Acessibilidade / Reportar erro
Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 34, Número: 2, Publicado: 2003
  • Bactérias bioluminescentes: os genes lux como biosensores ambientais Mini-Review

    Nunes-Halldorson, Vânia da Silva; Duran, Norma Letícia

    Resumo em Português:

    Bactérias que emitem bioluminescência são amplamente distribuídas em ambientes naturais. Ao longo dos anos vários pesquisadores vêm estudando a fisiologia, bioquímica e controle genético da bioluminescência. Essas descobertas têm revolucionado a Área de Microbiologia Ambiental através da utilização dos genes lux como biosensores em estudos ambientais. Esta revisão examinará a cronologia de descobertas científicas da bioluminescência bacteriana e as aplicações atuais em estudos ambientais, salientando a utilização do teste de toxicidade Microtox. A significância ecológica da bioluminescência será também examinada.

    Resumo em Inglês:

    Bioluminescent bacteria are widespread in natural environments. Over the years, many researchers have been studying the physiology, biochemistry and genetic control of bacterial bioluminescence. These discoveries have revolutionized the area of Environmental Microbiology through the use of luminescent genes as biosensors for environmental studies. This paper will review the chronology of scientific discoveries on bacterial bioluminescence and the current applications of bioluminescence in environmental studies, with special emphasis on the Microtox toxicity bioassay. Also, the general ecological significance of bioluminescence will be addressed.
  • Bacterioplâncton em diferentes marés da gamboa do Perequê, Pontal do Sul, Paraná, Brasil Environmental Microbiology

    Kolm, Hedda Elisabeth; Andretta, Lucimar

    Resumo em Português:

    Com o objetivo de verificar a influência da maré sobre as bactérias foram realizadas coletas de águas superficiais em cinco pontos desde a desembocadura da gamboa (Est. 1) até o seu final (Est. 5) ao longo da Gamboa do Perequê (Estado do Paraná, Brasil), durante as preamares e baixa-mares de sizígia e quadratura em julho de 1999. Foram avaliados os seguintes parâmetros: salinidade, temperatura, pH, oxigênio dissolvido, gás carbônico, seston, matéria orgânica particulada, pluviosidade, clorofila, bactérias heterotróficas totais, biomassa bacteriana, heterotróficas aeróbicas cultiváveis halófilas e halófobas, coliformes totais e Escherichia coli. Os resultados mostraram que os valores mais altos de salinidade, pH e oxigênio dissolvido nas estações de 1 a 4 foram registrados durante as preamares de sizígia. As quantidades de heterotróficas totais foram diretamente proporcionais aos valores de seston e clorofila nas estações 2 e 3 durante a baixa-mar de 28 de julho, e na estação 5 durante a preamar do mesmo dia. Os valores de bactérias heterotróficas aeróbicas halófilas, de halófobas e de coliformes totais e E. coli apresentaram correlação direta com a matéria orgânica particulada e a pluviosidade. Os maiores destes valores foram registrados durante a baixa-mar de quadratura do dia 06 de Julho. Este período foi caracterizado por altas pluviosidades, que podem ter influenciado a variação bacteriana. Durante a preamar de quadratura e, esporadicamente, durante a baixa-mar de quadratura e sizígia, foram registrados os menores valores de bactérias heterotróficas totais e de biomassa bacteriana. Os resultados mostraram grande influência da maré sobre as bactérias das estações 1 a 4, mas não sobre a estação 5.

    Resumo em Inglês:

    The influence of tidal phase on bacteria abundance in surface waters was studied in five stations along the Perequê tidal creek (Paraná State, Brazil), at spring and neap low and high tides in July 1999. The stations were located from the mouth (St.1) to the creek's head (St. 5). The following parameters were analyzed: salinity, temperature, pH, dissolved oxygen, total carbon dioxide, seston, particulate organic matter, pluviosity, chlorophyll "a", total heterotrophic bacteria, bacterial biomass, cultivable heterotrophic aerobic halophilic and halophobic bacteria, total coliforms and Escherichia coli. The results showed that the highest values of salinity, pH and dissolved oxygen at stations 1 to 4 were registered during the spring high tide. The amount of total heterotrophic bacteria was directly proportional to seston and chlorophyl values at stations 2 and 3 during low tide of July 28, and at station 5 during high tide of the same day. The values of cultivable heterotrophic aerobic halophilic and halophobic bacteria, total coliforms and E. coli, were directly correlated with particulate organic matter and pluviosity. The largest of these values were registered during the neap low tide of July 6. This period was characterized by high precipitation, which may have influenced the bacterial number variation. During the neap high tide and, sporadically, during the neap and spring low tide, the lowest values of total heterotrophic bacteria and bacterial biomass were registered. The results showed great influence of the tide on the bacteria at stations 1 to 4, but not at station 5.
  • Estimativa da microbiota desnitrificante em tratamento terciário de esgoto sanitário e cinética do processo de desnitrificação com diferentes fontes de carbono Environmental Microbiology

    Marchetto, Margarida; Gianotti, Eloisa Pozzi; Campos, José Roberto; Pires, Roberto Cleto; Moraes, Elizabeth de Mattos

    Resumo em Português:

    O estudo da cinética do processo de desnitrificação foi realizado em laboratório a partir da quantificação de N2O, produto final da atividade de organismos desnitrificantes, quando acetileno bloqueou a redução enzimática de N2O para N2. Foram utilizados, como inóculo, licor misto concentrado (lodo proveniente de reator com aeração intermitente tratando esgoto sanitário) e, como fontes de carbono: metanol, ácido acético, glicose, esgoto efluente de reator anaeróbio de leito expandido/fluidificado e substrato sintético simulando esgoto sanitário. A concentração média de nitrato foi de 20 mg/L. Entre 0,5h e 2,0h de incubação, ocorreram máximos de produção de N2O e de consumo de NO3-, com todas as fontes de carbono usadas, caracterizando o processo de desnitrificação. Ácido acético e metanol foram responsáveis pelas maiores velocidades de produção de N2O. Os números estimados de microrganismos desnitrificantes no reator com aeração intermitente, empregando a técnica de NMP, variaram entre 10(9) a 10(10) NMP/g.SSV, indicando elevado potencial para a ocorrência da desnitrificação.

