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Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 33, Número: 4, Publicado: 2002
  • Descoberta de inibidor de tripsina em sementes de Eucalyptus urophylla e sua influência sobre o crescimento in vitro dos fungos Pisolithus tinctorius e Rhizoctonia solani Environmental And Soil Microbiology

    Tremacoldi, Célia Regina; Pascholati, Sérgio Florentino

    Resumo em Português:

    Os inibidores de proteases de plantas podem regular a hidrólise de proteínas no interior celular e também participar de seus mecanismos de defesa contra insetos herbívoros e patógenos. No presente trabalho, nós demonstramos que sementes de Eucalyptus urophylla apresentam atividades de inibidores de tripsina e papaína, duas proteases comumente encontradas em seres vivos. Pequenas quantidades de proteínas do extrato protéico bruto de sementes e de frações parcialmente purificadas por filtração em gel, com atividade inibitória de tripsina, inibiram o crescimento micelial in vitro de um isolado compatível do fungo ectomicorrízico Pisolithus tinctorius e permitiram um crescimento insatisfatório de outro isolado de Pinus taeda, considerado compatível para esta espécie de eucalipto. As mesmas concentrações de proteínas, quando testadas in vitro sobre o patógeno Rhizoctonia solani, não demonstraram qualquer efeito sobre seu crescimento. Estes resultados indicam a existência de inibidores de proteases em sementes de E. urophylla, os quais poderiam influenciar o complexo sistema bioquímico que diferencia mecanismos de simbiose e patogenicidade entre plantas e microrganismos.

    Resumo em Inglês:

    Inhibitors of plant proteases can regulate the hydrolysis of proteins inside the cells and also participate in the mechanisms of plant defense against herbivore insects and pathogens. Here, we demonstrated that seeds of Eucalyptus urophylla exhibit activities of trypsin and papain inhibitors, two proteases commonly found in living cells. Low amounts of proteins of the crude protein extract of seeds and fractions partially purified by gel filtration, with inhibitory activity against trypsin, inhibited in vitro the mycelial growth of a compatible isolate of the ectomycorrhizal fungus Pisolithus tinctorius and allowed an unsatisfactory growth of another isolate from Pinus taeda, considered incompatible for this eucalyptus species. The same amounts of inhibitory proteins, when tested in vitro on the pathogen Rhizoctonia solani, did not exhibit any effect on the growth of the pathogen. These results indicate the existence of proteases inhibitors in seeds of E. urophylla which could influence the complex biochemical system that differentiates mechanisms of symbiosis and pathogenicity between plants and microorganisms.
  • Aspectos ecológicos da resistência antimicrobiana de bactérias de importância em infecção humana Environmental And Soil Microbiology

    Meirelles-Pereira, Frederico de; Pereira, Angela de Meirelles Santos; Silva, Márcio Cataldo Gomes da; Gonçalves, Verônica Dias; Brum, Paulo Roberto; Castro, Almeida Ribeiro de; Pereira, Alexandre Adler; Esteves, Francisco de Assis; Pereira, José Augusto Adler

    Resumo em Português:

    Tendo em vista a íntima relação entre os seres humanos e as lagoas costeiras (usadas para recreação, turismo, fornecimento de água, etc.), o lançamento de efluentes domésticos e hospitalares podem contribuir para o estabelecimento de rotas de disseminação de microorganismos patogênicos, incluindo aqueles carreadores de genes de resistência a antimicrobianos. O objetivo da presente investigação foi o de relacionar a presença de bactérias resistentes a antimicrobianos com características ambientais de três lagoas costeiras, comparando os resultados com os obtidos em esgoto hospitalar. Das lagoas estudadas, duas (Geribá e Imboassica) recebem efluentes domésticos e outra (Cabiúnas), se encontra em estado natural. Utilizando cultura contendo 32 µg/ml de Cefalotina, isolamos coliformes fecais (E. coli), coliformes não-fecais (Klebsiella, Enterobacter, Serratia e Citrobacter), bacilos gram-negativos não fermentadores de glicose e Aeromonas sp. Nas culturas de esgoto hospitalar foram isoladas cepas contendo marcadores de resistência para a maioria dos 11 antibióticos testados. No outro extremo, foram isoladas apenas cepas apresentando resistências a antibióticos freqüentemente observadas em situações não-seletivas (considerados aqui como marcadores "comuns") nas lagoas Cabiúnas e Imboassica. A capacidade de diluição do corpo aquático e a salinidade mostraram-se relacionados com a ocorrência de cepas multirresistentes, enquanto a intensidade de contaminação fecal recente não se mostrou associada ao número e tipos de marcadores detectados.

    Resumo em Inglês:

    In view of the intimate relationship of humans with coastal lagoons (used for recreation, tourism, water supply, etc.), the discharge of domestic effluents may lead to the establishment of routes of dissemination of pathogenic microorganisms, including microorganisms carrying genes for resistance to antimicrobials, through the surrounding human communities. The objective of the present investigation was to relate the presence of antimicrobial-resistant bacteria to the environmental characteristics of three coastal lagoons, comparing the results with those from hospital sewage. Of the lagoons evaluated, two (Geribá and Imboassica) receive domestic sewage discharge, and the other (Cabiúnas) is still in a natural state. We isolated in a culture medium containing 32 ¼ µg/ml of Cephalothin, fecal coliforms (E. coli), non-fecal coliforms (Klebsiella, Enterobacter, Serratia, and Citrobacter), non-glucose-fermenting Gram-negative bacilli, and Aeromonas sp. In cultures from the hospital drain we found strains showing numerous markers for resistance to most of the 11 antimicrobials tested. On the other hand, in cultures from Cabiúnas and Imboassica lagoons, we found strains showing resistance only to antibiotics frequently observed in non-selective situations (considered as "common" markers). The capacity for dilution in the ecosystem, and salinity appeared related with the occurrence of multi-resistant bacterial strains. The intensity of recent fecal contamination was not shown to be associated with the numbers and types of markers found.
  • Sistema de galerias pluviais como vetor poluente da zona costeira de Fortaleza, Ceará, Brasil Environmental And Soil Microbiology

