Existem poucos estudos envolvendo testes de isolamento reprodutivo entre espécies do gênero Anastrepha. Neste trabalho apresentamos os resultados de testes feitos em laboratório com duas espécies relacionadas, A. striata e A. bistrigata. Nos cruzamentos interespecíficos foram observadas tentativas de cópula, mas o exame das espermatecas mostrou que não houve transferência de espermatozóides. Não ocorreram cruzamentos mesmo quando o período de contato entre as duas espécies foi prolongado. Os resultados sugerem a existência de isolamento prézigótico entre as espécies. A análise do padrão de atividade de cópula ao longo do dia, em condições de laboratório, pela primeira vez descrito para A. bistrigata, mostrou a existência de diferenças acentuadas, sendo que em A. striata as atividades estão concentradas no período da tarde, enquanto que, em A. bistrigata, no período da manhã. O isolamento reprodutivo entre estas duas espécies, aqui caracterizado, pode ser explicado pelas diferenças no comportamento e nos períodos de atividade de cópula