Constituintes químicos das folhas e do caule de Coccoloba mollisCasaretto (Polygonaceae)

Chemical constituents from leaves and stem of Coccoloba mollis Casaretto (Polygonaceae)

ARTIGO

Constituintes químicos das folhas e do caule de Coccoloba mollisCasaretto (Polygonaceae)

Chemical constituents from leaves and stem of Coccoloba mollis Casaretto (Polygonaceae)

Patrícia Emanuella S. Oliveira^I; Wagner S. dos Santos^I; Lucia M. Conserva^{I, *}; Rosangela P. de Lyra Lemos^II

^IInstituto de Química e Biotecnologia, Universidade Federal de Alagoas, 57072-970 Maceió-AL, Brasil

^IIInstituto do Meio Ambiente do Estado de Alagoas, 57017-320 Maceió-AL, Brasil

RESUMO

O estudo químico das frações neutra em hexano das folhas e em diclorometano do caule de Coccoloba mollis resultou no isolamento de um triterpeno pentacíclico (simiarenol), que pela primeira vez ocorre em Polygonaceae, dois fitoesteróides (sitostenona e sitosterol), um diterpeno (trans-fitol) e de um benzenóide (ácido vanílico) que está sendo descrito pela vez neste gênero. A identificação estrutural destes compostos foi feita com base na análise dos dados espectrais (IV, EM e RMN, incluindo DEPT e HMQC), bem como pela comparação com dados descritos na literatura.

Unitermos:Coccoloba mollis, Polygonaceae, triterpeno, benzenóide, fitoesteróides, diterpeno.

ABSTRACT

This work describes the isolation of a pentacyclic triterpene (simiarenol), described for the first time in this family, two phytosteroids (sitostenone and sitosterol), a diterpene (trans-phytol) and a benzenoid (vanillic acid), described for the first time in this genus, from leaves and stem of Coccoloba mollis. These compounds were identified on basis of their spectral data (IR, MS and NMR, including DEPT and HMQC), as well as by comparison with literature data.

Keywords: Coccoloba mollis, Polygonaceae, triterpene, benzenoid, phytosteroids, diterpene.

INTRODUÇÃO

A família Polygonaceae, única representante da ordem Polygonales (Barroso, 1978), compreende cerca de 40 gêneros, com mais de 800 espécies distribuídas nas regiões tropicais, temperadas e subtropicais. No Brasil, sete desses gêneros têm ocorrência espontânea, sendo Coccoloba o mais representativo (Melo, 2000). Algumas espécies desta família são cultivadas para ornamentação ou como fontes forrageiras (Melo, 1999) e muitas são utilizadas como medicinais (Jácome et al., 2004; Falcão et al., 2005; Barbosa-Filho et al., 2006a,b; Cardoso et al., 2006; Agra et al., 2007; Agra et al., 2008; Barbosa-Filho et al., 2008).

O gênero Coccoloba consiste de cerca de 400 espécies de distribuição neotropical, das quais 45 ocorrem no Brasil. Possui grande interesse florístico, uma vez que suas espécies ocorrem em diferentes formações vegetais, sendo algumas indicadas como possíveis marcadores fitogeográficos (Melo, 2004). Muitas dessas espécies são úteis do ponto de vista etnomedicinal. Dentre as quais estão as raízes de C. uvifera L. em anemia após o parto (Morton, 1977) e as cascas e as folhas em úlceras, erupção da pele e como digestivas (Coe & Anderson, 1996), as folhas de C. barbadensis Jacq. para problemas renais (Zamora-Martinez & Pola, 1992) e as cascas de C. diversifolia Jacq. como analgésica e os frutos como antidiarréico (Halberstein & Saunders, 1978). Por sua vez, os ensaios biológicos até então efetuados revelaram ação antifúngica em C. acrosticoides (Cota et al., 2003) e C. dugandiana A.C. Smith (Li et al., 1999), antimalárica em C. pubescens L. (Antoun et al., 1993), antibacteriana em C. acrosticoides Cham. (Cota et al., 2003), C. cozumelensis Hemsl. (Perez et al., 2001) e C. uvifera (Frisbey et al., 1953), antimutagênica em C. densifrons Mart. (Wall et al., 1988), inibitória da topoisomerase II em C. hondurensis Lundell. (Wall et al., 1996), moluscicida em C. cordifolia Meisn. (Sousa & Rouquayrol, 1974) e aleloquímica em C. uvifera (Keiser et al., 1975). Em relação ao perfil químico do gênero Coccoloba, as espécies até então investigadas estão representadas por flavonóides (Compagnone et al., 1995; Xing-Cong et al., 1999), terpenóides (Dan & Dan, 1986; Cota et al., 2003), benzenóide (Xing-Cong et al., 1999) e ácidos carboxílicos e ésteres (Shaw et al., 1992).

