EFICÁCIA DA CURCUMA LONGA NO TRATAMENTO DA COLITE DE DESUSO EM RATOS

RESUMO

Racional:

A colite de exclusão é ainda muito frequente em nosso meio, uma vez que a confecção de estomas é prática comum especialmente em situações de trauma. Em consequência, há necessidade de tratamento para a colite de desuso.

Objetivo:

Avaliar o efeito terapêutico da infusão retal de Curcuma longa (açafrão-da-terra) no segmento intestinal excluso de ratos.

Método:

Utilizou-se 18 ratos Wistar submetidos à colostomiae distribuídos em dois grupos: grupo controle, recebendo infusão intrarretal de solução salina (n=8) e grupo CL, recebendo infusão intrarretal de extrato de Curcuma longa (n=10). Após 21 dias de tratamento foram submetidos a eutanásia; o segmento intestinal excluso de trânsito intestinal foi ressecado e submetido a estudo histopatológico classificando-se os graus de inflamação e de congestão vascular.

Resultados:

Verificou-se média de inflamação 2,7 no grupo controle vs. 2,6 no grupo CL (p=0,3125), enquanto as médias de congestão vascular foram 2,3 e 2,1, respectivamente, nos grupos controle e CL (p=0,1642).

Conclusão:

A infusão intrarretal do extrato de Curcuma longa não foi capaz de minimizar o processo inflamatório ou a congestão vascular na colite de exclusão de ratos submetidos a colostomia.

DESCRITORES:
Curcuma, zingibereceae; Colite; Anti-inflamatórios; Ratos; Colostomia

ABSTRACT

Background:

Diversion colitis is still very common in our country, since the stoma creation is a common practice especially in situations of trauma. needing treatment for this condition.

Aim:

To evaluate the therapeutic effect of rectal infusion of Curcuma longa (turmeric) in the excluded intestinal segment of rats.

Method:

Eighteen Wistar rats were used and submitted to colostomy: control group (n=8) under rectal saline infusion and group CL, receiving intra-rectal infusion of Curcuma longa extract (n=10). After 21 days of treatment they were submitted to euthanasia; the intestinal segment excluded from intestinal transit was resected and sent to histopathological evaluation, classifying the degree of inflammation and of vascular congestion.

Results:

The average of inflammation was 2.7 in the control group vs. 2.6 in the CL group (p=0.3125), while the mean vascular congestion was 2.3 and 2.1, respectively, in the control and CL groups (p=0.1642).

Conclusion:

Intra-rectal infusion of Curcuma longa extract was not able to minimize the inflammatory process or vascular congestion in the diversion colitis of rats subjected to colostomy.

DESCRITORES:
Curcuma, zingibereceae; Colite; Anti-inflamatórios; Ratos; Colostomia

INTRODUÇÃO

Ainda é comum a realização de estomas intestinais em todo o mundo, especialmente em procedimentos de emergência, como traumas, obstruções intestinais, perfurações e doenças inflamatórias. Esses desvios de trânsito são feitos principalmente em caráter temporário; no entanto, podem se tornar definitivos devido às condições clínicas dos pacientes. Quando temporários, uma média de três meses é estimada para a reconstrução intestinal; no entanto, este período pode ser prolongado por anos devido a múltiplos fatores^4,17.

O procedimento de Hartmann, quando o colo sigmoide é exteriorizado e o reto excluído do trânsito intestinal, corresponde à metade dos desvios de trânsito intestinal, tornando este tipo de estoma também aquele que apresenta maior número de complicações, principalmente em longo prazo. Assim, nos casos em que o desvio permanece por mais de seis meses, aumenta o número de complicações, dentre elas, a colite de exclusão^11,13.

A colite de exclusão pode causar dor retal, além de secreção mucopurulenta, causando desconforto aos pacientes e pode causar dificuldades na anastomose no momento da reconstrução intestinal, quando isso for possível. A melhor terapia para essa situação é a infusão de enemas de ácidos graxos de cadeia curta, uma vez que haveria nutrição direta das células intestinais através do lúmen¹. No entanto, o maior obstáculo a essa terapia é o custo, que é bastante alto e inviável quando o tratamento deve ser prolongado por longos períodos^2,5.

Assim, o número de pesquisas que buscam uma opção terapêutica tão eficaz quanto os ácidos graxos de cadeia curta e que apresentam um custo menor sem efeitos adversos é crescente, o que, teoricamente, seria alcançado com fitoterápicos, pois muitos demonstraram efeito anti-inflamatório em outras situações^14,18.

