Ativação da proteína TGFbetaI latente em pulmão irradiado in vivo

Latent TGFbeta1 activation in the lung irradiated in vivo

Resumos

OBJETIVO: Investigar no pulmão, por imunohistoquímica, a localização das proteínas TGFbeta1 latente e TGFbeta1 ativa, se ocorre ativação radioinduzida da proteína TGFbeta1 latente e a distribuição das fibras colágenas em diversos períodos de tempo após irradiação. MÉTODOS: 32 camundongos isogênicos (C57BL) foram divididos em dois grupos: GI (não irradiado) com 12 animais e GII (irradiado) com 20 animais. Os animais do GII receberam radiação gama (telecobaltoterapia, 60Co, com rendimento de 0,97Gy/min, dose única de 7Gy em corpo inteiro). Os camundongos dos grupos I e II foram sacrificados por estiramento cervical nos períodos de 1, 14, 30 e 90 dias após irradiação. RESULTADOS: Os pulmões irradiados apresentaram: 1) congestão vascular e espessamento dos septos alveolares aos 30 dias e mais intensamente aos 90 dias depois da irradiação; 2) aumento significante da deposição de colágeno em todos os períodos de tempo após irradiação; 3) fraca ativação da proteína TGFbeta1 latente em um dia e intensa aos 14 dias depois da irradiação em brônquios e alvéolos. Nossos resultados sugerem que células dos brônquios e alvéolos podem participar do complexo mecanismo de fibrose pulmonar radioinduzida atuando como fontes da proteína TGFbeta1 ativa.

Radiação ionizante; Fibrose pulmonar; Fator beta de transformação do crescimento (TGFbeta)

PURPOSE: assess the latent and active TGFb1 localization in the lung, whether or not radiation induces latent TGFbeta1 activation, and the distribution of collagen fibers in the irradiated lung. METHODS: Thirty two C57BL mice were randomly assigned in two groups: GI (non irradiated animals) and GII (irradiated animals). The mice from GII received a single whole <FONT FACE=Symbol>¾</FONT> body radiation dose of 7Gy, using a 60Co source at a dose rate of 0.97 Gy/min. They were sacrificed by cervical dislocation at 1, 14, 30 and 90 days after radiation. RESULTS: The irradiated lungs showed: 1) vascular congestion and thickness of the alveolar septa 30 days and more intense 90 days after irradiation; 2) significant increase of collagen deposition in all time periods after irradiation; 3) weak latent TGFbeta1 activation 1 day and strong activation 14 days after irradiation in the bronchi and alveoli. Our results suggest that some bronchial and alveolar cells may have a role in the complex process of radiation-induced lung fibrosis acting as cellular sources of active TGFbeta.

Ionizing radiation; Lung fibrosis; Transforming growth factor b (TGFbeta)

Artigo Original

ATIVAÇÃO DA PROTEÍNA TGFbI LATENTE EM PULMÃO IRRADIADO IN VIVO

MARCOS DUARTE MATTOS, EDNA TERUKO KIMURA, MARIA REGINA RÉGIS SILVA, MIZUE IMOTO EGAMI, ROBERTO ARAÚJO SEGRETO, HELENA REGINA COMODO SEGRETO^*

Trabalho realizado no Laboratório de Radioterapia Experimental Prof. Dr. Camillo Segreto ¾ Setor de Radioterapia do Departamento de Medicina da Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, SP

RESUMO ¾ OBJETIVO: Investigar no pulmão, por imunohistoquímica, a localização das proteínas TGFb1 latente e TGFb1 ativa, se ocorre ativação radioinduzida da proteína TGFb1 latente e a distribuição das fibras colágenas em diversos períodos de tempo após irradiação.

MÉTODOS: 32 camundongos isogênicos (C57BL) foram divididos em dois grupos: GI (não irradiado) com 12 animais e GII (irradiado) com 20 animais. Os animais do GII receberam radiação gama (telecobaltoterapia, ⁶⁰Co, com rendimento de 0,97Gy/min, dose única de 7Gy em corpo inteiro). Os camundongos dos grupos I e II foram sacrificados por estiramento cervical nos períodos de 1, 14, 30 e 90 dias após irradiação.

