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Brazilian Journal of Microbiology, Volume: 38, Número: 1, Publicado: 2007
  • Leucose bovina enzoótica: desempenho de um ELISA indireto empregado no diagnóstico sorológico Veterinarian Microbiology

    González, Teresa; Licursi, María; Bonzo, Estela

    Resumo em Português:

    O vírus da leucose bovina é um agente patogênico amplamente distribuído na população bovina de muitos países, principalmente naqueles com aptidão para leite. Uma vez infectado o bovino permanece como portador do vírus para toda a vida, e esse estado é correlacionado com o nivel detectável de anticorpos específicos. Neste trabalho apresenta-se a avaliação de um ELISA indireto (Leucokit-La Plata) para a detecção de anticorpos contra VLB. Comparando com a prova de imunodifusão como teste de referencia a sensibilidade é de 98.93%; a especificidade de 79.74%; o valor preditivo negativo de 99.56% e o valor preditivo positivo 61.26%. A correspondência entre as duas provas é de 83.9%, semelhante ao resultados apresentados por outros autores (82.2%). A concordância entre as duas provas foi avaliada calculando-se os coeficientes Kappa e J de Youden e os valores obtidos foram classificados como bons. Fazendo-se uma comparação entre Leucokit-La Plata e outro kit comercial de referência (Chekit Leucotest Bommeli AG., Bern Switzerland), obteve-se uma sensibilidade de 97.05%, especificidade de 94.11%, um valor preditivo negativo de 92.30% e um valor preditivo positivo de 97.77%. Os coeficientes Kappa e index de Youden deram uma concordância quase perfeita entre os dois testes. O equipamento Leucokit-La Plata é ideal para ser utilizado na comercialização de bovinos para exportação, para seleção de bovinos para hemovacinas e na implementação de medidas de contrôle e erradicação.

    Resumo em Inglês:

    Bovine Leukosis Virus (EBLV) is a widely distributed pathogen agent in the bovine population of many countries, especially in dairy cattle. Once the bovine is infected, it remains as a virus carrier for life and such state is correlated with a specific antibody detectable level. In this study the evaluation of an indirect ELISA (Leucokit-La Plata) to detect antibodies against EBLV is presented. Comparing it with the Immunodiffusion as gold standard test, the sensitivity is 98.93%, the specificity 79.74%, the negative predictive value 99.56% and the positive predictive value 61.26%. The correspondence between both tests is 83.9% which is similar to the result mentioned by other authors (82.2%). The concordance was evaluated by calculating Kappa and Youden's J coefficients, obtaining values classified as good for both coefficients. Comparing Leucokit-La Plata and another commercial reference kit (Chekit Leucotest Bommeli AG, Bern Switzerland), the sensitivity (97.05%), specificity (94.11%), negative predictive value (92.30%) and positive predictive value (97.77%), were obtained. Applying Kappa and Jouden's Index (J) coefficients an almost perfect concordance was obtained between both kits. The Leucokit-La Plata is appropriate to apply to the commercialization of live bovines to export, bovine selection for hemo-vaccines and the implementation of control and eradication programmes.
  • Comparação de um teste in-house e um teste ELISA comercial para diagnóstico de paratuberculose Veterinarian Microbiology

    Marassi, Carla Dray; Gonzaga, Janete da Silva; Ristow, Paula; Ferreira, Rachel; Fonseca, Leila Souza; Oelemann, Walter; Lilenbaum, Walter

    Resumo em Português:

    Um teste ELISA in-house foi comparado a um teste comercial utilizando um painel de 108 soros. Em relação ao teste comercial, o ensaio in-house apresentou sensibilidade de 100%, especificidade de 83,5% e alta concordância (kapa>0,5), o que demonstra seu valor para uso em países em desenvolvimento.

    Resumo em Inglês:

    An in-house PPA-ELISA was compared to a commercial ELISA using a panel of 108 serum samples. In relation to commercial test, in-house assay presented 100% of sensitivity and 83.5% of specificity and a high concordance (kappa> 0.5), which demonstrates that the in-house assay is a valuable tool for use in developing countries.
  • Expressão de aderência agregativa em células HeLa por amostras de E. coli isoladas de eqüinos doentes Veterinarian Microbiology

    Liberatore, Ana Maria Alvim; Tomita, Sandra Kimie; Vieira, Mônica Aparecida Midolli; Toti Jr., Cyro; Heckmaier, João; Gomes, Tânia Aparecida Tardelli

    Resumo em Português:

    Características de virulência de 56 amostras de Escherichia coli isoladas de eqüinos doentes (secreção de colo uterino, fragmentos de necrópsia do trato gastrointestinal e de pulmões, fezes diarréicas e lavado traqueal) foram examinadas para determinar o padrão de aderência em células HeLa e pesquisar a presença de genes de virulência de vários patotipos de E. coli. Duas amostras não aderentes apresentaram astA, gene que codifica a toxina termo-estável de E. coli enteroagregativa. Das vinte e sete amostras (48,2%) que aderiram a células HeLa, 21 (77,8%) apresentaram o padrão de aderência agregativa (AA) que caracteriza o patotipo de E. coli Enteroagregativa (EAEC). Nove destas amostras que apresentaram AA foram isoladas de secreção de colo uterino, incluindo uma que apresentava genes de virulência de patotipos de EAEC (aggR,aap,irp2 e pic). Esta é a primeira descrição do fenótipo AA em amostras de cavalos doentes. Estas amostras deverão ser melhor avaliadas em relação a sua potencial função na patogênese de diferentes doenças eqüinas, bem como à possibilidade destes animais representarem um reservatório de infecções humanas causadas por esta bactéria.

    Resumo em Inglês:

    The virulence attributes of 56 Escherichia coli strains isolated from sick horses (secretions of uterine cervices; gastrointestinal and lung fragments of necropsy; diarrheic feces, and tracheal washings) was examined by determining their adherence pattern to HeLa cells and searching for the presence of virulence genes of the various E. coli pathotypes. Two non-adherent strains presented astA, which encodes the enteroaggregative E. coli heat-stable toxin. Twenty-seven strains (48.2%) adhered to HeLa cells, 21 (77.8%) of which presented the aggregative adherence pattern (AA) that characterize the Enteroaggregative E. coli pathotype (EAEC). Nine of the strains presenting AA were isolated from secretions of uterine cervix, including one carrying virulence genes of the EAEC pathotype (aggR,aap,irp2, and pic). This is the first description of the AA phenotype amongst E. coli strains from sick horses. Such strains should be further evaluated regarding their potential role in the pathogenesis of diverse equine diseases and as reservoirs of human infections.
  • Caracterização molecular de cepas de Borrelia burgdorferi sensu lato isoladas na região de Belgrado, Sérvia Veterinarian Microbiology

    Ristanovic, Elizabeta S.; Kitamura, Kayoko; Masuzawa, Toshiyuki; Milutinovic, Marija J.; Cekanac, Radovan M.; Stajkovic, Novica T.; Zivanovic, Danijela M.

    Resumo em Português:

    Trata-se do primeiro relato de identificação e caracterização molecular de cepas de Borrelia burgdorferi sensu lato isoladas na região de Belgrado, Sérvia. As cepas A1, A2 e M1, isoladas de Ixodes ricinus, pertencem à Borrelia burgdorferi sensu stricto, enquanto a cepa K1, isolada de Apodemus flavocollis é uma mistura de Borrelia afzelii e B. burgdorferi s.s.

    Resumo em Inglês:

    This is the first report of the molecular characterization and identification of Borrelia burgdorferi sensu lato strains isolated in Serbia. Isolates A1, A2 and M1, from Ixodes ricinus, belong to Borrelia burgdorferi sensu stricto, while isolate K1 from Apodemus flavicollis is a mixture of Borrelia afzelii and B. burgdorferi s.s.
  • Detecção de DNA de Brucella abortus em queijos clandestinos provenientes de São Paulo e Minas Gerais e diferenciação da vacina B19 pela reação da polimerase em cadeia (PCR) Veterinarian Microbiology

    Miyashiro, Simone; Scarcelli, Eliana; Piatti, Rosa M.; Campos, Fabíola R.; Vialta, Airton; Keid, Lara Borges; Dias, Ricardo Augusto; Genovez, Margareth E.

    Resumo em Português:

    Foram analisadas 192 amostras de queijo clandestinas provenientes de várias regiões do Estado de São Paulo e Minas Gerais, Brasil, para isolamento e detecção de DNA de Brucella spp. através das técnicas de cultivo microbiológico e reação da polimerase em cadeia (PCR), respectivamente. Para as amostras positivas foi pesquisada a ocorrência da espécie Brucella abortus (biovares 1, 2 e 4), além da diferenciação do DNA em cepa vacinal B19 ou de campo por PCR. Não foi possível isolar o microrganismo de nenhuma amostra, porém, na PCR, 37 amostras (19,27%) foram positivas na reação com primers gênero específicos e destas, todas (100%) foram comprovadas como sendo Brucella abortus. A diferenciação da cepa revelou que 30/37 amostras (81,08%) eram cepa vacinal B19 e sete (18,92%) eram cepas de Brucella abortus de campo. Os resultados mostraram uma maior sensibilidade diagnóstica da PCR em relação ao cultivo microbiológico, e a padronização da reação de diferenciação da cepa em vacinal ou campo permitiu que todas as amostras positivas para Brucella abortus fossem analisadas, sendo uma metodologia confiável e aplicável a infecções naturais pelo microrganismo.

