Ocorrência de Actinobacillus pleuropneumoniae biótipo 1 em pulmões de suínos com pleuropneumonia no Norte de Portugal

Occurrence of Actinobacillus pleuropneumoniae biotype 1 in swine with pleuropneumonia in the North of Portugal

Actinobacillus pleuropneumoniae; pleuropneumonia; isolamento; ocorrência

Actinobacillus pleuropneumoniae; pleuropneumonia; isolation; occurrence

COMUNICAÇÃO COMMUNICATION

Ocorrência de Actinobacillus pleuropneumoniae biótipo 1 em pulmões de suínos com pleuropneumonia no Norte de Portugal

Occurrence of Actinobacillus pleuropneumoniae biotype 1 in swine with pleuropneumonia in the North of Portugal

F.J. Vieira-Brito^I; M.G. Vieira-Brito^I; A.C. CoelhoI, II, ^*; J. Rodrigues^{I, II}

^IDepartamento de Ciências Veterinárias, Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, 5001-911 - Vila Real, Portugal

^IICECAV Portugal

Palavras-chave: Actinobacillus pleuropneumoniae, pleuropneumonia, isolamento, ocorrência

ABSTRACT

The isolation and identification of Actinobacillus pleuropneumoniae in swine lungs with pleuropneumonia in the North of Portugal were reported. A total of 127 swine lungs with and without lesions were examined. The system of lesions classification was based on a semi-quantitative method. Diagnosis was made by isolation and identification of the etiological agent in typical lesions. The occurrence of observed lesions was 75.6% and the occurrence of isolation of A. pleuropneumoniae was 19.7%. In 25 out of 96 (26.0%) lung samples with lesions of pleuropneumonia, A. pleuropneumoniae was isolated.

Keywords: Actinobacillus pleuropneumoniae, pleuropneumonia, isolation, occurrence

A pleuropneumonia, causada por Actinobacillus pleuropneumoniae, é uma das mais importantes doenças respiratórias suínas que ocorre em quase todos os países, acarretando elevadas perdas econômicas em todas as idades (Losinger, 2005). A enfermidade está normalmente associada com fatores ambientais e de manejo (Perestrelo-Vieira et al., 2000). São conhecidos dois biótipos: o biótipo 1 é do tipo NAD dependente, tendo sido descritos 15 sorotipos. A classificação dos resultados das lesões pulmonares durante a inspecção é usada para caracterizar o problema de doença calculando a ocorrência de tipos específicos de doença pulmonar, como pleuropneumonia (Andreasen et al., 2001). Embora esta seja, normalmente, causada por A. pleuropneumoniae, outras bactérias do gênero, como Haemophilus, assim como bactérias "Pasteurella-like", estão associadas em alguns casos (Nicolet, 1992). Um diagnóstico correto de A. pleuropneumoniae necessita de exames patológicos e bacteriológicos post-mortem para a identificação da etiologia da pleuropneumonia. A demonstração de A. pleuropneumoniae viável por cultura bacteriológica ainda é a técnica mais usada em muitos laboratórios (Gottschalk et al., 2003). As provas fundamentadas na genética apresentam-se muito interessantes, contudo, não parecem ser práticas nem econômicas para o processamento de grande número de amostras (Turni e Blackall, 2007).

Para este estudo, foram colhidas 127 amostras de pulmão em matadouro, provenientes de cinco explorações intensivas em ciclo fechado no Norte de Portugal. De todos os pulmões efetuou-se uma valorização macroscópica externa minuciosa sendo tomada nota da presença, ausência e características das lesões quando presentes. Do total de amostras, 96 apresentaram alterações anatomopatológicas compatíveis com pleuropneumonia e 31 amostras não tinham qualquer alteração macroscópica visível.

As amostras foram classificadas em dois grupos de acordo com a presença ou ausência de lesões típicas compatíveis com pleuropneumonia. O critério de inclusão em cada grupo baseou-se no método de classificação semiquantitativo utilizado pelo ITP Institut Technique du Porc (ITP) descrito por Le Foll e Solignac (1988) (Tab. 1). De acordo com esta classificação, cada lobo pulmonar é classificado com uma nota que varia entre zero e quatro. Fez-se ainda a classificação das lesões de pleurisia de acordo com a mesma grelha de apreciação de lesões.

