Colheita e avaliação do sêmen em onça pintada (Panthera onca)

Semen collection and evaluation in the jaguar (Panthera onca)

Colheita e avaliação do sêmen em onça pintada (Panthera onca)

Semen collection and evaluation in the jaguar (Panthera onca)

Ronaldo Gonçalves MORATO¹; Marcelo Alcindo de Barros Vaz GUIMARÃES²; Adauto Luis Veloso NUNES³; Aulus Cavalieri CARCIOFI¹; Fernando FERREIRA¹; Valquíria Hypollito BARNABE¹; Renato Campanarut BARNABE¹

Correspondência para:

Renato Campanarut Barnabe

Departamento de Reprodução Animal

Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da USP

Cidade Universitária Armando de Salles Oliveira

Av. Orlando Marques de Paiva, 87

05508-000 – São Paulo – SP

e-mail: [e-mail]

RESUMO

Foram submetidas à eletroejaculação 10 onças pintadas, de origem desconhecida, mantidas na Fundação Parque Zoológico de São Paulo (n = 7) e Parque Zoológico Municipal "Quinzinho de Barros"- Sorocaba (n = 3), recebendo alimentação de acordo com a dieta de rotina de cada instituição. Nos 54 procedimentos realizados, foram obtidos ejaculados, ocorrendo contaminação por urina em 3,7% (n = 2) e em 11 (20,4%) ocasiões em que não foram observados espermatozóides. O volume médio obtido foi 7,42 ± 3,69 ml, com motilidade média de 62,6 ± 11,0% e vigor de 2,71 ± 0,52. A concentração espermática foi 6,20 ± 3,03x10⁶ espermatozóides/ml, sendo que a porcentagem média de espermatozóides morfologicamente normais foi 46,7 ± 5,8%. A técnica de colheita de sêmen por eletroejaculação é eficiente na espécie Pathera onca.

UNITERMOS: Eletroejaculação; Espermatozóides; Jaguar.

INTRODUÇÃO

A onça pintada (Panthera onca), o maior felino das Américas, encontra-se na lista de animais ameaçados de extinção da União Internacional para a Conservação da Natureza²⁰. A principal ameaça a este grande felino é a perda constante de hábitat, associada à fragmentação destes⁵. Como conseqüência, temos o isolamento de populações e o isolamento de material genético que podem levar à diminuição da variabilidade genética. Vários autores citam que a diminuição da variabilidade genética pode afetar a espermatogênese e a ovulação, aumentar a susceptibilidade a doenças e a morbidade e mortalidade perinatal^1,12,15. Há um consenso de que a manutenção da diversidade genética na espécie é dependente da reprodução²². Neste contexto, a aplicação de técnicas de reprodução assistida surge como importante ferramenta na conservação de espécies silvestres ameaçadas de extinção, na medida em que pode minimizar a perda da variabilidade genética através de programas de manejo reprodutivo.

Para que possamos aplicar técnicas artificiais de reprodução em espécies de interesse, informações básicas de fisiologia reprodutiva devem ser obtidas, como as características normais do ejaculado. Para tanto, métodos seguros de colheita de amostras devem ser desenvolvidos de forma a garantir o bem-estar do animal, assim como tranqüilidade para a equipe que o assiste.

A eletroejaculação é o método de eleição para obtenção de sêmen em felinos¹³. Apesar disso, a primeira eletroejaculação em onça pintada não obteve bons resultados⁴. Posteriormente, um estudo com 6 indivíduos obteve melhores resultados, ainda que sem anestesiar os animais¹¹, expondo técnicos e animais a riscos de acidentes. Desde a padronização da técnica de eletroejaculação em felinos^13,24, 28 espécies de felinos selvagens foram avaliadas, incluindo a onça pintada. No entanto, estudos sistemáticos para a espécie não foram conduzidos. Os resultados obtidos até o momento retratam a aplicação da técnica uma única vez por indivíduo.

Sob estes aspectos, os objetivos deste trabalho foram:

a) avaliar sistematicamente a técnica de colheita de sêmen em felinos aplicada à onça pintada;

b) avaliar e caracterizar o ejaculado de onça pintada.

MATERIAL E MÉTODO

Foram utilizadas 10 onças pintadas, machos, adultos (7 a 10 anos), de origem desconhecida, mantidas em recintos individuais, que obedeciam às instruções normativas do Instituto Brasileiro do Meio Ambiente e dos Recursos Naturais Renováveis (IBAMA) na Fundação Parque Zoológico de São Paulo (7) (FPZSP) e Parque Zoológico Municipal "Quinzinho de Barros" - Sorocaba (3) (PZMS).