    Resumo em Inglês:

    A total of 192 samples of illegal cheese from different regions of the states of São Paulo and Minas Gerais, Brazil, were analyzed for the isolation and detection of Brucella spp. DNA by means of microbiological culture and polymerase chain reaction (PCR), respectively. Samples that yielded positive results were submitted to the analysis of the occurrence of Brucella abortus (biovars 1, 2 e 4), as well as to the differentiation of DNA in B19 vaccinal strain or Brucella abortus field strain using PCR. Although the microorganism was not isolated from any sample, PCR detected 37 positive samples (19.27%) using genus-specific primers. From these, all (100%) were Brucella abortus. Differentiation of the strain showed that 30/37 samples (81.08%) were vaccinal strain B19 and seven (18.92%) were Brucella abortus field strains. Results showed that diagnostic sensitivity of PCR was greater than that of microbiological culture. The standardization of the reaction for the differentiation of vaccinal and field strains enabled the analysis of all samples positive for Brucella abortus. It is, therefore, a reliable method, also applicable to natural infections caused by the microrganism.
  • Detecção de patógenos periodontais em amostras subgengivais de cães Veterinarian Microbiology

    Nishiyama, Sheila Alexandra Belini; Senhorinho, Gerusa Neyla Andrade; Gioso, Marco Antônio; Avila-Campos, Mario Julio

    Resumo em Português:

    Neste estudo, a presença de patógenos periodontais, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis, Fusobacterium nucleatum, Dialister pneumosintes, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus, Eikenella corrodens e Treponema denticola foi determinada por PCR, em amostras subgengivais de 40 cães com (25) e sem (15) doença periodontal. Os produtos amplificados pelo PCR para cada espécie bacteriana mostraram amplicons específicos. Dos 25 cães apresentando doença periodontal, P. gingivalis foi detectado em 16 amostras (64%), C. rectus em 9 (36%), A. actinomycetemcomitans em 6 (24%), P. intermedia em 5 (20%), T. forsythensis em 5 (20%), F. nucleatum em 4 (16%) e E. corrodens em 3 (12%). Em nenhuma amostra clínica periodontal foi observada a presença de T. denticola ou D. pneumosintes. Adicionalmente, P. gingivalis foi detectado em apenas um (6,66%) cão saudável, sem raça definida. Nossos resultados mostram que esses microrganismos estão presentes na microbiota periodontal de cães com periodontitis, e isto torna importante a avaliação do papel que esses microrganismos periodontais desempenham na periodontite de animais domésticos, particularmente cães, em termos ecológicos e terapêuticos, desde que esses cães podem adquirir esses periodontopatógenos de seus respectivos proprietários.

    Resumo em Inglês:

    In this study, the presence of putative periodontal organisms, Porphyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis, Fusobacterium nucleatum,Dialister pneumosintes,Actinobacillus actinomycetemcomitans,Campylobacter rectus,Eikenella corrodens and Treponema denticola were examined from subgingival samples of 40 dogs of different breeds with (25) and without (15) periodontitis, by using the PCR method. The PCR products of each species showed specific amplicons. Of the 25 dogs with periodontitis, P. gingivalis was detected in 16 (64%) samples, C. rectus in 9 (36%), A. actinomycetemcomitans in 6 (24%), P. intermedia in 5 (20%), T. forsythensis in 5 (20%), F. nucleatum in 4 (16%) and E. corrodens in 3 (12%). T. denticola and D. pneumosintes were not detected in clinical samples from dogs with periodontitis. Moreover, P. gingivalis was detected only in one (6.66%) crossbred dog without periodontitis. Our results show that these microorganisms are present in periodontal microbiota of dogs with periodontitits, and it is important to evaluate the role of these putative periodontal microorganisms play in the periodontitis in household pets particularly, dogs in ecologic and therapeutic terms, since these animals might acquire these periodontopahogens from their respective owners.
  • Tipagem genotípica de estirpes de Ureplasma diversum por meio da amplificação de fragmentos polimórficos com única enzima (SE-AFLP) Veterinarian Microbiology

    Buzinhani, Melissa; Mettifogo, Elena; Buim, Marcos R.; Moreno, Andréa M.; Paixão, Renata; Timenetsky, Jorge

    Resumo em Português:

    Cepas de referência e 30 estirpes de Ureaplasma diversum isoladas do muco vaginal de bovinos apresentando ou não distúrbios reprodutivos, de quatro diferentes propriedades, foram comparadas por meio da metodologia da SE-AFLP (single-enzyme amplified fragment length polymorphism). Foram obtidos 28 perfis, com ausência de fragmentos monomórficos. No dendrograma, as amostras foram divididas em grupos A e B. O grupo A foi subdividido em A1 e A2 e o A1 dividiu-se em A1a e A1b. As amostras de referência formaram o grupo B. Não houve diferenciação entre as estirpes isoladas de animais doentes ou sadios. Evidenciou-se grande heterogeneidade entre os ureaplasmas estudados indicando baixa estabilidade genômica, como detectado em outras espécies dos microrganismos da classe Mollicutes.

    Resumo em Inglês:

    Isolates of Ureaplasma diversum recovered from bovines with reproductive disorders and healthy ones of four premises were compared by SE-AFLP. Twenty-eight SE-AFLP profiles without monomorphic fragments were obtained. The ureaplasma studied were divided in clusters A and B. Cluster A was divided in subclusters A1 and A2, while A1 was divided in subclusters A1a and A1b. Cluster B grouped only the reference strains. The clusters obtained were not associated with the reproductive disorders. The dendrogram obtained showed high heterogeneity among the studied ureaplasmas and indicated a low genomic stability as detected in other species of microorganisms of class Mollicutes.
  • Efeito inibitório do óleo essencial de Cinnamomum zeylanicum Blume (Lauraceae) e beta-pineno sobre o crescimento de fungos dematiáceos Veterinarian Microbiology

    Moreira, Ana Carolina Pessoa; Lima, Edeltrudes de Oliveira; Souza, Evandro Leite de; Van Dingenen, Monique Araújo; Trajano, Vinícius Nogueira

    Resumo em Português:

    Os fungos dematiáceos são microrganismos patogênicos capazes de agir como agentes etiológicos de micoses com diferentes graus de severidade. Este estudo avaliou a efetividade do óleo essencial de Cinnamomum zeylanicum Blume e beta-pineno em inibir o crescimento de várias cepas de fungos dematiáceos (Alternaria brassicola, Cladosporium herbarium, C. resinae, C. cladosporioides, Chaetomum globosum, Curvularia, Fonsecaea compacta, Piedraia hortae). Os ensaios antimicrobianos foram conduzidos através da determinação da Concentração Inibitória Mínima-CIM utilizando-se da técnica de difusão em meio sólido, bem como através da observação da interferência dos valores de CIM sobre o crescimento micelial radial fúngico ao longo de 14 dias. Os valores de CIM encontrados para o óleo essencial de C. zeylanicum oscilaram entre 63 e 125 µL/mL. beta-pineno apresentou um valor de CIM de 125 µL/mL para a maioria das cepas fúngicas, entretanto C. resinae e C. globosum mostraram-se resistentes a todas as concentrações ensaiadas. Os valores de CIM encontrados para C. zeylanicum e beta-pineno apresentaram intenso efeito fungicida notado por uma total inibição do crescimento micelial de C. cladosporioides e F. compacta ao longo de 14 dias de exposição. Estes resultados mostraram o intenso potencial antifúngico do óleo essencial de C. zeylanicum e beta-pineno, os quais poderiam ser considerados em um uso racional em formulações farmacêuticas utilizadas para a terapia de algumas micoses, particularmente, aquelas causadas por fungos dematiáceos.

    Resumo em Inglês:

    Dematiaceous moulds are pathogen microorganisms able to act as etiological agents of mycoses with different degrees of severity. This study evaluated the effectiveness of Cinnamomum zeylanicum Blume essential oil and beta-pinene in inhibiting the growth of various strains of dematiaceous moulds (Alternaria brassicola, Cladosporium herbarium, C. resinae, C. cladosporioides, Chaetomum globosum, Curvularia sp., Fonsecaea compacta, Piedraia hortae). Antimicrobial assays were led by determining the Minimum Inhibitory Concentration-MIC using the solid medium diffusion procedure and observing the interference of the MIC values on the mould radial mycelial growth along 14 days. MIC values found to C. zeylanicum essential oil oscillated between 63 and 125 µL/mL. beta-pinene showed MIC value of 125 µL/mL for the most mould strains, however C. resinae and C. globosum were resistant to it in all assayed concentrations. MIC values found to C. zeylanicum essential oil and beta-pinene presented intense fungicidal effect noted by a total inhibition of the mycelial growth of C. cladosporioides and F. compacta along 14 days of exposure. These results showed the intense antimould potential of C. zeylanicum essential oil and beta-pinene which could be regarded in a rational use in pharmaceutical formulations used to treat some mycoses, particularly, those caused by dematiaceous moulds.
  • Degradação de ácido salicílico presente em soluções sintéticas utilizando Pseudomonas fluorescens HK44 Industrial Microbiology

    Silva, Tatyane R.; Valdman, Erika; Valdman, Belkis; Leite, Selma G.F.

    Resumo em Português:

    Com a intenção de criar um sensor microbiano, as condições ótimas para a biodegradação de ácido salicílico por Pseudomonas fluorescens HK44 foram determinadas neste estudo. Os experimentos cinéticos permitiram a definição dos tempos de 60 e 30 minutos como necessários para atingir a máxima degradação de ácido salicílico presente em meio com ou sem extrato de lêvedo, respectivamente. A degradação no meio sem extrato de lêvedo e a quantificação através de espectrofotometria 230 nm foram selecionadas para serem utilizadas em testes posteriores. O uso de células pré-ativadas ou na fase exponencial de crescimento apresentou melhores porcentagens de degradação de ácido salicílico quando comparadas a células não-ativadas ou no estado estacionário de crescimento. Além disso, a melhor concentração celular utilizada nessa degradação foi 0,1 g.L¹. A cepa HK44 parece ser capaz de degradar o ácido salicílico presente em sistemas aquosos simples, tornando este microrganismo uma ferramenta promissora para aplicação em um sensor microbiano luminescente.