RESULTADOS: Os pulmões irradiados apresentaram: 1) congestão vascular e espessamento dos septos alveolares aos 30 dias e mais intensamente aos 90 dias depois da irradiação; 2) aumento significante da deposição de colágeno em todos os períodos de tempo após irradiação; 3) fraca ativação da proteína TGFb1 latente em um dia e intensa aos 14 dias depois da irradiação em brônquios e alvéolos. Nossos resultados sugerem que células dos brônquios e alvéolos podem participar do complexo mecanismo de fibrose pulmonar radioinduzida atuando como fontes da proteína TGFb1 ativa.

UNITERMOS: Radiação ionizante. Fibrose pulmonar. Fator b de transformação do crescimento (TGFb).

INTRODUÇÃO

A radiossensibilidade pulmonar e a formação de fibrose radioinduzida são importantes fatores a serem considerados nas irradiações torácicas localizadas em campos restritos bem como na irradiação de corpo inteiro^1,2.

A resposta do pulmão à radiação depende do volume do órgão irradiado¹, dose total^3,4, fracionamento da dose^1,5 e da taxa de dose utilizada^(6,7). Dessa forma, as alterações histopatológicas observadas no pulmão irradiado podem variar desde edema e congestão da parede alveolar até a deposição de fibras colágenas e fibrose pulmonar^3,8.

Quanto ao mecanismo da fibrose pulmonar radioinduzida, o fator b de transformação do crescimento, TGFb, parece exercer um papel importante no processo. A TGFb é uma citoquina multifuncional envolvida no controle da proliferação e diferenciação celular⁹. Promove inibição da proliferação de células do tecido conjuntivo^10,11 e diminuição da degradação do colágeno¹². Parte da resposta fibrótica induzida pelo TGFb parece estar relacionada com a modulação do sistema fibroblasto/fibrócito, levando ao acúmulo de colágeno tipo I e tipo III^13-15. Em células de mamíferos, a TGFb está presente sob três isoformas, TGFb1, TGFb2 e TGFb3, sendo as proteínas produzidas na forma inativa e ligadas ao peptídeo associado à latência (LAP)^10,16-18. Dessa forma, a atividade biológica desta proteína depende da dissociação da TGFb madura do complexo latente¹⁹. In vivo, são ativadas por proteases que clivam o complexo latente, e a plasmina é uma das proteases envolvidas no processo de ativação²⁰.

Observou-se ativação da proteína TGFb1 em células da glândula mamária, horas depois da irradiação¹⁹. Por outro lado, é relatado na literatura a presença da proteína TGFb1 em pneumócitos tipo II de ratos, após irradiação com diferentes doses iniciais até àquela de 7 Gy¹³. Não é referido, porém, se a ativação da TGFb1 ocorre nessas células, ou se a proteína é proveniente de células do estroma e age de modo parácrino nas células do parênquima pulmonar.

Acreditamos que devido à importância clínica da fibrose pulmonar radioinduzida, o esclarecimento dos mecanismos envolvidos no processo são relevantes e irão otimizar sua prevenção e tratamento. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho é investigar no pulmão, por imunohistoquímica, a localização das proteínas TGFb1 latente e TGFb1 ativa, se ocorre ativação radioinduzida da proteína TGFb1 latente e a distribuição das fibras colágenas em diversos períodos de tempo após irradiação.

MÉTODOS

Animais: foram utilizados 32 camundongos da linhagem C57BL, machos, com idade média de 75 dias, pesando aproximadamente 22g. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da UNIFESP/EPM/HSP. Durante o experimento, os animais foram mantidos em número de quatro por gaiola de plástico, contendo serragem, recebendo alimento e água ad libitum.