    Vieira, Regine H.S.F.; Catter, Karla M.; Saker-Sampaio, Silvana; Rodrigues, Dália P.; Theophilo, Grace N.D.; Fonteles-Filho, Antonio A.

    Resumo em Português:

    O objetivo deste trabalho foi realizar o diagnóstico da poluição costeira, através da análise bacteriológica da água de galerias pluviais e da zona marinha adjacente. Entre setembro de 2000 e março de 2001 foram obtidas 90 amostras, sendo 45 nas galerias e 45 na adjacente zona marinha, localizadas em frente aos seguintes pontos de coleta: Esplanada Hotel, Imperial Othon Palace e Estátua de Iracema. Os resultados foram apresentados como o Número Mais Provável (NMP) de coliformes fecais por 100 ml (CF/100ml), e submetidos a comparação estatística nos regimes de preamar e baixamar por Análise de Variância e Teste de Tukey. As conclusões são: (a) a maior parte das amostras de água coletadas nas galerias apresentou valores de NPM de CF/100 ml superiores a 1.000; (b) a zona marinha adjacente apresentou apenas 20% das amostras com NPM de CF/100 ml maior do que 1.000, fato que pode estar relacionado com a distância das galerias à praia; (c) as galerias apresentaram NMP de CF/100 ml sempre mais altos que a zona marinha; (d) das 180 cepas isoladas, 118 eram E. coli; (e) os maiores índices de poluição por CF em galerias ocorreram em frente ao Imperial Othon Palace e, na zona marinha adjacente, em frente à Estátua de Iracema; (f) o regime de preamar contribui para o aumento da poluição da zona costeira por coliformes fecais; (g) os elevados índices de poluição por coliformes fecais só podem ser explicados pela existência de esgotos ilegais conectados às galerias pluviais.

    Resumo em Inglês:

    The aim of this study was to make a diagnosis of coastal pollution through bacteriological analysis of water taken from stormwater drain systems and the nearby seashore. The results were submitted to statistical analysis as to differences in the Most Probable Number (MPN) of fecal coliform (FC) found between the stormwater drain systems and adjacent seashore locations both at low and high tides. The main conclusions were: (a) most water samples collected from the stormwater systems presented MPN values for FC above 1,000 per 100 ml; (b) only 20% of the samples from the adjacent seashore presented MPN values for FC above 1,000 per 100 ml, a fact which may be explained by the distance between the drain system outlets and the actual seashore; (c) FC/100 ml values were invariably higher in the stormwater drain systems than in seawater; (d) out of the 180 strains isolated, 118 were Escherichia coli; (e) the highest in-sewer pollution rate was found at the sampling location in front of Imperial Othon Palace Hotel (IO-SEW), characterized by the presence of an everlasting puddle, while the most polluted seawater sample was taken in front of Statue of Iracema (SI-SEA); (g) the high tide regime enhances the chance of pollution of the coastal zone by fecal coliforms; (h) the high pollution indices by fecal coliforms can only be accounted for by the existence of illegal sewage pipelines connected to the stormwater drain systems.
  • Uso de RAPD, coloração de atividade enzimática e tamanho de colônia para diferenciação de isolados fitopatogênicos de Fusarium oxysporum obtidos no Irã Environmental And Soil Microbiology

    Motallebi, Mostafa; Zamani, Mohammad Reza; Jazayeri, Omid; Harighi, Mohammad Javad

    Resumo em Português:

    Fusarium oxysporum é um fitopatógeno amplamente difundido nos solos. A doença amarela do grão-de-bico (Cicer arietinum), causada por ele é destrutiva e um grande problema nas regiões produtoras do Irã. Três métodos de laboratório: amplificação aleatória de DNA genômico (RAPD), coloração de atividade enzimática e determinação das dimensões de colônia, foram usados para diferenciar isolados de Fusarium oxysporum altamente virulentos (HV) e fracamente virulentos (WV). Baseado no tamanho da colônia (método morfológico tradicional) e na capacidade dos isolados produzirem enzimas pécticas, cinco isolados HV foram diferenciados de três WV. Enquanto os isolados HV formaram colônias grandes (entre 10,1 e 12,6 mm de diâmetro) e apresentaram o mesmo padrão enzimático, os isolados WV produziram colônias pequenas (entre 5,8 e 7,8 mm de diâmetro) e não tiveram atividade enzimática detectável no gel de cobertura corado. Doze primers arbitrários foram testados nos 8 isolados de Fusarium oxysporum por reação de polimerase em cadeia (PCR). As análises dos dados da amplificação de DNA pelo método de amplificação aleatória do DNA polimórfico (RAPD) diferenciaram os isolados HV dos WV. Os resultados obtidos pelo teste RAPD confirmaram a classificação dos 8 isolados pelos testes de patogenicidade, tamanho da colônia e atividade enzimática de coloração nos dois grupos, HV e WV.