A espécie Coccoloba mollis (sin. C. polystachya Weddel), conhecida como "folha-de-bôlo" e "falso-novateiro" (Lorenzi, 1998), ocorre nas Américas Central e do Sul. No Brasil, distribui-se em todas as regiões (Melo, 2004), sendo recomendada para a composição de reflorestamentos mistos destinados à recuperação vegetal em áreas degradadas (Lorenzi, 1998). No estado do Paraná, Brasil, esta espécie é usada como modulador de memória e energético (Barros et al., 2007) e, com o nome de "Erva da memória", em formulações fitoterápicas para estresse, insônia, anemias, queda de visão e impotência sexual (Ferreira et al., 2006). Os estudos químicos referentes a esta espécie relatam à ocorrência nas folhas de hidrocarbonetos (C₁₆ a C₃₁, exceto C₁₇) e de um triterpeno (3-taraxenona) (Ferreira et al., 2006) e de antraquinonas (fissiona e emodina) nas raízes (Barros et al., 2007). O presente trabalho relata a primeira ocorrência de um triterpeno pentacíclico na família Polygonaceae (1), um diterpeno (2), dois fitoesteróides (3-4) e de um benzenóide (5) nas folhas e caule desta espécie (Figura 1).

MATERIAL E MÉTODOS

Métodos gerais

As cromatografias em coluna foram efetuadas em gel de sílica 60 G (70-230 e 230-400 mesh, Merck), 60 H (Merck) e em Sephadex LH-20 (Pharmacia), enquanto que nas cromatografias em camada delgada analítica e preparativa (0,25 e 0,75 mm de espessura, respectivamente) utilizou-se gel de sílica 60 PF₂₅₄ (Merck). Os espectros IV foram registrados em pastilhas de KBr utilizando espectrofotômetro Perkin-Elmer, FT-IR 1750, contendo 1% da amostra. Os espectros de RMN (¹H: 200 e 500 MHz; ¹³C: 50 e 125 MHz) foram obtidos em espectrômetros Varian Mercury-200 e DRX-500, respectivamente. O sinal residual do solvente ou o TMS foram utilizados como referência interna. O espectro de massas foi registrado em um cromatográfo líquido acoplado a um espectrômetro de massas (LC-EM) da Shimadzu operando no modo positivo por ionização química à pressão atmosférica (APCI).

Material vegetal

As folhas e o caule de Coccoloba mollis Casar foram coletados em março de 2003, no município de São Miguel dos Campos, Alagoas, Brasil. A identificação botânica da espécie foi efetuada por Rosângela Pereira de Lyra Lemos do Instituto do Meio Ambiente do Estado de Alagoas, onde a exsicata do material herborizado foi depositada (MAC-17.274).

