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Associação entre o polimorfismo rs7700944 no gene TIM-4 e artrite reumatoide em Zahedan, sudeste do Irã

Resumos

INTRODUÇÃO: Recentemente, relatou-se uma associação entre artrite reumatoide (AR) e a variante rs7700944 G>A nos domínios imunoglobulina e mucina de células T (TIM-4). OBJETIVO: Investigar o impacto desse polimorfismo na suscetibilidade a AR em uma amostra da população iraniana. PACIENTES E MÉTODOS: Este estudo caso-controle foi conduzido em 120 pacientes com AR e 120 indivíduos saudáveis. O polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 foi determinado usando-se o ensaio tetra amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction (T-ARMS-PCR). RESULTADOS: Não se observou diferença significativa quanto ao polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 entre os pacientes com AR e os indivíduos saudáveis. Nas mulheres, não houve associação significativa quanto ao polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 nos dois grupos. Nos homens, o genótipo GA+AA, em comparação ao GG, aumentou o risco para AR (OR = 5,15; IC 95% = 1,30-20,48; P = 0,020). Além disso, os resultados mostraram que o alelo rs7700944 A aumentou o risco para AR (OR = 4,39; IC 95% = 1,43-13,54; P = 0,009). CONCLUSÃO: Nossos resultados não confirmam a existência de associação entre AR e o polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4. Uma interação entre esse polimorfismo e sexo sugere uma associação sexo-específica entre AR e esse polimorfismo de nucleotídeo único, que ainda requer elucidação.

Artrite reumatoide; TIM-4; Polimorfismo


INTRODUCTION: Recently, an association between rheumatoid arthritis (RA) and the rs7700944 G>A variant in the T-cell immunoglobulin and mucin domains 4 (TIM-4) has been reported. OBJECTIVE: The present study aimed at investigating the impact of that polymorphism on susceptibility to RA in a sample of the Iranian population. Patients and methods: This case-control study was conducted on 120 patients with RA and 120 healthy subjects. The rs7700944 polymorphism in the TIM-4 gene was determined using tetra amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction (T-ARMS-PCR) assay. RESULTS: No significant difference was observed regarding the rs7700944 polymorphism of the TIM-4 gene between patients with RA and normal individuals. In females, no significant association was found between the groups concerning the rs7700944 polymorphism of the TIM-4 gene. In males, the GA+AA genotype increased the risk of RA in comparison with the GG genotype (OR = 5.15, 95% CI = 1.30-20.48, P = 0.020). Furthermore the results showed that the rs7700944 A allele increased the risk of RA (OR = 4.39, 95% CI = 1.43-13.54, P = 0.009). CONCLUSION: Our results do not support an association between the rs7700944 polymorphism of the TIM-4 gene and RA. An interaction between this polymorphism and sex suggests a sex-specific association between this single nucleotide polymorphism and RA, which remains to be fully elucidated.

Vasculitis; Adolescent; Cutaneous lupus erythematosus


ARTIGO ORIGINAL

Associação entre o polimorfismo rs7700944 no gene TIM-4 e artrite reumatoide em Zahedan, sudeste do Irã

Zahra ZakeriI; Mohammad HashemiII,III,* * Autor para correspondência. E-mail: mhd.hashemi@gmail.com; hashemim@zaums.ac.ir (M. Hashemi). ; Seyed Mohammad Ebrahim PourhosseiniI; Ebrahim Eskandari-NasabIII; Gholamreza BahariIII; Mohsen TaheriIV

IDepartamento de Medicina Interna, Faculdade de Medicina, Zahedan University of Medical Sciences, Zahedan, Irã

IICentro de Pesquisa Celular e Molecular, Zahedan University of Medical Sciences, Zahedan, Irã

IIIDepartamento de Bioquímica Clínica, Faculdade de Medicina, Zahedan University of Medical Sciences, Zahedan, Irã

IVCentro de Pesquisa de Doenças Genéticas Não Comunicáveis, Zahedan University of Medical Sciences, Zahedan, Irã

RESUMO

INTRODUÇÃO: Recentemente, relatou-se uma associação entre artrite reumatoide (AR) e a variante rs7700944 G>A nos domínios imunoglobulina e mucina de células T (TIM-4).