    Resumo em Inglês:

    Fusarium oxysporum is a common soilborn plant pathogen with a worldwide distribution. Fusarium yellows disease of chickpea (Cicer arientinum) caused by F.oxysporum is one of the most destructive soilborn disease which is a major production constraint in chickpea-growing regions of Iran. Three laboratory methods "amplification of genomic DNA using random primers, enzyme activity staining, and colony size determination" have been used to discriminate between highly virulent (HV) and weakly virulent (WV) isolates of F. oxysporum. On the basis of colony size (a traditional morphological method) and the ability of isolates to produce pectic enzymes, five HV isolates were differentiated from three WV isolates. The HV isolates formed large colony (ranging from 10.1 to 12.6 mm in diameter) and showed the same enzyme pattern,while the WV isolates produced small colony (ranging from 5.8 to 7.8 mm in diameter) and had not detectable enzyme activity in the stained overlaying gel. Twelve arbitrary 10-mer primers were tested on these 8 isolates of F. oxysporum by Polymerase Chain Reaction (PCR). Cluster analysis of the data from the DNA amplification by Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD), differentiated HV from WV isolates. The results obtained from RAPD test confirmed the classification of these eight isolates based on pathogenicity test, colony size, and enzyme activity staining into two groups (HV and WV).
  • Diversidade bacteriana do solo em resposta a diferentes plantas, fertilizantes fosfatados e calagem Environmental And Soil Microbiology

    Silva, Paulo da; Nahas, Ely

    Resumo em Português:

    Este estudo avaliou a diversidade de bactérias isoladas do solo em resposta a diferentes plantas (controle, Brachiaria ruziziensis e Cajanus cajan), fertilizantes (controle, superfosfato simples e fosfato de rocha) e calagem (com e sem calcário). As características fenotípicas e fisiológicas dos isolados foram registradas e organizadas em um arquivo para identificar as bactérias. Entre os isolados, 95% foram de bactérias Gram positivas e 5% bacilos Gram negativos. B. ruziziensis favoreceu mais os bacilos Gram positivos não esporulados e bacilos Gram negativos que o solo com C. cajan ou não cultivado. O número de bacilos Gram positivos esporulados foi superior nas parcelas fertilizadas com fosfato do que nas não adubadas ou fertilizadas com fosfato de rocha. Nas parcelas não fertilizadas, maior número de cocos Gram positivos e bacilos Gram negativos foi obtido do que nas parcelas fertilizadas. A ausência de calagem favoreceu os bacilos Gram positivos esporulados, cocos Gram positivos e os bacilos Gram negativos, enquanto que, com calagem foram encontradas proporções maiores de bacilos Gram positivos não esporulados. De 7 a 86% do total de isolados utilizaram diferentes carboidratos. O registro dos dados utilizado neste experimento foi efetivo na identificação dos isolados e pode ser útil para o diagnóstico das bactérias do solo. Os gêneros mais freqüentes foram Bacillus, Cellulomonas, Rhodococcus, Enterobacter, Flavobacterium, Micrococcus e Arthrobacter. A diversidade bacteriana foi aumentada nas parcelas com calagem, não fertilizadas e cultivadas com plantas.

    Resumo em Inglês:

    The diversity of bacterial isolates from soil in response to different plants (control, Brachiaria ruziziensis and Cajanus cajan), fertilization (control, simple superphosphate and rock phosphate) and liming (with and without lime) was evaluated. Phenotypic and physiological characteristics of the isolates were recorded and organized in a file to identify the bacteria. Among the isolates, 95% were Gram-positive and 5% Gram-negative rods. Soil cultivated with B. ruziziensis favored the nonsporing Gram-positive and Gram-negative rods compared to soils with C. cajan or uncultivated. Number of spore-forming Gram-positive rods were higher in plots with superphosphate than in unfertilized soil or soil fertilized with rock phosphate. In unfertilized plots, larger number of Gram-positive cocci and Gram-negative rods was obtained than in fertilized plots. Unlimed plots favored spore-forming Gram-positive rods, Gram-positive cocci and Gram-negative rods, while with liming a larger proportion of nonsporing Gram-positive rods was found. From 7 to 86% of the total isolates utilized different carbohydrates. The recording data used in this experiment was effective in the isolates identification, and might be useful for diagnosis of soil bacteria. Bacillus, Cellulomonas, Rhodococcus, Enterobacter, Flavobacterium, Micrococcus and Arthrobacter were the genera more commonly found. Bacterial diversity was enhanced in limed, unfertilized and plant cultivated plots.
  • Avaliação de atividade antibacteriana de extratos de seis macroalgas do nordeste brasileiro Environmental And Soil Microbiology

    Lima-Filho, José Vitor M.; Carvalho, Ana F.F.U.; Freitas, Sissi M.; Melo, Vânia M.M.

    Resumo em Português:

    Extratos lipídicos de seis macroalgas (Rhodophyta e Chlorophyta) coletadas na costa do Estado do Ceará foram avaliadas para atividade antibacteriana pelo método de difusão em disco. Os extratos de Amansia multifida (obtidos a partir dos solventes orgânicos hexana, clorofórmio e etanol) demonstraram os melhores resultados contra as espécies entéricas Gram negativas de Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, S. cholerae-suis, Serratia marcescens, Vibrio cholerae e bactérias Gram positivas Bacillus subtilis e Staphylococcus aureus.

