Um método eficiente de obtenção de cultivares de alface por meio de transformação com Agrobacterium tumefaciens foi descrito por Torres et al., 1993. Neste trabalho foi desenvolvido um procedimento melhorado a partir do trabalho descrito acima foi aplicado para transformação da cultivar de alface Grand Rapids com o gene mutado P5CS. As principais modificações nos protocolos de transformação e regeneração, com o objetivo de torná-los mais práticos. Também foi procurado o melhoramento das etapas de transformação no sentido de se aumentar a superfície de infecção, além do aumento no tempo de co-cultivo com Agrobacterium (em uma alta concentração celular). Maior pressão seletiva foi utilizada contra plantas não transformadas e bactérias. Neste trabalho também se trabalhou na produção de sementes das gerações T1 e T2, para que se pudesse fazer os ensaios fisiológicos e genéticos. Este gene codifica para delta¹-pirrolina-5-carboxilato sintetase, uma enzima bifuncional que catalisa dois passos na biossíntese de prolina em plantas (Zhang et al., 1995; Peng et al., 1996), só que neste caso se tornou insensível para inibição por retroalimentação por prolina. O potencial deste gene é conferir resistência ao estresse hídrico (seca, alta concentração salina, frio) devido ao aumento na concentração de prolina intracelular, que funciona como um osmoprotetor. Neste trabalho foram obtidas e analisadas linhagens de alface transgênicas resistentes ao congelamento.
