Taxa de filtração glomerular pelo EDTA marcado com 51cromo e com 113míndio em equinos

Glomerular fltration rate by 51chomium and 113m indium labeled EDTA in horses

MEDICINA VETERINÁRIA

Taxa de filtração glomerular pelo EDTA marcado com ⁵¹cromo e com ^113míndio em equinos

Glomerular fltration rate by ⁵¹chomium and ^113mindium labeled EDTA in horses

C. Maliska^I; W.R. Pinho^II; J.E.T. Lima^III; J. D´Almeida^I, P.M. Pellegrini^I; T.S. Schimit^I

^IServiço de Medicina Nuclear - Hospital Central do Exército. Rua Francisco Manuel, 126. 20911-270 - Rio de Janeiro, RJ

^IIFaculdade de Medicina Veterinária - Centro de Ensino Superior - Valença, RJ

^IIIServiço de Medicina Nuclear - Instituto Nacional do Câncer - Rio de Janeiro, RJ

RESUMO

Determinou-se a taxa de filtração glomerular por meio do EDTA, marcado com ⁵¹Cr e com ^113mIn, pela técnica de injeção única, em nove equinos, seis machos e três fêmeas com idades de dois a 12 anos. A taxa de filtração glomerular foi calculada a partir da curva de desaparecimento no plasma e do volume de distribuição do radiotraçador, ⁵¹Cr-EDTA ou ^113mIn-EDTA. O resultado (média±desvio-padrão) foi de 148,80±26,42mL.min^-1.100kg. Conclui-se que a medida da taxa de filtração glomerular pelo ⁵¹Cr-EDTA ou ^113mIn-EDTA, pela técnica de injeção única, elimina o cateterismo vesical e, por sua simplicidade, comodidade, precisão e baixa dose de radiação, pode ser empregada em cavalos como método de escolha em rotina clínica.

Palavras-chave: cavalo, taxa de filtração glomerular, ⁵¹Cr, ^113mIn, EDTA

ABSTRACT

The glomerular filtration rate was determined in nine healthy horses, six male and three female, aged two to 12-year-old, by means of ⁵¹Cr and ^113mIn labeled EDTA single injection technique. The glomerular filtration rate was calculated from the plasma disappearance curve and the volume of distribution of the radiotracer, ⁵¹Cr-EDTA or ^113mIn-EDTA. The result (mean±standard deviation) was 148.80±26.42mL.min^-1.100kg. It is concluded that the measurement of glomerular filtration rate by ⁵¹Cr-EDTA or ^113mIn-EDTA by single injection technique eliminates the bladder catheterization, and for its simplicity, convenience, accuracy, and low dose of radiation, can be used in horses as a method of choice in clinical routine.

Keywords: horse, glomerular filtration rate, ⁵¹Cr, ^113mIn, EDTA

INTRODUÇÃO

A identificação precoce das disfunções dos rins é de grande importância no diagnóstico e no tratamento das doenças renais. Segundo Kunze et al. (2006) e Nicolle et al. (2007), a azotemia não está presente enquanto o animal não tiver perdido aproximadamente 75% de sua função renal global e a creatinina sérica depende da massa muscular, que normalmente não se eleva, fora dos limites normais, antes que a filtração glomerular esteja reduzida, no mínimo, em 50% (Brochner-Mortensen e Rodbro, 1976). Shemesh et al. (1985) verificaram secreção de creatinina pelos túbulos, que aumenta progressivamente com o agravamento da doença renal, levando a um aumento dos valores da taxa de filtração glomerular de forma imprevisível. Estes fatos enfatizam a necessidade de ser utilizada uma medida mais efetiva da função renal para que o procedimento clínico seja baseado em informações seguras (Woolfson e Neild, 1997).

Segundo Krawiec et al. (1988), o método por excelência para a avaliação da função renal é a medida da taxa de filtração glomerular; sendo o indicador mais precoce de disfunções renais (Fein et al., 2006).

Shannon e Smith (1935) propuseram como substância ideal, para a medida da taxa de filtração glomerular, a inulina, um polissacarídeo de peso molecular de aproximadamente 5.000D. A inulina cumpre as especificações necessárias para uma substância traçadora da filtração glomerular, ou seja: 1 - ser filtrada pelos glomérulos; 2 - não ser nem sintetizada e nem destruída pelos túbulos; 3 - ser fisiologicamente inerte; e 4 - não ser nem reabsorvida e nem secretada pelos túbulos (Cohen, 1975). A depuração (clearance) da inulina passou a ser considerada o método padrão da medida da taxa de filtração glomerular tanto para animais como para o homem (Knutsen, 1959; Shuster e Seldin, 1985; Woolfson e Neild, 1997).