    Resumo em Inglês:

    Hexane, chloroform and ethanol extracts of six marine macroalgae (Rhodophyta and Chlorophyta) from North Ceará coast (Northeast Brazil) were evaluated for antibacterial activity by the single disk method. Best results were shown by the hexane extracts of Amansia multifida against enteric Gram-negative strains such as Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, S. cholerae-suis, Serratia marcescens, Vibrio cholerae and the Gram-positive bacteria Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus.
  • Efeito de biomassa como fonte de proteína no cultivo de Drosophila Environmental And Soil Microbiology

    Uysal, Handan; Aydogan, M. Nuri; Algur, O. Faruk

    Resumo em Português:

    Investigou-se os efeitos de biomassa de Phanerochaete chrysosporium em diferentes concentrações (1; 2,5; 5; 10; 25; 50; 75 e 100%) no crescimento de Drosophila melanogaster. Em meio SDM (Standard Drosophila Medium) a biomassa foi empregada como fonte de proteína, em substituição à farinha de milho. Observou-se que a biomassa causou aumento no tamanho corporal das larvas e no número de descendentes, especialmente nas concentrações mais elevadas (50, 75 e 100%). Ao usar-se a concentração de 100%, a metamorfose acelerou-se e completou-se um dia antes do controle. Foram observadas anormalidades fenotípicas tanto no meio controle (0,64%) quanto no meio contendo baixas concentrações de biomassa (0,02 a 0,19%), mas essas anormalidades não foram observadas na concentração de 100%.

    Resumo em Inglês:

    The effects of biomass of Phanerochaete chrysosporium at various concentrations (1; 2.5; 5; 10; 25; 50; 75 and 100%) on the growth of Drosophila melanogaster have been investigated. Biomass was used as a protein source instead of corn flour in Standard Drosophila Medium(SDM). It was seen that it causes increments in both body size of larvae and the numbers of offsprings, especially at higher concentrations (50, 75 and 100%). At the application of 100% concentration, metamorphosis accelerated and was completed one day before the control. There were phenotipic abnormalities in both control (0.64%) and applications with low concentrations (0.02-0.19%), while they were not observed at the application of 100% concentration
  • Produção de pectinases por Penicillium viridicatum RFC3 através de fermentação em estado sólido, usando resíduos agrícolas e sub-produtos agroindustriais Industrial Microbiology

    Silva, Dênis; Martins, Eduardo da Silva; Silva, Roberto da; Gomes, Eleni

    Resumo em Português:

    A produção de pectina liase (Pl) e poligalacturonase (Pg) por cepa de Penicillium viridicatum Rfc3, recentemente isolada, foi estudada por meio de fermentação em estado sólido usando bagaço de laranja, tegumento de milho, farelo de trigo e cascas de manga e banana como fontes de carbono. Quando os resíduos foram utilizados isoladamente, o valor máximo de atividade de Pg (30 U g-1) foi observado em meio de farelo de trigo, enquanto que o valor máximo para atividade de Pl (2000 U g-1) foi obtido em meio de bagaço de laranja. Misturas de cascas de banana ou de manga com bagaço de cana-de-açúcar (50% p/p), resultaram em aumento na produção tanto de Pl quanto de Pg, quando comparado com os experimentos nos quais esses materiais foram usados isoladamente. A mistura de bagaço de laranja e farelo de trigo (50%) elevou a produção de Pg e Pl para 55 U.g-1 e 3540 U.g-1, respectivamente. O fracionamento das enzimas presentes na solução enzimática bruta, através de filtração em gel Sephadex G50, resultou na obtenção de diferentes frações de Pl e de Pg. As frações de Pg e Pl, as quais foram caracterizadas, apresentaram atividade ótima em pH 5,0 e 10,5, respectivamente. A atividade máxima da fração de Pg foi obtida a 55ºC e, para Pl, a 50ºC. A Pg foi estável em valores de pH próximos à neutralidade e a 40ºC, enquanto que a Pl foi estável em pH ácido e a 35ºC, por uma hora.

    Resumo em Inglês:

    Pectin lyase and polygalacturonase production by newly isolated Penicillium viridicatum strain Rfc3 was carried out by means of solid state fermentation using orange bagasse, corn tegument, wheat bran and mango and banana peels as carbon sources. The maximal activity value of polygalacturonase (Pg) (30U.g-1) was obtained using wheat bran as carbon source while maximal pectin lyase (Pl) (2000 U.g-1) activity value was obtained in medium composed of orange bagasse. Mixtures of banana or mango peels with sugar cane bagasse resulted in increased Pg and Pl production compared to fermentations in which this residue was not used. The mixture of orange bagasse and wheat bran (50%) increased the production of Pg and Pl to 55 U.g-1 and 3540 U.g -1 respectively. Fractions of Pg and Pl, isolated by gel filtration in Sephadex G50, presented optimum activity at pH 5.0 and 10.5 respectively. Maximal activity of Pg and Pl fractions was determined at 55ºC and 50ºC respectively. Pg was stable in neutral pH range and at 40ºC whereas Pl was stable in acidic pH and at 35ºC, for 1 h.
  • Screening de Mucor spp. para produção de amilase, lipase, poligalacturonase e protease Industrial Microbiology

    Alves, Maria Helena; Campos-Takaki, Galba M.; Porto, Ana Lúcia Figueiredo; Milanez, Adauto Ivo

    Resumo em Português:

    Os fungos apresentam a capacidade de produzir e secretar enzimas para o meio ambiente. Entre esses, representantes de Mucor Fresen constituem um grupo de microrganismos com importante potencial biotecnológico, sendo responsáveis pela produção de várias enzimas usadas em processos industriais. Foi observado que 56 isolados do gênero Mucor, totalizando 11 táxons, obtidos de fezes de herbívoros são capazes de produzir amilase, lipase, polygalacturonase e protease em meios sólidos. Os resultados demonstraram que 96% dos isolados produziram poligalacturonase, (84%) amilase, (82%) protease e (66%) lipase.