Para a eletroejaculação, os animais eram contidos quimicamente com a associação tiletamina-zolazepam (Zoletil 50-Virbac do Brasil), na proporção de 10 mg/kg. O aparelho utilizado para a geração dos eletrochoques era o modelo Torjet 65A (Eletrovet), alimentado por corrente elétrica de 110/220V. O eletrodo retal era bipolar, com três tiras longitudinais em cobre com 9 cm de comprimento, o diâmetro do eletrodo era de 2,3 cm com comprimento de 29 cm. O eletrodo era devidamente lubrificado com carboxi-metil-celulose e introduzido no reto por, aproximadamente, 15 cm, com as tiras longitudinais posicionadas ventralmente sob leve pressão. O pênis era exposto, devidamente lavado, e um copo coletor plástico, aquecido na palma da mão, era acoplado. A série de eletrochoques seguiu o protocolo de 80 estímulos divididos em 3 séries (série 1 com 10 estímulos em 2, 3, 4V; série 2 com 10 estímulos em 3, 4, 5V; série 3 com 10 estímulos em 5 e 6V)^13,24. O material obtido era imediatamente examinado quanto ao aspecto e coloração e, em seguida, era transferido para um tubo graduado onde se verificava o volume. Para a obtenção de pH, utilizou-se tira reagente (Merck). Uma pequena fração do ejaculado, sobre lâmina de vidro para microscopia previamente aquecida a 37ºC em mesa aquecedora (Eletrovet), era coberta com lamínula e levada ao microscópio ótico binocular (Olimpus BHK), onde era avaliado quanto à motilidade (0-100%) e vigor (0-5). A concentração espermática era avaliada com sêmen diluído 1:3 em câmara hematimétrica de Neubauer. Outra fração do ejaculado era fixada em formol salino a 10%, convenientemente preparada para exame em microscópio de contraste de fase (Zeiss), que permitiu realizar a avaliação de morfologia espermática. Para avaliação e caracterização dos ejaculados, eram utilizadas medidas de tendência central (x) e medidas de dispersão (d ).

RESULTADOS

A eletroejaculação foi realizada 54 vezes, obtendo-se ejaculado em 100% dos procedimentos. Houve contaminação por urina em duas colheitas (3,7%), confirmada por diminuição do pH e coloração amarelada da amostra, que à microscopia apresentava espermatozóides. Em 11 (20,4%) ocasiões, os ejaculados não continham espermatozóides. A coloração do ejaculado variou entre transparente a esbranquiçado. O pH médio normal observado foi 7. Em ocasiões em que ocorreu contaminação por urina, o pH variou de 5 a 6. O volume médio obtido foi de 7,42 ± 3,69 ml, com motilidade média de 62,6 ± 11,0% e vigor de 2,71 ± 0,52. A concentração espermática foi 6,20 ± 3,03x10⁶ espermatozóides/ml, sendo que a porcentagem média de espermatozóides morfologicamente normais foi 46,7 ± 5,8% (Tab. 1 e 2 e Fig. 1).

Tabela 1

Tabela 2

Valores médios das características seminais de onça pintada (n = 43 amostras). São Paulo/Sorocaba, 1996 a 1997.

Figura 1

DISCUSSÃO

A técnica de colheita de sêmen por eletroejaculação revelou-se eficiente, uma vez que 100% dos procedimentos produziram ejaculado. Platz Jr.; Seager¹⁴, trabalhando com gatos domésticos, utilizaram protocolo com 180 estímulos, que variavam de 2V a 7V, e obteve 60,6% de sucesso. Wildt et al.²⁴ não avalia a técnica em si, mas relata que entre 22 cheetahs (Acinonyx jubatus) 18 produziram ejaculado, porém a não-obtenção de sêmen nos outros 4 animais parece estar mais relacionada à aspermia - propriamente dita - que à não-resposta ao protocolo, uma vez que repetidos procedimentos produziram ejaculado nos outros animais. Desde então, vários autores adotaram a metodologia, sendo que se observa regularidade na obtenção de sêmen nas várias espécies de felinos estudadas^{1,3,7,8,16,19,25}.