Os camundongos foram numerados, sorteados e distribuídos em dois grupos: Grupo I ¾ GI (não irradiado), com 12 animais e Grupo II ¾ GII (irradiado), com 20 animais. Os animais do grupo II foram subdivididos em quatro subgrupos com cinco camundongos cada, de acordo com o período de tempo escolhido para o sacrifício, isto é, 1(n=5), 14((n=5), 30(n=5) e 90(n=5) dias após irradiação. Os animais do grupo I (controle) foram manipulados, subdivididos e sacrificados de maneira semelhante àqueles do grupo II, sendo 3 (n=3) para cada subgrupo. Os dias de sacrifício foram escolhidos após a realização de estudo piloto para determinar quais os melhores períodos de tempo para evidenciar os parâmetros escolhidos para análise. Para isso, os animais foram sacrificados em diversos dias após irradiação (1,3,6,14,20,30 e 90 dias). Foram também utilizados alguns dados da literatura²¹.

Irradiação: Os camundongos do grupo GII foram submetidos à radiação gama em aparelho de telecobaltoterapia^* da marca CGR, modelo Alcyon II, contendo fonte de ⁶⁰Co com rendimento de 0,97Gy/min, em campo 20 x 20cm, à distância de 80 cm da fonte. Na ocasião da exposição à radiação, os camundongos foram colocados em caixas de madeira de 20 x 20 cm com tampa de acrílico e divisões internas que possibilitaram a imobilização dos mesmos e, portanto, não foram anestesiados. Foram irradiados com a dose de 7Gy em corpo inteiro, calculado em todo volume corporal, com a técnica de paralelo oposto, num campo de 20 x 20 cm, com distância foco-superfície de 80 cm.

Nos períodos de tempo pré-estabelecidos (1,14,30 e 90 dias), os animais foram sacrificados por estiramento cervical e os pulmões retirados.

Morfologia: Após sacrifício dos animais por estriamento cervical, os pulmões foram retirados e submetidos a técnicas histopatológicas rotineiras. Em cada amostra de pulmão dos animais do GI (não irradiado) e GII (irradiado) realizou-se cuidadosa análise morfológica do parênquima pulmonar em secções coradas pelo HE e das regiões onde ocorreram deposição de fibras colágenas após coloração por picro sirius e prata de Gomori, em todos os períodos de tempo escolhidos.

Realizou-se também quantificação utilizando-se uma ocular histométrica, em microscópio de luz, das fibras colágenas com aspecto morfológico característico, coradas pelo picro sirius, que não discrimina sub-tipos de colágeno e pela prata de Gomori que evidencia o colágeno III, contando-se ao acaso as regiões no tabique alveolar²², nos pulmões dos animais dos grupos I (1d, n=3; 14d, n=3; 30d, n=3; 90d, n=3) e II (1d, n=5; 14d, n=5; 30d, n=5; 90d, n=5).

Utilizou-se ocular integradora de 100 pontos da marca Carl Zeiss. Foram contados 10 campos com 100 pontos em cada lâmina, sendo 1000 pontos por lâmina (picro sirius e reticulina) totalizando 2000 pontos por animal.

As contagens foram realizadas em região de tabique alveolar, "às cegas", ou seja, as lâminas tinham suas identificações encobertas. Os resultados numéricos obtidos foram submetidos à análise estatística.

Análise estatística: A análise de variância por postos de Kruskal-Wallis²³ foi utilizada para comparar os resultados obtidos nos diferentes períodos de tempo de sacrifício (1,14,30 e 90 dias), dentro de cada grupo, isto é, GI (não irradiado) e GII (irradiado), para os dois métodos utilizados (picros sírius e prata de Gomori).

Foi aplicado o teste não-paramétrico de Mann-Whitney²³ para duas amostras independentes, para comparar o grupo não irradiado (GI) com o grupo irradiado (GII), em cada um dos quatro períodos de sacrifício, para os dois métodos empregados (picro sírius e prata de Gomori).

Em todos os testes fixou-se em 0,05 ou 5% (p<0,05) o nível de rejeição da hipótese de nulidade, assinalando-se com um asterisco os valores significantes e (0,05 £ p £ 0,10) para nível de significância limítrofe, assinalando-se com dois asteriscos.