OBJETIVO: Investigar o impacto desse polimorfismo na suscetibilidade a AR em uma amostra da população iraniana.

PACIENTES E MÉTODOS: Este estudo caso-controle foi conduzido em 120 pacientes com AR e 120 indivíduos saudáveis. O polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 foi determinado usando-se o ensaio tetra amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction (T-ARMS-PCR).

RESULTADOS: Não se observou diferença significativa quanto ao polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 entre os pacientes com AR e os indivíduos saudáveis. Nas mulheres, não houve associação significativa quanto ao polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 nos dois grupos. Nos homens, o genótipo GA+AA, em comparação ao GG, aumentou o risco para AR (OR = 5,15; IC 95% = 1,30-20,48; P = 0,020). Além disso, os resultados mostraram que o alelo rs7700944 A aumentou o risco para AR (OR = 4,39; IC 95% = 1,43-13,54; P = 0,009).

CONCLUSÃO: Nossos resultados não confirmam a existência de associação entre AR e o polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4. Uma interação entre esse polimorfismo e sexo sugere uma associação sexo-específica entre AR e esse polimorfismo de nucleotídeo único, que ainda requer elucidação.

Palavras-chave: Artrite reumatoide; TIM-4; Polimorfismo

Introdução

A artrite reumatoide (AR) é uma doença inflamatória crônica que resulta em lesão grave da cartilagem e destruição óssea nas articulações sinoviais. Embora sua etiologia ainda seja desconhecida, considera-se que a AR sofra influência de uma combinação de fatores genéticos e ambientais.1,2 Estima-se que a AR afete cerca de 1% da população adulta do mundo, e que fatores genéticos representem 60% do risco da doença.3

A família dos genes portadores dos domínios mucina e imunoglobulina de células T (T-cell immunoglobulin domain and mucin domain - TIM) consiste de três genes localizados no cromossomo 5q23. Três dos membros da família (TIM-1, TIM-3 e TIM-4) são conservados no camundongo e no homem, e codificam glicoproteínas de células superficiais com motifs estruturais comuns. Os genes da família TIM codificam proteínas que são expressas por células T e contêm um domínio "IgV-like" e um 'mucin-like' e mostraram-se capazes de regular a imunidade adaptativa.4,5

O gene TIM-4 foi identificado como um ligante natural para TIM-1, e a interação de TIM-1 e TIM-4 estimula a proliferação e a ativação de células T.6 O gene TIM-4 é um receptor fosfatidilserina (PS) expresso em células maduras de apresentação de antígeno, que aumenta a atividade fagocítica de células apoptóticas por macrófagos para manter a homeostase.7 O gene TIM-4 desempenha papel essencial no controle da imunidade adaptativa através da regulação do clearance de células antígeno-específicas.8 No camundongo, a falta do TIM-4 dificulta o clearance de corpos apoptóticos in vivo, levando a desregulação da ativação linfocítica e sinais de autoimunidade sistêmica,9 indicando que o gene TIM-4 possa estar associado à suscetibilidade a doenças alérgicas e autoimunes. Os polimorfismos dos genes TIM-1 e TIM-3 mostraram-se associados com suscetibilidade a AR.10-14

Há alguns dados sobre a associação dos polimorfismos do gene TIM-4 e o risco para AR. Recentemente, Xu et al.15 encontraram uma associação entre a suscetibilidade para AR e o polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 em populações chinesas de etnias Han e Hui. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar o impacto do polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 na suscetibilidade a AR em uma amostra da população iraniana.