    Resumo em Inglês:

    Fungi are well known by their ability to excrete enzymes into the environment. Among them, representatives of Mucor Fresen. have important biotechnological potential and some of them produce industrial enzymes. This work studied amylase, lipase, polygalacturonase and protease production by fifty-six isolates of Mucor belonging to 11 different taxa, selected from herbivores dung using solid media. The results showed that the majority of the isolates presented several enzymatic activities with predominance of polygalacturonase (96%), followed by amylase (84%), protease (82%) and lipase (66%).
  • Floculação de partículas de fluorita com Corynebacterium xerosis e com polímeros de cadeia longa comerciais Industrial Microbiology

    Rigo, Lisandra N.; Pinto, Angela Maria; Denardin, Norimar D'Avila; Schneider, Ivo André H.

    Resumo em Português:

    O objetivo do presente trabalho foi estudar, comparativamente, a floculação de partículas de fluorita com células da bactéria Corynebacterium xerosis e com três polímeros floculantes comerciais. Os melhores resultados foram obtidos com C. xerosis e com uma po1iacri1amida aniônica. Ambos sistemas são eficientes em termos da remoção de sólidos e na clarificação da água, porém a floculação com C. xerosis requer uma dosagem mais elevada de reagente por unidade de massa de minério processado.

    Resumo em Inglês:

    This work aimed to study, comparatively, the flocculation of fluorite particles with Corynebacterium xerosis cells and three commercial long chain polymers. Best flocculation results were obtained with cells of C. xerosis and with an anionic polyacrylamide. Both were effective in solids removal and water clarification, although flocculation with C. xerosis cells requires a higher dosage of reagent per mass unit of processed ore.
  • Produção e propriedades de xilanase livre de celulase de Thermomyces lanuginosus IOC-4145 Industrial Microbiology

    Damaso, Mônica Caramez Triches; Andrade, Carolina M.M. Carvalho; Pereira Jr, Nei

    Resumo em Português:

    Nos últimos anos tem crescido o uso de xilanases em muitas indústrias, tais como polpa e papel, alimentos e têxtil. Thermomyces lanuginosus IOC-4145 foi capaz de produzir um alto nível de xilanase livre de celulase em culturas agitadas usando sabugo de milho como substrato (500 U/mL). Procedeu-se, inicialmente, à otimização da composição do meio de produção em fermentação submersa, com o intuito de alcançar uma composição de meio de produção de baixo custo para produção da enzima. Para este propósito, utilizou-se planejamento estatístico de experimentos. O sabugo de milho revelou-se como a mais importante variável que afeta a produção enzimática. Adicionalmente, a influência de vários reagentes na atividade xilanásica foi investigada no extrato bruto. Um pequeno estímulo na atividade enzimática (5-15%) foi observado para NaCl e uréia, ambos nas concentrações de 3 e 5 mM. Por outro lado, ditiotreitol e beta-mercaptoetanol 5mM causaram um grande estímulo na atividade xilanásica (40-53%). A xilanase produzida apresentou apreciável termoestabilidade, retendo quase 50% da atividade inicial durante 24 horas de incubação a 50ºC e, aproximadamente, 50% da atividade foram mantidos a 60ºC, mesmo após 4 horas de incubação. A enzima também exibiu boa estabilidade à estocagem a -20ºC na ausência de qualquer agente estabilizante.

    Resumo em Inglês:

    In recent years, xylanases have expanded their use in many processing industries, such as pulp and paper, food and textile. Thermomyces lanuginosus IOC-4145 was able to produce a very high level of cellulase-free xylanase in shaken cultures using corncob as substrate (500 U/mL). An optimization of the medium composition in submerged fermentation was carried out aiming at a low cost medium composition for enzyme production. Statistical experiment design was employed for this purpose, pointing out corncob as the most important parameter, which affects enzyme production. Additionally, the influence of several chemicals on xylanase activity was investigated in the crude extract. A slight stimulation of the enzyme (5-15%) was achieved with NaCl and urea, both at 3 and 5 mM of concentration. On the other hand, dithiothreitol and beta-mercaptoethanol at a molarity of 5mM have caused a strong stimulation of the enzyme (40-53%). The crude xylanase displayed appreciable thermostability, retaining almost 50% of activity during 24 hours of incubation at 50ºC; about 50% of activity was present at 60ºC even after 4 hours of incubation. The enzyme also exhibited good storage stability at -20ºC without any stabilizing agent.
  • Utilização da separação imunomagnética na detecção de Salmonella em cortes de frango Food Microbiology

    Ribeiro, Aldemir Reginato; Nascimento, Vladimir Pinheiro do; Cardoso, Martha Oliveira; Santos, Luciana Ruschel dos; Rocha, Silvio Luís da Silveira

    Resumo em Português:

    Este trabalho foi conduzido com o objetivo de comparar o método microbiológico convencional para detecção de Salmonella em partes de frango, com o método de separação imunomagnética (IMS) e de separação imunomagnética associada ao caldo Rappaport-Vassiliadis (RV). A IMS foi realizada a partir do caldo de pré-enriquecimento. Os resultados obtidos nas 61 amostras (partes de frango) testadas indicam que a separação imunomagnética seguida de plaqueamento em meio sólido isolou o agente em 9 das 61 amostras, enquanto a associação IMS/RV isolou o agente em 30 das 61 amostras e o método microbiológico convencional foi capaz de isolar a bactéria em 25 amostras. Através destes resultados, conclui-se que a combinação IMS/RV aumenta a sensibilidade do processo. Outra conclusão possível foi de que deve-se buscar outros meios de isolamento e seleção de colônias (em ágar) que não interfiram no crescimento das salmonelas ligadas aos "beads".