A cúrcuma na medicina tem sido utilizada pelo seu efeito anti-inflamatório e cicatrizante. Sua bioatividade deve-se aos curcuminóides, especialmente a curcumina, que têm vários efeitos comprovados cientificamente, como a redução da inflamação em casos de artrite, prevenção de arteriosclerose, desordens respiratórias e gastrointestinais, efeitos hepatoprotetores, afecções da pele como psoríase e eczema, prevenção de câncer e capacidade antioxidante. A capacidade anti-inflamatória, em parte, é devida à inibição da síntese de prostaglandinas inflamatórias⁹.

Foi evidenciado que a aplicação de enemas contendo extrato oleoso de Curcuma longa, foi efetiva em prevenir alguns sinais inflamatórios como perda epitelial e, também, a preservação da regularidade do epitélio do lúmen colônico⁸.

Assim, havendo evidências do efeito anti-inflamatório da Curcuma longa e devido à necessidade de se encontrar medicação de grande disponibilidade e baixo custo que tenha eficácia na colite de desuso justifica-se a presente pesquisa, que tem por objetivo avaliar o efeito anti-inflamatório da Curcuma longa no segmento intestinal excluso de ratos submetidos a colostomia terminal.

MÉTODO

Todos os procedimentos foram realizados de acordo com as normas do Colégio Brasileiro de Experimentação Animal (COBEA) e o estudo foi aprovado pela Comissão de Ética em Uso de Animais da Universidade Anhanguera-Uniderp.

Animais

Utilizou-se 18 ratos Wistar machos com peso variando entre 250-300 g, que foram obtidos do Biotério da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul. Os animais foram distribuídos em dois grupos: 1) grupo controle, n=8, submetido à infusão de solução salina durante 21 dias; 2) grupo Curcuma longa, n=10, submetido à colostomia e, após sete dias, à infusão intrarretal de enemas de Curcuma longa durante 21 dias.

Procedimento cirúrgico

Os animais foram mantidos em jejum nas 12 h que antecederam o procedimento e então anestesiados por injeção intraperitoneal de solução 2:1 de cloridrato de cetamina 50 mg/kg e cloridrato de xilasina 20 mg/ml, respectivamente, na dose de 0,1 ml da solução para cada 100 g de peso.

Após confirmada a anestesia, os animais foram fixados à mesa operatória com os quatro membros em abdução, realizada tricotomia abdominal, antissepsia com clorexidine 2%, colocação de campos estéreis e laparotomia mediana de aproximadamente 4 cm. Uma sonda 6F previamente introduzida no reto demarcou o ponto exato de secção para que fosse realizada de modo semelhante em todos os animais. Realizou-se a secção 6 cm proximalmente ao ânus com bisturi de lâmina fria, seguida de fechamento do coto distal com sutura contínua seromuscular com fio poligalactina 910 5-0. O coto proximal foi exteriorizado pela parede abdominal à esquerda e fixado à pele por quatro pontos com fio poligalactina 910 5-0. A parede abdominal foi fechada por sutura contínua com poligalactina 910 5-0 e a pele com pontos separados com mononylon 4-0.

Preparação do extrato de Curcuma longa

As folhas foram coletadas em suas áreas de vegetação nativa de Campo Grande no Mato Grosso do Sul, Brasil. Após secagem, trituração e tamização foram, separadamente, submetidas à extração com etanol, que ocorreu em banho de ultrassom (UNIDQUE,1450) durante 60 min e submetido em sequência à extração por maceração até o esgotamento da droga. Os solventes foram evaporados (rota evaporador rotativo a 45º C) e o extrato bruto aquoso ficou em dessecador sob pressão reduzida por 6 h, que foi incorporado à solução de cloreto de sódio 0,9%. A concentração estabelecida foi de 200 mg/ml. Para manipulação do medicamento foram seguidas as normas de boas práticas de manipulações de fórmulas, com assepsia completa da bancada e vidrarias com álcool 70%. Para isto, portanto, foi necessário a utilização de toda a paramentação para realizar o procedimento evitando possíveis contaminações ao produto.

Tratamento

Após sete dias da confecção do estoma iniciou-se a infusão dos enemas retais, com frequência diária, sempre no mesmo horário, durante 21 dias, com seringa conectada a sonda uretral 6F, de acordo com o grupo, ou seja, grupo controle submetido à injeção intrarretal de solução salina e grupo Curcuma longa à injeção intrarretal de extrato de Curcuma longa.

