AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO MITOCONDRIAL DO FÍGADO SUBMETIDO A ISQUEMIA PARCIAL COM E SEM PRÉ-CONDICIONAMENTO ISQUÊMICO

EVALUATION OF LIVER MITOCHONDRIAL FUNCTION SUBMITTED TO PARTIAL ISCHEMIA FOLLOWING ISCHEMIC PRECONDITIONING

AVALIAÇÃO DA FUNÇÃO MITOCONDRIAL DO FÍGADO SUBMETIDO A ISQUEMIA PARCIAL COM E SEM PRÉ-CONDICIONAMENTO ISQUÊMICO¹

EVALUATION OF LIVER MITOCHONDRIAL FUNCTION SUBMITTED TO PARTIAL ISCHEMIA FOLLOWING ISCHEMIC PRECONDITIONING

Centurion S.², Brisotti J. L.², Oliveira G. R.², Tolentino E.², Pacheco E. G.²,

Oliveira A. F. de², Silva Jr. O. de C.³

Resumo: Estudou-se o papel do pré-condicionamento isquêmico de 5 minutos sobre o efeito da isquemia hepática de 2 horas seguida de reperfusão de 1 hora. Verificou-se a Razão de Controle Respiratório (RCR) foi significativamente maior nos animais submetidos à isquemia hepático com pré-condicionamento prévio de 5 minutos.

Descritores: isquemia hepática, pré-condicionamento isquêmico

Key Words: liver ischemia, ischemic preconditioning

Introdução: Durante cirurgias com ressecções do parênquima hepático, o potencial de sangramento é relevante. Para diminuir esse risco, podemos fazer uma clampagem da tríade portal ou total do fígado com pinçamento concomitante da supra hepática ⁴. Sabe-se que clampagem leva a isquemia e ao mesmo tempo em que minimiza ou evita sangramentos durante a cirurgia, induz diferentes intensidades de sofrimento (isquemia/reperfusão) hepatocelular. Estudo de Belghiti et al., 1996 ³, mostrou que pacientes suportam melhor as alterações de isquemia do que as grandes hemorragias com suas conseqüentes transfusões. Os distúrbios metabólicos durante a isquemia ou hipóxia tissular estão bem estabelecidos, porém evidências clínicas e experimentais demonstram que os principais eventos que levam à disfunções tecidual e celulares, relacionam-se com a subseqüente reperfusão.

O termo pré-condicionamento isquêmico foi introduzido na literatura por Murry et al., 1986 ⁵, e significa a indução de um pequeno período de isquemia seguido por pequeno período de reperfusão antes de um período mais longo de isquemia. O objetivo do presente estudo é avaliar o efeito do pré-condicionamento isquêmico em animais submetidos à isquemia/reperfusão sobre a função mitocondrial na isquemia parcial hepática.

Métodos: Foram utilizados 21 ratos albinos da linhagem Wistar, machos, com peso corporal variando de 200 a 280 gramas, fornecidos pelo Biotério Central da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo (FMRP-USP).

Neste experimento foi utilizado grupo Controle (C) submetido a laparotomia e apenas manipulação dos órgãos e que ficaram anestesiados por um período de 1 hora. A isquemia hepática de cada animal foi induzida por um período de 2 horas. Os grupos experimentais foram divididos em dois sub-grupos respectivamente com Pré-condicionamento (PC) e sem Pré-condicionamento.

Com pré condicionamento- isquemia de 5 minutos seguida de reperfusão de 5 minutos e a seguir nova isquemia hepática, agora de 2 horas para em seguida a reperfusão hepática de 1 hora.

C = Grupo controle com 1 hora de anestesia (n=5).

I R1 = Isquemia de 2 horas com reperfusão de 1 hora Sem PC (n=7).

PC I R1= Isquemia de 2 horas com reperfusão de 1 hora e Com PC (n=7).

Durante o período de isquemia de 2 horas e os períodos de reperfusão de 1 hora, as bordas da parede abdominal foram aproximadas adequadamente com 3 a 4 pontos separados de fio algodão 2.0. Depois de observados os tempos adequados para o experimento, os animais foram reabertos por incisão cirúrgica abdominal anterior.

Foram coletados os lóbulos medianos e esquerdo do fígado para extração das mitocôndrias por centrifugação diferencial, para estudo da Razão de Controle Respiratório mitocondrial (RCR), que corresponde a relação entre a velocidade do consumo de oxigênio no estado 3 e no estado 4 da respiração mitocondrial.