    Resumo em Inglês:

    A study of the kinetics of denitrification was carried out in the laboratory based on the quantification of N2O, the final product of the activity of denitrifying microorganisms, when the enzymatic reduction of N2O to N2 was blocked by acetylene. Concentrated mixed liquor (sludge from a reactor with intermittent aeration used for sewage treatment) was used as the inoculum, while methanol, acetic acid, glucose, effluent sewage from an anaerobic fluidized bed reactor and synthetic substrate simulating domestic sewage were used as carbon sources. The mean concentration of nitrate was 20 mg/L. Maxima of N2O production and NO3- consumption occurred between 0.5h and 2.0h of incubation using all the carbon sources, which characterized the denitrification process. Acetic acid and methanol were responsible for the highest rates of N2O production. The estimated number of denitrifying microorganisms in the reactor with intermittent aeration, using the MPN technique, varied from 10(9) to 10(10) MPN/g VSS, indicating a high potential for the occurrence of denitrification.
  • Aparato simples para captura de microrganismos magnetotácticos não cultivados Environmental Microbiology

    Lins, Ulysses; Freitas, Flavia; Keim, Carolina Neumann; Barros, Henrique Lins de; Esquivel, Darci Motta S.; Farina, Marcos

    Resumo em Português:

    Descrevemos um aparato simples para a captura de microrganismos magnetotácticos não cultivados. Este aparato consiste em um recipiente de vidro com duas aberturas. Uma abertura maior na parte superior é usada para introduzir o sedimento e a água. O sedimento e a água são previamente armazenados em um recipiente semitampado, previamente testado para a presença de bactérias magnetotácticas. O aparato é exposto a um campo magnético, devidamente alinhado, em uma bobina feita a mão e as bactérias são removidas pela extremidade capilar da segunda abertura do recipiente. As bactérias coletadas podem então ser usadas em estudos ultraestruturais usando a técnica de imagem espectroscópica eletrônica. Um grande número de bactérias consistindo de cocos e bastonetes foi eficientemente coletado de diferentes ambientes. Este aparato é útil para estudos microbiológicos sobre microrganismos magnetotácticos não cultiváveis, especialmente em abordagens moleculares para investigações filogenéticas que fornecem informações sobre a diversidade natural de comunidades microbianas.

    Resumo em Inglês:

    A simple apparatus for harvesting uncultured magnetotactic microorganisms is described. This apparatus consists of a glass container with two openings. A large opening on the topside is used to introduce the sediment and water. The sediment and water are previously stored in loosely capped bottles previously tested for the presence of magnetotactic bacteria. The apparatus is exposed to a properly aligned magnetic field of a homemade coil and the bacteria are removed through the capillary end of the second opening of the container. Harvested bacteria can then be used to ultrastrucutral studies using electron spectroscopic imaging. Large numbers of magnetotactic bacteria consisting of cocci and rod-shaped cells were efficiently collected from different environments. This apparatus is useful for microbiological studies on uncultured magnetotactic bacteria, especially in molecular approaches for phylogenetic investigations that give information on the natural diversity of microbial communities.
  • Variabilidade genética de isolados de Alternaria spp, revelada através da análise de RAPD Environmental Microbiology

    Tigano, Myrian Silvana; Aljanabi, Salah; Mello, Sueli Corrêa Marques de

    Resumo em Português:

    A variabilidade genética entre 22 isolados dos fungos Alternaria alternata e A. Cassiae, obtidos de Senna obtusifolia, foi estudada através da análise de RAPD. No total, 491 bandas foram selecionadas com o uso de 28 primers. O agrupamento baseado em similaridades computadas dos marcadores mostrou dois distintos grupos de isolados relacionados às espécies. A análise de RAPD provou ser um método eficiente para detecção da variabilidade genética entre isolados de A. alternata e A. cassiae ocorrendo em S. obtusifolia, e também para distinguir as espécies de Alternaria.

    Resumo em Inglês:

    The genetic variability of 22 isolates of the fungi Alternaria alternata and A. cassiae, obtained from Senna obtusifolia, was studied by RAPD analysis. A total of 491 scorable bands were produced with the use of 28 primers. Cluster analysis based on similarities computed from RAPD markers showed two distinct genetic groups of isolates related to both species. RAPD analysis proved to be an efficient method for detecting genetic variability of A. cassiae and A. alternata isolates occurring in S. obtusifolia, and also for distinguishing Alternaria species.
  • Novos bioemulsificantes produzidos por Candida lipolytica usando D-glicose e óleo de babaçu como fontes de carbono Industrial Microbiology

    Vance-Harrop, Mabel H.; Gusmão, Norma B. de; Campos-Takaki, Galba Maria de

    Resumo em Português:

    Candida lipolytica IA 1055 produziu biosurfactantes extracelulares com atividade de emulsificação, através de fermentação utilizando óleo de babaçu e D-glicose como fontes de carbono. A água do mar diluída a 50% suplementada com uréia, sulfato de amônio e fosfato foi usada como meio basal. Os melhores resultados foram atingidos com os meios YSW-B2 (contendo uréia, sulfato de amônio e óleo de babaçu)e YSW-B3 (contendo uréia, sulfato de amônio, fosfato e óleo de babaçu), através de fermentação em batelada alimentada com 5% de óleo de babaçu. A velocidade específica de crescimento foi de 0,02 h-1 e 0,04 h-1; tempo de geração de 34,6 h-1 e 17,3 h-1 e atividade de emulsificação igual a 0,666 e 0,158 unidades, respectivamente. As moléculas dos novos bioemulsificantes demonstraram ser constituídas por carboidratos, proteínas e lipídeos.

    Resumo em Inglês:

    Candida lipolytica IA 1055 produced extracellular biosurfactants with emulsification activity by fermentation using babassu oil and D-glucose as carbon sources. Natural seawater diluted at 50% supplemented with urea, ammonium sulfate, and phosphate was used as economic basal medium. The best results were achieved with the YSW-B2 medium, which contained urea, ammonium sulfate, and babassu oil and with YSW-B3 medium, which contained urea, ammonium sulfate, phosphate, and babassu oil, kept under fed batch fermentation for 60 hours with 5% of babassu oil. For the two media, the maximum specific growth rates were 0.02 h-1 and 0.04 h-1; the generation times were 34.6 h-1 and 17.3 h-1, and the emulsification activities were 0.666 and 0.158 units, respectively. The molecules of these new bioemulsifiers were contituted of carbohydrates, proteins and lipids.
  • Produção e purificação de uma Endo–1,4-beta-Xylanase de Humicola grisea var. thermoidea por eletroeluição Industrial Microbiology

    Monti, Rubens; Cardello, Leonardo; Custódio, Marcos F.; Goulart, Antonio J.; Sayama, Adriana H.; Contiero, Jonas

    Resumo em Português:

    Humicola grisea var. thermoidea produz duas formas de xilanase extracelular. A componente forma 1 foi purificada usando o método de eletroeluição devido à baixa produção desta enzima extracelular. A aparente massa molar foi determinada 61,8 kDa por SDS-PAGE.

    Resumo em Inglês:

    Humicola grisea var. thermoidea produces two forms of extracellular xylanase. The component form 1 was purified using the electroelution method, due to the very small production of this extracellular enzyme. The apparent molecular mass was 61.8 kDa by SDS-PAGE.
  • Comparative study between yeasts immobilized on alumina beads and on membranes prepared by two routes Industrial Microbiology

    Kiyohara, Pedro K.; Lima, Urgel de Almeida; Santos, Helena de Souza; Santos, Persio de Souza

    Resumo em Português:

    Esferas de superfície canelada ou estriada e membranas de textura porosa e superfície rugosa preparadas com sóis aquosos de pseudoboemita fibrillar são capazes de imobilizar leveduras para fermentação alcoólica de soluções aquosas açucaradas. Este artigo descreve os resultados de ensaios levados a efeito com leveduras imobilizadas em esferas e membranas de alumina-alfa, preparadas sob duas diferentes condições de processamento e queima. A fermentação alcoólica dos meios foi acompanhada pelo decréscimo do teor de sólidos solúveis em graus Brix por hora e indicou que as leveduras imobilizadas nas esferas obtidas pelas duas rotas apresentaram desempenho similar, provavelmente por causa de suas superfícies que, mesmo morfologicamente diferentes, apresentaram o mesmo valor de porosidade aberta. Um tipo de membrana (assimétrica; pseudoboemita fibrilar como precursor; temperatura de queima de 1.150ºC; estrutura cristalina de alumina-alfa), levou a melhor desempenho do que outro (assimétrico; mistura de pseudoboemita fibrilar e hidroxiacetato de alumínio como precursor; 1.150ºC; alumina-alfa), provavelmente porque as células de leveduras penetraram no seu interior poroso pelas fendas superficiais, imobilizaram-se e cresceram mais facilmente do que na superfície externa.

    Resumo em Inglês:

    Alumina channeled beads and rough surface membranes prepared from aqueous sols of fibrillar pseudoboehmite are able to immobilize yeasts for ethanol fermentation of sugar solutions. This paper describes comparative results of assays carried out with yeasts immobilized onto alpha-alumina beads and membranes prepared under two different conditions of processing and firing. The fermentation tests evaluated by the decrease of fermentable sugars, referred as Brix degrees per hour, indicated that the yeasts immobilized on beads had similar performance, probably because their surfaces, even being morphologically different, presented the same value of open porosity. One type of membrane (asymmetrical; precursor: pseudoboehmite; firing temperature 1,150ºC; crystal structure; alpha-alumina) had better performance than the other type (asymmetrical; precursor: fibrillar pseudoboehmite plus aluminum hydroxiacetate mixture; 1,150ºC; alpha-alumina) because the yeast cells entered into their porous interior through the surface slits, were immobilized and their growth was easier than on the external surface.
  • Comparação de diferentes etapas de enriquecimento seletivo no isolamento de Salmonella sp. de fezes de suínos de terminação Veterinary Microbiology

    Michael, Geovana Brenner; Simoneti, Roselis; Costa, Marisa da; Cardoso, Marisa

    Resumo em Português:

    Através de um estudo em duas fases comparou-se a eficiência de etapas de enriquecimento seletivo, associadas a diferentes meios seletivos, na recuperação de Salmonella sp. de fezes de suínos de terminação. Em uma primeira fase, as amostras foram contaminadas artificialmente e os caldos Rappaport-Vassiliadis (RV) incubado a 42ºC, Tetrationato Müller-Kauffmann a 37ºC (TMK37) e 42ºC (TMK42), e Selenito Cistina (SC) a 37ºC foram testados, em associação com meios sólidos seletivos: ágar Rambach (RA), ágar Xilose-Lisina-Tergitol 4 (XLT4), e ágar Verde-brilhante Vermelho-neutro Lactose Sacarose (VB). Na segunda fase os caldos RV, TMK37, and TMK42, semeados nos meios XLT4 and VB, foram testados com amostras naturalmente contaminadas. No isolamento de Salmonella sp. em amostras artificialmente contaminadas o RV, TMK42 e TMK37 foram superiores ao SC. Na segunda fase o TMK42 e RV foram mais eficientes que o TMK37. O desempenho destas etapas de enriquecimento seletivo influenciou diretamente a capacidade seletiva e indicadora dos meios sólidos seletivos utilizados. No presente estudo, a associação TMK42/XLT4 demonstrou ser a mais sensível, e a RV/XLT4 a mais específica. O uso do meio VB também é recomendado para aumentar a probabilidade do isolamento de colônias atípicas de Salmonella - produtoras tardias ou não produtoras de H2S. No presente estudo, RV e TMK42 foram as etapas de enriquecimento seletivo mais eficientes para o isolamento de Salmonella de fezes de suínos.

    Resumo em Inglês:

    A two-phase study was conducted to compare the efficacy of several enrichment selective-broth steps associated to different plating media for recovery of Salmonella sp. from finishing swine feces. In a first phase, Rappaport-Vassiliadis broth (RV) incubated at 42ºC, Tetrathionate Müller-Kauffmann broth at 37ºC (TMK37) and 42ºC (TMK42), and Selenite Cystine broth (SC) at 37ºC, in combination with three selective plating media Rambach agar (RA), Xylose-Lysine-Tergitol 4 agar (XLT4), and Brilliant-Green Phenol-Red Lactose Sucrose agar (VB) were compared for recovery of Salmonella from artificially contaminated swine feces. In a second phase, RV, TMK37, and TMK42, associated with XLT4 and VB , were tested with naturally contaminated swine feces. In this study RV, TMK42 and TMK37 were superior to SC for isolating Salmonella sp. from artificially contaminated feces. TMK42 and RV were more productive than TMK37 for recovery of Salmonella from naturally contaminated feces samples. Selectivity and indication capability of the plating media were remarkably affected by the selective enrichment step effectiveness. The TMK42/XLT4 association was the most sensitive and RV/XLT4 the most specific. The use of VB agar is also recommended to increase the likelihood of isolating atypical H2S-late producing/ non-producing Salmonella. In this study RV and TMK42 were the most efficient selective enrichment for recovery of Salmonella sp. from swine feces.
  • Detecção de Leptospira spp pela técnica da reação da polimerase em cadeia (PCR) em amostras clínicas de macaco prego (Cebus apella) criado em cativeiro Veterinary Microbiology

    Scarcelli, Eliana; Piatti, Rosa Maria; Fedullo, José Daniel Luzes; Simon, Faiçal; Cardoso, Maristela Vasconcellos; Castro, Vanessa; Miyashiro, Simone; Genovez, Margareth Élide

    Resumo em Português:

    A leptospirose é uma zoonose de ampla distribuição geográfica que acomete os animais domésticos e silvestres, tendo o homem como ponto final da cadeia epidemiológica. O diagnóstico da leptospirose em primatas é dificultado em relação a outras espécies animais, porque os sinais clínicos e lesões são menos evidentes e a resposta de anticorpos é detectada apenas em curtos períodos. O presente trabalho tem por objetivo descrever a detecção de Leptospira spp empregando-se a Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) em amostras clínicas provenientes de um macaco prego (Cebus apella) criado em cativeiro, que apresentou ao exame macroscópico realizado durante a necrópsia, características sugestivas de leptospirose (icterícia e rins hemorrágicos). Amostras de urina e fragmento de rim friável foram submetidas às técnicas cultivo e inoculação experimental em cobaias e PCR empregando-se primers gênero específicos da seqüência do gene 16S rRNA de Leptospira interrogans sorovar canicola. Na PCR as amostras clínicas revelaram um fragmento amplificado de 330 pb correspondente ao gênero Leptospira. O isolamento do agente foi negativo nas demais técnicas empregadas. Pelos resultados obtidos, verifica-se que a técnica de PCR representou uma importante ferramenta de detecção de leptospiras em primatas não-humanos, principalmente considerando-se que não foi necessária a viabilidade do patógeno, permitindo a detecção do agente em amostras autolisadas, congeladas ou amostras mal conservadas, que prejudicaram o isolamento e a inoculação experimental.