    Resumo em Inglês:

    The optimal conditions for salicylic acid biodegradation by Pseudomonas fluorescens HK44 were determined in this study with the intention to create a microbial sensor. Kinetic experiments permitted a definition of 60 and 30min the time needed to achieve the maximum degradation of salicylic acid presented in a medium with and without yeast extract, respectively. The degradation in medium without yeast extract and the quantification by spectrophotometry 230 nm were selected to be used in further tests. The use of preactivated cells or on the exponential growth phase showed better salicylic acid degradation percentages when compared to nonactivated cells or on the stationary growth state. Finally, the best cellular concentration used on the salicylic acid degradation was 0,1 g.L-1. Strain HK44 shows to be capable of degrade salicylic acid presented in simple aqueous systems, making this strain a promising tool for the application on a luminescent microbial sensor.
  • Aplicação do planejamento fatorial fracionário para a produção de levana por Zymomonas mobilis Industrial Microbiology

    Melo, I.R.; Pimentel, M.F.; Lopes, C.E.; Calazans, G.M.T.

    Resumo em Português:

    Levana é um polissacarídeo extracelular, biologicamente ativo, não tóxico, contendo em sua estrutura apenas frutose. A maximização da produção de levana, por via fermentativa, pela linhagem de Zymomonas mobilis ZAG-12, foi estudada utilizando-se um planejamento fatorial de dois níveis 2(4-1), variando-se as concentrações iniciais de sacarose (150, 200 e 250 g.L-1) , extrato de levedura (2.0, 3.5 e 5.0 g.L-1), temperatura (20, 25 e 30ºC) e agitação (50, 75 e 100 rpm). As fermentações foram desenvolvidas por processos descontínuos em frascos Pyrex roscados, de 500 mL, contendo 300 mL de meio a base de sacarose, por 72 horas. No início e ao final do processo, foram dosados: biomassa, etanol, levana e sacarose como açúcares redutores totais. A análise dos dados mostra que o aumento da produção de levana depende tanto dos efeitos da concentração inicial de sacarose, temperatura e agitação, isoladamente, quanto da interação entre agitação e temperatura na faixa experimental estudada. O extrato de levedura não afeta a produção de levana, entretanto, quando a resposta é produção de etanol e biomassa, fica evidente que essa variável é significativa. Os resultados demonstraram que as melhores condições para a produção em batelada ocorreram com 250g/L de sacarose inicial, 100 rpm de agitação, a 20ºC.

    Resumo em Inglês:

    Levan is a non-toxic, biologically active, extra cellular polysaccharide composed solely by fructose units. Optimization of levan production by Zymomonas mobilis strain ZAG-12 employing a 2(4-1) fractional factorial design was performed to analyze the influence of the temperature (20, 25 e 30ºC) agitation (50, 75 e 100 rpm), and the initial concentrations of both sucrose (150, 200 e 250 g.L-1) and yeast extract (2.0, 3.5 e 5.0g.L-1) on final levan concentration. Aerobic fermentation was performed batchwise in 500mL Pyrex flasks for 72 hours. Biomass, ethanol, levan and sucrose were determined at beginning and also at end of the fermentations. The experiments showed that the final levan concentration depended on initial sucrose concentration, temperature and agitation velocity and that the initial concentration of yeast extract did not influence levan production. However, when the production of ethanol and biomass were considered, it became evident that yeast extract was a significant variable. The best conditions for levan production occurred at 100 rpm agitation, 20ºC and 250g.L-1 of initial sucrose resulting in 14.67g.L-1 of levan.
  • Isolamento de linhagens recombinantes com maior produção de pectinases por meio de fusão de protoplastos entre Penicillium expansum e Penicillium griseoroseum Industrial Microbiology

    Varavallo, Maurilio Antonio; Queiroz, Marisa Vieira de; Lana, Taís Guimarães; Brito, Admilson Toscano Ribeiro de; Gonçalves, Daniel Bonoto; Araújo, Elza Fernandes de

    Resumo em Português:

    Fusões de protoplastos entre linhagens mutantes auxotróficas e morfológicas complementares de Penicillium griseoroseum e P. expansum foram induzidas por polietilenoglicol e íons cálcio (Ca2+). Fusionantes foram obtidos em meio mínimo e uma linhagem prototrófica, possivelmente diplóide, foi selecionada para a haploidização com o fungicida benomil. Diferentes linhagens recombinantes foram isoladas e caracterizadas quanto à presença de mutações auxotróficas e a produção de enzimas pectinolíticas. O fusionante prototrófico não apresentou maior atividade de pectinases em relação às linhagens parentais, entretanto, entre 29 recombinantes analisados, quatro apresentaram maiores atividades enzimáticas. O recombinante RGE27, o qual possui as mesmas mutações auxotróficas e morfológicas que a linhagem parental de P. griseoroseum, apresentou um aumento considerável na produção de poligalacturonase (3 vezes) e de pectina liase (1,2 vezes).

    Resumo em Inglês:

    Protoplast fusion between complementary auxotrophic and morphological mutant strains of Penicillium griseoroseum and P. expansum was induced by polyethylene glycol and calcium ions (Ca2+). Fusant strains were obtained in minimal medium and a prototrophic strain, possibly diploid, was chosen for haplodization with the fungicide benomyl. Different recombinant strains were isolated and characterized for occurrence of auxotrophic mutations and pectinolytic enzyme production. The fusant prototrophic did not present higher pectinase production than the parental strains, but among 29 recombinants analyzed, four presented enhanced enzyme activities. The recombinant RGE27, which possesses the same auxotrophic and morphologic mutations as the P. griseoroseum parental strain, presented a considerable increase in polygalacturonase (3-fold) and pectin lyase production (1.2-fold).
  • Repressão catabólica da produção de retamicina por Streptomyces olindensis ICB20 Industrial Microbiology

    Inoue, Olavo Ossamu; Schmidell Netto, Willibaldo; Padilla, Gabriel; Facciotti, Maria Cândida Reginato

    Resumo em Português:

    A retamicina é um complexo antitumoral antraciclínico produzido por Streptomyces olindensis ICB20. Neste trabalho estudou-se a influência de diferentes concentrações de glicose no meio de alimentação sobre a produção de retamicina. Os resultados de cultivos contínuos mostraram que o uso de elevadas concentrações de glicose resultou em repressão catabólica da biossíntese do antitumoral. A maior velocidade específica de produção de retamicina, qRTM = 7,8 mg/g.h, foi obtida quando a concentração de glicose foi de 10 g/L. O menor valor de qRTM, 2,5 mg/g.h, foi observado quando a concentração de glicose foi de 20 e 25 g/L. A concentração de glicose residual aumentou de 0 a 13 g/L conforme a concentração de glicose na alimentação foi incrementada de 10 a 25 g/L.

    Resumo em Inglês:

    Retamycin is an anthracyclinic antitumoral complex produced by Streptomyces olindensis ICB20. In this work the influence of different glucose concentrations in the feed medium on the production of retamycin was studied. Chemostat cultures employing glucose concentration varying between 10 g/L and 25 g/L showed that use of high glucose concentration resulted in catabolite repression of the biosynthesis of the antitumoral. The highest specific retamycin production rate, qRTM = 7.8 mg/g.h, was obtained when glucose concentration was 10 g/L. The lowest value of qRTM, 2.5 mg/g.h, was observed when glucose concentration was 20 and 25 g/L. The residual glucose concentration varied from 0 to 13 g/L, as the glucose concentration in the feed was increased from 10 to 25 g/L.
  • Isolamento de Trichosporon spp produtor de lipase e extração enzimática pelo sistema bifásico aquoso Industrial Microbiology

    Santos, Juliana A.; Amaral, Marcel C.O.; Araújo, Thiago A.S.; Fernandes, Késsia G.C.; Chaves, Adilson C.; Morais, Márcia M.C.

    Resumo em Português:

    Uma levedura produtora de lipase isolada de queijo coalho e identificada como Trichosporon spp produziu 7,3 U/mL (59,3 U/µg) após 72h de cultivo. A lipase mostrou atividade ótima em pH 7,0-8,0 e temperatura ótima entre 45-50ºC. Extração pelo sistema PEG - sais de fosfato apresentou 99,8% de recuperação da atividade enzimática na fase PEG.

    Resumo em Inglês:

    A lipase-producing yeast strain isolated from crude cheese and identified as Trichosporon spp produced 7.3 U/mL (59.3 U/µg) after 72h of cultivation. Lipase showed optimum activity at pH 7.0-8.0 and 45-50ºC. Extraction by the two-phase aqueous system (PEG-phosphate salts) showed an elevated recuperation (99.8%) of enzymatic activity in the PEG phase.
  • Seleção e caracterização de leveduras produtoras decarotenóides na região de Campinas, Brasil Industrial Microbiology

    Maldonade, Iriani R.; Scamparini, Adilma R. P.; Rodriguez-Amaya, Délia B.

    Resumo em Português:

    Este trabalho teve como objetivo selecionar e identificar leveduras encontradas no Brasil capazes de produzir carotenóides. As leveduras pigmentadas foram isoladas de amostras de solos, folhas, frutos, flores e um alimento processado. As amostras foram colocadas em frascos de erlenmeyer, contendo meio de Extrato de Malte e Levedura (YM), e incubadas a 30ºC. Após 48 horas, as amostras foram inoculadas em placas de petri contendo meio YM ágar e incubadas a 30ºC por 120 horas. As colônias, que apresentaram coloração entre amarelo e vermelho, foram transferidas para os tubos de culturas, contendo meio YM ágar e incubadas a 30ºC por 72 horas. Das 242 amostras, somente cinco delas apresentaram coloração intensa entre amarelo e vermelho. Estas colônias de leveduras foram reisoladas, em placas de petri contendo YM ágar e, posteriormente, transferidas para tubos de ensaios contendo GPYM ágar. A identificação das leveduras, baseada nas características morfológicas, de reprodução, além dos testes fisiológicos e bioquímicos, classificou quatro linhagens como Rhodotorula mucilaginosa e uma como Rhodotorula graminis. Os principais pigmentos extraídos destas linhagens foram identificados através da análise de cromatografia de alta eficiência como beta-caroteno e toruleno. As linhagens de leveduras mostraram potencial como microrganismos promissores para a produção comercial de carotenóides por fermentação.