Extração e isolamento dos constituintes químicos

As folhas (643 g) e o caule (5750 g), após secagem à temperatura ambiente e trituração, foram individualmente macerados com acetona e/ou etanol 90 %. Os extratos brutos obtidos, após concentração das soluções em evaporador rotatório [folhas: acetona (8,33 g), EtOH (7,38 g); caule: EtOH (114,0 g)], foram suspensos em solução MeOH-H₂O (3:2) e extraídos sucessivamente com C₆H₁₄, CH₂Cl₂ e AcOEt. O extrato em C₆H₁₄ (5,35 g), oriundo da partição do extrato em acetona das folhas, foi tratado sob agitação durante 2 horas com NaOH a 2% e extraído com C₆H₁₄. Após eliminação do solvente em evaporador rotatório obteve-se a fração neutra em C₆H₁₄ (3,98 g). Esta fração, após sucessivos fracionamentos cromatográficos em gel de sílica (230-400 mesh e 60 H), utilizando misturas de C₆H₁₄-AcOEt em gradiente crescente de polaridade como eluentes, sucessivas recristalizações com MeOH e CCD preparativa [sílica gel, C₆H₁₄-AcOEt (97:3) contendo gotas de MeOH] conduziu ao isolamento de simiarenol (1, 115 mg), trans-fitol (2, 56 mg), sitostenona (3, 63 mg) e sitosterol (4, 64 mg).

O extrato em CH₂Cl₂ (7,28 g), proveniente da partição do extrato em EtOH do caule, foi filtrado em gel de sílica (70-230 mesh), utilizando solventes de diferentes polaridades: C₆H₁₄ (0,12 g), C₆H₁₄-CH₂Cl₂ 1:1 (0,33 g), CH₂Cl₂ (0,84 g), CH₂Cl₂-AcOEt 1:1 (1,96 g), AcOEt (0,46 g) e MeOH (2,42 g). A subfração em CH₂Cl₂ (0,84 g) após permeação em gel (Sephadex LH-20 com MeOH) e fracionamento em gel de sílica 60 H com misturas de C₆H₁₄-AcOEt em gradiente crescente de polaridade resultou na obtenção do ácido vanílico (5, 25 mg).

Simiarenol (1): RMN ¹H (200 MHz, CDCl₃): δ 3,46 (sl, H-3), 5,16 (ddd, J = 6,0; 2,0; 2,0, H-6), 1,04 (s, H-23), 1,14 (s, H-24), 0,89 (s, H-25), 1,00 (s, H-26), 0,92 (s, H-27), 0,78 (s, H-28), 0,88 (d, J = 6,7, H-29), 0,82 (d, J = 6,7, H-30). RMN ¹³C (50 MHz, CDCl₃): δ 18,03 (C-1), 27,73 (C-2), 76,37 (C-3), 40,79 (C-4), 141,93 (C-5), 121,98 (C-6), 24,01 (C-7), 44,20 (C-8), 34,79 (C-9), 50,19 (C-10), 34,10 (C-11), 28,95 (C-12), 38,56 (C-13), 39,26 (C-14), 29,06 (C-15), 35,36 (C-16), 42,75 (C-17), 51,70 (C-18), 19,85 (C-19), 28,28 (C-20), 59,99 (C-21), 30,75 (C-22), 29,04 (C-23), 25,44 (C-24), 17,84 (C-25), 15,71 (C-26), 14,97 (C-27), 16,04 (C-28), 21,93 (C-29) e 22,89 (C-30).

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Fracionamentos cromatográficos da fração neutra em hexano das folhas conduziu ao isolamento de um triterpeno pentacíclico (1), um diterpeno (2) e de dois fitoesteróides (3-4), enquanto que da fração em diclorometano do caule foi isolado um benzenóide (5).