    Resumo em Inglês:

    Leptospirosis is a widely distributed zoonosis that affects domestic and wild animals, and that has the man as the end point of its epidemiological chain. Leptospirosis diagnosis in primates is more difficult than in other animal species, as clinical signs and lesions are less evident and antibody response is detected only for short periods. The aim of this article was to describe the detection of Leptospira spp using polymerase chain reaction (PCR), in clinical samples from one captive black-capped Capuchin monkey (Cebus apella), which presented characteristics compatible with leptospirosis (jaundice and haemorrhagic kdney) in the macroscopic post-mortem examination. A friable kidney fragment and urine sample were cultured and submitted to experimental inoculation in guinea pigs and PCR using genus specific primer pair targeting the 16S rRNA region from Leptospira interrogans serovar canicola. Isolation of the agent was negative both in culture and experimental inoculation. The PCR amplification of the clinical samples showed a 330 pb amplified fragment that corresponds to the Leptospira genus. Based on these results PCR was considered an important tool for leptospira detection in nonhumam primates, more sensitive and specific than other techniques, especially considering that the viability of the pathogen was not possible. These advantages enable the detection of the leptospiras in urine and kidney, even when autolysed, frozen or badly conserved, which prevented the isolation and experimental inoculation from positive results.
  • Comparação de quatro antibióticos para inativar leptospiras em sêmen bovino diluído em gema-citrato e experimentalmente contaminado com Leptospira santarosai sorovar guaricura Veterinary Microbiology

    Miraglia, Fabiana; Morais, Zenaide Maria; Cortez, Adriana; Melville, Priscilla Anne; Marvullo, Maria Fernanda Vianna; Richtzenhain, Leonardo José; Visintin, José Antonio; Vasconcellos, Silvio Arruda

    Resumo em Português:

    A inativação de leptospiras em misturas de sêmen, obtidas através de vagina artificial, de três touros holandeses, foi estudada. A concentração espermática foi ajustada em diluidor gema-citrato utilizando os seguintes tratamentos: A (controle; sem antibióticos); B (penicilina, 1000 UI/mL - estreptomicina, 1000 µg/mL); C (amoxicilina, 1000 µg/mL); D (ceftiofur sódico, 1000 µg/mL); E (amoxicilina 1000 µg/mL - ceftiofur sódico 1000 µg/mL). Leptospiras (2,0x10(6) leptospiras/mL) foram adicionadas ao sêmen diluído. A recuperação das leptospiras foi obtida em meio EMJH modificado semi-sólido, com e sem antibióticos. As médias da porcentagem de motilidade progressiva e a de motilidade individual progressiva dos espermatozóides não foram afetadas pelos antibióticos nas concentrações usadas. Penicilina-estreptomicina apresentou os melhores resultados na inativação das leptospiras (97.1%). Amoxicilina, ceftiofur sódico e suas combinações, nas concentrações estudadas, apresentaram resultados insatisfatórios: 59.29%; 32.5% e 60.36% de inativação, sendo menos efetivos na inativação das leptospiras do que penicilina-estreptomicina.

    Resumo em Inglês:

    Inactivation of leptospires in pools of semen from three Holstein Friesian bulls, collected in an artificial vagina, was investigated. Spermatic concentration was adjusted in egg yolk citrate extender, submitted to the following treatments: A (control; without antibiotics); B (penicillin, 1,000 UI/mL - streptomycin, 1,000 µg/mL); C (amoxicillin, 1,000 µg/mL); D (ceptiofur sodium, 1,000 µg/mL); E (amoxicillin 1,000 µg/mL - ceptiofur sodium 1,000 µg/mL). Leptospires (2.0 x 10(6) leptospires/mL) were added into the diluted semen. Recovery of leptospires was obtained in modified EMJH semi-solid medium with and without antibiotics. The antibiotics in the concentrations used did not affect means of percentage of progressive motility and individual progressive motility of spermatozoids. Penicillin-streptomycin presented the best results in leptospire inactivation (97.1%). Amoxicillin, ceptiofur sodium and their combination at the concentrations studied presented poor results: 59.29%; 32.5% and 60.36% of inactivation, being less effective in leptospire inactivation than penicillin-streptomycin.
  • Caracterização genética da recombinação somática em Trichoderma pseudokoningii Mycology

    Barcellos, Fernando Gomes; Pizzirani-Kleiner, Aline Aparecida

    Resumo em Português:

    Com o objetivo de se caracterizar o processo de recombinação somática em Trichoderma pseudokoningii, foram realizados cruzamentos via anastomose de hifas entre duas linhagens desta espécie, contrastantes para os marcadores de auxotrofia. Foram realizados quatro cruzamentos, sendo analisadas um total de 1052 colônias obtidas a partir de suspensões de conídios provenientes das colônias heterocarióticas. Foram analisadas sessenta e oito colônias recombinantes em quatro gerações de crescimento, sendo verificados os marcadores de auxotrofia. Das 68 colônias, 58 se mostraram estáveis após quatro gerações de crescimento e as colônias restantes permaneceram instáveis, revertendo para as marcas de uma das linhagens parentais. A maioria das colônias se mostrou instável através das gerações de subcultivo, e após quatro gerações de crescimento estas apresentaram as marcas de auxotrofia leu ino met (auxotrofia para leucina, inositol e metionina, respectivamente). As colônias recombinantes instáveis apresentaram bordas irregulares de crescimento, esporulação esparsa e a freqüente formação de setores. Os resultados sugerem a ocorrência de mecanismos de recombinação no heterocário (recombinação somática), diferente daqueles descritos para o ciclo parassexual ou parameiose, sendo proposto a ocorrência da degradação no heterocário de núcleos provenientes de uma das linhagens parentais (parental não prevalente) e a incorporação de fragmentos cromossômicos nos núcleos íntegros da outra linhagem parental (parental prevalente). No entanto a parameiose, como originalmente descrita, não pode ser excluída.