Anticorpos: Foram utilizados os seguintes anticorpos: anticorpo policlonal anti LAP (TGFb1) recombinante humano, obtido em cabra (R & D Systems Inc. Minneapolis MN), específico para evidenciar a expressão da proteína TGFb1 latente, e o anticorpo policlonal anti TGFb1 de rato, camundongo e humano, obtido em coelho (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), para observação da imunoexpressão da proteína TGFb1 ativa. Desta forma, o uso de diferentes anticorpos permite detectar a proteína na forma latente e inativa (ligada ao complexo latente) e na forma ativa (após clivagem do complexo latente), e evidenciar se ocorre ou não a ativação in situ da proteína¹⁹ .

Imunohistoquímica: O ensaio imunohistoquímico baseou-se no método imunoenzimático indireto em três etapas, utilizando-se o complexo estreptoavidina-biotina-fosfatase alcalina. Os cortes foram colocados em lâminas silanizadas (Sigma, St. Louis, MD) e após desparafinização foram incubados com os anticorpos primários, em temperatura ambiente, a noite toda. Após lavagem em solução de PBS, as seções foram incubadas com os anticorpos secundários biotinilados por três horas. Posteriormente, foram incubadas com a solução do complexo estreptoavidina ¾ fosfatase alcalina (Sigma) por duas horas para detectar as proteínas TGFb1 latente e TGFb1 ativa. Para revelação da fosfatase alcalina, os cortes foram incubados com solução substrato-cromógeno recém-preparada, contendo naftol- AS- MX-fosfato (Sigma), levamizol (Sigma) e o sal cromogênico "fast red TR" (Sigma), diluídos em solução tempão acetato de veronal, pH8,3. Os complexos de imunoglobulina foram demonstrados pela positividade expressa em vermelho para as proteínas TGFb1 latente e TGFb1 ativa. Os cortes foram então lavados durante toda a noite, contra-corados com Hematoxilina de Gill e montados com immu-mount (Shandon, Pittsburgh, PA). Controles com omissão do anticorpo primário foram incluídos em todos os experimentos.

A análise imunohistoquímica foi realizada em pulmões dos animais de ambos os grupos, GI e GII, sendo um animal para cada período de sacrifício (GI) e dois animais para cada período de sacrifício (GII).

RESULTADOS

Alterações morfológicas e histométricas: comparação entre os pulmões irradiados (GII) e não-irradiados (GI): observou-se congestão vascular em áreas focais, especialmente peribrônquicas e espessamento dos septos alveolares, aos 30 dias após irradiação. Estas alterações foram mais intensas aos 90 dias após irradiação. Nos períodos de 1 e 14 dias depois da irradiação não foram observadas alterações significantes no parênquima pulmonar.

Após análise dos resultados morfológicos que sugeriram aumento da deposição de colágeno, especialmente na região do tabique alveolar, realizamos quantificação do mesmo. Esta contagem mostrou aumento significante das fibras colágenas em geral, evidenciadas pelo picro sírius, em região de tabique alveolar, em todos os períodos de tempo estudados (Fig. 1).

Quanto ao colágeno III, evidenciado pela prata de Gomori, também verificou-se aumento deste, em região de tabique alveolar, em todos os períodos de tempo estudados (Fig. 2).

Análise imunohistoquímica

TGFb latente: A imunoexpressão da proteína TGFb1 latente, demonstrada pela cor vermelha, foi observada com forte positividade nas células de revestimento dos brônquios, bronquíolos, alvéolos e vasos, distribuídos difusamente pelo parênquima pulmonar em todos os animais não irradiados (GI) (Fig. 3A). Quanto aos animais irradiados (GII), a imunoexpressão da proteína TGFb1 latente manteve a mesma localização e forte positividade semelhante aos animais controle, isto, é em brônquios, bronquíolos, alvéolos e vasos no período de um dia.

