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Revista Odonto Ciência

On-line version ISSN 1980-6523

Rev. odonto ciênc. (Online) vol.25 no.1 Porto Alegre  2010

http://dx.doi.org/10.1590/S1980-65232010000100010 

ORIGINAL ARTICLE

 

Quality evaluation of DNA obtained from stored human saliva and its applicability to identification in Forensic Dentistry

 

Avaliação da qualidade do DNA extraído de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade na identificação em Odontologia Legal

 

 

Suzana Papile Maciel CarvalhoI; Arsenio Sales-PeresII; Lucilene Arilho Ribeiro-BicudoIII; Ricardo Henrique Alves da SilvaIV

IDoutorado em Odontologia Social, Universidade de São Paulo, São Paulo, SP, Brasil
IIFaculdade de Odontologia de Bauru, Universidade de São Paulo, Bauru, SP, Brasil
IIIHospital de Reabilitações de Anomalias Crânio-faciais de Bauru, Universidade de São Paulo, Bauru, SP, Brasil
IVFaculdade de Odontologia de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, SP, Brasil

Correspondence

 

 


ABSTRACT

PURPOSE: This study evaluated the quality of DNA obtained from stored human saliva and its applicability to human identification.
METHODS: The saliva samples of 20 subjects, collected in the form of saliva in natura and from mouth swabs and stored at -20ºC, were analyzed. After 7 days, the DNA was extracted from the 40 saliva samples and subjected to PCR and electrophoresis. After 180 days, the technique was repeated with the 20 swab samples.
RESULTS: The first-stage results indicated that DNA was successfully extracted in 97.5% of reactions, 95% of saliva in natura and 100% of swab saliva samples, with no statistically significant difference between the forms of saliva. In the second phase, the result was positive for all 20 analyzed samples (100%). Subsequently, in order to analyze the quality of the DNA obtained from human saliva, the SIX3-2 gene was tested on the 20 mouth swab samples, and the PCR products were digested using the MbO1 restriction enzyme to evaluate polymorphisms in the ADRA-2 gene, with positive results for most samples.
CONCLUSION: It was concluded that the quantity and quality of DNA from saliva and the techniques employed are adequate for forensic analysis of DNA.

Key words: Human identification; Forensic Dentistry; Forensic Medicine; DNA; molecular biology; saliva


RESUMO

OBJETIVO: Este trabalho objetivou avaliar a qualidade do DNA obtido de saliva humana armazenada e sua aplicabilidade da identificação de pessoas.
METODOLOGIA: Analisaram-se amostras salivares de n=20 sujeitos da pesquisa, coletadas nas formas de saliva in natura e de swab bucal, sendo armazenadas a 20ºC. Após 7 dias, o DNA foi extraído das 40 amostras de saliva e submetido à PCR e à eletroforese. Após 180 dias repetiu-se a técnica nas 20 amostras de swab.
RESULTADOS: Os resultados da primeira etapa indicaram que o DNA foi extraído com sucesso em 97,5% das reações, e, analisando-se separadamente, em 95% de saliva in natura e em 100% da saliva do swab, não havendo diferenças estatisticamente significantes entre as duas formas de saliva. Na segunda fase, o resultado foi positivo para as 20 amostras analisadas (100%). Posteriormente, para analisar a qualidade do DNA obtido da saliva humana, o gene SIX3-2 foi testado nas 20 amostras de swab bucal e foi feita a digestão do produto da PCR com a enzima de restrição MbO1 para avaliar polimorfismo do gene ADRA-2 obtendo-se resultados positivos para a maioria das amostras.
CONCLUSÃO: Concluiu-se que a quantidade e a qualidade do DNA advindo de saliva e as técnicas empregadas estão adequadas à análise forense do DNA.

Palavras-chave: Identificação humana; Odontologia Legal; Medicina Legal; DNA; biologia molecular; saliva


 

 

Texto completo disponível apenas em PDF.

Full text available only in PDF format.

 

 

References

1. Oliveira RN, Daruge E, Galvão LCC, Tumang AJ. Contribuição da odontologia legal para a identificação post-mortem. Rev Bras Odontol 1998;55:117-22.         [ Links ]

2. Silva RHA, Oliveira RN. Odontologia legal e a busca pela identidade humana [Internet]. 2006. [cited 2006 Dez 20]. Availabe from: http://www.jornaldosite.com.br.         [ Links ]

3. Remualdo VR, Oliveira RN. Potencial de análise forense do DNA de diferentes amostras biológicas. Rev Assoc Paul Cir Dent 2005;59:421-52.         [ Links ]

4. Schie RCAA van, Wilson ME. Saliva: a convenient source of DNA for analysis of bi-allelic polymorphisms of Fc gamma receptor IIA (CD32) and Fc gamma receptor IIIB (CD16). J Immunol Methodos 1997;208:91-101.         [ Links ]