A contaminação do ejaculado por urina ocorreu em apenas 3,7% dos procedimentos, resultado bastante satisfatório se considerarmos ser este o principal problema na eletroejaculação de felinos^10,14,18,21. Possivelmente, a contaminação do ejaculado por urina esteja relacionada ao posicionamento mais cranial do eletrodo no momento da eletroejaculação^6,10,17, uma vez que parece haver maior proximidade entre a inervação controladora da micção e a inervação controladora da ejaculação, na família Felidae¹⁰.

A variação da coloração pode ser explicada pelas diferenças dos ejaculados. Aqueles que não apresentavam espermatozóides mostravam-se transparentes, ao passo que aqueles mais concentrados apresentavam coloração esbranquiçada.

A literatura apresenta poucos trabalhos avaliando sêmen de Panthera onca^4,7,11. Os resultados obtidos estão próximos aos encontrados por outros autores^7,11, exceto quando comparado às anormalidades espermáticas que apresentaram índices superiores em nosso trabalho.

As causas do elevado índice de espermatozóides morfologicamente anormais dos animais estudados são de difícil interpretação. Howard⁶ relata que elevados índices de anormalidade espermática são comuns na família Felidae. Geralmente as alterações de qualidade espermática estão diretamente relacionadas a três grandes fatores: genéticos, nutricionais e ambientais⁹.

Considerando-se o fator genético, elevado índice de espermatozóides morfologicamente anormais (75%) tem sido associada a baixa variabilidade genética em cheetahs (Acinonyx jubatus)²³. Em pantera da Flórida (Felis concolor coryi), subespécie de puma que apresenta elevado grau de consangüinidade e concomitante perda de variabilidade genética, a incidência de espermatozóides anormais está em torno de 95%¹⁵. Sendo os animais estudados de origem desconhecida, o estudo de paternidade pode contribuir substancialmente para a elucidação da causa do elevado índice de espermatozóides morfologicamente anormais.

Quanto ao aspecto nutricional, deve-se considerar que as dietas fornecidas pelos zoológicos sul-americanos são baseadas em carne (eqüina ou bovina) ou frango e pescoço de frango sem suplementação mineral e vitamínica, diminuindo a concentração espermática e aumentando a porcentagem de espermatozóides morfologicamente anormais, quando comparadas às dietas suplementadas.

Condições ambientais desfavoráveis podem conduzir ao estresse, afetando o ciclo espermatogênico². No entanto, no presente estudo, é difícil avaliar o impacto da condição de cativeiro, uma vez que não há informações quanto às características do sêmen de onça pintada em vida livre, que permita comparação.

CONCLUSÃO

De acordo com os resultados obtidos, podemos concluir que:

a) a técnica utilizada é bastante eficiente para a obtenção de ejaculados em onça pintada, devendo ser adotada rotineiramente nesta espécie, tanto para obtenção de ejaculados em animais em cativeiro como para animais em vida livre;

b) observou-se elevado índice de anormalidade espermática, quando comparado a outros autores;

c) estudos devem ser conduzidos no sentido de elucidarmos as possíveis causas do elevado índice de anormalidades espermáticas, dando-se ênfase aos fatores genéticos e nutricionais.

AGRADECIMENTOS

Fundação Parque Zoológico de São Paulo, Parque Zoológico Municipal "Quinzinho de Barros".

Apoio financeiro: CAPES, CNPq.

SUMMARY

Electroejaculation was performed in 10 jaguars (Panthera onca) of unknown breed, granted by the Fundação Parque Zoológico de São Paulo and Parque Zoológico Municipal "Quinzinho de Barros", with routine feeding for each institution. The electroejaculation was successful in 100% of the cases (n = 54), urine contamination occurred in 3.7% (n = 2), and in 11 (20.4%) were obtained ejaculates without spermatozoa. The mean obtained volume was 7.42 ± 3.69 ml, with motility 62.6 ± 11.0% and status 2.71 ± 0.52. The sperm concentration was 6.20 ± 3.03x10⁶ sperm/ml, with normal morphology spermatozoa 46.7 ± 5.8%. The electroejaculation technique was efficient for semen collection on jaguars.

UNITERMS: Electroejaculation; Spermatozoa; Jaguar.

Recebido para publicação: 03/02/1997

Aprovado para publicação: 23/09/1997

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1

Departamento de Produção Animal da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da USP - SP

² Fundação Parque Zoológico de São Paulo - SP

³ Parque Zoológico Municipal "Quinzinho de Barros" - SP

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  11 Ago 2000
• Data do Fascículo
  1998

Histórico

• Recebido
  03 Fev 1997
• Aceito
  23 Set 1997