Eutanásia e retirada dos espécimes

A eutanásia foi realizada após 21 dias de tratamento em todos os animais por meio de injeção intraperitoneal de dose dobrada dos anestésicos já descritos. Em seguida realizou-se nova laparotomia mediana e ressecção de 2 cm do reto proximal, seguido de abertura do espécime, lavagem em solução salina e colocação em frascos separados e identificados contendo formaldeído a 10% para posterior análise histológica.

Estudo histopatológico

Os espécimes foram processados, embebidos em parafina e seccionados em micrótomo a cada 5μm; as lâminas foram coradas com H&E e avaliadas por pesquisador experiente sem que ele tivesse conhecimento do grupo. Todas as lâminas foram analisadas avaliando-se o grau do processo inflamatório e a congestão vascular de acordo com escore variando de 0 a 3. O inflamatório foi feito com base dos focos por campo (Figura 1) sendo que eles eram caracterizados pela presença de macrófagos, células dendríticas, linfócitos B e T observados nos folículos linfoides exibindo mucosa atrofiada.).: 0=ausência; 1=leve - um foco; 2=moderado - dois focos; 3=intensa - três focos. Cada foco inflamatório era caracterizado por presença de infiltrado de células mononucleares incluindo macrófagos, linfócitos e células plasmáticas, resultando em recrutamento contínuo da circulação sanguínea e proliferação local.

FIGURA 1
Classificação do infiltrado inflamatório por foco inflamatório por campo: A) epitélio normal, ausência de inflamação; B) um foco; C) dois focos; D) mais de dois focos (H&E 200x)

Classificação da congestão vascular (Figura 2): 0=ausente; 1=leve; 2=moderada; 3=intensa, onde cada grau era avaliado como sendo a representação da estase, Os critérios para determinação da intensidade da congestão vascular foram a dilatação pronunciada e o ingurgitamento das arteríolas e dos capilares, com leucócitos em posição periférica no fluxo laminar.

FIGURA 2
Classificação da congestão vascular: A) ausência de congestão vascular; B) congestão vascular leve (setas); C) congestão vascular moderada; D) congestão vascular intensa (H&E, 200x)

Análise estatística

As médias dos graus de inflamação e congestão vascular foram submetidos a tratamento estatístico pelo programa BioEstat 5.3, com análise de variância (ANOVA), testes Kruskal-Wallis e Mann-Whitney seguidos pelo teste de Tukey com nível de significância de p<0,05.

RESULTADOS

Na avaliação do processo inflamatório observou-se média 2,7 no grupo controle, enquanto que no grupo extrato de Curcuma longa a média foi 2,6 (p=0,3125, Tabela 1).

TABELA 1
Avaliação do processo Inflamatório no segmento intestinal excluso

Ratos	Grupos
	Controle	Curcuma longa
1	3	0
2	3	3
3	2	2
4	3	3
5	3	3
6	3	3
7	3	3
8	2	3
9	-	3
10	-	3
Média	2,7	2,6

Em relação à avaliação do grau de congestão vascular não houve diferença entre os grupos, uma vez que no grupo controle a média observada foi 2,3 enquanto que no da Curcuma longa foi 2,1 (p=0,1642, Tabela 2).

TABELA 2
Avaliação do grau de congestão vascular no segmento intestinal excluso

Ratos	Grupos
	Controle	Curcuma longa
1	0	1
2	1	2
3	3	2
4	3	2
5	3	2
6	2	2
7	3	2
8	3	3
9	-	3
10	-	2
Média	2,3	2,1

DISCUSSÃO

No presente estudo, observou-se que a exclusão do trânsito fecal no segmento colônico em ratos durante 21 dias promoveu de fato um processo inflamatório, considerando a média de 2,7 graus observada, em uma escala que varia de 0 a 3, caracterizada por inflamação moderada a grave. O mesmo já foi observado por outros autores, e este é o ponto de partida para a avaliação da eficácia terapêutica da Curcuma longa^1,2,3,4,5. O método de avaliação histológica também foi o mesmo, o que facilita a comparação, pois ela é bem caracterizada pela infiltração com células mononucleares, que incluem macrófagos, linfócitos e plasmócitos; destruição tecidual por células inflamatórias e tentativas de cicatrização pela substituição de tecido lesado por tecido conjuntivo por pequena proliferação de vasos (angiogênese) e fibrose^{7,8,13,14,15,16}.