5. Trevillato PC, Line SR. Use of buccal epithelial cell for PCR amplification of large DNA fragments. J Forensic Odontostomatol 2000;18:6-9.         [ Links ]

6. Yamamoto Y, Ishizu H. Km genotyping by polymerase chain reaction (PCR) using allele-specific amplification primers. Forensic Sci Int 1995;75:85-93.         [ Links ]

7. Sweet D, Dizzino JA. Personal identification through dental evidence - tooth fragments to DNA. J Calif Dent Assoc 1996;24:35-42.         [ Links ]

8. Hochmeister MN, Rudin O, Ambach E. PCR analysis from cigarette butts, postage stamps, envelope sealing flaps and others saliva-stained material. In: Lincooln PJ, Thomson J, editors. Forensic DNA profiling protocols. Totowa: Humana Press; 1998. p.27-32. (Methods in molecular biology, n. 98).         [ Links ]

9. Sweet D, Hildebrand D. Recovery of DNA from human teeth by cryogenic grinding. J Forensic Sci 1998;43:1199-202.         [ Links ]

10. Brasil. Conselho Nacional de Saúde. Resolução nº 196, de 10 de Outubro de 1996. Aprova as diretrizes e normas regulamentadoras de pesquisas envolvendo seres humanos. [internet]. 1996. [cited 2007 Fev 10]. Available from: http://conselho.saude.gov.br/resolucoes/reso_96.htm        [ Links ]

11. Umeda M. The utility of whole saliva to detect the oral presence of periodontopathic bacteria. J. Periodontol 1998;69:828-33.         [ Links ]

12. Sakai VT, Campos MR, Machado MA, Lauris JR, Greene AS, Santos CF. Prevalence of four putative periodontopathic bacteria in saliva of a group of Brazilian children with mixed dentition: 1-year longitudinal study. Int J Paediatr Dent 2007;17:192-9.         [ Links ]

13. Federal Bureau of Investigation. Quality assurance audit for forensis DNA and convicted offender DNA databasing laboratories. Forensic Sci Commun [serial on the internet]. 2001. [cited 2001 Sep 28]. Available from: http://www.fbi.gov/hq/lab/fsc/backissu/jan2001/dnaaudit.htm        [ Links ]

14. Internacional Criminal Police Organization. INTERPOL handbook on DNA data exchange and practice. [handbook online]. 2001. [cited 2002 Mar 01]. Available from: http://www.interpol.int/Public/Forensic/dna/HandbookPublic.pdf        [ Links ]

15. São Paulo (Estado). Secretaria de Segurança Pública de São Paulo. Resolução SSP-194 de 02 de junho de 1999. Diário Oficial do Estado. 1999 Jun 3: Seção 1:104.         [ Links ]

16. Federal Bureau of Investigation. Handbook of forensic services: evidence examinations- DNA general [handbook online]. 1999. [cited 2008 May 10]. Available from: http://www.fbi.gov/hq/lab/handbook/exasdna.htm        [ Links ]

17. Strachan T, Read A. Genética molecular humana. 2. ed. Porto Alegre: Artmed; 2002.         [ Links ]

18. Ng DP, Koh D, Choo SG, Ng V, Fu Q. Effect of storage conditions on the extraction of PCR-quality genomic DNA from saliva. Clin Chim Acta 2004; 343:191-4.         [ Links ]

19. Mätto J, Saarela M, Alaluusua S, Oja V, Jousimies-Somer H, Asikainen S. Detection of Porphyromonas gingivalis from saliva by PCR by using a simple sample-processing method. J. Clin. Microbiol 1998;36:157-60.         [ Links ]

20. Rahimi M, Heng NC, Kieser JA, Tompkins GR. Genotypic comparison of bacteria recovered from human bite marks and teeth using arbitrarily primed PCR. J Appl Microbiol 2005;99:1265-70.         [ Links ]

21. Anzai EK. Extração de DNA de saliva humana depositada sobre a pele e sua aplicabilidade aos processos de identificação individual. [dissertation]. São Paulo (SP): Faculdade de Odontologia, Universidade de São Paulo; 2002.         [ Links ]

22. Allen M, Saldeen T, Gyllensten U. PCR- Based DNA typing of saliva on stamps and envelopes. Biotechniques1994;17:546-52.         [ Links ]

 

 

Correspondence:
Suzana Papile Maciel Carvalho
Rua Christiano Pagani, 8-51, Apto. 61B,
Vila Engler Bauru, SP
rasil 17047-144
E-mail: sumaciel@uol.com.br

Received: March 23, 2009
Accepted: November 16, 2009