Material e métodos

Pacientes

Analisamos a possível associação entre o polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 e a suscetibilidade para AR em 120 pacientes (104 mulheres e 16 homens) com idade média de 44,8 ± 12,8 anos, que atendessem aos critérios do American College of Rheumatology (ACR) para diagnóstico de AR.16 Todos os participantes eram pacientes da Clínica de Reumatologia da Universidade de Ciências Médicas de Zahedan.2,17,18 O grupo controle consistiu de 120 indivíduos saudáveis (85 mulheres e 35 homens) com idade média de 44,9 ± 12,4 anos e que não tivessem familiares com AR. O comitê de ética da Universidade de Ciências Médicas de Zahedan aprovou o projeto. Todos os pacientes e participantes saudáveis assinaram o termo de consentimento livre e informado. Amostras de sangue foram colhidas dos pacientes e controles saudáveis em tubos Na-EDTA. O DNA genômico foi extraído de amostras de sangue periférico colhido em tubos contendo EDTA, como descrito em publicação anterior.18

As sequências genômicas do TIM-4 (NT_023133.13) foram obtidas do National Center for Biotechnology Information (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Procuramos os polimorfismos e desenhamos os primers para o ensaio tetra amplification refractory mutation system-polymerase chain reaction (T-ARMS-PCR), que é um método simples e rápido para detectar polimorfismo de nucleotídeo único (SNP, sigla em inglês)19 (tabela 1). A figura 1 mostra a representação esquemática.


A reação em cadeia da polimerase (PCR) foi realizada com a utilização de premix PCR comercialmente disponível (AccuPower PCR PreMix; BIONEER, Daejeon, Coreia) segundo as instruções do fabricante. Resumidamente, 1 µL de template de DNA (~100 ng/µL), 1 µL de cada primer (10 pmol/µL) e 15 µL de água sem DNase foram adicionados ao AccuPower PCR PreMix.

Realizou-se a amplificação com um estágio de desnaturação inicial a 95 ºC por 5 minutos, seguido por 30 ciclos de 30 segundos a 95 ºC, 22 segundos a 62 ºC, e 25 segundos a 72 ºC, com etapa final a 72 ºC por 10 minutos. Os produtos da PCR foram verificados em gel agarose 2,0% contendo 0,5 µg/mL de brometo de etídio. Fotografias foram feitas (fig. 2). Para confirmar a qualidade da genotipagem, todos os polimorfismos em amostras aleatórias foram regenotipados.


Análise estatística

A análise estatística foi realizada usando-se o programa SPSS 18. O equilíbrio Hardy-Weinberg (HWE) foi estimado separadamente para casos e controles. As associações entre genótipos do gene TIM-4 e AR foram avaliadas por odds ratio (OR) e intervalos de confiança a 95% (IC 95%) de análises de regressão logística ajustadas para sexo e idade.

Resultados

Não houve diferença significativa entre os grupos com relação à idade (P = 0,815), mas houve com relação ao sexo (P < 0,05).

A tabela 2 mostra o genótipo e as frequências alélicas do polimorfismo rs7700944 em pacientes com AR e em controles. Os grupos não diferiram significativamente quanto ao polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 (χ2 = 2,253; P = 0,324). Esse polimorfismo não se associou a suscetibilidade a AR nem a proteção contra AR em modelos testados de herança codominante (OR = 1,17; IC 95% = 0,68-2,01; P = 0,557, GA vs. GG; e OR = 3,07; IC 95% = 0,55-17,02; P = 0,200; AA vs. GG), dominante (OR = 1,25, IC 95% = 0,74-2,13; P = 0,410; GA+AA vs. GG) e recessiva (OR = 2,90; IC 95% = 0,53-15,98; P = 0,221; AA vs. GG+GA) (tabela 2).

Os grupos também não diferiram significativamente quanto à frequência alélica (χ2 = 1,79; P = 0,180). O genótipo no polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 nos grupos caso e controle estava em HWE (χ2 = 0,794; P = 0.372; e χ2 = 1,762; P = 0,183, respectivamente).

Realizou-se análise do polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4, tendo sexo como covariável e ajustando-se para idade (tabela 3). Nas mulheres, não se observou associação significativa nos grupos quanto ao polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4. Nos homens, o genótipo GA+AA aumentou o risco para AR em comparação ao GG (OR = 5,15; IC 95% = 1,30-20,48; P = 0,020). Além disso, os resultados mostraram que o alelo rs7700944 A aumentou o risco para AR (OR = 4,39; IC 95% = 1,43-13,54; P = 0,009). Descobrimos ainda uma interação entre polimorfismo rs7700944 e sexo, sugerindo uma associação sexo-específica entre esse SNP e AR.

