Open-access Transient gene expression of beta-glucuronidase in citrus thin epicotyl transversal sections using particle bombardment

Nosso objetivo é desenvolver um protocolo para transformação genética de Citrus através do bombardeamento de partículas usando cortes finos de epicótilo como explantes alvo. Neste trabalho foram otimizadas condições para a expressão transiente usando citrange carrizo (Citrus sinensis x Poncirus trifoliata) como modelo. Epicótilos de plântulas de citrange carrizo germinadas in vitro foram cortadas transversalmente em seções de 1 mm e cultivadas em meio MS com 5 miM no escuro. Depois de uma semana, explantes foram bombardeados com o plasmídio pE2113-GUS usando um aparelho de alta pressão de hélio (PDS 1000/He Bio-Rad). As melhores condições para a expressão transiente foram: partículas de tungstênio M-25, pressão de hélio de 1550 psi, distância de 9 cm entre os explantes e DNA/particle holder e cultivo dos explantes em meio com alta osmolaridade (0,2 M manitol + 0,2 M sorbitol) 4 h antes e 20 h depois do bombardeamento. Usando estes parâmetros, uma média de 102 pontos azuis por bombardeamento (20 explantes/placa) foi obtida. Este protocolo esta sendo usado atualmente para transformação de citrange Carrizo e adaptado para transformação de laranja doce (Citrus sinensis).


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