Análise Estatística: A análise estatística para comparação global entre os diversos grupos estudados (amostras independentes) foi feita pelo teste Kruskall-Wallis. Para comparação (dois a dois) entre os grupos utilizou-se o teste U de Mann-Whitney com nível de significância de 5%.

Resultado: Como mostra a figura 1, para os valores da Razão do Controle Respiratório (RCR), observamos nos grupos com 1 hora de reperfusão, no controle C valores maiores que nos grupos sem pré e com pré condicionamento e entre estes, os valores I R1 menores que PC I R1

Discussão: Nos organismos submetidos a isquemia hepática, seguida de reperfusão, ocorre interação complexa entre alterações microvasculares, liberação de mediadores inflamatórios, radicais livres de oxigênio, ativação de neutrófilos, plaquetas, células de Kupffer e células endoteliais sinusoidais. A ativação destas células pode levar à liberação de fator de necrose tumoral (TNF), leucotrienos, tromboxanos, prostaglandinas, endotelinas^1,2, fator de ativação plaquetária ³, causando danos à membrana celular, membrana mitocondrial e endotélio levando a distúrbios na microcirculação hepática.

Visando minimizar as alterações isquêmicas e de reperfusão, no presente estudo utilizou-se o pré-condicionamento isquêmico como possível método protetor das lesões hepatocelulares induzidas pelo binômio isquemia/reperfusão.

A ativação das células de Kupffer e neutrófilos induzida pela isquemia e reperfusão pode ser intemediada pelo fator de ativação plaquetária ³, propiciando a liberação de radicais livres de oxigênio, aumento do influxo de cálcio ³ e redução de agentes anti-oxidantes superóxido dismutase, catalase e glutationa, aumentando a produção de malondialdeído (MDA) (5). A ativação de fosfolipases pode produzir graves danos aos lípides de membrana e alterações da permeabilidade mitocondrial ⁶.

No presente estudo, no grupo isquêmico (IR1) houve diminuição significativa da RCR mostrando diminuição da produção de energia mitocondrial, induzida pela isquemia, como verificado também por outros autores^5,6. No grupo PCIR1 os níves da RCR foram maiores que no grupo IR1, sugerindo que o pré-condicionamento protegeu as mitocôndrias da lesão isquêmica, contudo os valores foram significativamente menores que os do grupo Controle. Na continuidade deste estudo será analisado esse indicador com tempos miores de reperfusão.

Em outro trabalho realizado neste laboratório, notou-se que o pré-condicionamento isquêmico diminuiu os níveis de malondialdeído (MDA) em relação ao grupo com isquemia. Assim, com essa observação, é possível concluir que a proteção do pré-condicionamento isquêmico verificado no presente estudo deveu-se, entre outros fatores, a inibição de espécies reativas do oxigênio e consequente lipoperoxidação.

Abstract: The influence of a 5 minute ischeamic pré-conditioning on the effect of 2 hours of ischeamia of the liver, followed by one hour of reperfusion, was studied. The Respiratory Control Ratio (RCR) was significantly greater in the animals submitted to pre-conditioning.

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• 2. Alves Neto W C, Jordani M C, Souza M E J, Franco C F F, Picinato M A N C, Castro e Silva Jr. O. Repercusões teciduais do fígado em dois modelos de isquemia e reperfusão intermitentes. Acta Cir. Bras. 1998; 13 (supl.1): 38-9.
• 3. Belghiti, J.; Noun, R.; Zante, E; et al Portal triade clamping or hepatic vascular exclusion for major liver resection; a controlled study. Ann. Surg. 1996; 224: 155-61.
• 4. Cerwenka, H.; Mischinger. Postischemic oxidative stress during liver resection. In Book proceedings of 3 rd word congress of the IHPBA. Ed. Gonzales, E.M.; Paschoal, M.H., Madrid, 1999; 160-4.
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• 6. Davis JM, Gute DC, Jones S, et al. Ischemic preconditioning prevents postoschemic P-selectin expression in the rat small intestine. Am J Physiol 1999; 277:H2476-H2481.

1

Trabalho realizado no Laboratório de Técnica Cirúrgica e Cirurgia Experimental do Depto. de Cirurgia e Anatomia da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da Universidade de São Paulo _ FMRP-USP

2

Pós-Graduandos junto à Área de Clínica Cirúrgica do Depto. de Cirurgia e Anatomia da FMRP-USP

3

Professor Associado junto à Disciplina de Gastroenterologia do do Depto. de Cirurgia e Anatomia da FMRP-USP

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  11 Jun 2002
• Data do Fascículo
  2001