    Resumo em Inglês:

    This study was conducted aiming to compare the conventional microbiological method to detect Salmonella in broiler parts with the Immunomagnetic Separation method (IMS) followed by plate isolation and also the IMS associated with Rappaport-Vassiliadis broth (RV). The IMS was performed following a pre- enrichment step in buffered peptone water. Sixty-one samples (raw broiler parts) were tested and the results showed that the use of the IMS method alone allowed the isolation of Salmonella in 9 of the tested samples, while the association IMS/RV detected the agent in 30 samples. The conventional microbiological method was able to isolate the agent in 25 opportunities. These results allowed to conclude that the IMS/RV association presented an increased sensitivity and permitted a better isolation of Salmonella. The conclusion was that other means of isolation, in particular those which do not interfere with the growth of bead bounded Salmonella, should be searched.
  • Salmoneloses no Rio Grande do Sul, Brasil, de 1997 a 1999 Food Microbiology

    Costalunga, Suzana; Tondo, Eduardo Cesar

    Resumo em Português:

    Salmonella spp. foi a principal causa de doenças transmitidas por alimentos nos últimos anos no estado do Rio Grande do Sul, sul do Brasil. Foram avaliados dados epidemiológicos de salmoneloses ocorridas durante o período de 1997 a 1999 fornecidos pela Divisão de Vigilância Sanitária do Rio Grande do Sul. Os seguintes fatores foram investigados: número total de surtos confirmados, número de pessoas envolvidas, incidência dos surtos de acordo com a estação do ano, idade e sexo das pessoas envolvidas, principais alimentos envolvidos, local de armazenagem dos alimentos envolvidos e local de ocorrência dos surtos e suas causas prováveis. Os resultados demonstraram 8217 pessoas envolvidas, das quais 1557 foram hospitalizadas. O maior número de surtos ocorreu durante a primavera, enquanto as pessoas na faixa etária de 16 a 50 anos foram mais frequentemente afetadas. O alimento mais comumente relacionado aos surtos foi a maionese caseira (42,45%), enquanto as principais causas das salmoneloses foram a utilização de matéria-prima sem inspeção (22,92%), na grande maioria ovos, e alimentos mantidos à temperatura ambiente por mais de 2 horas (20,55%). A maioria dos surtos ocorreu dentro de residências (43,70%) e estabelecimentos comerciais (25,21%).

    Resumo em Inglês:

    Salmonella spp. was the major cause of reported foodborne diseases in the last years in the State of Rio Grande do Sul, South of Brazil. Epidemiological data on salmonellosis, occurred in the period of 1997 to 1999 and supplied by the Division of Sanitary Surveillance (DVS/RS), were analysed according to the following factors: total number of confirmed outbreaks, number of people involved, outbreaks incidence according to the period of the year, age and sex of involved people, food vehicle, food storage conditions, local where the disease occurred, and possible causes of the outbreaks. The results indicated that 8217 people were involved, and 1557 had to be hospitalized. The highest number of outbreaks occurred during springtime and the principal age group affected was between 16 and 50 years. The most common food vehicle was salad prepared with homemade mayonnaise (42.45%). The principal causes of salmonellosis were raw-materials not submitted to regulatory inspection (22.92%), mainly eggs, and foods maintained at room temperature for more than 2 hours (20.55%). The majority of the outbreaks occurred in private homes (43.70%) and commercial food establishments (25.21%).
  • Formação e regeneração de protoplastos de Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 e produção de ácido clavulânico Micology

    Carneiro-da-Cunha, Maria das Graças; Lima Filho, José Luiz de; Campos-Takaki, Galba Maria de

    Resumo em Português:

    Protoplastos foram formados a partir de esporos da amostra selvagem de Streptomyces clavuligerus durante a fase lag, exponencial e estacionária de crescimento, utilizando glicina a 0.5% como meio de cultura. Os protoplastos foram obtidos pelo tratamento das células com lisozima (EC-3.2.1.17) 40.000 U (1mg/mL) em solução osmótica de sorbitol e TES, por 90 min a 28ºC. A freqüência de protoplastos regenerados na fase lag foi de 1,7x10³ UFC/mL (28,97%), no início da fase exponencial correspondeu a 0,4x10² UFC/mL (31,67%), no final da fase exponencial observou-se 2,5x10³ UFC/mL (46,30%) e para a fase estacionária de crescimento apresentou 1,0x10(5) UFC/mL (48,45%). A produção do antibiótico e a atividade antibiótica dos protoplastos regenerados foram observadas em todas as fases de crescimento, exceto na fase lag. As técnicas de formação de protoplastos e regeneração resultaram em uma nova linhagem de Streptomyces clavuligerus produzindo 2,5 vezes mais ácido clavulânico.