    Resumo em Inglês:

    Crossing experiments via hyphal anastomosis between two strains contrasting for auxotrophic markers of Trichoderma pseudokoningii were conducted to characterize the somatic recombination process in this specie. Four crossings were made and a total of 1052 colonies obtained from conidial suspensions of the heterokaryotic colonies were analyzed. Sixty-eight recombinant colonies, from four growing generations, were analyzed for the auxotrophic markers. Of the 68 colonies analyzed, 58 were stable after four generations and the remainders were unstable, reverting to one of the parentals. Most of the recombinant colonies were unstable through subculture and after four growing generations they showed the leu ino met markers (auxotrophic for leucin, inositol and metionin respectively). The unstable recombinant colonies showed irregular growing borders, sparse sporulation and frequent sector formation. The results suggest the occurrence of recombination mechanisms in the heterokaryon (somatic recombination), different from those described for the parasexual cycle or parameiosis. Therefore, we proposed the ocurrence of nuclei degradation from one parental (non prevalent parental) in the heterokaryon and that the resulting chromosomal fragments may be incorporated into whole nuclei of the another parental (prevalent parental). However the parameiosis as originally described cannot be excluded.
  • Esporulação, crescimento radial e produção de biomassa dos fungos controladores biológicos A. robusta e M. Thaumasium submetidos a diferentes métodos de preservação Mycology

    Mota, Marcelo de Andrade; Campos, Artur Kanadani; Araújo, Jackson Victor

    Resumo em Português:

    O controle biológico é uma técnica baseada no emprego de microorganismos no combate a população de um patógeno específico. Os fungos nematófagos têm demonstrado serem agentes promissores no combate aos parasitos de plantas e de animais. Estes organismos produzem estruturas diferenciadas a partir das hifas, denominadas armadilhas, capazes de capturar e matar os estágios pré-parasitários dos nematóides. Foi avaliado o comportamento dos isolados I31 de Arthrobotrys robusta e NF34a de Monacrosporium thaumasium após terem sido submetidos a quatro métodos de preservação por período de dezoito meses. Os isolados foram armazenados em temperatura de 4ºC, criopreservados com e sem adição de crioprotetores e em sílica-gel. Os isolados I31 e NF34a não apresentaram variação no crescimento radial quando submetidos a armazenamento em temperatura de 4ºC e congelados com e sem adição de crioprotetores. Não foi evidenciada diferença entre a produção de massa micelial seca dos isolados armazenados em 4ºC e congelados com adição de crioprotetores. A preservação em sílica-gel e o congelamento sem crioproteção demonstraram interferir negativamente na capacidade do fungo em produzir massa micelial. Este comportamento negativo foi evidenciado também na capacidade de esporulação dos isolados. A escolha de um método eficiente de preservação destes microorganismos é uma das formas de se assegurar a capacidade predatória destes isolados após períodos prolongados de manutenção em condições laboratoriais.

    Resumo em Inglês:

    Biological control is based on the use of microorganisms to combat populations of a specific pathogen. Nematophagous fungi have shown to be promising agents to combat nematode parasites of plants and animals. These organisms produce special structures along the hyphae, named traps, which are responsible for capturing and killing the nematode pre-parasitic stages. The growth of the isolates I31 of Arthrobotrys robusta and NF34a of Monacrosporium thaumasium was studied after submission to four different methods of preservation during eighteen months. The isolates were stored at 4ºC and cryopreserved with or without addition of cryoprotectants and stored in silica gel. The isolates did not present variation in radial growth when stored at 4ºC and frozen with or without addition of cryoprotectants. There was no significant difference between the dry mycelial mass of the isolates stored at 4ºC and those frozen after the addition of cryoprotectants. Storage in silica gel and freezing without cryoprotection interfered negatively in the capacity of the fungi to produce mycelial mass. This characteristic also was observed for sporulation of the two isolates. The behaviour of the isolates when maintained for prolonged periods under laboratory conditions is an important factor for selection of the most efficient method of preservation.
  • O dermatófito Trichophyton rubrum secreta uma fosfatase alcalina EDTA-sensível em meio contendo alta concentração de fosfato Mycology

    Ferreira-Nozawa, Monica S.; Nozawa, Sérgio R.; Martinez-Rossi, Nilce M.; Rossi, Antonio

    Resumo em Português:

    Nesta comunicação nós mostramos que o crescimento do isolado H6 do dermatófito T. rubrum em meio não tamponado e sob condição saturante de fosfato, é dependente do pH inicial de cultivo, com um ótimo aparente em pH 4,0. Além disto, independente do pH inicial, o pH do meio se altera durante o cultivo alcançando valores que variam de 8,3 a 8,9. Verificou-se também que este isolado sintetiza e secreta quase os mesmos níveis de fosfatase alcalina, com um ótimo de atividade aparente entre os valores de pH 9,0 e 10,0, independentemente da concentração de fosfato no meio. Também mostramos que essa fosfatase alcalina é inibida por EDTA e ativada por Mg2+. Por outro lado, o nível dessa enzima retida no micélio cultivado em meio tamponado em pH 5,0-5,2 é baixo, sugerindo que ela seja codificada por um gene alcalino, isto é, um gene responsivo à sinalização pelo pH ambiente.