Aos 14 dias após irradiação a intensidade de expressão da proteína TGFb1 latente ocorreu de maneira variável entre as diversas células de revestimento dos brônquios e bronquíolos, ou seja, foram observadas células positivas, fracamente positivas e negativas, resultando em aspecto descontínuo de expressão. Os alvéolos também apresentaram menor imunorreatividade, e foram freqüentes regiões fracamente positivas e/ou negativas (Fig. 3B).

No período de 30 dias após irradiação, os brônquios, alvéolos e vasos apresentaram áreas negativas alternadas com regiões de fraca imunopositividade, difusamente distribuídas pelo parênquima pulmonar.

Noventa dias após irradiação, algumas células em brônquios, alvéolos e vasos voltaram a apresentar imunorreatividade forte para TGFb1 latente, havendo ainda algumas regiões fracamente positivas.

TGFb1 ativa: O parênquima pulmonar dos animais controles (GI) nos diversos períodos de sacrifício, revelou ausência de imunopositividade para proteína TGFb1 ativa em regiões de brônquios e alvéolos (Fig. 3C).

No período de um dia após irradiação, a maioria das células não apresentou imunopositividade para TGFb1 ativa em região de brônquios e bronquíolos. Observou-se porém escassas regiões com células imunorreativas em raros brônquios.

Aos 14 dias após irradiação foram observadas células imunopositivas, distribuídas de forma heterogênea em brônquios e vasos. A imunopositividade para proteína TGFb1 ocorreu de forma difusa nos alvéolos (Figs. 3D e 3E).

A avaliação de imunoexpressão da proteína TGFb1 ativa aos 30 e 90 dias após irradiação, evidenciou ausência de imunopositividade em regiões de brônquios, alvéolos e vasos.

DISCUSSÃO

Nossos resultados histopatológicos nos pulmões irradiados evidenciaram congestão vascular mais acentuada nos vasos do parênquima pulmonar em relação aos animais controle. A alteração mais relevante observada foi a formação de áreas focais de espessamento do septo alveolar aos 30 dias e mais intensas e difusas 90 dias após irradiação. Achados semelhantes foram relatados por diversos autores após exposição do tórax de camundongos a diferentes doses únicas de radiação^3,24,25. Importante ressaltar os achados de Jennings e Arden²⁶, que observaram, com a dose de 3000 rad em tórax de ratas, a formação de edema e congestão da parede alveolar, que se iniciou precocemente aos dois dias e se intensificou até 60 dias após irradiação. À semelhança dos nossos resultados, Finkelstein, Johnston, Baggs e Rubin²⁷ observaram também espessamento do septo alveolar em camundongos C57BL irradiados com a dose única de 12,5 Gy e sacrificados após 14 dias.

No presente trabalho, o espessamento do septo foi evidente no período de 30 dias após irradiação estendendo-se até aos 90 dias, e não mais precocemente como nos trabalhos supra citados. Acreditamos que este fato ocorreu devido à dose de 7Gy por nós utilizada, inferior àquelas empregadas pelos autores referidos.

Para análise quantitativa da deposição inicial do colágeno, realizamos coloração com picro sirius e com a prata de Gomori. Em relação especificamente ao método do picro sirius, a quantificação do colágeno não foi realizada em microscópio de luz polarizada²⁸, porque o fundo escuro deste, associado ao retículo em preto da ocular histométrica, dificultava consideravelmente a contagem. Desta forma, optamos por utilizar o microscópio de luz comum, tomando-se o cuidado de considerar para as contagens as estruturas com características morfológicas de fibras colágenas coradas em vermelho. Isto nos possibilitou estimar o colágeno em geral. Esta análise foi complementada pela coloração com a prata de Gomori, eletiva para colágeno III, que permitiu assim quantificar a fibrose reticulínica inicial²⁹.

