos de animais, G1 (n=11), G2 (n=8) e G3 (n=5), superovulados com 500UI de FSH, 200mg e 180mg de FSH (hormônio folículo estimulante), respectivamente, em doses decrescentes, duas vezes ao dia, durante quatro dias. As amostras de sangue foram coletadas antes da superovulação (A), no terceiro dia da superovulação (B), no momento da inseminação artificial (C) e na coleta dos embriões (D). As concentrações de triglicérides, AST e colesterol foram verificados por espectrofotometria, e a de progesterona (P4) por radioimunoensaio. Não houve alteração (P>0,05) na concentração de triglicérides, AST e colesterol entre as amostras. Não houve efeito (P>0,05) do protocolo de superovulação sobre a concentração de triglicérides, AST e P4 nas diferentes amostras. O G2 apresentou menor concentração de colesterol (P<0,05) nas amostras A e B, possivelmente em razão da grande instabilidade dessa variável.

Palavras-chave: vaca, Nelore, aspartato transaminase, colesterol, progesterona, superovulação, triglicéride

ABSTRACT

The purpose of this research was to evaluate the concentration of tryglicerides, cholesterol, aspartate transaminase (AST) and progesterone (P4) in embryo donor Nelore cows superovulated with different protocols. Twenty four donors were randomly distributed in three groups: group 1 (n=11), donors superovulated with 500UI of FSH and group 2 (n=8) and group 3 (n=5) respectively with 200mg and 180mg of FSH, in decreasing doses, twice a day, during four consecutive days. Blood samples were collected before superovulation (A), in the third day of superovulation (B), at the artificial insemination time (C) and at the embryo collection time (D). The concentrations of tryglicerides, aspartate transaminase (AST) and cholesterol were measured by spectrophotometry and progesterone (P4) by radioimmunoassay. There was no alteration (P<0.05) in the concentration of tryglicerides, AST and cholesterol among the samples. There was no effect (P>0.05) of the superovulation protocol on the concentration of tryglicerides, AST and P4 in the samples. In the samples A and B of group 2 the concentration of cholesterol was lower (P<0.05) than in groups 1 and 3, probably due to the instability of the parameter.

Keywords: cow, Nelore, aspartate transaminase, cholesterol, progesterone, superovulation, trygliceride

INTRODUÇÃO

As biotecnias reprodutivas têm sido utilizadas para acelerar a multiplicação de genes superiores, e o sucesso dos programas de transferência de embriões depende, em grande parte, da resposta à superovulação, seu fator limitante (Neves et al., 2005).

Estudos sobre o perfil metabólico e bioquímico do sangue de vacas tiveram início na década de 70, e seu uso possibilita entender as relações entre os componentes sangüíneos e eventos fisiológicos, bem como identificar rebanhos com problemas metabólicos que afetam direta ou indiretamente a fertilidade e a produtividade dos mesmos.

Constituintes bioquímicos do sangue, como colesterol, triglicérides e progesterona, podem interferir na eficiência reprodutiva do animal. O colesterol, um dos principais componentes estruturais da membrana plasmática das células dos mamíferos, é importante para o crescimento e a sobrevivência celular, além de ser o precursor dos hormônios esteróides. Os triglicérides, maiores componentes lipídicos do tecido adiposo, são constituídos por três ácidos graxos de cadeia longa esterificados a uma molécula de glicerol, com capacidade de aumentar a concentração plasmática de colesterol (Wathes et al., 1998). A progesterona, secretada principalmente pelo corpo lúteo e pela placenta, tem como principais funções inibir a secreção de gonadotropinas na fase luteal do ciclo estral e preparar o trato reprodutivo para a implantação embrionária e a manutenção da gestação, pelo estímulo secretório às glândulas uterinas e inibição da motilidade do miométrio (Hadley, 1996).

O objetivo deste experimento foi caracterizar o efeito de diferentes protocolos de superovulação sobre parâmetros bioquímicos do sangue em vacas Nelore com elevado escore corporal.