    Resumo em Inglês:

    The objective of the present study was to select and identify yeasts from Brazil capable of producing carotenoids. Pigmented yeasts were isolated from soil, leaves, fruits, flowers and a processed product. The samples were incubated at 30ºC in Erlenmeyer flasks, containing YM broth. After 48 hours, they were inoculated in Petri dishes with YM agar, and incubated at 30ºC during 120 hours. The yeast colonies, which presented yellow to red coloration, were transferred to culture tubes containing YM agar, and incubated at 30ºC for 72 hours. Out of 242 samples, only five had yellow to red color at high intensity. These highly pigmented yeasts were re-isolated in Petri dishes with YM agar and then transferred to tubes with GPYM agar. Identification through morphological and reproduction characteristics, along with physiological and biochemical tests, classified four strains as R. mucilaginosa and one strain as R. graminis. The main carotenoids extracted from them were identified through HPLC analysis as beta-carotene and torulene. The strains showed potential as promising microorganisms for the commercial production of carotenoids.
  • Diferenciação morfológica e molecular de fungos produtores de pectinases Penicillium expansum e Penicillium griseoroseum Industrial Microbiology

    Cardoso, Patrícia Gomes; Queiroz, Marisa Vieira de; Pereira, Olinto Liparini; Araújo, Elza Fernandes de

    Resumo em Português:

    Penicillium expansum e P. griseoroseum foram caracterizados morfológica e molecularmente. Variações na morfologia das colônias e coloração dos conídeos foram observadas entre os isolados. A caracterização molecular foi baseada em marcadores RAPD, sequenciamento da região do espaçador interno transcrito do DNA ribossomal e "fingerprinting" telomérico. Foi usado um total de 78 primers RAPD, sendo que 8 apresentaram 54% de fragmentos de DNA polimórficos. Os produtos da amplificação da região ITS de P. expansum e P. griseoroseum foram de 600 e 594 pb, respectivamente. Não foi detectada nenhuma variação na seqüência de nucleotídeos dessa região, comparando-se P. expansum e P. griseoroseum, exceto em relação aos seis nucleotídeos iniciais adicionais. Observou-se a ocorrência de polimorfismo na organização da região subtelomérica no genoma destes fungos e estimou-se um número mínimo de três cromossomos para estas espécies. Este é o primeiro trabalho que descreve a existência de polimorfismo na organização da região subtelomérica do genoma de espécies de fungos pertencentes ao gênero Penicillium, altamente homogêneo, indicando uma possível utilização da abordagem empregada neste estudo para pesquisas filogenéticas futuras.

    Resumo em Inglês:

    Two species from the genus Penicillium, Penicillium expansum and P. griseoroseum (Brasilian isolates) were characterized morphologic and molecularlly. Morphological variability was detected among isolates in regard to colony morphology and to conidia coloration. The molecular characterization was based on the RAPD markers, telomeric fingerprinting and ITS sequencing. A total of 78 RAPD primers were used and 8 presented differences in band patterns with 54% of the amplified polymorphic fragments. The monomorphic fragments of 600 bp (P. expansum) and 594 bp (P. griseoroseum) were amplified. The only internal transcribed spacer region variation detected between the two species was the additional six initial nucleotides. The analysis by telomeric fingerprinting showed polymorphism between both species and the chromosome minimal numbers estimated were three. The polymorphism observed in the organization of the subtelomeric region in the genome of two Penicillium species within the high homogeneous Penicillium subgenus is for the first time reported and perhaps can be employed in future phylogenetic studies.
  • Purificação parcial de glucose-6-fosfato desidrogenase por sistemas de duas fases aquosas poli (etilenoglicol)/fosfato Industrial Microbiology

    Ribeiro, Marcela Zanella; Silva, Daniel Pereira; Vitolo, Michele; Roberto, Inês Conceição; Pessoa-Jr, Adalberto

    Resumo em Português:

    Glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PDH) é uma importante enzima usada em estudos bioquímicos e médicos, bem como em diversos métodos analíticos com aplicação comercial e industrial. Neste trabalho foi avaliado a extração da G6PDH em sistemas de duas fases aquosas (ATPS) constituídos por poli(etilenoglicol) (PEG)/tampão fosfato, usando como fonte de enzima um meio preparado por rompimento de leveduras de panificação comercial. Inicialmente foram investigados os efeitos da massa molar do PEG na partição da enzima e da homogeneização e repouso no equilíbrio do sistema. Na sequência, diversos ATPS foram preparados usando análise estatística (planejamento fatorial 2²). Os resultados, incluindo parâmetros cinéticos e termodinâmicos para a atividade da G6PDH, indicaram parcial purificação desta enzima em ATPS constituídos por 17,5% (p/p) PEG400 e 15,0% (p/p) fosfato. Um alto valor de recuperação enzimática (97,7%), um alto coeficiente de partição (351), e um fator de purificação aceitável (2,28 vezes maior que em homogenato celular) foram obtidos na fase superior do sistema. Assim, foi possível alcançar uma pré-purificação eficaz da enzima separando alguns contaminadores aplicando um método simples tal como a extração líquido-líquido em sistemas bifásicos (ATPS).

    Resumo em Inglês:

    Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) is an important enzyme used in biochemical and medical studies and in several analytical methods that have industrial and commercial application. This work evaluated the extraction of G6PDH in aqueous two-phase system (ATPS) of poly(ethyleneglycol) (PEG)/phosphate buffer, using as enzyme source a medium prepared through commercial baker's yeast disruption. Firstly, the effects of PEG molar mass on the enzyme partition and of homogenization and rest on the system equilibrium were investigated. Afterwards, several ATPS were prepared using statistical analysis (2² factorial design). The results, including kinetic and thermodynamic parameters for the G6PDH activity, showed partial purification of this enzyme in ATPS composed of 17.5% (w/w) PEG400 and 15.0% (w/w) phosphate. A high enzymatic recovery value (97.7%), a high partition coefficient (351), and an acceptable purification factor (2.28 times higher than in cell homogenate) were attained from the top phase. So, it was possible to attain an effective enzyme pre-purification by separating some contaminants with a simple method such as liquid-liquid extraction in aqueous two-phase systems (ATPS).
  • Um caso incomum de paracoccidioidomicose no Brasil Medical Microbiology

    Macêdo, Danielle Patrícia Cerqueira; Neves, Rejane Pereira; Magalhães, Oliane Maria Correia; Lacerda Filho, Armando Marsden

    Resumo em Português:

    Este trabalho relata um caso incomum de paracocci-dioidomicose com ulcerações na cabeça e nariz em homem brasileiro. Para o diagnóstico, realizou-se exame microscópico direto de secreção de úlcera e amostras de pele, tratados com hidróxido de potássio. O isolamento de Paracoccidioides brasiliensis ocorreu a 28ºC e 37ºC em Sabouraud ágar com cloranfenicol. O diagnóstico foi estabelecido pela presença de células leveduriformes isoladas e com brotações múltiplas e o crescimento típico do fungo P. brasiliensis.

    Resumo em Inglês:

    This paper reports an unusual case of paracoccidioidomycosis with ulcerations in the head and nose in a Brazilian man. For diagnosis, direct microscopic examination of ulcer secretion and skin samples treated with potassium hydroxide was performed. The isolation of Paracoccidioides brasiliensis occurred at 28ºC and 37ºC on Sabouraud agar with chloranphenicol. Diagnosis was established by the presence of isolated and multiple budding yeast-like cells and typical fungus growth of P. brasiliensis.
  • Inibição da adesão de Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) as células CACO-2 pelo leite humano e suas frações imunoglobulínica e não imunoglobulínica Medical Microbiology

    Oliveira, Inaiara R. de; Bessler, Heidi C.; Bao, Sonia N.; Lima, Renato de L.; Giugliano, Loreny G.

    Resumo em Português:

    Escherichia coli enterotoxigênica (ETEC) é uma importante causa de diarréia infantil em países em desenvolvimento e entre os viajantes em áreas endêmicas. A diarréia por ETEC é causada pela colonização do intestino delgado, mediada pelos fatores antigênicos de colonização (CFs), e a subseqüente elaboração de enterotoxinas. A amamentação tem sido relacionada com a proteção contra infecções entéricas. O efeito protetor do leite humano pode ser atribuído ao seu conteúdo imunoglobulínico, especialmente a imunoglobulina A secretória (sIgA), e aos componentes não imunoglobulínicos tais como oligossacarídeos livres, glicoproteínas e glicolipídeos. Neste estudo nós investigamos o efeito do leite humano total e suas frações imunoglobulínica e não imunoglobulínica sobre a adesão de cepas ETEC possuidoras de diferentes fatores de colonização as células Caco-2, bem como a habilidade da sIgA e do componente secretor livre (fSC) de se ligarem as proteínas da superfície bacteriana. Uma mistura de leite de três doadoras foi fracionada por filtração em gel e analisada por SDS-PAGE. Nossos resultados revelaram que o leite humano total e suas frações protéicas, contendo sIgA e fSC, inibiu a adesão de cepas ETEC albergando diferentes fatores antigênicos de colonização. Nós também verificamos que a sIgA e o fSC, usando ensaios de imunoeletrotransferência e imunomarcação, ligaram-se a algumas proteínas fimbriais e a outro material presente na superfície bacteriana. Nossos dados sugerem que o leite humano total e suas frações podem contribuir para proteção contra as infecções por ETEC bloqueando a adesão bacteriana mediada pelos diferentes antígenos de colonização.