O aumento significante da deposição do colágeno em geral e do colágeno III observado constitui importante efeito radioinduzido no pulmão, e de implicações clínicas para o paciente irradiado. Nossos resultados corroboram aqueles de Johnston e colaboradores³⁰, que observaram elevação do RNA mensageiro para fibras colágenas tipo I e tipo III em pulmões de camundongos após irradiação torácica, com a dose única de 12,5 Gy. Outros observaram aumento da expressão do RNA mensageiro para fibras colágenas tipo I, III, IV e fibronectina em pulmões de camundongos irradiados em torax com doses únicas de 5 e 12 Gy, em um dia após irradiação, persistindo até oito semanas²¹. É relatada também evidente fibrose intersticial, associada ao depósito de colágeno no parênquima pulmonar de camundongos irradiados com doses úinicas de 6 e 12 Gy, 24 semanas depois da irradiação torácica⁴.

Pelo exposto, observa-se que o efeito relevante induzido pela radiação na dose empregada é o processo inflamatório inicial e conseqüente edema, espessamento do tabique alveolar e aumento da deposição de colágeno que podem levar ao processo de fibrose pulmonar.

Em relação ao mecanismo ou fatores envolvidos no aumento do colágeno após irradiação, a proteína TGFb1 parece exercer relevante papel.

Nossos resultados revelaram que a imunoexpressão da proteína TGFb1 latente ocorreu nas células de revestimento dos bronquíolos, alvéolos e vasos nos pulmões dos animais não irradiados. Porém, a expressão da proteína TGFb1 ativa não foi detectada nos pulmões destes animais. Estes achados nas células e estruturas pulmonares diferem daqueles encontrados em células de outros tecidos, como a medula óssea. Neste caso, os granulócitos apresentam a imunoexpressão da proteína TGFb1 latente e ativa em condições fisiológicas⁽³¹⁾. Talvez este fato se deva à diferença na cinética dos tipos celulares em ambos os tecidos. Os granulócitos são células que desenvolvem mitose até a fase de mielócito e após esse estágio, amadurecem⁽³¹⁾. Precisam portanto, de controle fisiológico para a proliferação e diferenciação. No caso das células pulmonares, estas não estão em processo de divisão constante em condições fisiológicas. Esta pode ter sido uma das razões para encontrarmos a imunopositividade apenas para TGFb1 latente nos pulmões dos animais controle. Diferentes padrões de expressão para as diferentes isoformas da proteína TGFb também foram observados em outros tipos de células³².

Após irradiação, a imunoexpressão da proteína TGFb1 latente tornou-se tênue, descontínua e até ausente nos brônquios, bronquíolos e alvéolos aos 14 e 30 dias depois da irradiação. Ao mesmo tempo, a expressão da proteína TGFb1 ativa, que era negativa nas células do parênquima pulmonar dos animais não irradiados, apresentou fraca imunopositividade em um dia e forte imunopositividade especialmente nos alvéolos aos 14 dias depois da irradiação. Talvez, esta discreta ativação da proteína TGFb1, um dia depois da irradiação se deva à baixa concentração da mesma neste período de tempo, e, portanto, de difícil detecção imunohistoquímica. Tais resultados indicam ativação "in situ" da proteína TGFb1 em células do parênquima pulmonar. Em outros tecidos, como a glândula mamária, observou-se ativação da TGFb em horas e em dias após irradiação^19,33. Sugeriu-se que a ativação precoce seria conseqüente ao "stress" oxidativo induzido pelos radicais livres produzidos pela radiação e a elevação continuada e tardia da proteína devido aos mecanismos celulares via plasmina. Sugere-se que a plasmina é uma protease que ativa a proteína TGFb1 latente in vivo. A indução do ativador do plasminogênio tecidual (tPA) e do inibidor do ativador do plasminogênio (PAI) foi demonstrada em vários tecidos após irradiação³⁴. Demonstrou-se também aumento da ativação da proteína TGFb1 latente pelo tPA, pelo ativador do plasminogênio tipo uroquinase e pelo plasminogênio após irradiação³⁵.

Em relação aos nossos resultados, a discreta ativação da proteína TGFb1 observada em um dia e a evidente ativação em 14 dias após irradiação sugerem a importância da via celular de ativação da TGFb1 latente no pulmão. Porém, o papel da ativação desta proteína induzida pelos radicais livres, que apresentam meia vida curta, não foi verificada em nosso experimento, uma vez que o período mais precoce estudado foi o de um dia após irradiação. Talvez ambos os mecanismos possam ser importantes para a ativação da proteína TGFb1 latente no pulmão irradiado.