Knutsen (1959) determinou a taxa de filtração glomerular no cavalo pela técnica de depuração da inulina, 1,66 (1,00-2,32)mL.min^-1.kg. Mesmo considerado o método mais preciso, a depuração da inulina não é o mais apropriado para uso em rotina clínica por se basear em técnica invasiva, trabalhosa, demorada e que exige concentração plasmática em equilíbrio dinâmico (steady state), por infusão contínua de inulina na veia, e múltiplas coleções urinárias por cateterismo vesical, o que torna sua realização quase impossível em equinos machos (Matthews et al., 1992). Durante anos, pesquisadores buscaram substitutos para o inquestionável teste da inulina, como a depuração da creatinina exógena, do iohexol e mesmo da inulina em dose única, com grau variável de precisão (Jung et al., 1992; Gonda et al., 2003; Finco, 2005; Hoek et al., 2007).

Sapirstein et al. (1955), ao desenvolveram um método para determinar o volume de distribuição e analisar a curva de desaparecimento plasmático da creatinina exógena, com o objetivo de determinar a depuração renal dessa substância em cães, verificaram que estão envolvidos dois compartimentos com taxas de depuração plasmática diferentes. O primeiro, muito rápido, corresponde à difusão do traçador para todo o espaço extracelular; o segundo, mais lento, corresponde à eliminação renal do traçador. Ham e Piepsz, (1991) verificaram que a curva que correspondente ao volume de distribuição de 2h, obtida por amostras de plasma de 2 e 4h, corresponde à taxa de depuração renal da substância no homem. O método apresenta precisão comparável à da depuração da inulina (Krawiec et al., 1988; Heiene e Moe, 1998).

Há algum tempo, investigações foram focadas nos radionuclídeos, que permitem substituir as complexas determinações químicas por técnica simples e precisa de quantificação das amostras em contador de cintilações (Cohen, 1975). Stacy e Thorburn (1966), ao usarem o quelante etilenodiaminotetraacetato, EDTA marcado com cromo radioativo, ⁵¹Cr (⁵¹Cr-EDTA), que era empregado, então, como traçador solúvel da fisiologia do rúmen de ovelhas (Downes e McDonald, 1964), determinaram, pela primeira vez, a taxa de filtração glomerular com ⁵¹Cr-EDTA, empregando o método da inulina. Encontraram, mediante determinações simultâneas, uma relação ⁵¹Cr-EDTA/inulina de 0,95±0,03, em 41 determinações em cinco ovelhas.

Por ser uma substância que tem depuração plasmática praticamente igual à da inulina, não necessitar de infusão contínua nem de cateterismo vesical e ter suas amostras analisadas em cintilador tipo poço, o ⁵¹Cr-EDTA é considerado o radiotraçador - radiofármaco - de escolha para a determinação da taxa de filtração glomerular por depuração plasmática em rotina clínica (Stacy e Thornburn, 1966; Blaufox et al., 1996).

Mólnár et al. (1971), além do EDTA, testaram o dietilenotriaminopentaacetato (DTPA), marcados com ⁵¹Cromo, ⁵⁸Cobalto, ¹¹⁴Índio e ^115mÍndio, e verificaram correlação significativa entre as diversas combinações de complexos de EDTA e DTPA com estes radionuclídios e em testes simultâneos com creatinina e inulina. Walsh e Royal (1992) e Matthews et al. (1992) verificaram correlação significativa entre a depuração do DTPA marcado com ^99mTecnécio (^99mTc-DTPA) e a da inulina em cavalos. O ^99mTc-DTPA foi também empregado para estudar o efeito do exercício sobre a taxa de filtração glomerular em cavalos (Gleadhill et al., 2000; Pinho, 2003; Pinho et al., 2006) e, sob a forma de aerossol, para medir a taxa de depuração alveolocapilar em humanos (Carriel et al., 2007).

O método de injeção única não necessita mais que uma injeção intravenosa de ⁵¹Cr-EDTA e coleta de duas amostras de sangue, nas instalações onde o animal está estabulado, sendo as amostras de plasma analisadas, logo após, em laboratório de medicina nuclear.

O objetivo deste trabalho foi determinar a taxa filtração glomerular no cavalo, pela técnica de injeção única do EDTA marcado (⁵¹Cr-EDTA e ^113mIn-EDTA).

