Teste imunoenzimático (Elisa) no diagnóstico da neurocisticercose: estudo de diferentes extratos antigênicos na detecção de anticorpos IgG em amostras de soro e de líquido cefalorraqueano

Costa, Julia Maria

doi:10.1590/S0004-282X1986000100002

Resumos

Estudou-se o teste imunoenzimático ELISA na neurocisticercose humana investigando o comportamento de diferentes antígenos do Cysticercus cellulosae na detecção de anticorpos específicos em amostras de soro e de líquido cefalorraqueano (LCR). Obtiveram-se 5 extratos antigênicos: líquido de vesícula e extrato salino total, alcalino total, de escólex e de membrana. A concentração de 20/ug/ml foi ideal para sensibilização das placas de polivinil para os 5 extratos preparados, tanto para soro como para LCR. A anti IgG humana marcada com peroxidase foi utilizada no título de 1.400 e a reação revelada pela adição de H(2)0(2)-ácido 5-amino salicílico, determinando-se como limite de reatividade 10 UE para soro e 5 UE para LCR. Estudaram-se 182 amostras de soro e 115 amostras de LCR. A sensibilidade do teste ELISA em relação aos soros variou, sendo de mesmo valor para o líquido de vesícula, extrato de escólex e de membrana (88,6%) extrato salino total (85,7%) e extrato alcalino total (62,8%). A sensibilidade do teste ELISA em relação ao LCR foi de 100% para o líquido de vesícula e extrato salino total, 91,7% para o extrato de membrana, 89,6% para o extrato de escólex e 77,1% para o alcalino total. A especifididade do teste ELISA em amostras de soro foi de 100% para os 5 extratos estudados. Em relação ao LCR, foi de 100% para o extrato alcalino e de escólex e de 98,5% para os demais. As médias geométricas dos títulos dos soros e LCR nos testes ELISA variaram, sendo respectivamente de 121,3 e 27,3 para o líquido de vesícula, 111,6 e 31,1 para o extrato salino total, 30,3 e 5,3 para o alcalino total, 63,2 e 14,8 para o de escólex e 64,1 e 18,8 para o de membrana. Comparou-se o teste ELISA com os diferentes antígenos com a reação de fixação do complemento, reação de imunofluorescência e reação de hemaglutinação para amostras de soro e LCR. O teste imunoenzimático ELISA com extrato salino total, pela facilidade de preparo, rendimento obtido (a partir de 50 cisticercos prepara-se antígeno suficiente para 15.000 reações qualitativas) e pela alta sensibilidade e especificidade, é recomendado como alternativa diagnostica em substituição à reação de fixação do complmento, RIF e RHA, na pesquisa de anticorpos IgG circulantes no soro e LCR na neurocisticercose.

Five different antigens from Cysticercus cellulosae, a vesicular fluid, a saline and an alkaline total extracts, an escolex and membrane, were studied in the ELISA immunoenzymatic assay to demonstrate IgG antibodies in cerebrospinal fluid (CSF) and serum samples. For the 5 antigens the 20mg/ml concentration was selected for polyvinyl plates sensitization for CSF and serum assays. The IgG fraction of a sheep anti-human IgG antiserum was labeled with horseradish peroxidase and revealed with hydrogen peroxide-5-aminosalicilic acid. For positive results 10 ELISA Units for sera and 5 EU for CSF were taken. A total of 182 serum samples and 115 CSF samples were tested. The ELISA sensitivity for sera were 88.6% for vesicular fluid, escolex and membrane; 85.7% for saline extract and 62.8% for alkaline extract. The ELISA sensitivity for CSF was 100% for vesicular fluid and saline total extract, 91.7% for membrane, 89.6% for excolex and 77.1% for alkaline. The ELISA specificity for sera was 100% to the 5 antigens studied; to the CSF was 100% for the alkaline and escolex and 98.5% for the other antigens. An ELISA geometric mean titer of sera and CSF was respectively the 121.1 and 27.3 for vesicular fluid, 111.6 and 31.1 for saline total extract, 30.3 and 5.3 for alkaline total extract, 63.2 and 14.8 for escolex and 69.1 and 18.8 for membrane antigen. ELISA was then compared to immunofluorescence, hemagglutination and complement fixation tests in CSF and sera. ELISA immunoenzymatic assay with saline total extract is recommended for the easy preparation and for the high quantity of antigens obtained, for the high sensitivity and great specificity for sera and CSF; we suggest that this test may be used as a substitute for immunofluorescence, hemagglutination and complement fixation in sera or CSF for the diagnosis of neurocysticercosis.