Nossos achados que mostram elevação da proteína TGFb1 ativa radioinduzida em pulmão corroboram os de diversos autores. Aumento do RNA mensageiro para as proteínas TGFb1, TGFb2 e TGb3 foi observado em pulmão de camundongos após irradiação torácica com as doses de 5, 12 e 12,5 Gy^21,27,30. Em culturas de fibroblastos e pneumócitos, a irradiação induziu a síntese de TGFb1 nestas células³⁶. Estudos in vivo, em pulmões de camundongos irradiados, mostraram a imunoexpressão da proteína TGFb1 ativa em fibroblastos próximos à regiões que apresentavam lesões fibróticas³⁷ e em pneumócitos tipo II⁴. No entanto, estes trabalhos não estudaram especificamente a ativação in situ da proteína TGFb1 em pulmão. O esclarecimento destes aspectos histopatológicos é crítico, especialmente quando se planeja desenvolver estratégias para evitar ou mesmo tratar a fibrose pulmonar radioinduzida. Uma possível estratégia é o uso de drogas antioxidantes, uma vez que a literatura mostra que a proteína TGFb1 ativa induz a liberação do peróxido de hidrogênio (H₂O₂) de fibroblastos do pulmão humano⁽³⁸⁾. Mostra também que o aumento da oxidação intracelular induzido pela TGFb1 é abolido após o uso de drogas antioxidantes³⁹.

Em conclusão, analisados em conjunto, nossos resultados mostram aumento da deposição de colágeno nos pulmões dos animais irradiados e ativação da proteína TGFb1 em células do parênquima pulmonar em 1 e 14 dias depois da irradiação. Apesar da ativação da TGFb1 ser discreta em um dia após irradiação, já ocorre elevação do colágeno neste período de tempo. Sugerem também a importância da participação da proteína TGFb1 no complexo processo da fibrose pulmonar radioinduzida, e que células do próprio parênquima pulmonar (brônquios e alvéolos), podem participar deste mecanismo atuando como fontes da proteína TGFb1 ativa.

Tese apresentada à UNIFESP-EPM para obtenção do título de Mestre em Radiologia Clínica ¾ área de Radioterapia. Realizado com Auxílio à Pesquisa FAPESP e bolsa de Pós-Graduação CNPq.

SUMMARY

Latent Tgfb1 activation in the lung irradiated in vivo

PURPOSE: assess the latent and active TGFb1 localization in the lung, whether or not radiation induces latent TGFb1 activation, and the distribution of collagen fibers in the irradiated lung.

METHODS: Thirty two C57BL mice were randomly assigned in two groups: GI (non irradiated animals) and GII (irradiated animals). The mice from GII received a single whole ¾ body radiation dose of 7Gy, using a ⁶⁰Co source at a dose rate of 0.97 Gy/min. They were sacrificed by cervical dislocation at 1, 14, 30 and 90 days after radiation.

RESULTS: The irradiated lungs showed: 1) vascular congestion and thickness of the alveolar septa 30 days and more intense 90 days after irradiation; 2) significant increase of collagen deposition in all time periods after irradiation; 3) weak latent TGFb1 activation 1 day and strong activation 14 days after irradiation in the bronchi and alveoli. Our results suggest that some bronchial and alveolar cells may have a role in the complex process of radiation-induced lung fibrosis acting as cellular sources of active TGFb. [Rev Assoc Med Bras 2002; 48(4): 329-34]

KEY WORDS: Ionizing radiation. Lung fibrosis. Transforming growth factor b (TGFb).

Artigo recebido: 20/09/2001

Aceito para publicação: 20/03/2002

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  28 Jan 2003
• Data do Fascículo
  Dez 2002

Histórico

• Aceito
  20 Mar 2002
• Recebido
  20 Set 2001