MATERIAL E MÉTODOS

Foram estudados nove equinos, seis machos e três fêmeas, com idade entre 2 e 12 anos. Quatro animais eram Puro Sangue Inglês, oriundos do Jockey Club Brasileiro e cinco mestiços, com predominância da raça crioula, do Instituto de Biologia do Exército, Rio de Janeiro, RJ. Após exame físico, dosagens bioquímicas do sangue, de uréia e creatinina, com resultados dentro das variações normais para a espécie, os animais foram mantidos estabulados, à temperatura ambiente, com ração própria para a espécie e água ad libitum.

Os procedimentos com os animais foram realizados de acordo com a Declaração Universal dos Direitos dos Animais da UNESCO, Bruxelas, 1978, e das normas de ética brasileiras (Lei 6.638/79 de 08/05/1979 e Lei 9.605 de 12/02/1998).

O ⁵¹Cr-EDTA¹ foi fornecido com atividade específica de 40mCi por mg de Cr. O ⁵¹Cr é um emissor gama de 320keV e meia vida física de 27,8 dias. O ^113mIn foi obtido de gerador de Índio-113m (vaca de índio)¹, com atividade de 25mCi, e o EDTA foi fornecido pelo fabricante². O ^113mIn é um emissor gama de 393keV e tem meia vida física de 1,66h. A marcação do EDTA com o ^113mIn foi feita no setor de Radiofarmácia do Serviço de Medicina Nuclear do Hospital Central do Exército.

As doses de ⁵¹Cr-EDTA, de 5μCi por kg de peso, e as de ^113mIn-EDTA, de 100μCi por kg de peso, foram administradas na veia jugular do animal. Amostras de sangue foram coletadas, da veia jugular contralateral, aos 10, 120 e 240min após a injeção para os estudos com ⁵¹Cr-EDTA e aos 10, 120 e 180min, após a injeção, para os estudos realizados com ^113mIn-EDTA. Uma alíquota de 0,5mL da dose foi diluída em 500mL de água e separados 5mL para servir de amostra padrão para o cálculo do volume de distribuição.

As amostras de plasma e a amostra padrão foram contadas em cintilador tipo poço³ para determinar a atividade - radioativa - de cada uma. A atividade específica da amostra padrão (Ap) e a atividade específica (A_t) de cada amostra de plasma foram anotadas em contagens por minuto por mililitro (cpm.mL^-1).

A determinação da taxa de filtração glomerular, descrita anteriormente (Maliska et al., 1977), foi baseada no cálculo da depuração plasmática do EDTA marcado e do seu volume de distribuição.

Uma vez em equilíbrio dentro de seu compartimento (espaço extracelular), a depuração plasmática do radiotraçador - como a da inulina - ocorre por filtração glomerular e corresponde a uma exponencial negativa, assim: A_t = A_o . e^-kt ; em que: A_t é a atividade específica após ter transcorrido um determinado tempo t; A_o é a atividade específica inicial, quando t é igual a zero; e é a base dos logaritmos naturais e k, a constante de decaimento plasmático do radiotraçador.

O volume de distribuição (VD) foi calculado dividindo-se a atividade da dose administrada por A_o, obtida pela fórmula inversa da de depuração (A_o = A_t . e^kt). A taxa de filtração glomerular (TFG), emmL.min^-1 foi obtida pela fórmula da depuração: TFG = VD.k.

Os dados tiveram tratamento estatístico simples tais como média aritmética, desvio-padrão e coeficiente de variação.

RESULTADOS

Os valores da taxa de filtração glomerular dos nove animais, em mL.min^-1 e mL.min^-1.100kg de peso, foram (média±desvio-padrão) de: 581,62±170,49mL.min^-1 e 148,80±26,42mL.min^-1.100kg, respectivamente (Tab. 1), e o coeficiente de variação de 17,8%.

A média e o desvio-padrão dos valores da taxa de filtração glomerular, em mL.min^-1.100kg, dos animais grupados por gênero foram: machos = 146,47±16,39 e fêmeas = 153,47±35,94; grupados por raça (e idade): PSI (até cinco anos) = 149,92±33,85 e mestiços (mais de cinco anos) = 147,91±14,09; e grupados pelo radiofármaco usado: ⁵¹Cr-EDTA = 149,57±30,28 e ^113mIn-EDTA = 147,84±15,75.

DISCUSSÃO

A taxa de filtração glomerular, determinada pelo método de injeção única de EDTA marcado corresponde aos valores obtidos pelo laborioso método da inulina por Knutsen (1959), e por Walsh e Royal (1992), pela inulina e pelo ^99mTc-DTPA.

