O direcionamento de proteínas a organelas e à membrana celular, ou de proteínas a serem secretadas, é coordenado por seqüências sinalizadoras localizadas na extremidade 5´ de seus respectivos genes que codificam peptídeos-sinal. Este trabalho analisa um sistema para seleção de seqüências sinalizadoras utilizando uma fosfatase ácida de levedura, enzima reconhecidamente secretada por estes organismos, desprovida de seu códon de iniciação e de sua seqüência sinalizadora, como gene repórter. Uma fração enriquecida em fragmentos provenientes da região 5´ de uma biblioteca de cDNA de células-guarda de batata foi inserida in frame ao gene truncado da fosfatase ácida em vetores apropriados. Após a transformação em leveduras, a atividade da fosfatase ácida foi medida diretamente sobre colônias crescidas em meio seletivo. A seqüência nucleotídica dos prováveis peptídeos-sinal capazes de direcionar aquela enzima ao exterior celular foram utilizadas como sondas para recuperação da seqüência original da biblioteca de cDNA. Dois clones sem homologia conhecida, mas apresentando forte expressão tecido-específica, foram obtidos, um deles (YE139) com expressão acentuada em botões florais verdes e células do tronco, e o outro (YE290) de expressão elevada em androceu, gineceu e raízes. Os diversos problemas encontrados durante a execução do trabalho são discutidos face aos resultados obtidos com outras proteínas-modelo.
seqüências sinalizadoras; canal de potássio; fosfatase ácida de levedura; triagem de biblioteca de cDNA
