Tris-EDTA no teste de sensibilidade antimicrobiana in vitro em amostras de Pseudomonas aeruginosa

In vitro antimicrobial sensitivity test with EDTA-Tris in strains of Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa; antimicrobial susceptibility test; Tris-EDTA; multiple drug resistance

Pseudomonas aeruginosa; sensibilidade antimicrobiana; Tris-EDTA

COMUNICAÇÃO

[Communication]

Tris-EDTA no teste de sensibilidade antimicrobiana in vitro em amostras de Pseudomonas aeruginosa

[In vitro antimicrobial sensitivity test with EDTA-Tris in strains of Pseudomonas aeruginosa]

E.M. Tanaka, M.G. Ribeiro, J. Megid, F.J.P. Listoni

Faculdade de Medicina Veterinária e Zootcnia da UNESP-Botucatu

Caixa Postal 560

18618-000 – Botucatu, SP

Recebido para publicação em 24 de setembro de 2001.

Recebido para publicação, após modificações, em 27 de março de 2002

E-mail: [e-mail]

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)são reconhecidos como organismos ubíquos, de comportamento oportunista, relacionados às várias manifestações clínicas no homem e em animais. Nos animais domésticos, o agente tem sido descrito em diferentes afecções, incluindo otite, cistite, endometrite, laminite, encefalite, linfadenite, mastite, dermatite, cólica, abscessos, pneumonia, enterite, conjuntivite e septicemia (Radostits et al., 2000).

No homem, a ocorrência de P. aeruginosa está relacionada principalmente a distúrbios entéricos, dermatites pós-queimaduras e osteomielites (Galanakis et al., 1997). Infecções por P. aeruginosa assumem alta gravidade em crianças, pacientes com neoplasias, e em anos recentes, em indivíduos acometidos pela síndrome da imunodeficiência adquirida (aids) (Quinn, 1998). Paralelamente, o microrganismo é considerado como um dos principais agentes na gênese de infecções hospitalares, apresentando multi-resistência aos antimicrobianos convencionais (Paul et al., 1997) e mutações que determinam amostras resistentes às drogas derivadas do anel b-lactâmico e das quinolonas.

A multi-resistência às diferentes drogas por P. aeruginosa tem estimulado investigações envolvendo compostos com efeito potencializador de antimicrobianos, como a associação Tris (hidroximetil-aminometano)-EDTA (ácido etileno diamino tetra acético). O EDTA apresenta as propriedades de aumentar a permeabilidade da parede celular bacteriana e de alterar a estabilidade dos ribossomos de microrganismos (Farca et al., 1997), potencializando a ação de determinadas drogas. O Tris potencializa os efeitos do EDTA nos microrganismos, por interferir na síntese do peptideoglican, bloqueando a utilização de compostos necessários a biossíntese da parede bacteriana (Farca et al., 1997). A associação Tris-EDTA tem sido utilizada como complementar na terapia antimicrobiana de otites, dermatites e cistites em animais (Sparks et al., 1994; Farca et al., 1997).

Em face do amplo espectro de infecções por P. aeruginosa nos animais e no homem, e da resistência múltipla natural ou adquirida do agente aos antimicrobianos convencionais, o presente estudo procurou comparar a sensibilidade in vitro de amostras de P. aeruginosa, isoladas de animais, no teste padrão de difusão com discos e no modificado, pela adição de Tris-EDTA.

Utilizaram-se 57 linhagens de P. aeruginosa isoladas de diferentes afecções em animais domésticos e silvestres (otite, cistite, endometrite, laminite, mastite, dermatite, pneumonia, abscesso, enterite, conjuntivite e onfaloflebite), encaminhadas para a FMVZ-UNESP/Botucatu, SP. As linhagens foram isoladas nos meios de ágar sangue ovino (5%) desfibrinado e ágar MacConkey. O agente foi identificado segundo suas características morfo-tintoriais, bioquímicas e de cultivo (Krieg & Holt, 1984; Quinn et al., 1994). Foram utilizadas duas cepas-controle de P. aeruginosa (ATCC 10.145 e 14.502), cedidas pelo Instituto Adolfo Lutz de São Paulo, perfazendo 59 linhagens estudadas.

Todas as amostras de P. aeruginosaforam submetidas ao teste padrão de sensibilidade microbiana in vitro - método de difusão com discos (Bauer et al., 1966) - frente a 17 antimicrobianos (Tab. 1). Simultaneamente, as 59 amostras foram submetidas ao método modificado, mediante a adição de 6,057g de Tris e 1,2g de EDTA ao meio de Müller-Hinton, em pH 8, esterilizado em autoclave (Ferreira et al., 1993). Usou-se o teste de McNemar e o teste da proporção binomial de sucesso, considerando diferença significativa para valores de P<0,05.