MATERIAL E MÉTODOS

O experimento consistiu na avaliação de parâmetros bioquímicos do sangue, incluindo triglicérides, aspartato transaminase, colesterol e progesterona, em doadoras de embrião da raça Nelore, não-lactantes, do início da superovulação até a coleta dos embriões. O experimento foi realizado nos meses de junho e julho, caracterizados por um período de seca.

Foram utilizadas 24 doadoras, com escore da condição corporal de 7 a 9 numa escala de 1 a 9 pontos, segundo Dias (1991). O grupo 1 (n=11) foi superovulado com 500UI de FSH¹, e os grupos 2 (n=8) e 3 (n=5) com 200 e 180mg de FSH², respectivamente. Os protocolos de superovulação foram feitos com administração de doses decrescentes de FSH, duas vezes ao dia, do dia 9 (dia 0 = dia do estro) até o dia 12 do ciclo estral, com aplicação de análogo de prostaglandina F2a³ nos dias 11 e 12 (Tab. 1).

As vacas foram mantidos em pastagem de Brachiaria brizanta, sem suplementação, recebendo água e sal mineral à vontade, e foram conduzidas ao curral dois dias antes do início do programa de superovulação, para avaliação e seleção daquelas consideradas aptas a serem superovuladas. O procedimento de seleção das doadoras, para entrar no programa de superovulação e coleta de embriões, foi realizado empiricamente por palpação transretal. Os animais que apresentavam corpo lúteo no momento da seleção (dia 7 do ciclo estral) foram submetidos à superovulação com início no dia nove do ciclo e subseqüente coleta dos embriões.

As amostras de sangue foram coletadas por venopunção jugular, antes do início da superovulação, para mensuração basal dos parâmetros (dia 9), no início do terceiro dia de superovulação (dia 11), por ocasião da primeira inseminação artificial (dia 13) e da coleta de embriões (dia 20). Para a coleta, foram utilizadas agulhas hipodérmicas⁴ 21g, tubos de 6ml com vácuo, contendo EDTA fluoretado e tubos de 8ml com gel separador, ambos comerciais⁵. Após a coleta, o sangue foi centrifugado⁶ a 4000g, durante cinco minutos. O plasma e o soro, acondicionados em tubos eppendorf de 1,5ml e com três alíquotas de cada, foram estocados e congelados a –20°C até análise de seus parâmetros metabólicos e hormonais.

Os parâmetros bioquímicos, consistindo de triglicérides, aspartato transaminase e colesterol, foram determinados com o uso de kits comerciais⁷, segundo os protocolos recomendados pelo fabricante. Todas as leituras colorimétricas foram feitas em aparelho de espectrofotometria⁸, com comprimento de onda, para cada um dos parâmetros, sugerido pelo fabricante do kit comercial utilizado. Nos testes enzimáticos, para a estabilização da temperatura do complexo reagente-amostras, foi utilizado um banho-maria⁹. A análise de progesterona foi realizada através de radioimunoensaio utilizando kits comerciais¹⁰.

A metodologia estatística utilizada foi análise de variância e teste de Duncan, com auxílio do programa estatístico SAEG (Sistema..., 1995). Os resultados referentes à concentração de progesterona não apresentaram distribuição normal e sofreram transformação logarítmica.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

O valor médio para a concentração sérica de colesterol foi de 137,80±52,06mg/dl, superior ao considerado fisiologicamente normal para vacas mestiças superovuladas (Borges et al., 2001) e vacas Nelore e Gir (Ruas, 1998; Borges et al., 2001). A concentração média de colesterol não variou do início da superovulação até a coleta dos embriões, seja para os diferentes grupos como para a totalidade dos animais (Tab. 2). Os resultados sinalizam que, para este parâmetro, parece não haver efeito da superovulação sobre o metabolismo do animal. No entanto, o grupo tratado com 200mg de FSH apresentou menor concentração de colesterol (P<0,05) antes da superovulação e por ocasião da inseminação artificial em relação aos grupos tratados com 500UI de FSH e 180mg de FSH, possivelmente devido à instabilidade da variável estudada.