    Resumo em Inglês:

    Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is the most common cause of diarrhea in children in developing countries and among travelers to ETEC endemic areas. ETEC diarrhea is caused by colonization of the small intestine mediated by colonization factor (CF) antigens, and subsequent elaboration of enterotoxins. Breast feeding has been related to protection against enteric infections. The protective effect of human milk can be ascribed to its immunoglobulin content, specially secretory immunoglobulin A (sIgA), and to non-immunoglobulin components such as free oligosaccharides, glycoproteins and glycolipids. In this study we investigated the effect of whole human milk and its fractions immunoglobulin and non-immunoglobulin on the adherence of ETEC strains possessing different CFs to Caco-2 cells, as well as the ability of sIgA and free secretory component (fSC) to bind to bacterial superficial proteins. Pooled human milk from three donors were fractionated by gel filtration and analyzed by SDS-PAGE. Our results revealed that whole human milk and its proteins fractions, containing sIgA and fSC, inhibited adhesion ETEC strains harboring different colonization factors antigens. We also verified that sIgA and fSC, using immunoblotting and immunogold labeling assays, bound to some fimbrial proteins and other material present in bacterial surface. Our findings suggest that whole human milk and its fractions may contribute to protection against ETEC infections by blocking bacterial adhesion mediated by different colonization antigens.
  • Anticorpos anti-Leptospira spp e anti-Brucella spp em humanos da área rural do município de Monte Negro, estado de Rondônia, Amazônia Ocidental Brasileira Medical Microbiology

    Aguiar, Daniel M.; Cavalcante, Guacyara T.; Camargo, Luis M. A.; Labruna, Marcelo B.; Vasconcellos, Silvio A.; Souza, Gisele O.; Gennari, Solange M.

    Resumo em Português:

    Foram avaliados soros de 276 humanos procedentes de 71 fazendas localizadas no município de Monte Negro, RO, pela Soroaglutinação Microscópica para verificar a presença de anticorpos anti-Leptospira spp e pela Soroaglutinação Lenta em Tubos para verificar a presença de anticorpos anti-Brucella spp. Anticorpos anti-Leptospira spp foram detectados em 28 (10,2%) humanos procedentes de 23 fazendas (32,4%). Os sorovares mais freqüentes foram Patoc (46,7%), Autumnalis (10,0%) e Shermani (10,0%). A positividade foi maior no sexo masculino (14,5%) que no feminino (5,0%; P < 0,05) e o contato com a água de rio apresentou associação com a infecção por Leptospira spp (OR: 27; P < 0,05). Quatro humanos (1,4%) reagiram contra antígenos de Brucella spp, com três (4,2%) fazendas apresentando pelo menos uma reação positiva para Brucella spp.

    Resumo em Inglês:

    Sera from 276 humans living in 71 farms located in Monte Negro Municipality, RO., Western Amazon, Brazil were examined for anti-Leptospira spp antibodies by Microscopic Agglutination Test and for anti-Brucella spp antibodies by Tube Agglutination Test. Leptospira spp antibodies were detected in 28 (10.2%) of them with at least one positive case in 23 farms (32.4%). The most frequent leptospira serovars were Patoc (46.7%), Autumnalis (10.0%) and Shermani (10.0%). The proportion of positive males (14.5%) were higher than females (5.0%; P <0.05) and the contact with river water presented association with Leptospira spp infection (OR: 27; P=0.01). A total of 04 (1.4%) humans reacted against Brucella antigens; three farms (4.2%) presented at least one positive case of brucellosis.
  • Meningite asseptica por echovírus 30 no estado de São Paulo, Brasil Medical Microbiology

    Machado, Bráulio Caetano; Ferreira, Raquel de Souza; Carmona, Rita de Cássia Compagnoli; Timenetsky, Maria do Carmo Sampaio Tavares

    Resumo em Português:

    O objetivo deste estudo foi identificar e caracterizar quanto aos aspectos imunológicos e moleculares os Enterovirus humanos associados a casos de meningite asséptica. Amostras clínicas (líquido cefaloraquidiano, fezes e soro) originárias de 21 casos suspeitos de meningite viral, provenientes do estado de São Paulo no período de 1998 a 1999 foram analisadas. Os vírus isolados foram identificados como pertencentes ao gênero Enterovirus e mais especificamente ao sorotipo echovírus 30 (EV-30), utilizando-se técnicas imunológicas como Imunofluorescência Indireta e Neutralização e técnica molecular da transcrição reversa - reação em cadeia da polimerase (RT-PCR) direcionada para as regiões 5' não traduzida (5'NTR) e Proteína Viral 1(VP1) do genoma viral. Os resultados obtidos contribuíram com o sistema de vigilância epidemiológica do estado de São Paulo na geração de informações sobre a circulação de EV-30 associado à meningite asséptica nessa região do mundo.

    Resumo em Inglês:

    The objective of this study was to identify and characterize the immunological and molecular aspects of Human Enterovirus (HEV) associated with aseptic meningitis cases in São Paulo State, Brazil. Clinical samples (cerebrospinal fluid CSF, stool and sera) were analyzed from 21 viral meningitis suspected cases collected in the period from 1998 to 1999. The isolated virus were identified as belonging to Enterovirus genus and specifically to echovirus serotype 30 (EV-30), using immunological techniques as Indirect Immunofluorescense Assay (IFA) and Neutralization (Nt) and by molecular technique of Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) directed to the 5' NTR and VP1 regions of viral genome. The results obtained contributed with to the surveillance system of São Paulo State and they are important due to a shortage of epidemiological data about the circulation of EV-30 associated to aseptic meningitis in this region of the world.
  • Incidência de espécies de Candida em cateteres umbilicais implantados em recém-nascidos em Natal-RN Medical Microbiology

    Fernandes, Ana Cristina Santos; Sousa Junior, Francisco Canindé de; Oliveira, Solange Maria de; Calich, Lucia; Milan, Eveline Pipolo

    Resumo em Português:

    Foram estudados, entre janeiro de 2003 a dezembro de 2004, todos os recém-nascidos internados na UTI neonatal da Maternidade Escola Januário Cicco, portadores de cateter venoso umbilical. Avaliou-se a prevalência de espécies de Candida nas pontas de cateteres intra-venosos dos neonatos, e os fatores associados a que os pacientes estavam submetidos. As pontas de cateter foram cultivadas em ágar sangue, e, quando houve crescimento de colônia leveduriforme, esta foi subcultivada para a realização de provas morfológicas e bioquímicas para identificar a espécie. Do total de 240 cateteres analisados, 41 apresentaram crescimento de leveduras, sendo 34 encaminhados para identificação, observando-se os seguintes agentes: 13 C. albicans (38%), 10 Candida parapsilosis (29%), 8 C. tropicalis (20%), 1 C. guilliermondii (3%), 1 C. famata (3%) e 1 Trichosporon spp. (3%). Dos pacientes que apresentaram cultura de ponta de cateter positiva para fungos, três tiveram hemocultura positiva com a mesma espécie em ambos os sítios. Entre os fatores de risco destaca-se que todos os pacientes faziam uso de antibioticoterapia de amplo espectro, portavam sonda nasogástrica, além de outros procedimentos invasivos, como ventilação mecânica e cateter umbilical.

    Resumo em Inglês:

    All the newborns with umbilical venous catheters, hospitalized in the neonatal intensive care unit at Januário Cicco Maternity Hospital in Natal, Brazil, between January, 2003 and December, 2004 were studied. The prevalence of Candida species in the tips of intra-venous catheters was assessed, as well as the coexisting exposures that the patients were subjected to. Catheter tips were cultivated in blood agar and when yeast culture occurred, the colony was subcultivated for species identification through morphologic and biochemical assays. From a total of 240 catheters, 41 were positive for yeasts, and 34 were submitted to identification. The following agents were isolated: 13 C. albicans (38%), 10 Candida parapsilosis (29%), 8 C. tropicalis (20%), one C. guilliermondii (3%), one C. famata (3%) and one Trichosporon spp. (3%). Three patients among those with positive catheter tip fungal cultures were also hemoculture positive, with the same fungal species at both sites. Among the coexisting exposures, it should be pointed out that all the patients underwent broad spectrum antibiotic therapy, used a nasogastric probe, in addition to undergoing other invasive procedures such as mechanical ventilation and umbilical catheter implantation.
  • Ocorrência dos genes de metalo-beta-lactamases blaSPM-1 e blaIMP-1 em isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa de três hospitais universitários da cidade de Porto Alegre, Brasil Medical Microbiology

    Gaspareto, Patrick Barcelos; Martins, Andreza Francisco; Zavascki, Alexandre Prehn; Barth, Afonso Luis

    Resumo em Português:

    Descrevemos a ocorrência dos genes de metalo-beta-lactamases (MBL) blaSPM-1 e blaIMP-1 em isolados clínicos de Pseudomonas aeruginosa resistentes ao imipenem e/ou ceftazidima obtidos em três hospitais universitários de Porto Alegre, Brasil. A produção de MBL foi observada através de técnica fenotípica e os genes foram detectados pelo método de PCR.

    Resumo em Inglês:

    We described the ocurrence of metallo-beta-lactamases (MBL) genes blaSPM-1 and blaIMP-1 in clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa resistant to imipenem and/or ceftazidime obtained from three universitary hospitals in the city of Porto Alegre, Brazil. The MBL production was screened by phenotypic test and the genes were detected by PCR.
  • Fungemia por engyodontium album: primeiro caso reportado Medical Microbiology

    Macêdo, Danielle Patrícia Cerqueira; Neves, Rejane Pereira; Souza-Motta, Cristina Maria de; Magalhães, Oliane M. Correia

    Resumo em Português:

    Micoses oportunistas têm sido progressivamente observadas entre pacientes imunocomprometidos. Nós descrevemos um caso no qual Engyodontium album foi isolado e crescido do sangue de um paciente com a Síndrome da Imunodeficiência Adquirida. E. album cresceu a 37ºC e exibiu atividade proteásica, ambos indicadores de patogenicidade. Esta é a primeira vez que este organismo foi reportado como agente de fungemia.