Classicamente, a verificação de disfunções do sistema urinário no cavalo é limitada ao exame clínico e à avaliação laboratorial das concentrações plasmáticas da ureia e da creatinina, à eliminação urinária de eletrólitos, à atividade de enzimas urinárias, à ultrassonografia renal e à palpação do rim esquerdo por via retal (Matthews et al., 1992). Segundo Krawiec et al. (1988), estes métodos são imprecisos e indicadores pouco sensíveis de disfunções renais iniciais, em comparação com a medida da taxa de filtração glomerular. A taxa de filtração glomerular corresponde à soma da taxa de filtração de cada néfron funcionante e representa um índice da função de toda a massa renal; é um indicador sensível e específico de disfunções renais iniciais e fornece informações sobre a gravidade e o prognóstico da doença renal (Shuster e Selding, 1985; Krawiec et al., 1988; Fein et al., 2006). A inulina continua sendo o método padrão na determinação da taxa de filtração glomerular, mas é de execução demorada, requerendo infusão contínua e coletas de sangue e urina por cateterismo. Além de trabalhosa, é uma técnica altamente estressante para o animal, principalmente o cavalo (Matthews et al., 1992), o que reduz grandemente sua utilização. E, para dificultar ainda mais, a inulina está cada vez mais difícil de ser obtida (Blaufox et al., 1996).

Na prática clínica, o método de injeção única é de execução simples e preciso o bastante para cumprir as exigências diagnósticas da rotina clínica. O radiotraçador de escolha para a medida da taxa de filtração glomerular é o ⁵¹Cr-EDTA, cuja depuração plasmática é praticamente igual à da inulina (Stacy e Thornburn, 1966; Blaufox et al., 1996). As principais qualidades dos métodos que utilizam radioisótopos - radionuclídeos - são a simplicidade e a rapidez com que são realizados e a precisão dos resultados. E, ainda, empregam técnicas não invasivas, com desconforto mínimo para o animal e baixa dose de radiação para o paciente e para o operador (Chervu et al., 1975).

A média dos valores da taxa de filtração glomerular dos animais, agrupados por gênero, tanto machos como fêmeas, foi muito próxima dos valores publicados por Walsh e Royal (1992), 146,92±27,49mL.min^-1.100kg, usando ^99mTc-DTPA, em éguas. Praticamente não houve diferença entre os resultados dos exames feitos com ⁵¹Cr-EDTA e com ^113mIn-EDTA, concordando com o trabalho de Mólnár et al. (1971), em que o valor da taxa de filtração glomerular, determinada pelo EDTA marcado com diversos radioisótopos - ⁵¹Cromo, ⁵⁸Cobalto, ^114mÍndio e ^115mÍndio -, não foi afetado pelo isótopo marcador do EDTA.

O coeficiente de variação (CV) das medidas da taxa de filtração glomerular pelo método de injeção única do EDTA marcado foi de 17,8%, menor que o CV de 27,3% obtido por Walsh and Royal (1992), em 12 éguas, com mais de cinco anos de idade, pela depuração da inulina, e, comparável às medidas feitas pelo ^99mTc-DTPA, CV de 18,7%, nos mesmos animais.

O exame de medicina nuclear, para medir a taxa de filtração glomerular em cavalos, foi rápido, não invasivo e aparentemente não introduziu estresse nos animais. Trata-se de exame de execução simples e rápida, com baixa dose de radiação, cuja fase de injeção e coleta das amostras de sangue foi realizada no local onde os animais estavam estabulados. Somente o preparo da dose do radiotraçador e a contagem da atividade radioativa das amostras de soro foram feitos no laboratório de medicina nuclear. Não houve necessidade de contenção, cateterismo ou deslocamento do animal.

Conclui-se que a medida da taxa de filtração glomerular pelo ⁵¹Cr-EDTA ou ^113mIn-EDTA, pela técnica de injeção única, elimina a necessidade de cateterismo vesical e, por sua simplicidade, comodidade, precisão e baixa dose de radiação, pode ser empregada em cavalos como o método de escolha em rotina clínica.

Recebido em 14 de agosto de 2008

Aceito em 8 de abril de 2009

E-mail: [e-mail]

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1

Farbweke Hoecht, Alemanha.

2

Merck - Darmstadt, Alemanha.

3

Siemens - Alemanha.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  13 Jul 2009
• Data do Fascículo
  Jun 2009

Histórico

• Aceito
  08 Abr 2009
• Recebido
  14 Ago 2008