Guédon et al. (1999) sugeriram que a alta concentração de colesterol sangüíneo pode estar associada à melhor atividade ovariana em vacas no pós-parto, condição que não se aplica a este experimento, já que nenhum animal apresentava-se nessa condição fisiológica. Não é possível definir se a concentração de colesterol alta, encontrada neste experimento, poderia estar favorecendo a esteroidogênese e melhorando a atividade ovariana ou se ela atingiu valores acima do tolerável, passando a ser prejudicial à atividade reprodutiva. O colesterol, através das lipoproteínas HDL e LDL, é a principal fonte para a esteroidogênese e, segundo Williams et al. (1989), pode influenciar o corpo lúteo a secretar progesterona, hormônio importante na preparação do ambiente uterino para a gestação (Hadley, 1996).

O valor médio encontrado para triglicérides, obtido da totalidade dos animais e das amostras coletadas, foi de 48,38±14,69mg/dl, valor acima do considerado normal para bovinos leiteiros durante o pré e o pós-parto (Marcos et al., 1990; Castillo, 1994; Zambrano, 2003) e próximo ao limite máximo sugerido por Rosemberger (1979). Os valores médios obtidos nos diferentes grupos reduziram, embora não apresentando significância, de antes do início da superovulação até a primeira inseminação artificial, com subseqüente estabilização até o momento da coleta dos embriões. Quando considerada a totalidade dos animais, as concentrações de triglicérides foram semelhantes às encontradas nos diferentes grupos, porém, apresentando significância, possivelmente por contemplar um número de animais (n=24) maior que cada grupo tratado com 500UI de FSH (n=11), 200mg (n=8) e 180mg de FSH (n=5). Não houve diferença entre os grupos (P>0,05) dentro de uma mesma amostra, para as concentrações de triglicérides, o que sinaliza não haver efeito do protocolo de superovulação utilizado sobre a concentração sangüínea desse parâmetro (Tab. 3).

A concentração sérica de triglicérides, superior à encontrada na literatura para bovinos de leite durante o pré e o pós-parto, aparentemente deve-se ao fato de os animais estarem apresentando balanço energético negativo, por estarem sendo alimentados durante o período de seca apenas com pastagem de Brachiaria brizanta e, apesar do escore corporal alto, podem ter equilibrado seu aporte energético pela mobilização de reservas corporais, primariamente do tecido adiposo, gerando um acúmulo de triglicérides na corrente circulatória (Zambrano, 2003). Segundo Butler (2000), esses eventos podem estar associados com a redução da fertilidade pela diminuição da freqüência dos picos de LH (Canfield e Butler, 1990), presença de pequenos folículos dominantes (Murphy et al, 1991), ciclo estral com mais de três ondas foliculares e redução na produção de progesterona (Mann et al., 1996), características que não foram avaliadas neste experimento, por se tratar de um programa comercial no qual não foi permitido fazer modificações nos protocolos de rotina.

Wathes et al. (1998) afirmaram que o aumento da concentração sérica de ácidos graxos está associado à elevação da concentração plasmática de colesterol. O número e o tamanho dos folículos, segundo Lucy et al. (1992), podem ser aumentados em animais que apresentam concentração de colesterol sangüíneo mais alta, sugerindo que o aumento da concentração de ácidos graxos pode ter efeito positivo na reprodução. Não está claro, com base na literatura consultada, se a elevação verificada na concentração de triglicérides nas doadoras poderia estar favorecendo ou não a resposta superovulatória.