Kadri et al.⁸ observaram eficácia do extrato de Curcuma longa em modelo experimental de colite de exclusão em ratos, de modo oposto ao aqui observado. Esta discrepância nos resultados pode dever-se ao veículo utilizado, já que na presente pesquisa utilizou-se extrato aquoso, enquanto os autores referidos utilizaram extrato oleoso, o que em tese poderia oferecer maior aderência do produto à mucosa retal. Pareceu-nos conflitante, entretanto, que aqueles autores não tenham observado diferença entre 50 mg/kg/dia e 200 mg/kg/dia, ou seja, mesmo com uma concentração quatro vezes menor do que a aqui utilizada também obtiveram redução do processo inflamatório no segmento excluso. Kadri et al.⁸ também se utilizaram da análise histológica como aqui aplicado, mas analisaram também a concentração tecidual de mieloperoxidase. Uma outra importante diferença observada no método foi que na presente pesquisa optou-se por aguardar sete dias para dar início ao tratamento, uma vez que na prática clínica, a colite de exclusão só é tratada uma vez que esteja instalada. Já Kadri et al.⁸ optaram por iniciar a terapêutica imediatamente após a confecção do estoma, o que permitiria um menor grau de inflamação em comparação com nossa pesquisa.

Fernandez et at.⁴ avaliaram o sucralfato no tratamento da colite de exclusão em ratos e também iniciaram a terapêutica imediatamente após a confecção do estoma, o que dá respaldo ao método de Kadri et al.⁸, mas que a nosso ver não seria o ideal, porque não se sabe a real eficácia do fármaco frente a um processo inflamatório mais intenso e já instalado. Entendemos que a pesquisa experimental deve simular situações clínicas para que haja aplicabilidade.

Apesar de muito estudada como agente anti-inflamatório, especificamente na colite de exclusão há apenas a publicação de Kadri et al.⁸ utilizando Curcuma longa. Assim, cabe-nos comparar os resultados aqui obtidos com outras situações de inflamação intestinal. Cunha Neto et al.³ observaram em artigo de revisão sobre os efeitos da Curcuma longa no processo inflamatório intestinal em doenças como retocolite ulcerativa e doença de Crohn; esta planta poderia agir como coadjuvante, já que comprovadamente reduz o estresse oxidativo e inibe a migração de leucócitos. Pode também prevenir apoptose das células intestinais e induzir a recuperação mucosa. Embora tais efeitos descritos sejam os mesmos desejados na colite de exclusão para comprovar a redução do processo inflamatório, há que se considerar que a revisão analisou artigos com métodos muito diversos e, nenhum deles, em colite de exclusão experimental.

Simadibrata et al.¹⁶ revisaram também o efeito da Curcuma longa em manter a retocolite ulcerativa em remissão. Encontraram 49 publicações sobre o tema, todos em pacientes com a doença tratada por agentes tradicionais e, embora o resultado promissor, os próprios autores ressaltam a importância de pesquisas desenhadas especificamente para a análise pura da Curcuma longa e de maior número de pacientes, já que as publicações estudadas tinham todas número reduzido de pacientes. Esta publicação mostra de forma clara o interesse crescente do uso de fitoterápicos, incluindo-se a Curcuma longa no tratamento de colite.

A congestão vascular é um achado comum no processo inflamatório intestinal independente da origem. É também um dos mais precoces, ocorrendo mesmo na inflamação leve^1,6,10,12. Sendo assim, o fato de não haver diferença estatisticamente significante entre os grupos estudados quanto à congestão vascular era de fato esperado, uma vez que também não se observou diferença em relação à inflamação.

Os resultados aqui obtidos, embora divergentes da maior parte das publicações relacionadas a Curcuma longa na prevenção ou redução do processo inflamatório intestinal, não devem ser entendidos como uma avaliação negativa deste fitoterápico, uma vez que o método aqui empregado é diferente das publicações utilizadas para comparação. Demonstram apenas que quando a inflamação já está instalada após uma semana de confecção do estoma, portanto, com processo inflamatório moderado a intenso, o extrato de Curcuma longa não foi eficaz em diminuir a intensidade da inflamação com o tratamento realizado por três semanas. Caberia a realização do tratamento a partir do momento da confecção do estoma para se obter uma comparação direta, ou, o que seria ideal a nosso ver, prolongar-se o tratamento por mais uma a duas semanas, o que deve ser objeto de novas pesquisas.

CONCLUSÃO

O extrato de Curcuma longa não foi capaz de minimizar o processo inflamatório do segmento intestinal excluso de ratos submetidos à colostomia terminal.

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• Fonte de financiamento: não há

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  09 Dez 2019
• Data do Fascículo
  2019

Histórico

• Recebido
  20 Fev 2019
• Aceito
  03 Jun 2019