O composto 1 foi identificado como sendo um triterpeno pentacíclico com base na análise dos dados obtidos dos espectros IV, EM e RMN, incluindo DEPT e HMQC, bem como pela comparação com dados da literatura. O espectro de absorção na região IV, obtido em KBr, revelou bandas de absorção indicativas da presença de grupo hidroxila (3507 e 1171 cm^-1), de ligação dupla (1639 cm^-1), além de bandas de para grupos alquílicos saturados (2927, 2842, 1450, 1381 cm^-1). Os dados do espectro de RMN ¹H, registrado a 200 MHz em CDCl₃, permitiram identificar sinais, cujos valores de deslocamentos químicos estão condizentes com a presença de uma ligação dupla [δ 5,59 (m, H-6, 1H)], um hidrogênio oximetínico [δ 3,45 (sl, H-3, 1H)], um grupo isopropila [δ 0,80 (d, J = 6,6 Hz) e δ 0,86 (d, J = 6,4 Hz)] e para seis grupos metílicos angulares [δ 0,75; 0,87; 0,90; 0,98; 1,02 e 1,11 (s, cada)]. Os dados obtidos do espectro de RMN¹³C-APT a 50 MHz permitiram identificar sinais para um total de vinte e nove átomos de carbono (seis não hidrogenados, seis monoidrogenados, nove diidrogenados e oito triidrogenados). Dentre esses carbonos foram reconhecidos sinais cuja natureza e valores de deslocamentos químicos estão coerentes com a presença de uma ligação dupla do tipo trissubstituída [δ 141,94 (C-5, C) e δ 121,98 (C-6, CH)], de um grupo isopropila [δ 21,93 (C-29, CH₃), δ 22,89 (C-30, CH₃) e δ 30,75 (C-22, CH)] e para seis metilas (δ 29,04; 25,44; 17,84; 15,71; 14,97 e 16,04). O espectro de RMN¹³C-APT não evidenciou a presença do sinal referente ao carbono oximetínico sugerido pelos espectros de RMN¹H e IV. Entretanto, no espectro bidimensional de correlação heteronuclear HMQC foram observadas correlações entre o sinal do hidrogênio que absorve em δ 5,59 (H-6) e com o sinal em δ 121,98 (C-6) e entre o sinal em δ 3,45 (H-3) e o sinal do carbono que absorve em δ 76,37 (C-3), cujo valor de deslocamento químico coincide com o sinal residual do solvente utilizado. Esta informação possibilitou a inclusão na molécula de 1 de um carbono oximetínico. O espectro de massas obtido no modo positivo por ionização química à pressão atmosférica (APCI), mostrou o pico correspondente ao íon molecular em m/z 427 (M+1) e um pico em m/z 409 (M+1 - H₂O) proveniente da perda, a partir do pico do íon molecular, de uma molécula de H₂O. Esta informação, associada à análise dos dados dos espectros de IV e RMN permitiu sugerir uma fórmula molecular de C₃₀H₅₀O (IDH = 6), compatível com o esqueleto de um triterpeno pentacíclico contendo uma ligação dupla, um grupo hidroxila e um grupo isopropila. A análise comparativa dos dados espectrais obtidos, especialmente dos deslocamentos químicos atribuídos aos grupos metilas e isopropila, ligação dupla e de C-17, C-18, C-19 e C-21, possibilitou excluir os esqueletos hopano, arborano, fernano, hancokinol, filicano e neogammacerano e sugerir para 1 um triterpeno pentacíclico da série adianano, conhecido como simiarenol. Embora esta substância ocorra com freqüência em algumas famílias de plantas, esta sendo relatado pela primeira vez na família Polygonaceae.

As estruturas dos compostos trans-fitol (2) (Sims & Pettus Jr., 1976; Goodman et al., 1973), sitostenona (3), sitosterol (4) (Della Greca et al., 1990) e ácido vanílico (5) (Lai et al., 1985) foram identificadas através da comparação dos dados espectrais obtidos com os da literatura. Em Polygonaceae, a ocorrência deste ácido está restrita aos gêneros Polygonum (Adinarayanda et al., 1980; Ulubelen et al., 1992; Smorlarz, 2000) e Rumex (Djurdjevic et al., 1992). Sendo, portanto o primeiro relato no gênero Coccoloba.

AGRADECIMENTOS

Os autores agradecem ao CNPq, FAPEAL, MCT-IMSEAR e BNB-RENORBIO pelo apoio financeiro e pela Bolsa de Doutorado (P.E.S.O.), ao técnico Vicente Carlos C. de Oliveira (Laboratório de Tecnologia Farmacêutica da Universidade Federal da Paraíba), aos Profs. Drs. Edilberto R. Silveira (CENAUREMN da Universidade Federal do Ceará) e Jorge M. David (Instituto de Química da Universidade Federal da Bahia), pelos espectros de RMN e APCI.

Recebido 9 Outubro 2008

Aceito 25 Novembro 2008

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  09 Mar 2009
• Data do Fascículo
  Dez 2008

Histórico

• Aceito
  25 Nov 2008
• Recebido
  09 Out 2008