Julia Maria Costa

Professor Adjunto da Disciplina de Parasitologia Médica da Universidade Federal de Uberlândia, MG. Resumo da Tese de Doutorado do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo (1983) realizada no Laboratório de Imunologia e Soroepidemiologia do Instituto de Medicina Tropical de São Paulo

RESUMO

Estudou-se o teste imunoenzimático ELISA na neurocisticercose humana investigando o comportamento de diferentes antígenos do Cysticercus cellulosae na detecção de anticorpos específicos em amostras de soro e de líquido cefalorraqueano (LCR). Obtiveram-se 5 extratos antigênicos: líquido de vesícula e extrato salino total, alcalino total, de escólex e de membrana. A concentração de 20/ug/ml foi ideal para sensibilização das placas de polivinil para os 5 extratos preparados, tanto para soro como para LCR. A anti IgG humana marcada com peroxidase foi utilizada no título de 1.400 e a reação revelada pela adição de H₂0₂-ácido 5-amino salicílico, determinando-se como limite de reatividade 10 UE para soro e 5 UE para LCR. Estudaram-se 182 amostras de soro e 115 amostras de LCR. A sensibilidade do teste ELISA em relação aos soros variou, sendo de mesmo valor para o líquido de vesícula, extrato de escólex e de membrana (88,6%) extrato salino total (85,7%) e extrato alcalino total (62,8%). A sensibilidade do teste ELISA em relação ao LCR foi de 100% para o líquido de vesícula e extrato salino total, 91,7% para o extrato de membrana, 89,6% para o extrato de escólex e 77,1% para o alcalino total. A especifididade do teste ELISA em amostras de soro foi de 100% para os 5 extratos estudados. Em relação ao LCR, foi de 100% para o extrato alcalino e de escólex e de 98,5% para os demais. As médias geométricas dos títulos dos soros e LCR nos testes ELISA variaram, sendo respectivamente de 121,3 e 27,3 para o líquido de vesícula, 111,6 e 31,1 para o extrato salino total, 30,3 e 5,3 para o alcalino total, 63,2 e 14,8 para o de escólex e 64,1 e 18,8 para o de membrana. Comparou-se o teste ELISA com os diferentes antígenos com a reação de fixação do complemento, reação de imunofluorescência e reação de hemaglutinação para amostras de soro e LCR. O teste imunoenzimático ELISA com extrato salino total, pela facilidade de preparo, rendimento obtido (a partir de 50 cisticercos prepara-se antígeno suficiente para 15.000 reações qualitativas) e pela alta sensibilidade e especificidade, é recomendado como alternativa diagnostica em substituição à reação de fixação do complmento, RIF e RHA, na pesquisa de anticorpos IgG circulantes no soro e LCR na neurocisticercose.

SUMMARY

Five different antigens from Cysticercus cellulosae, a vesicular fluid, a saline and an alkaline total extracts, an escolex and membrane, were studied in the ELISA immunoenzymatic assay to demonstrate IgG antibodies in cerebrospinal fluid (CSF) and serum samples. For the 5 antigens the 20mg/ml concentration was selected for polyvinyl plates sensitization for CSF and serum assays. The IgG fraction of a sheep anti-human IgG antiserum was labeled with horseradish peroxidase and revealed with hydrogen peroxide-5-aminosalicilic acid. For positive results 10 ELISA Units for sera and 5 EU for CSF were taken. A total of 182 serum samples and 115 CSF samples were tested. The ELISA sensitivity for sera were 88.6% for vesicular fluid, escolex and membrane; 85.7% for saline extract and 62.8% for alkaline extract. The ELISA sensitivity for CSF was 100% for vesicular fluid and saline total extract, 91.7% for membrane, 89.6% for excolex and 77.1% for alkaline. The ELISA specificity for sera was 100% to the 5 antigens studied; to the CSF was 100% for the alkaline and escolex and 98.5% for the other antigens. An ELISA geometric mean titer of sera and CSF was respectively the 121.1 and 27.3 for vesicular fluid, 111.6 and 31.1 for saline total extract, 30.3 and 5.3 for alkaline total extract, 63.2 and 14.8 for escolex and 69.1 and 18.8 for membrane antigen. ELISA was then compared to immunofluorescence, hemagglutination and complement fixation tests in CSF and sera. ELISA immunoenzymatic assay with saline total extract is recommended for the easy preparation and for the high quantity of antigens obtained, for the high sensitivity and great specificity for sera and CSF; we suggest that this test may be used as a substitute for immunofluorescence, hemagglutination and complement fixation in sera or CSF for the diagnosis of neurocysticercosis.

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Teste imunoenzimático (Elisa) no diagnóstico da neurocisticercose: estudo de diferentes extratos antigênicos na detecção de anticorpos IgG em amostras de soro e de líquido cefalorraqueano

ELISA immunoenzymatic assay for neurocysticercosis: different antigenic extracts for IgG antibodies to Cysticercus cellulosae in cerebrospinal fluid and serum samples

Datas de Publicação

Publicação nesta coleção
29 Jun 2011
Data do Fascículo
Mar 1986

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[1] 1. ARAMBULO III, P.V.; WALLS, K.W. ; BULLOCK, S. & KAGAN, I.G. - Sero-diagnosis of human cysticercosis by microplate enzyme-linked immuno specific assay (ELISA). Acta tropica 35: 63, 1978.

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