    Resumo em Inglês:

    Protoplasts of the wild type Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 (ATCC 27064) were formed from spores cultures obtained in the lag, exponential and stationary growth phases by using 0.5% glycine in the culture medium. The protoplasts were obtained by treatment of the cells with lysozyme (EC-3.2.1.17) 40,000 U (1mg/mL), in an osmotic solution for 90 min at 28ºC. The frequency of regenerated protoplasts in the lag phase was 1.7x10³ CFU/mL (28.97%), in the beginning of the exponential phase 0.4x10² CFU/mL (31.67%), in the exponential growth phase 2.5x10³ CFU/mL (46.30%) and 1.0x10(5) CFU/mL in stationary phase (48.45%). Antibiotic production and activity of regenerated protoplasts were observed in all phases, except in the lag phase. The protoplast formation and regeneration techniques resulted in a new isolate strain of Streptomyces clavuligerus that produced approximately 2.5 fold more clavulanic acid.
  • Germinação de conídios e crescimento micelial de Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho influenciados por herbicidas e surfatantes Micology

    Nemoto, Marta Cecília Mallasen; Nahas, Ely; Pitelli, Robinson Antonio; Coelho, Lisias

    Resumo em Português:

    Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho é um forte candidato para o controle de Euphorbia heterophylla L. (amendoim bravo). Este fungo pode ser aplicado em combinação com herbicidas para controlar um maior espectro de espécies daninhas. Para tanto, experimentos laboratoriais foram realizados para verificar a possibilidade da utilização de mistura de tanque de esporos de B. euphorbiae e herbicidas ou surfatantes recomendados para a cultura da soja. Crescimento micelial e germinação de conídios foram avaliados em meio BDA acrescido dos herbicidas, nas concentrações recomendadas dos produtos comerciais, oxasulfuron (80 g/ha), glifosato (4 L/ha), bentazon (1.5 L/ha), fomesafen (1 L/ha), chlorimuron-ethyl (80 g/ha), lactofen (1 L/ha) e imazetaphyr (1 L/ha) e dos surfatantes Energic (2 ml/L), Aterbane (2,5 ml/L), Silwet L-77Ag (1 ml/L), Herbitensil (2 ml/L) e Natur L'óleo (10 ml/L). Diluições dos herbicidas de 50% e 25% foram avaliadas com um consumo de calda equivalente a 300 L/ha. Os surfatantes foram somente utilizados nas concentrações recomendadas. O crescimento micelial não foi afetado por bentazon e fomesafen e apenas levemente por oxasulfuron. Porém, glifosato, chlorimuron-ethyl, lactofen, Energic, Herbitensil, Silwet, e Aterbane o reduziram drasticamente. A redução observada com imazetaphyr foi intermediária e Natur L' óleo promoveu o crescimento micelial. Na presença dos surfatantes, observou-se que todos permitiram uma porcentagem de germinação equivalente àquela alcançada na presença de água. Energic e Herbitensil causaram um retardamento expressivo. Com Herbitensil, o processo germinativo iniciou somente aos 120 minutos. Com herbicidas, foi observado que somente na presença de glifosato e imazetaphyr a germinação dos conídios não seguiu a tendência observada com água, como ocorreu com os outros produtos testados.

    Resumo em Inglês:

    Bipolaris euphorbiae Muchovej & Carvalho can be combined with herbicide in order to control a large spectrum of weed species, being a strong candidate for the biocontrol of Euphorbia heterophylla L. (milk weed). The fungus release can be combined with herbicide in order to control a broader spectrum of weed species. Thus, laboratory experiments were set up to study the feasibility of using tank mixes of B. euphorbiae spores with herbicides or surfactants recommended for soybean. Mycelial growth and conidia germination were evaluated in PDA medium enriched with the herbicides oxasulfuron (80 g/ha), glyphosate (4 L/ha), bentazon (1.5 L/ha), fomesafen (1 L/ha), chlorimuron-ethyl (80 g/ha), lactofen (1 L/ha) and imazetaphyr (1 L/ha), and the surfactants Energic (2 ml/L), Aterbane (2.5 ml/L), Silwet L-77Ag (1 ml/L), Herbitensil (2 ml/L) and Natur L'óleo (10 ml/L). Dilution of the herbicides at 50% and 25% were evaluated based on solution consumption of 300 L/ha. The surfactants were evaluated only in the recommended concentrations. Mycelial growth was not affected by bentazon and fomesafen and slightly by oxasulfuron. However, glyphosate and the surfactants Energic, Herbitensil and Aterbane strongly reduced its growth. The reduction observed on imazetaphyr enriched medium was intermediate and the Natur L'óleo promoted mycelial growth. All of the surfactants allowed B. euphorbiae conidia germination equivalent to that reached in the presence of water. Energic and Herbitensil caused an expressive retardation on spore germination. The germinative process only began after 120 minutes in the presence of Herbitensil. In relation to the herbicides, it was observed that only in the presence of glyphosate and imazetaphyr the conidia germination did not follow the trend of the treatment with water.
  • Análise eletroforética de proteínas totais e marcadores de RAPD na identificação de Aeromonas ao nível de espécie Medical Microbiology

    Delamare, Ana Paula Longaray; Artico, Liane de Oliveira; Grazziotin, Felipe Gobbi; Echeverrigaray, Sergio; Costa, Sérgio Olavo Pinto da

    Resumo em Português:

    Quinze linhagens de Aeromonas pertencentes a treze espécies foram avaliadas através de eletroforese de proteínas totais (SDS-PAGE) e segmentos de DNA amplificados ao acaso (RAPD). A comparação entre os padrões obtidos por ambos métodos permitiu diferenciar todas as linhagens. Agrupamentos formados com base nos dados protéicos mostraram relação com informações bioquímicas e genéticas a respeito das espécies. Os resultados mostraram que análises protéicas têm potencial para diferenciar espécies de Aeromonas, mas a baixa variação qualitativa indica que esta técnica não é eficiente para a caracterização entre linhagens dentro de espécies. Ao contrário, marcadores de RAPD permitem identificar linhagens, mas a alta variabilidade limita seu potencial como método auxiliar na identificação de espécies.