Na prova padrão verificaram-se as maiores taxas de sensibilidade de P. aeruginosa com o uso da tobramicina (83,0%), ciprofloxacina (74,6%) e norfloxacina (78,0%) (Tab. 1). Em medicina humana e veterinária, os aminoglicosídeos e as quinolonas também têm demonstrado efetividade in vitro em amostras de P. aeruginosa isoladas de diferentes afecções, e são apontados como drogas de eleição na terapia (Quinn et al., 1994; Galanakis et al., 1997). Essa alta efetividade in vitro ratifica a condição deste grupo de drogas como de primeira linha na terapia de afecções por P. aeruginosa em animais (Radostits et al., 2000). No presente estudo, todas as linhagens de P. aeruginosa apresentaram resistência na prova padrão para amoxicilina/ácido clavulânico, ampicilina, cefalotina, cloranfenicol, tetraciclinas e sulfadiazina/trimetoprim. Paralelamente, observaram-se altos índices de resistência do agente para estreptomicina (98,3%), neomicina (89,8%), ceftazidima (76,3%) e enrofloxacina (71,2%) (Tab. 1). A elevada resistência in vitro de P. aeruginosa no teste padrão para a grande maioria dos antimicrobianos utilizados coincide com os resultados de outros estudos, que também assinalaram multi-resistência do agente aos antibióticos e quimioterápicos de uso em linha humana ou em medicina veterinária (Paul et al., 1997; Radostits et al., 2000).

Na prova modificada com o Tris-EDTA observou-se aumento (P<0,05) de sensibilidade do agente para ceftazidima (67,8%), cefoperazona (54,2%), amicacina (52,5%), gentamicina (49,1%), ofloxacina (23,6%), norfloxacina (18,6%), tobramicina (13,6%), neomicina (10,2%) e estreptomicina (8,5%). Verificou-se, também, incremento na efetividade da ciprofloxacina (6,8%) e enrofloxacina (6,8%). Estes dados coincidem com os de Ferreira et al. (1993), que ao utilizarem a associação Tris-EDTA no teste de sensibilidade microbiana in vitro em agentes de mastite bovina no Brasil, também obtiveram incremento da sensibilidade para P. aeruginosa.

Os aminoglicosídeos, quinolonas e cefalosporinas apresentaram maior ganho de efetividade na prova modificada com Tris-EDTA. Este resultado pode encontrar justificativa na ação permeabilizante da parede celular bacteriana ou na alteração da estabilidade dos ribossomos bacterianos atribuída ao EDTA, potencializada pelos efeitos do Tris, a qual interfere na síntese do peptideoglican e bloqueia a utilização de determinados compostos necessários à biossíntese da parede bacteriana. A somatória desses efeitos provavelmente favoreceu a ação in vitro deste grupo de drogas bactericidas - que atuam na parede ou no ribossoma bacteriano - nas amostras de P. aeruginosa.

Observou-se pequena redução na efetividade de certos antimicrobianos na prova contendo Tris-EDTA. Wood & Wood (1975) e Ribeiro et al. (2001) também assinalaram redução da eficácia de certos antimicrobianos quando associados a compostos permeabilizantes de membranas biológicas, em testes in vitro de sensibilidade. Sugere-se que esses compostos poderiam estimular a produção de enzimas pelos microrganismos, que bloqueariam a ação dos antimicrobianos, semelhante às beta-lactamases. Este resultado alerta para a necessidade da realização do teste in vitro de sensibilidade contendo o Tris-EDTA, previamente à indicação in vivo do Tris-EDTA associado a antimicrobianos, na terapia de afecções por P. aeruginosa.

Ressalta-se a ocorrência de multi-resistência in vitro de P. aeruginosa e a potencialização da ação in vitro de drogas do grupo aminoglicosídeos, quinolonas e cefalosporinas quando associadas ao Tris-EDTA, sugerindo estudos in vivo com esses antimicrobianos e o Tris-EDTA, como alternativa na terapia de infecções por P. aeruginosa em animais domésticos.

Palavras-chave: Pseudomonas aeruginosa, sensibilidade antimicrobiana, Tris-EDTA

ABSTRACT

In vitro antimicrobial susceptibility of strains of Pseudomonas aeruginosa by standard diffusion disk test and a modified method, by the addition Tris-EDTA, was evaluated. Increase in sensitivity of agent using modified method was observed mainly in aminoglycosides (amikacin, gentamicin, tobramycin), quinolones (ofloxacin and norfloxacin) and cephalosporins (cefoperazone and ceftazidime) groups.

by standard diffusion disk test and a modified method, by the addition Tris-EDTA, was evaluated. Increase in sensitivity of agent using modified method was observed mainly in aminoglycosides (amikacin, gentamicin, tobramycin), quinolones (ofloxacin and norfloxacin) and cephalosporins (cefoperazone and ceftazidime) groups.

Keywords: Pseudomonas aeruginosa, antimicrobial susceptibility test, Tris-EDTA, multiple drug resistance

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  16 Dez 2002
• Data do Fascículo
  Jun 2002

Histórico

• Recebido
  27 Mar 2002