A redução da concentração de triglicérides, antes do início da superovulação até a inseminação artificial, contrapõe-se ao encontrado por Vásquez-Añon (1996), que cita estar o processo de lipólise regulado pela concentração de glucocorticóides, catecolaminas, hormônio do crescimento, 17ß-estradiol e insulina. Assim, para animais superovulados, que apresentam concentração elevada de 17ß-estradiol no dia do estro (Sugano et al., 2001), não foi encontrada uma explicação plausível para a diminuição dos triglicérides por ocasião do estro, pois durante, o mesmo há expectativa de menor ingestão de alimento e, portanto, possibilidade de aumento da lipólise com conseqüente elevação da concentração de ácidos graxos.

Os valores encontrados para a concentração de progesterona no início da superovulação, no terceiro dia da superovulação e na inseminação artificial encontram-se dentro dos mencionados na literatura consultada, para vacas superovuladas, durante o ciclo estral e no pré e pós-parto (Borges, 2001; Mondal e Prakash, 2003). A concentração de progesterona por ocasião da coleta dos embriões foi inferior à encontrada por Sugano et al. (2001), possivelmente devido à baixa resposta das doadoras à superovulação, principalmente nos animais pertencentes ao grupo tratado com 200mg de FSH. A concentração de progesterona teve um pequeno aumento, antes do início da superovulação até o terceiro dia da mesma, devido ao desenvolvimento e à maturação do corpo lúteo (Mapletoft et al., 2000). A redução encontrada para progesterona, do terceiro dia da superovulação até a inseminação artificial, decorre da ação do análogo de PGF2a utilizado, que causa luteólise e, com isso, possibilita a manifestação clínica de estro pelo animal (Milvae et al., 1996). O aumento encontrado para a progesterona, do momento da inseminação até a coleta dos embriões, pode ser atribuído à múltipla ovulação, em decorrência da administração do FSH, com formação de maior número de corpos lúteos e, com isso, aumento da secreção de progesterona (Tab. 4).

A elevação da concentração de progesterona após a ovulação é importante para o desenvolvimento embrionário, e a demora no aumento da secreção de progesterona está associada à redução da fertilidade (Mann et al., 1996). Animais que apresentam maior concentração de progesterona antes e depois da ovulação possuem maior taxa de gestação (Butler et al., 1996). Ashworth et al. (1989) sugeriram efeito da progesterona na modificação da maturação folicular e na qualidade do oócito, enquanto Lozano et al. (1998) consideraram também seu efeito sobre o ambiente uterino. Essas informações aparentemente não estão associadas à resposta superovulatória obtida neste experimento, pois foi verificada elevação da concentração de progesterona por ocasião da coleta dos embriões, principalmente nos animais que apresentaram boa resposta à superovulação.

Os valores encontrados para a concentração de aspartato transaminase (AST), do início da superovulação até a coleta dos embriões, foram inferiores aos encontrados por Doornenbal et al. (1988) para bovinos de corte da raça Brahman, mas dentro dos limites estabelecidos por Rosenberger (1979) (Tab. 5).

A não-alteração da concentração de AST, de antes do início da superovulação até a coleta dos embriões e entre os tratamentos com diferentes protocolos, indica que a superovulação não interferiu na atividade hepática, não sendo esta, aparentemente, a causa da variação na concentração de triglicérides por modificação em sua via metabólica (Lehninger et al., 1995).

CONCLUSÃO

O tratamento com 500UI de FSH e 200 e 180mg de FSH não alterou o metabolismo de vacas Nelore doadoras de embrião e com escore corporal alto, refletido na concentração de colesterol, triglicérides, AST e progesterona, do início da superovulação até a coleta dos embriões.

AGRADECIMENTOS

Os autores agradecem a Cauêmbrio pela oportunidade de realização deste trabalho, a Quibasa pela doação de kits comerciais para análises bioquímicas e ao laboratório Betlab pela realização das análises de progesterona.

Recebido em 24 de setembro de 2006

Aceito em 21 de dezembro de 2006

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2

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6

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Bioclin, Química Básica Ltda (Quibasa)

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9

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10

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  03 Jul 2007
• Data do Fascículo
  Abr 2007

Histórico

• Aceito
  21 Dez 2006
• Recebido
  24 Set 2006