    Resumo em Inglês:

    In this communication, we show that the growth of isolate H6 of the dermatophyte Trichophyton rubrum on non-buffered medium and under saturating phosphate conditions is dependent on the initial growth pH, with an apparent optimum at pH 4.0. In addition, irrespective of the initial growth pH, the pH of the medium alteredduring cultivation reaching values that ranged from 8.3 to 8.9. Furthermore, this isolate synthesized and secreted almost the same levels of an alkaline phosphatase with an apparent optimum pH ranging from 9.0 to 10.0 when grown on both low- and high-phosphate medium. Also, this alkaline phosphatase is activated by Mg2+ and is EDTA-sensitive. On the other hand, the very low levels of the enzyme retained by the mycelium grown on buffered medium at pH 5.0-5.2 suggest that this enzyme is encoded by an alkaline gene, i.e., a gene responsive to ambient pH signaling.
  • Técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) no diagnóstico da tuberculose cutânea Medical Microbiology

    Ogusku, Mauricio Morishi; Sadahiro, Aya; Hirata, Mário Hiroyuki; Hirata, Rosário D. C.; Zaitz, Clarisse; Salem, Júlia Ignez

    Resumo em Português:

    Visando melhorar o diagnóstico laboratorial da Tuberculose Cutânea, foi realizado o estudo da aplicação da técnica de PCR em amostras de tecidos cutâneos macerados, descontaminados (com H2SO4 4% para eliminação da microbiota normal), neutralizados (com NaOH 4%) e armazenadas a -20ºC. Das 37 amostras submetidas ao estudo, 16,22% apresentavam baciloscopias positivas para bacilos álcool-ácidos resistentes (método concentrado) e em 43,24% houve o isolamento do Mycobacterium tuberculosis em meio de cultivo Löwenstein-Jensen. Utilizando-se de primers para a região 16S rDNA do M. tuberculosis, o DNA micobacteriano foi detectado em 24,32% das biópsias. A sensibilidade e especificidade da PCR foram 43,7% e 90,4%, respectivamente. Devido à baixa sensibilidade e resultados divergentes entre as técnicas bacteriológicas e PCR (para a seqüência 16S rDNA), as amostras foram repetidas em um novo PCR com primers para a região IS6110. Tanto a sensibilidade como a especificidade da PCR com primers para IS6110 alcançaram 100% em relação ao cultivo. Os resultados confirmam a eficácia da PCR utilizando primers para a seqüência IS6110 e oferecem a possibilidade da técnica ser aplicada em amostras congeladas enviadas por serviços que não identificam o M. tuberculosis por técnicas de biologia molecular.

    Resumo em Inglês:

    Seeking to improve the laboratory diagnosis of Cutaneous Tuberculosis, a study was carried out on the application of PCR technique in macerated, decontaminated(with 4% H2SO4 for elimination of normal microbiot), neutralized (with 4% NaOH)biopsies tissues samples stored at -20ºC. Of the 37 samples submitted for study, 16.22% were positive by microscopy for acid-fast bacilli (concentrated method) and in 43.24% the Mycobacterium tuberculosis was isolated in Löwenstein-Jensen medium. Using a M. tuberculosis complex specific primer set (gene sequence for 16S rDNA), the mycobacterial DNA was detected in 24.32% of the biopsies. The sensitivity and specificity of PCR were 43.7% and 90.4%, respectively. Due to low sensitivity and discrepant results between bacteriological techniques and PCR methodology, the samples were repeated in a new PCR with primers for the IS6110 target. The sensitivity and specificity of PCR for the IS6110 target obtained 100% in comparison with the culture method. The results confirm the effectiveness of PCR methodology using primers for the IS6110 gene sequence and permit the PCR method to be applied to frozen cutaneous biopsies sent by services that do not identify the M. tuberculosis by the biology molecular method.
  • Presença de corda e morfologia da colônia para a identificação presuntiva do complexo Mycobacterium tuberculosis Medical Microbiology

    Monteiro, Paulo Henrique Tasso; Martins, Maria Conceição; Ueki, Suely Yoko Mizuka; Giampaglia, Carmen Maria Saraiva; Telles, Maria Alice da Silva

    Resumo em Português:

    O resultado da identificação convencional do complexo Mycobacterium tuberculosis (MT) é demorado. O objetivo deste estudo foi avaliar um teste de triagem para identificação presuntiva de MT e agilização da informação preliminar do resultado, baseado na análise da morfologia da colônia e da visualização de corda no exame microscópico do esfregaço feito da cultura. De janeiro de 1998 a dezembro de 1999 foram analisadas 3056 culturas no Instituto Adolfo Lutz, São Paulo, Brasil. As culturas classificadas como micobactérias não tuberculosas foram submetidas ao teste de identificação por método convencional (testes de crescimento em cultura e bioquímicos) e as MT foram submetidas ao teste de sensibilidade às drogas. Os resultados de sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivo e negativo, obtidos com a comparação da identificação presuntiva de MT com o teste de triagem proposto e a identificação final com o método convencional, foram respectivamente 98,9, 86,9, 97,8 e 93,0%. Concluiu-se que a análise da morfologia da colônia e da presença de corda no exame microscópico possibilitou a identificação presuntiva de MT. Este teste pode ser usado pelo laboratório para informação preliminar do resultado presuntivo e para direcionar de maneira prática e com baixo custo, os testes adicionais de sensibilidade às drogas ou de identificação de espécie que serão necessários.