    Resumo em Inglês:

    Opportunistic mycoses have been increasingly observed among immunocompromised patients. We describe a case in which Engyodontium album was isolated and cultured from the blood of a patient with the Acquired Immunodeficiency Syndrome. E. album grew at 37ºC and showed proteinase activity, both indicators of pathogenicity. This is the first time that this organism has been reported as agent of fungaemia.
  • Uso do Bioscreen C para crescimento de Mucor hiemalis em diferentes fontes de carbono e nitrogênio Environmental Microbiology

    Tauk-Tornisielo, Sâmia Maria; Vieira, Joelma Maurício; Govone, José Silvio

    Resumo em Português:

    O sistema automatizado Bioscreen C foi utilizado para o crescimento de quatro linhagens de Mucor hiemalis, isoladas do solo da Estação Ecológica de Juréia-Itatins (EEJI), estado de São Paulo, em meios líquidos com uma única fonte de carbono (2%) ou de nitrogênio (1%), pH 5,0, a 25ºC, e agitação de 150rpm por 5 dias. O meio com somente uma única fonte de nitrogênio foi adicionado com 2% de glicose. As leituras de densidade óptica foram realizadas a 540nm, em intervalos de 2h, por cinco dias. Os resultados foram analisados estatisticamente com o Teste de Friedman (alfa = 5%). Os melhores crescimentos foram obtidos com as linhagens M1, M2 e M3, que atingiram o início da fase log em 60 horas de cultivo. As melhores fontes de carbono variaram de acordo com a linhagem estudada, e extrato de levedura provou ser a melhor fonte de nitrogênio para todas as linhagens. Acetato de sódio inibiu o crescimento das quatro linhagens, sendo a M3 a mais afetada. O uso do sistema automatizado foi muito conveniente para as culturas em meio liquido, sendo rápido e automático, constituindo em uma boa técnica para a determinação das condições ambientais ótimas para crescimento de fungos filamentosos.

    Resumo em Inglês:

    The automated Bioscreen C system was used for growth of four Mucor hiemalis strains isolated from the soil in the Juréia-Itatins Ecology Station (JIES), São Paulo state, in liquid culture media containing different carbon (2%) and nitrogen (1%) sources, pH 5.0, at 25ºC, and agitated at 150 rpm for 5 days. The medium containing only one nitrogen source had been added with 2% glucose. The readings were taken at lambda = 540 nm, at 2-hour intervals, up to five days. The results were compared using the Friedman Test (alpha = 5%). The best growth was obtained for strains M1, M2 and M3, reaching the log phase in 60 hours. The best carbon sources varied according to the strain, and yeast extract proved to be the best nitrogen source. Sodium acetate inhibited the growth of the four strains, being the M3 strain the most affected. The use of the automated system was very convenient for cultures in liquid media, as it is rapid and automated, providing a good technique for determination of the optimal environmental factors for growth of the filamentous fungi.
  • Promoção do enraizamento e crescimento de eucalipto por rizobactérias Environmental Microbiology

    Teixeira, Débora A.; Alfenas, Acelino Couto; Mafia, Reginaldo Gonçalves; Ferreira, Eraclides M.; Siqueira, Leandro de; Maffia, Luiz A.; Mounteer, Ann H.

    Resumo em Português:

    Neste trabalho, testaram-se 107 rizobactérias, isoladas da rizosfera de mudas de clones de eucalipto, quanto ao seu potencial como promotoras de enraizamento de estacas e miniestacas de eucalipto, em substrato à base de casca de arroz carbonizada e vermiculita (1:1). Estacas e miniestacas foram plantadas em tubetes cônicos contendo substrato tratado e não tratado (testemunha) e foram mantidas sob nebulização intermitente de água a 26-28ºC. Aos 35 dias, avaliou-se a porcentagem média de estacas enraizadas e a massa seca do sistema radicular. Dez isolados destacaram-se como indutores de enraizamento e crescimento, propiciando ganhos de até 110% e de 250%, respectivamente. Esses isolados também foram eficientes no enraizamento de miniestacas, cujos ganhos variaram de acordo com o clone e isolado testado. Os maiores incrementos obtidos no enraizamento de estacas foram superiores aos observados para miniestacas. Em geral, quanto menor o índice de enraizamento do clone, maior foi o ganho médio obtido com a inoculação. Apenas os isolados 3918 (código R98) e MF4 (código R87) foram capazes de produzir ácido indol-acético (AIA) in vitro, em quantidades equivalentes a 0,7 e 0,67 µg/ml de suspensão, respectivamente. Quando comparados ao tratamento de miniestacas em ácido indol butírico (AIB), estes isolados promoveram incrementos significativos na porcentagem de enraizamento e na massa seca do sistema radicular de miniestacas.

    Resumo em Inglês:

    A total of 107 rhizobacterial isolates, obtained from the rhizosphere of eucalypt clones were tested as rooting inducers of cuttings and mini-cuttings planted in substrate composed of carbonized rice husk and vermiculite (1:1). Cuttings and mini-cuttings were planted in conical plastic tubes containing treated and untreated (control) substrate and kept under intermittent mist irrigation at 26-28ºC. After 35 days, rooting percentage and dry root matter of cuttings were evaluated. Ten isolates capable of providing gains of up to 110% in root formation and up to 250% in root biomass over non-inoculated control cuttings were selected. Gains in rooting varied according to clone and isolate tested. The greatest gains were obtained for the mini-cuttings exhibiting the lowest rooting efficiency. Among the ten isolates tested, only 3918 (code R98) and MF4 (code R87), produced 3-indole-acetic acid in vitro, at concentrations of 0.7 and 0.67 µg ml-1, respectively. Significant increases in rooting and root dry matter of cuttings grown on rhizobacteria-inoculated substrate were found when compared to untreated or indole-butyric acid (IBA) treated mini-cuttings.
  • Mesorhizobium loti MP6 rizosférico competente induz encurvamento do pelo daraiz, inibe Sclerotinia sclerotiorum e estimula o crescimento de mostarda indiana (Brassica campestris) Environmental Microbiology

    Chandra, Shikha; Choure, Kamlesh; Dubey, Ramesh C.; Maheshwari, Dinesh K.

    Resumo em Português:

    A cepa bacteriana Mesorhizobium loti MP6 isolada de nódulos de raiz de Mimosa pudica induziu o crescimento e o rendimento de Brassica campestris. A cepa MP6 secretou sideróforo do tipo hidroxamato em meio sólido Chrom-Azurol Siderophore (CAS). Em condições normais de crescimento, a cepa foi também capaz de produzir de ácido cianídrico (HCN) e acido indolacético (AIA) e solubilizar fosfato. O encurvamento do pelo da raiz foi observado usando a simples técnica de lâmina e lamínula. Estudos in vitro mostraram um aumento significativo na população de M. loti MP6 na rizosfera devido aos exsudatos de B. campestris. Empregando-se técnica de co-cultura, a cepa mostrou um grande efeito antagônico contra o fungo Sclerotinia sclerotiorum, o patógeno da podridão branca de Brassica campestris. Após incubação prolongada, o crescimento de S. sclerotiorum foi inibido em 75%. Uma eficiente colonização de sementes de mostarda foi confirmada pelo emprego da linhagem M. loti MP6strep+ que contém um marcador de resistência à estreptomicina. As sementes cobertas com M. loti MP6 apresentaram aumento da sua germinação,crescimento vegetativo rápido e melhor rendimento quando comparadas ao controle. Além disso, foi observado um drástico declínio na incidência da podridão branca decorrente da aplicação de M. loti MP6.

    Resumo em Inglês:

    The bacterial strain Mesorhizobium loti MP6, isolated from root nodules of Mimosa pudica induced growth and yield of Brassica campestris. The isolate MP6 secreted hydroxamate type siderophore in Chrom-Azurol Siderophore (CAS) agar medium. Production of hydrocyanic acid (HCN), indole acetic acid (IAA) and phosphate solubilizing ability was also recorded under normal growth conditions. Root hair curling was observed through simple glass-slide technique. In vitro study showed a significant increase in population of M. loti MP6 in rhizosphere due to root exudates of B. campestris. In dual culture technique the strain showed a strong antagonistic effect against Sclerotinia sclerotiorum, a white rot pathogen of Brassica campestris. The growth of S. sclerotiorum was inhibited by 75% after prolonged incubation. Efficient root colonization of mustard seedlings was confirmed by using a streptomycin-resistant marker M. loti MP6strep+. The M. loti MP6 coated seeds proved enhanced seed germination, early vegetative growth and grain yield as compared to control. Also, a drastic decline (99%) in the incidence of white rot was observed due to application of M. loti MP6.
  • Multiresistência a antimicrobianos de cepas de Staphylococcus aureus isoladas de uma feira de pescado e de seus manipuladores Environmental Microbiology

    Albuquerque, W.F.; Macrae, A.; Sousa, O.V.; Vieira, G.H.F.; Vieira, R.H.S.F.

    Resumo em Português:

    O objetivo da pesquisa foi investigar a presença de Staphylococcus aureus resistente a antibióticos nos boxes de venda de peixe e nas mãos e cavidades nasal e oral de manipuladores de pescado da Feira de Pescado do Mucuripe, Fortaleza, Ceará. Todas as cepas isoladas foram resistentes à ampicilina e 44% apresentaram multiresistência.

    Resumo em Inglês:

    The aim of this study was to investigate the presence of antibiotic resistant Staphylococcus aureus strains in fish stalls and in hands and nasal and oral cavities of fish handlers of the Mucuripe Fish Market, Fortaleza, Ceará, Brazil. All S. aureus isolates were resistant to Ampicillin and 44 % were multi-drug resistant.
  • Dinâmica populacional e atividade de enzimas extracelulares de bactérias mesofílicas e termofílicas isoladas do solo do semi-árido nordestino Environmental Microbiology

    Gorlach-Lira, Krystyna; Coutinho, Henrique D.M.