    Resumo em Inglês:

    Fifteen well-defined strains of Aeromonas of thirteen species were analyzed by SDS protein electrophoretic analysis (SDS-PAGE) and random amplified polymorphic DNA analysis (RAPD). The comparison between the patterns obtained by both methods allowed differentiating all the strains. Clusters formed by the unweighted pair group method with arithmetic averages applied to protein data correlates with the genetic and biochemical information about the species. The results show that protein fingerprinting has the potential to differentiate Aeromonas species, but the low qualitative variation indicates that this technique is not efficient for the characterization of strains within a species. Conversely, RAPD fingerprinting allows the identification of strains but the high variability limits its potential as an aiding method for species identification.
  • Leveduras isoladas de materiais clínicos de pacientes com AIDS Medical Microbiology

    Neves, Rejane Pereira; Cavalcanti, Maria Auxiliadora de Q.; Chaves, Guilherme Maranhão; Magalhães, Oliane M.C.

    Resumo em Português:

    Para investigar leveduras em amostras clínicas de secreção orofaríngea, urina, esputo e escamas inguinais em pacientes com AIDS, foram realizadas coletas em 100 pacientes internos no setor de Doenças Infecciosas e Parasitárias do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco e do Hospital Universitário Osvaldo Cruz da Universidade de Pernambuco. Foram isoladas leveduras em setenta e duas amostras clínicas, sendo sessenta e duas de Candida albicans, quatro de C. tropicalis, duas de C. glabrata, duas de C. parapsilosis, uma de C. krusei e uma de Trichosporon pullulans.

    Resumo em Inglês:

    In order to investigate yeasts in oropharyngeal secretion, urine, sputum and inguinal scales from AIDS patients, clinical samples were collected from one hundred patients interned in the Infectious and Parasitic Diseases Sector of the Hospital das Clínicas of the Universidade Federal de Pernambuco and in Hospital Universitário Osvaldo Cruz of the Universidade de Pernambuco. Yeasts were isolated from seventy-two out of one hundred and eight clinical samples. The isolated yeasts were: Candida albicans (sixty-two isolates), Candida tropicalis (four isolates), Candida glabrata (two isolates), Candida parapsilosis (two isolates), Candida krusei (one isolate) and Trichosporon pullulans (one isolate).
  • Atividade antimicrobiana da própolis contra bactérias periodontopatogênicas Oral Microbiology

    Gebara, Elaine C.E.; Lima, Luiz A.; Mayer, Marcia P.A.

    Resumo em Português:

    A atividade antimicrobiana da própolis contra bactérias periodontopatogênicas (ATCC) foi investigada através de testes "in vitro". As cepas bacterianas testadas foram: Prevotella intermedia, Prevotella melaninogenica, Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Capnocytophaga gingivalis e Fusobacterium nucleatum. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada usando-se o método de diluição do extrato de própolis no meio de cultura em diferentes concentrações. Os resultados demonstraram CIM de 1 µg/ml para Actinobacillus actinomycetemcomitans e Capnocytophaga gingivalis; e 0,25 µg/ml para Prevotella intermedia, Prevotella melaninogenica, Porphyromonas gingivalis e Fusobacterium nucleatum. Alguns microrganismos que desempenham "in vivo" papel de superinfectantes também foram testados: a susceptibilidade de Candida albicans ao extrato etanólico de própolis foi observada na concentração de 12 µg/ml. A CIM para Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli e Staphylococcus aureus (tipo selvagem) foi de 14 µg/ml. Todos os patógenos periodontais e microrganismos superinfectantes testados foram sensíveis ao extrato de própolis testado. Os resultados obtidos encorajam a realização de novos estudos com esse extrato de própolis, para avaliar sua utilização como coadjuvante ao tratamento periodontal.

    Resumo em Inglês:

    Propolis extract antimicrobial activity against periodontopathic (ATCC) bacteria was investigated "in vitro". Bacterial strains tested were: Prevotella intermedia, Prevotella melaninogenica, Porphyromonas gingivalis, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Capnocytophaga gingivalis and Fusobacterium nucleatum. Minimal inhibitory concentration (MIC) for the strains tested was determined using the method of broth dilution with the propolis extract in serial concentrations. Results showed MIC of 1 µg/ml for Actinobacillus actinomycetemcomitans and Capnocytophaga gingivalis; and 0.25 µg/ml for Prevotella intermedia, Prevotella melaninogenica, Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nucleatum. Some superinfectant organisms were also tested: Candida albicans susceptibility to propolis ethanolic extract was demonstrated at a concentration of 12 µg/ml. The MIC for Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli and Staphylococcus aureus (wild types) was 14 µg/ml. All periodontal pathogens and superinfectants tested were susceptible to the propolis extract. The positive results suggest that the propolis extract should be further tested as an adjuvant to periodontal therapy.
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