As amostras foram colhidas de forma asséptica e conservadas em refrigeração a 4ºC. Em lesões de pleuropneumonia, o fragmento é localizado na charneira entre a zona lesada e a zona sã, de acordo com o procedimento de Gutiérrez et al. (1992). Os órgãos, transportados para o laboratório, foram semeados em no máximo seis horas após a colheita. Com base na técnica aplicada por Harley e Prescott (2002), executou-se a sementeira diretamente a partir do tecido pulmonar com auxílio de uma zaragatoa. O isolamento primário do agente foi feito em ágar chocolate suplementado com fator V no qual se encontravam agentes inibidores, como a bacitracina (100mg/ml) e a cloxacilina (1mg/ml), com antimicrobianos (violeta de cristal-1mg/ml). A incubação foi realizada durante 24 a 48 horas a 37ºC, em atmosfera com 10% de CO₂ (Oxoid BR38). A coloração de Gram foi efetuada para a confirmação do crescimento de bacilos/cocobacilos Gram-negativos. Foi utilizada a estirpe de referência #4074 MITTAL. As subculturas destinadas à realização de provas de identificação complementares foram efetuadas em meio PPLO enriquecido com 10% de extrato fresco de levedura e 20% de soro inativado de cavalo e 1% de ágar. Para a confirmação de A. Pleuropneumoniae, realizaram-se as provas bioquímicas de identificação: dependência de factores de crescimento; crescimento no meio de Triple Sugar Iron (TSI); reação de Christie-Atkins-Munch-Peterson (CAMP); prova da catalase; prova da oxidase; pesquisa da urease; produção de indol; fermentação dos hidratos de carbono; prova da ortonitrofenol galactosídeo (ONPG); teste de lysine decarboxylase sulphydrase (LDS); teste Ornithine decarboxylase arginine dihydrolase (ODC/ADH). Os microrganismos identificados bioquimicamente foram mantidos em meio de conservação com leite desnatado.

A ocorrência observada de lesões pulmonares foi de 75,6%. A ocorrência de isolamento do agente foi de 19,7%. Em 25 (26,0%) das 96 amostras com sinais evidentes de pleuropneumonia, isolou-se A. pleuropneumoniae. Quanto à localização anatômica dos diferentes tipos de lesões, observou-se que a maioria se situou no lobo cardíaco (47,9%), seguido do lobo apical (40,6%) e, por último, o diafragmático (20,8%). Encontraram-se lesões de pleurisia em seis (6,3%) pulmões lesionados. Os resultados obtidos de acordo com a classificação proposta por Le Foll e Solignac (1988) encontram-se na Tab. 2.

Isolou-se A. pleuropneumoniae biótipo 1, em 25 (19,7%). Este valor representa isolamento do agente em 26,0% dos 96 pulmões que apresentavam lesões de pleuropneumonia. Não foi isolado A. pleuropneumoniae das 31 amostras de pulmões que não continham lesões típicas à inspecção macroscópica.

A infecção causada por A. pleuropneumoniae origina a identidade clínica designada por pleuropneumonia, normalmente restrita à cavidade torácica. As lesões pulmonares são freqüentemente bilaterais e englobam o lobo apical, o cardíaco e o diafragmático. Para Pointon et al. (1992), as lesões mais severas localizam-se na parte caudal dos lobos cardíaco e diafragmático. Os resultados deste estudo estão em conformidade com esses autores, na medida em que se encontrou maior percentagem de lesões no lobo cardíaco. Existe a opinião mais ou menos generalizada de que a persistência de A. pleuropneumoniae em uma exploração traduz-se por elevada ocorrência de pleurisias e lesões pulmonares observadas quando do abate. Neste trabalho, observou-se uma relação entre a ocorrência dessas lesões e o sucesso de isolamento de A. Pleuropneumoniae. Não se isolou este microrganismo em pulmões com ausência de lesões. Os resultados obtidos apontam para uma associação entre a presença de lesões compatíveis com pleuropneumonia e o isolamento do agente etiológico. Algumas lesões podem ter sido causadas por A. Pleuropneumoniae, mas não foi possível a confirmação devido à dificuldade de isolar o agente a partir de lesões crônicas (Williams et al., 2000). A percentagem de isolamento do agente nos pulmões que apresentavam lesões de pleuropneumonia foi menor que a apresentada em outros trabalhos em diferentes países (Hunter e Livingstone, 1986; Williams et al., 2000). Os resultados deste trabalho confirmam os apresentados por outros autores, sobre a validade do diagnóstico de pleuropneumonia mediante isolamento do agente em pulmões com lesões (Williams et al., 2000). No México, esses autores, isolaram A. pleuropneumoniae em 129 (51,6%) amostras de pulmão com pleuropneumonia crônica. Os melhores resultados apresentados por esses autores podem ser atribuídos à seleção do lobo diafragmático, na medida em que, relativamente aos outros parâmetros, no presente estudo cumpriu-se toda a metodologia das técnicas, como a assepsia, e garantiu-se a qualidade dos meios de cultura para o isolamento (Brandreth e Smith, 1985). Também é possível que a ocorrência de pleuropneumonia por A. pleuropneumoniae seja mais alta no México que em Portugal e, como tal, a porcentagem de isolamento do agente também seja maior. Os resultados deste estudo reforçam a importância do isolamento e a identificação do agente em presença de lesões típicas no diagnóstico da doença.

Recebido em 31 de março de 2008

Aceito em 20 de outubro de 2008

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  09 Fev 2009
• Data do Fascículo
  Dez 2008

Histórico

• Aceito
  20 Out 2008
• Recebido
  31 Mar 2008