    Resumo em Português:

    A dinâmica das populações bacterianas meso e termofílicas foi estudada no solo sem raízes e rizosférico associado à gramínea Aristida adscensionis L. na caatinga da zona semi árida do nordeste brasileiro. As bactérias totais heterotróficas, as bactérias esporuladoras e actinomicetos mesofílicos foram significativamente mais abundantes que os termofílicos, suas contagens variando na ordem de 10(6) - 10(7) UFC g-1 de solo seco, apresentando flutuações discretas ao longo de um período de um ano. Microrganismos termófilos foram encontrados numa ordem de 10(6) UFC g-1 de solo seco e demonstraram, em geral, flutuações mais evidentes durante o mesmo período de estudo. Entre os termófilos, os actinomicetos apresentaram um maior declínio durante a estação seca. Nenhuma diferença significativa no número de microrganismos foi observada entre o solo rizosférico e o solo não rizosférico. As bactérias mesofílicas mais observadas foram as filamentosas Gram positivas (actinomicetos) e os bastonetes esporulantes Gram positivos. Todos os isolados termofílicos foram bactérias esporuladoras Gram positivas em forma de bacilo. A maioria dos isolados mesofílicos produziu amilases e proteases, enquanto que 38% das linhagens produziram todas as enzimas extracelulares estudadas: amilases, proteases, celulases e quitinases. Entre as bactérias termofílicas, todos os isolados apresentaram atividade proteolítica e 77% produziram amilases, mas nenhum produziu quitinases ou celulases.

    Resumo em Inglês:

    The dynamics of mesophilic and thermophilic bacterial population was studied in the bulk soil and rhizosphere of the grass Aristida adscensionis L. in a caatinga of the semi-arid Brazilian Northeast. Mesophilic heterotrophic bacteria, sporeforming bacteria and actinomycetes were significantly more abundant than thermophiles, and their counts were 10(6) - 10(7) CFU g-1 dry soil, showing weak fluctuations over the one-year study period. Thermophiles were below 10(6) CFU g-1 dry soil and, in general, demonstrated stronger fluctuations over the studied period. Among them, thermophilic actinomycetes showed the greatest decline during the dry season. No significant differences in microbial number were observed between bulk and rhizosphere soil. Mesophilic bacteria were represented mainly by Gram positive, filamentous organisms (actinomycetes) and by Gram positive, endospore-forming, rod-shaped organisms. All isolates of thermophilic bacteria were Gram positive, endospore-forming rods. Most of mesophilic isolates produced amylases and proteases, and 38% of isolates produced all studied extracellular enzymes: amylases, proteases, cellulases and chitinases. Among thermophilic bacteria, all isolates showed proteolytic activity and 77% produced amylases, but no one produced cellulases or chitinases.
  • Cercospora apii causing leaf spots on two Brazilian toxic weeds: solanum glaucophyllum and Xanthium strumarium Environmental Microbiology

    Rocha, Fabiano Branco; Pereira, Olinto Liparini; Barreto, Robert Weingart

    Resumo em Português:

    Foram encontrados plantas das espécies Solanum glaucophyllum e Xanthium strumaruium apresentando sintomas de manchas foliares. Cercospora apii foi encontrado associado lesões foliares em ambas as plantas. Estes são os primeiros relatos desse fungo nestes hospedeiros no Brasil e o primeiro relato de sua ocorrência em S. glaucophyllum no mundo.

    Resumo em Inglês:

    Samples of two toxic weeds, Solanum glaucophyllum and Xanthium strumarium, bearing leaf spots symptoms were found. Cercospora apii was found associated to these leaf spots in both plants. These are the first reports of this fungus on these hosts in Brazil and its first report on S. glaucophyllum worldwide.
  • Avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos brutos e dos constituintes de Chresta scapigera General Microbiology

    Schinor, Elisandra C.; Salvador, Marcos J.; Ito, Izabel Y.; Dias, Diones A.

    Resumo em Português:

    Os extratos brutos e oito constituintes isolados de Chresta scapigera foram avaliados para as atividades antibacteriana e antifúngica, utilizando o método de difusão em ágar. Vinte cepas indicadoras, incluindo bactérias (Gram-positivas e Gram-negativas) e leveduras, foram utilizadas no bioensaio. Os melhores resultados foram obtidos para os extratos hexânicos, enquanto os extratos etanólicos não inibiram o crescimento microbiano. Acetato de b-amirina, tilirosídeo e luteolina foram os mais eficazes dentre os constituintes avaliados.

    Resumo em Inglês:

    Crude extracts and eight isolated compounds from Chresta scapigera were evaluated for antibacterial and antifungal activities by the agar-well diffusion method. Twenty strains, including Gram-positive and Gram-negative bacteria and yeasts were used in the bioassay. Hexane extracts presented the best results while ethanol extracts did not indicate inhibition of the microbial growth. Amongst the evaluated compounds b-amyrin acetate, tiliroside and luteolin showed the strongest antimicrobial effect.
  • Eficiência antimicrobiana do extrato bruto de Glomerella cingulata General Microbiology

    Hara Kishore, K.; Misra, Sunil; Ramesh Chandra, D.; Prakash, K.V.V. R.; Suryanarayana Murty, U.

    Resumo em Português:

    Fungos são conhecidos produtores de uma vasta coleção de metabólitos secundários que vem mostrando importância crescente na sua aplicação biotecnológica. Publicações anteriores sugerem que G. cingulata tem a capacidade de transformar vários componentes por diferentes ações enzimáticas. Logo, o foco deste estudo foi determinar a atividade antibacteriana e antifúngica do extrato bruto de G. cingulata obtido por acetato de etila utilizando-se um método envolvendo bloco de agar. O extrato bruto de G. cingulata demonstrou marcante atividade antifungica contra Rhizopus oryzae, Chrysoporium tropicum e Beauveria bassiana entretanto, não foi possível detectar, em nenhuma concentração, atividade antifungica contra Alternaria tenuissima e Aspergillus niger. O mesmo extrato não apresentou atividade antibacteriana, em nenhuma concentração, contra bactérias Gram negativa e positiva.

    Resumo em Inglês:

    Fungi are known to produce a vast array of secondary metabolites that are gaining importance for their biotechnological applications. Early reports suggest that G. cingulata has the capability to transform many compounds by various enzymatic actions. Therefore, the focus of this study was to determine the antibacterial and antifungal activity of crude ethyl acetate extract of G. cingulata using agar cup bioassay method. Crude extract of G. cingulata exhibited remarkable antifungal activity against Rhizopus oryzae, Chrysoporium tropicum and Beauveria bassiana but no antifungal activity was found against Alternaria tenuissima and Aspergillus niger at any concentrations. The crude extract presented no antibacterial activity against Gram positive and Gram negative bacteria at any concentration.
  • Partículas semelhantes à nanobactérias: uma ameaça às culturas de células General Microbiology

    Simonetti, Amauri Braga; Englert, Gelsa Edith; Campos, Karen; Mergener, Michelle; David, Cíntia de; Oliveira, Anna Paula de; Roehe, Paulo Michel

    Resumo em Português:

    O principal objetivo deste estudo é alertar aos pesquisadores que trabalham com cultivos celulares sobre o risco de contaminação por estruturas denominadas nanobactérias (NB). NB são estruturas muito pequenas cujo tamanho varia de 80 a 500 nm e que comumente ocorrem em agrupamentos, produzindo biofilme de carbonato ou hidroxiapatita. A fonte mais provável de contaminação dos cultivos celulares por tais organismos é o soro utilizado como suplemento nos meios de cultura. A presença de NB leva a uma progressiva deterioração do cultivo com acúmulo de grânulos (provavelmente NB fagocitadas) em vacúolos citoplasmáticos, um número cada vez maior de células mortas no sobrenadante e degeneração das células que permaneceram aderidas à superfície do frasco de cultura. NB podem ser encontradas também em sobrenadantes de cultivos onde são observadas em agrupamentos de tamanho variável com movimento browniano. Neste estudo, 19 linhagens celulares, 8 lotes de soro e 1 lote de suplemento de diferentes procedências foram analisados. Amostras de soros foram cultivadas em Meio Essencial Mínimo de Eagle (E-MEM) ou incubados diretamente a 37ºC. Testes efetuados para detectar a presença de bactérias extracelulares, Mycoplasma sp e vírus foram todos negativos. Análise por microscopia eletrônica de varredura (SEM) revelou minúsculas estruturas ovóides com tamanho inferior a 500 nm, isoladas ou em pequenos agrupamentos, em todos os materiais analisados exceto em um lote de soro fetal bovino.

    Resumo em Inglês:

    The main goal of this study is to alert researchers who work with cell cultures for the risk of contamination by structures called nanobacteria (NB). NB are tiny structures with size varying from 80 to 500 nm, commonly occurring in clusters and producing a biofilm which contains carbonate or hydroxyl apatite. The most likely source of cell culture contamination by such organisms is serum used as supplement in culture media. The presence of NB leads to a progressive culture deterioration with accumulation of granules (probably phagocytized NB) in cytoplasmic vacuoles, an increasing number of dead cells in the supernatant and degeneration of cells that remained attached to the bottom of the vessel. NB can also be found in culture supernatants where they are found in clusters with variable size and displaying brownian movement. In this study, 19 cell lineages, 8 batches of sera and 1 batch of growth supplement from different sources were analyzed. Samples from sera were cultured in Eagle's Minimum Essential Medium (E-MEM) or incubated directly at 37ºC. Tests carried out to detect the presence of extracellular bacteria, Mycoplasma sp and viruses were all negative. Analysis by scanning electron microscopy (SEM) revealed tiny oval structures less than 500 nm in size, isolated or in small groups, in all material analyzed except in one fetal bovine serum batch.
  • 16S-23S rDNA: polimorfismos e sua aplicação na detecção e identificação de linhagens de Xylella fastidiosa General Microbiology

    Martinati, Juliana Camargo; Pacheco, Flávia Tereza Hansen; Miranda, Vitor Fernandes Oliveira de; Tsai, Siu Mui

    Resumo em Português:

    Linhagens de Xylella fastidiosa de diferentes hospedeiros (café, uva, amêndoa, ameixa, etc.) foram caracterizados analisando as sequências de nucleotídeos do espaço intergênico 16S-23S (ITS). Os métodos atuais para o sequenciamento da região ITS produzem fragmentos parciais das sequências que não contribuem com informações significantes. Em vista disso, novos primers foram desenhados a fim de obter uma sequência completa e facilitar o sequenciamento. A sequencia completa da região ITS de 08 linhagens de X. Fastidiosa foram amplificadas via PCR, sequenciadas e comparadas com outras 52 sequencias depositadas no GenBank. Os resultados revelaram um alto nível de variação sendo maior que os níveis encontrados quando se utiliza o gene 16S para este tipo de análise, com valores variando entre 0.79 a 1.00. O dendograma baseado em dados de similaridade agrupou as linhagens de X. fastidiosa em 5 grupos principais. Duas sequencias codificadoras de tRNA's foram encontradas (tRNAala e tRNAile) e mostram-se conservadas entre as linhagens analisadas com pouca diferença entre a composição nucleotídica.

