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Nephrotoxicity of Bence-Jones proteins: correlation with endocytosis by BHK cells and intracellular movement

O objetivo deste trabalho foi avaliar a endocitose de duas proteínas de Bence Jones por células renais, com a finalidade de elucidar a interferência de características físico-químicas na nefrotoxicidade. As proteínas de Bence Jones (denominadas AK e GL) forma purificadas e isoladas da urina de dois pacientes com mieloma múltiplo. Isótopos de ambas as proteínas foram caracterizdos como sendo cadeias leves lambda monoclonais humanas. AK apresentou principalmente pI > 7,0, alto conteúdo de galactose e baixo teor de moléculas de ácido siálico. Por outro lado, GL apresentou uma única banda com pI 4,3, maior teor de ácido siálico e baixo teor de galactose, em comparação com AK. Células renais de hamster, BHK (Baby Hamster Kidney) foram mantidas em cultura à temperatura de 37ºC, utilizando meio de cultura DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino, em pH 7,4. Quando confluentes, as céluals BHK foram incubadas com as duas proteínas dissolvidas em meio isento de soro, durante 1, 5, 15, 30, 60 minutos e 24 horas. Foi omitida a incubação com proteínas de Bence Jones em células usadas como controle. Com o término da incubação, as células foram lavadas, tripsinizadas, centrifugadas e fixadas em solução de paraformaldeído 4,0% e glutaraldeído 0,5% em tampão fosfato 0,1M pH 7,4. A seguir, os pellets obtidos foram processados para microscopia e incluídos em LRWhite. Cortes semi-finos foram colhidos e submetidos a reações imunocitoquímicas, utilizando proteína A-acoplada a ouro coloidal e intensificação pela prata. A detecção da marcação foi avaliada em microscopia de luz. Os resultados mostraram que a proteína GL tendeu a ser direcionada para localização peri-nuclear. Por outro lado, AK demonstrou um comportamento diferente. Os dados indicaram que houve uma contribuição direta das características físico-químicas das proteínas no direcionamento intracelular.


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