    Resumo em Inglês:

    The identification of Mycobacterium tuberculosis complex (MT), using non-molecular methods, is time-consuming. The objective of this study was to evaluate a screening test for the presumptive identification of MT, which could potentially decrease laboratory turn-around time for reporting preliminary results. From January 1998 to December 1999, 3056 cultures were analysed at the Mycobacterial Laboratory, Instituto Adolfo Lutz, São Paulo, Brasil. The screening test consisted of observation of colony morphology on Löwenstein Jensen medium and evaluation of cord formation on smear microscopy from those positive cultures. After the screening test, the cultures identified as non-tuberculous mycobacteria were identified to species by conventional methods (growth on culture and biochemical tests). Those identified as MT were submitted to drug susceptibility tests. The presumptive identification of MT using the proposed screening test, when compared with conventional tests, presented 98.9, 86.9, 97.8 and 93.0% of sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, respectively. The conclusion is that it is possible to make a presumptive identification of MT using visual analysis of colony morphology and cord formation on microscopy examination. This method could be used to report the presumptive identification of MT and to guide laboratory decisions regarding susceptibility and identification tests with little cost and in a very practical way.
  • Avaliação da radiação ultravioleta no controle de microrganismos aderidos em filmes de polietileno de baixa densidade Food Microbiology

    Silva, Cleuber Antonio de Sá; Andrade, Nélio José de; Soares, Nilda de Fátima Ferreira; Ferreira, Sukarno Olavo

    Resumo em Português:

    A eficiência da radiação ultravioleta (UV) na redução do número células de Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Escherichia coli k12 aderidas a filmes de polietileno de baixa densidade (PEBD) foi avaliada. Os microrganismos em suspensões foram aderidos à superfície de sacos de PEBD a 18ºC durante 12 horas, e, em seguida, submetidos à exposição de raios UV na intensidade de 196 µW.cm-2 a 254 nm, durante 2 segundos. Staphylococcus aureus foi menos resistente do que E. coli à ação da radiação UV. Após 1500 horas de uso, a intensidade da radiação UV reduziu-se de 288 para 78 µW.cm-2, com declínio acentuado nas 100 horas iniciais. A eficiência da radiação UV na inativação dos microrganismos decresceu após 1500h de uso da lâmpada germicida. O numero de mesófilos aeróbios nas superfícies dos filmes de polietileno de baixa densidade (PEBD) foi reduzido em 90% após a irradiação com 137 µW.cm-2. Fendas e elevações, observadas na superfície do PEBD através de microscopia de força atômica, podem proteger as células do contato com a radiação UV, reduzindo sua eficiência. Os resultados mostram que a radiação UV é uma técnica útil na redução da microbiota aderida à superfície de filmes de PEBD.

    Resumo em Inglês:

    Efficiency of ultraviolet (UV) radiation in reducing the cell number of Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli K-12 adhered to low-density polyethylene (LDPE) films was evaluated. The microorganisms were let to adhere to the surface of LPDE bags for 12h at 18ºC, and then submitted to UV radiation at an intensity 196 µW.cm-2, 254nm, for 2 seconds. Staphylococcus aureus was less resistant to UV radiation than E. coli, and the efficiency increased with the increase of the concentration of microbial suspension. After 1500 hours of use the UV radiation intensity of the lamp was reduced from 288 to 78 µW.cm-2, and the higher decrease occurred in the first 100 hours of use. Also, the efficiency of the UV radiation decreased after 1500 hours of use. The number of mesophilic aerobes on the surface of LDPE films was reduced by 90% after irradiation with 137 µW.cm-2 for 2 seconds. Atomic force microscopy revealed cracks and crevices and protuberances on the LDPE surface, a topography that can protect the cells from UV radiation, reducing the efficiency of the process. The results showed that UV radiation can be a useful technique for reducing the microbiota adhered to LDPE films.
  • Reação da polpa dental ao lipopolissacarídeo de Escherichia coli e ao ácido lipoteicóico de Enterococcus faecalis Oral Microbiology

    Oliveira, Laudimar Alves de; Barbosa, Sérgio Valmor

    Resumo em Português:

    O presente trabalho avaliou os efeitos do ácido lipoteicóico (LTA) e do lipopolissacarídeo (LPS) no tecido pulpar. Essas moléculas estão presentes nas paredes das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, respectivamente. Utilizaram-se dez cães para inoculação das substâncias em polpas expostas cirurgicamente. Os períodos de avaliação foram de 1, 7, 15, 30 e 60 dias. Os resultados demonstraram que 150 µg/ml de LPS e LTA interferem negativamente na polpa promovendo destruição tecidual. O LTA estabeleceu um padrão citotóxico menos agressivo que o LPS.

    Resumo em Inglês:

    This research evaluates the effects of the lipopolysaccharides (LPS) from Escherichia coli and lipoteichoic acid (LTA) from Enterococcus faecalis on dental pulp. These molecules are components of the Gram-negative and Gram-positive bacteria cell wall, respectively. Ten dogs were used in the experiment. Inoculation in surgically opened pulp and coronal restoration with glass ionomer was the method chosen. The evaluation times were 1, 7, 15, 30 and 60 days. The results showed that the LPS and LTA, at 150 µg/ml, produced a negative interference in the pulp leading to destruction. LTA caused less damage than LPS.
Sociedade Brasileira de Microbiologia USP - ICB III - Dep. de Microbiologia, Sociedade Brasileira de Microbiologia, Av. Prof. Lineu Prestes, 2415, Cidade Universitária, 05508-900 São Paulo, SP - Brasil, Ramal USP 7979, Tel. / Fax: (55 11) 3813-9647 ou 3037-7095 - São Paulo - SP - Brazil
E-mail: bjm@sbmicrobiologia.org.br