    Resumo em Inglês:

    Strains of Xylella fastidiosa from several hosts (coffee, citrus, grape, almond, oleander, peach, plum, etc.) were characterized by analyzing the content of the nucleotide sequences of 16S-23S rDNA (coding for a small subunit ribosomal RNA) spacer region (ITS). Current methods for sequencing the ITS region yields partial sequences that do not contribute with significant information. According to this fact, new primers have been designed in order to obtain a complete sequence and facilitate the sequencing. The complete 16S-23S sequences from 08 strains were amplified through PCR using the primers designed in our lab. The 16S-23S sequences obtained were compared with 52 others sequences entries in GenBank database. The results revealed a higher level of variation than that found in 16S gene sequences, with similarity values ranging from 0.79-1.00. The dendogram based on similarity data revealed 5 main groups. This spacer sequence contains two genes for tRNA (tRNAala and tRNAile). The sequence analysis of the tRNA content showed a conserved region with a few differences in the nucleotide composition.
  • Bacteriocina produzida por Lactobacillus pentosus ST712BZ isolad de boza Food Microbiology

    Todorov, Svetoslav D.; Dicks, Leon M.T.

    Resumo em Português:

    A bacteriocina ST712BZ produzida par Lactobacillus pentosus (peso molecular de 14,0kDa) inibe o crescimento de Lactobacillus casei,Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae e Lactobacillus curvatus. O crescimento de L. pentosus ST712BZ em BHI, M17, leite de soja e melaços foi semelhante ao observado em MRS, registando-se a produção máxima de bacteriocina (12800UA/mL) em MRS após 24 h. Observou-se o mesmo nível de produção de bacteriocina (12800UA/mL) em caldo MRS com pH inicial de 6,5, 6,0 e 5,5. No entanto, em caldo MRS (pH 6,5) suplementado com 1 mM de EDTA a produção apenas atingiu 6400UA/mL. Os níveis de atividade bacteriocinogênica detectados em caldo MRS com um pH inicial de 5,0 e 4,5 foram baixos. De todas as fórmulas de meios de cultura testadas a que apresentou a atividade máxima 12800UA/mL foi MRS suplemento de triptona (20,0g/L), glicose (20,0 e 40,0 g/L), manose (20.0 g/L), vitamina B12 e vitamina C. A produção de bacteriocinas foi inibida por concentrações de glicerol superiores ou iguais a 1.0 g/L. Verificou-se a actividade bacteriocinogênica máxima (25600UA/mL) em caldo MRS suplementado com vitamina B1 ou ácido DL-6,8-thioctic.

    Resumo em Inglês:

    Bacteriocin ST712BZ (14.0kDa in size) inhibits the growth of Lactobacillus casei,Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae and Lactobacillus curvatus. Growth of strain ST712BZ in BHI, M17, soy milk and molasses was similar to growth in MRS, with optimal bacteriocin production (12800AU/mL) recorded in MRS after 24h. The same level of bacteriocin production (12800AU/mL) was recorded in MRS broth with an initial pH of 6.5, 6.0 and 5.5. However, MRS broth (pH 6.5) supplemented with 1mM EDTA, yielded only 6400AU/mL. Low levels of bacteriocin activity were recorded in MRS broth with an initial pH of 5.0 and 4.5. Of all media compositions tested, MRS supplemented with tryptone (20.0g/L), glucose (20.0 to 40.0g/L), mannose (20.0g/L), vitamin B12, or vitamin C yielded 12800AU/mL. Glycerol concentrations of 1.0g/L and higher repressed bacteriocin production. Maximal bacteriocin activity (25600AU/mL) was recorded in MRS supplemented with Vit. B1 or DL-6,8-thioctic acid.
  • Enumeração seletiva e viabilidade de Bifidobacterium animalis subsp. lactis em um novo produto lácteo fermentado Food Microbiology

    Antunes, Adriane Elisabete Costa; Grael, Elza Terezinha; Moreno, Izildinha; Rodrigues, Luana Gajardoni; Dourado, Fernanda Martelo; Saccaro, Daniela Marques; Lerayer, Alda Luiza Santos

    Resumo em Português:

    Atualmente, um dos principais focos da indústria de laticínios em todo o mundo é o desenvolvimento de novos produtos, especialmente probióticos. Buttermilk é originalmente um sub-produto do processamento da manteiga fermentado por Culturas Aromáticas Mesofílicas (MAC). Pode também ser feito pela fermentação de leite integral ou desnatado. Este produto não é comercializado no Brasil. Os objetivos deste trabalho foram o desenvolvimento de meio de cultura seletivo para Bifidobacterium animalis subsp. lactis e a determinação da viabilidade deste microrganismo durante a vida de prateleira do buttermilk produzido. Leite desnatado foi adicionado de 10% da sacarose ou 0,03% de sucralose, pasteurizado e inoculado com 1% de MAC composto por Lactococcus lactis subsp. cremoris, Lactococcus lactis subsp. lactis, Lactococcus lactis subsp. lactis biovar. diacetylactis e Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris e por 2% de Bifidobacterium animalis subsp. lactis. Para obter contagens seletivas de Bif. animalis subsp. lactis, o meio MRS ágar suplementado com 0,5% L-cisteína HCl a 10%, 1% cloreto de lítio a 10%, 0,01% azul de anilina e 0,5% dicloxacilina a 0,1% foi modificado pelo aumento da concentração de antibiótico, adição de NaCl, ajuste de pH para 4,8 ou aumento da temperatura de incubação (de 37 para 45ºC). A temperatura de incubação de 45ºC foi eficiente para inibir as culturas MAC mesmo sem adição de antibiótico ao meio. Bif. animalis subsp. lactis apresentou alta viabilidade no produto. O buttermilk preparado com sacarose e edulcorante, apresentou mais de 10(8) ufc.ml-1 de Bif. animalis subsp. lactis durante a vida-de-prateleira (28 dias).

    Resumo em Inglês:

    One of the key focuses of today's dairy industry worldwide is the continued development of new products, especially probiotic-based products. Buttermilk is originally a by-product of butter making fermented by Mesophilic Aromatic Cultures (MAC). It can also be made by fermentation of pasteurized whole milk or skimmed milk. This product is not marketed in Brazil. The objectives of this work were: (1) to develop a selective medium for Bifidobacterium animalis subsp. lactis enumeration and (2) to determine the viability of this microorganism during the shelf life of the buttermilk. Skim milk added with 10% sucrose or 0.03% sucralose was pasteurized and inoculated with a composite starter culture consisting of 1% MAC (containing Lactococcus lactis subsp. cremoris, Lactococcus lactis subsp. lactis, Lactococcus lactis subsp. lactis biovar. diacetylactis and Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris) and 2% Bifidobacterium animalis subsp. lactis. To attain selective counts of Bif. animalis subsp. lactis the MRS agar supplemented with 0.5% L-cysteine hydrochloride at 10%, 1% lithium chloride at 10%, 0.01% aniline blue and 0.5% dicloxacillin at 0.1% was modified by increasing the antibiotic concentration, addition of NaCl, adjusting pH to 4.8 or increasing the incubation temperature (from 37 to 45ºC). Raising the incubation temperature to 45ºC was found to be efficient in inhibiting the MAC cultures, even in media not added with dicloxacillin. Bif. animalis subsp. lactis exhibited high viability in the product. The buttermilk product prepared with sucrose and sweetener contained in excess of 10(8) cfu.ml-1 bifidobacteria throughout the shelf life of the product (28 days).
  • Diversidade sorológica e genética de cepas de Salmonella sp. isoladas em uma linha de produção industrial de salame Food Microbiology

    Ribeiro, Vinicius B.; Andrigheto, Cristiano; Bersot, Luciano S.; Barcellos, Vinicius; Reis, Eliana F.; Destro, Maria T.

    Resumo em Português:

    Salmonella é um dos principais agentes de enfermidades transmitidas por alimentos (ETA) no Brasil e em outros países, sendo os derivados cárneos frequentemente associados como veículos de surtos de salmonelose. Um total de 54 cepas de Salmonella sp., isoladas a partir de amostras de salame coletadas nas diferentes etapas de uma linha de produção industrial, foram sorotipadas e posteriormente caracterizadas quanto a sua sensibilidade a antimicrobianos e perfil PFGE. Entre as cepas avaliadas, 11,1% apresentaram resistência a três ou mais dos antimicrobianos, sendo o perfil AmpCStxTe mais freqüente. Foram obtidos 9 e 12 perfis PFGE, empregando-se as enzimas XbaI e SpeI, respectivamente. Os perfis de ambas as enzimas foram agrupados, obtendo-se 12 perfis PFGE combinados que puderam ser separados em dois grupos empregando-se a análise de UPGMA. A linha de produção industrial de salame avaliada apresentou etapas em que há contaminação por diferentes sorotipos de Salmonella sp. Os perfis genéticos encontrados indicam origens distintas para muitas cepas estudadas, uma vez que estes foram pouco relacionados entre si.

    Resumo em Inglês:

    Salmonella is one of the most important agents of foodborne disease in Brazil and in other countries, with meat and meat products being identified as important vehicles of salmonelosis. A total of 54 Salmonella strains isolated from a commercial salami processing line were first serotyped and then their antibiotic resistance and macro restriction profiles were determined. 11.1% of the strains showed resistance to 3 or more antibiotics with profile AmpCStxTe being the most frequent. PFGE generated 9 and 12 profiles with enzymes XbaI and SpeI, respectively. It was observed that different serotypes of Salmonella could be found in the different steps of the processing line. The genetic profile of the strains had low relationship indicating the genetic diversity of the tested strains.
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