Discussão

O presente estudo avaliou a associação do polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 com a suscetibilidade a AR em uma amostra da população iraniana. Não se observou associação significativa entre polimorfismo rs7700944 e AR. O genótipo GA+AA, em comparação ao GG, aumentou o risco de AR em homens, sugerindo a existência de associação sexo-específica entre esse SNP e AR. Os estudos sobre os polimorfismos do gene TIM-4 e AR são poucos e controversos. Xu et al.15 investigaram o polimorfismo rs7700944 de íntron do gene TIM-4 em populações chinesas de etnias Han e Hui. Os autores relataram que o genótipo GA do polimorfismo rs7700944 aumentou o risco de AR na população chinesa de etnia Han, mas mostrou-se protetor na população chinesa de etnia Hui. De maneira semelhante, o genótipo GG foi o genótipo de risco para AR na etnia Hui, mas pode ser um genótipo protetor na etnia Han.15 Embora o alelo G tenha se mostrado mais frequente nas duas etnias, o alelo do polimorfismo rs7700944 que representa risco para AR diferiu nas duas populações como se segue: na etnia Hui, o alelo de risco foi o G (OR = 1,823; IC 95% = 1,330-2,498; P < 0,01), enquanto na etnia Han, indivíduos com o alelo A nesse sítio de SNP mostraram-se mais suscetíveis a AR (OR = 1,930; IC 95% = 1,412-2,636; P < 0,01).15

Segundo nossos achados, o genótipo AA não foi comum. Nossos resultados estão de acordo com aqueles relatados por Xu et al.,15 que descobriram que o genótipo AA não era comum nas populações chinesas Han e Hui. Descobrimos ainda que existe uma interação entre polimorfismo rs7700944 e sexo, sugerindo uma associação sexo-específica entre esse SNP e AR.

Polimorfismos do gene TIM-4 foram associados com asma20 e dermatite atópica (DA).21 Polimorfismos do gene TIM3 foram associados com AR,10-12 câncer de pâncreas,22 carcinoma de células renais,23 câncer gástrico,24 suscetibilidade a doenças e carcinoma hepatocelular associado com infecção pelo vírus da hepatite B.25 Polimorfismo do gene TIM-1 foi associado com AR,13,14,26 rinite alérgica27 e DA.21

Uma das limitações do nosso estudo foi o tamanho relativamente pequeno da amostra, em particular, na análise de genótipo e sexo. Outra limitação foi a diferença estatística significativa quanto ao sexo entre os pacientes e os controles. É possível que tal diferença não tenha um impacto significativo nos resultados, uma vez que sexo foi utilizado como covariável na análise de regressão.

Concluindo, não se observou associação significativa entre o polimorfismo rs7700944 do gene TIM-4 e AR em uma amostra da população iraniana. No entanto, identificou-se uma interação entre polimorfismo rs7700944 e sexo, sugerindo uma associação sexo-específica entre esse SNP e AR. Tal associação sexo-específica entre o polimorfismo rs7700944 e AR deve ser interpretada com cautela, devido ao pequeno tamanho da amostra. Estudos adicionais sobre tal associação com amostras maiores e diferentes etnias são necessários para confirmar nossos achados.

Agradecimentos

Este estudo recebeu suporte da Universidade de Ciências Médicas de Zahedan. Agradecemos a todos os participantes do estudo.

Conflitos de interesse

Os autores declaram não haver conflitos de interesse.

Recebido em 11 de setembro de 2012

Aceito em 17 de fevereiro de 2013

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    Autor para correspondência. E-mail:
    hashemim@zaums.ac.ir (M. Hashemi).
  • Datas de Publicação

    • Publicação nesta coleção
      06 Nov 2013
    • Data do Fascículo
      Ago 2013

    Histórico

    • Recebido
      11 Set 2012
    • Aceito
      17 Fev 2013
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